LCMS在藥物代謝動力學(xué)中的應(yīng)用課件

LC-MS在藥物代謝動力學(xué)中的應(yīng)用LC-MS在藥物代謝動力學(xué)中的應(yīng)用1要點：(刪除4-6片)一、幾種現(xiàn)代分析方法介紹與比較二、LC-MS在藥物動力學(xué)中的應(yīng)用三、LC-MS在代謝物研究中的應(yīng)用四、LC-MS在現(xiàn)代新藥研究中的應(yīng)用1、高通量篩選2、中藥現(xiàn)代化要點：(刪除4-6片)2體內(nèi)藥物分析中的現(xiàn)代分析方法與技術(shù)(標(biāo)題一致性)一、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS)*二、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)*三、液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)(LC-NMR)四、毛細(xì)管電泳免疫分析(CEIA)五、柱切換高效液相色譜法六、高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)體內(nèi)藥物分析中的現(xiàn)代分析方法與技術(shù)(標(biāo)題一致性)一、氣相色譜3LCMS在藥物代謝動力學(xué)中的應(yīng)用課件4氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）特點：靈敏度高、分析速度快、鑒別能力強(qiáng)；但它受到藥物分子的極性和熱穩(wěn)定性等限制，要求分子具有揮發(fā)性或通過衍生化提高分子的揮發(fā)性，因此其有明顯的局限性。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）特點：5液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)(LC-NMR)特點：能提供最大量的分子結(jié)構(gòu)信息，在體內(nèi)藥物分析中對代謝產(chǎn)物的鑒定具有顯著優(yōu)勢，但是在做NMR分析前必須做大量的分離純化工作，不利于樣品的快速分離；另外，NMR檢測靈敏度低是LC-NMR技術(shù)的瓶頸。液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)(LC-NMR)特點：6液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)基本組成：HPLC裝置、接口裝置與離子源、質(zhì)量分析器。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)基本組成：7目前商品化LC-MS儀主要用大氣壓離子化接口（API）。API不僅是一種較好的接口技術(shù)，同時也是一種離子化方法，該技術(shù)使樣品的離子化在處于大氣壓條件下的離子化室中完成。目前商品化LC-MS儀主要用大氣壓離子化接口8API的操作模式分三種：一、電噴霧離子化（ESI)二、氣動輔助電噴霧離子化三、大氣壓化學(xué)離子化（APCI)API的操作模式分三種：9液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS）特點：樣品前處理簡單，無需衍生化，適用范圍廣將色譜的高分離能力與質(zhì)譜的高檢測靈敏度、定性專屬性集于一身隨著接口裝置和離子化技術(shù)的發(fā)展成熟，該技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中逐漸發(fā)展成為一種常規(guī)的分離檢測方法液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS）特點：10LC-MS在藥物動力學(xué)中的應(yīng)用介紹藥物動力學(xué)研究，需對生物樣品中的微量乃至痕量成分定量分析。而當(dāng)今的藥物研制日趨低劑量，使常規(guī)的分離檢測技術(shù)難以滿足復(fù)雜介質(zhì)中痕量成分準(zhǔn)確定量的要求。LC-MS技術(shù)的高靈敏度使之在這一領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛并趨于常規(guī)化。LC-MS在藥物動力學(xué)中的應(yīng)用介紹藥物動力學(xué)11舉例：閆小華等人用LC/MS聯(lián)用法測定人血漿中氟西汀的濃度：舉例：閆小華等人用LC/MS聯(lián)用法測定人血漿中氟西12色譜條件色譜柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)柱溫：30℃流動相：10mmol/L醋酸銨緩沖液-甲醇（20：80）流速：1.0ml/min色譜條件色譜柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)13質(zhì)譜條件離子檢測方式：選擇性離子檢測；離子極性：正離子離子化方式：氣動輔助電噴霧離子化檢測對象：苯磺酸氨氯地平傳輸區(qū)電壓：100V干燥氣流速：10L/min霧化室壓力：40psi干燥氣溫度：350℃質(zhì)譜條件離子檢測方式：選擇性離子檢測；14以往文獻(xiàn)中均以紫外檢測器檢測氨氯地平的濃度,但口服10mg氨氯地平后體內(nèi)最高血漿濃度不到10ng·mL–1,最低只有0.2ng·mL–1,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了紫外的檢測范圍,而本實驗采用LC-MS法測定,結(jié)果最低檢測濃度為0.12ng·mL–1，本法簡便,靈敏,能滿足測定血漿中藥物濃度的要求。以往文獻(xiàn)中均以紫外檢測器檢測氨氯地平15LC-MS在代謝物研究中的應(yīng)用在新藥開發(fā)過程中，為了預(yù)防潛在的毒性，測定是否有代謝物和已知藥物相關(guān)，是否和原藥具有相同的治療作用或?qū)ζ渌委熡袃?nèi)在的活性，有必要對代謝物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。LC-MS在代謝物研究中的應(yīng)用在新藥16舉例：陳懷俠等人運用液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MSn)聯(lián)用技術(shù)研究了樟柳堿大鼠肝勻漿中的代謝物：舉例：陳懷俠等人運用液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(L17色譜條件：色譜柱：C18柱(150mm×2mmi.d.,5μm),流動相：甲醇/0.01%三乙胺溶液(用甲酸調(diào)節(jié)pH3.5)(60∶40,V/V)柱溫：40℃流速：0.2mL/min。色譜條件：色譜柱：C18柱(150mm×2mmi.18質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子化方式,檢測離子為正離子。離子源噴射電壓5.0kV,毛細(xì)管電壓45V,毛細(xì)管溫度200℃,氮氣為鞘氣,其流速40個單位,其它通過碰撞誘導(dǎo)解離獲得母分子離子的多級質(zhì)譜,優(yōu)化的多級質(zhì)譜相對碰撞能量為30%。采用全掃描一級質(zhì)譜及其源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離、全掃描二級質(zhì)譜及三級質(zhì)譜等方式進(jìn)行測定。質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子化方式,檢測離子為正離子。離19依據(jù)上述實驗方法,在樟柳堿的大鼠肝勻漿培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了原藥及其代謝物。本實驗首先總結(jié)出樟柳堿電噴霧質(zhì)譜的電離和裂解規(guī)律,由原藥的特征碎片及特征中性丟失為依據(jù),通過LC-MS數(shù)據(jù)鑒別代謝物,完全可以排除內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。因此,本方法靈敏度高,專屬性好。依據(jù)上述實驗方法,在樟柳堿的大鼠肝勻漿20LC-MS在高通量篩選中的應(yīng)用隨著組合化學(xué)和高通量活性篩選技術(shù)的發(fā)展，大量的活性化合物被發(fā)現(xiàn)，這就對這些活性化合物的藥代屬性進(jìn)行篩選提出要求。為解決體內(nèi)外藥代動力學(xué)篩選規(guī)模小及化合物相互影響的問題,國外實驗室開發(fā)了快速的藥代動力學(xué)篩選法,將樣品收集周期短至6～8h,利用串聯(lián)LC-MS-MS技術(shù),計算AUC0～t。利用體外肝細(xì)胞培養(yǎng)和串聯(lián)LC/MS可識別代謝產(chǎn)物。LC-MS在高通量篩選中的應(yīng)用21

生物樣品的分析借用LC-MS/MS技術(shù),通過應(yīng)用混合功能型色譜柱,樣品不經(jīng)處理就可以直接快速地分析,極大地提高了藥代篩選的通量性。生物樣品的分析借用LC-MS/MS技22LC-MS在中藥現(xiàn)代化中的應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)自身的優(yōu)點也決定了其在中藥藥動學(xué)方面將發(fā)揮不可替代的作用，對闡明和揭示中草藥作用機(jī)制及其科學(xué)內(nèi)涵，設(shè)計及優(yōu)選給藥方案，促進(jìn)中藥新藥開發(fā)和劑型改進(jìn)及提高質(zhì)量水平，推動中醫(yī)藥走向世界，并最終實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。LC-MS在中藥現(xiàn)代化中的應(yīng)用液相色譜-23ThankYou!ThankYou24LC-MS在藥物代謝動力學(xué)中的應(yīng)用LC-MS在藥物代謝動力學(xué)中的應(yīng)用25要點：(刪除4-6片)一、幾種現(xiàn)代分析方法介紹與比較二、LC-MS在藥物動力學(xué)中的應(yīng)用三、LC-MS在代謝物研究中的應(yīng)用四、LC-MS在現(xiàn)代新藥研究中的應(yīng)用1、高通量篩選2、中藥現(xiàn)代化要點：(刪除4-6片)26體內(nèi)藥物分析中的現(xiàn)代分析方法與技術(shù)(標(biāo)題一致性)一、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS)*二、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)*三、液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)(LC-NMR)四、毛細(xì)管電泳免疫分析(CEIA)五、柱切換高效液相色譜法六、高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)體內(nèi)藥物分析中的現(xiàn)代分析方法與技術(shù)(標(biāo)題一致性)一、氣相色譜27LCMS在藥物代謝動力學(xué)中的應(yīng)用課件28氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）特點：靈敏度高、分析速度快、鑒別能力強(qiáng)；但它受到藥物分子的極性和熱穩(wěn)定性等限制，要求分子具有揮發(fā)性或通過衍生化提高分子的揮發(fā)性，因此其有明顯的局限性。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）特點：29液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)(LC-NMR)特點：能提供最大量的分子結(jié)構(gòu)信息，在體內(nèi)藥物分析中對代謝產(chǎn)物的鑒定具有顯著優(yōu)勢，但是在做NMR分析前必須做大量的分離純化工作，不利于樣品的快速分離；另外，NMR檢測靈敏度低是LC-NMR技術(shù)的瓶頸。液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)(LC-NMR)特點：30液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)基本組成：HPLC裝置、接口裝置與離子源、質(zhì)量分析器。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)基本組成：31目前商品化LC-MS儀主要用大氣壓離子化接口（API）。API不僅是一種較好的接口技術(shù)，同時也是一種離子化方法，該技術(shù)使樣品的離子化在處于大氣壓條件下的離子化室中完成。目前商品化LC-MS儀主要用大氣壓離子化接口32API的操作模式分三種：一、電噴霧離子化（ESI)二、氣動輔助電噴霧離子化三、大氣壓化學(xué)離子化（APCI)API的操作模式分三種：33液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS）特點：樣品前處理簡單，無需衍生化，適用范圍廣將色譜的高分離能力與質(zhì)譜的高檢測靈敏度、定性專屬性集于一身隨著接口裝置和離子化技術(shù)的發(fā)展成熟，該技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中逐漸發(fā)展成為一種常規(guī)的分離檢測方法液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS）特點：34LC-MS在藥物動力學(xué)中的應(yīng)用介紹藥物動力學(xué)研究，需對生物樣品中的微量乃至痕量成分定量分析。而當(dāng)今的藥物研制日趨低劑量，使常規(guī)的分離檢測技術(shù)難以滿足復(fù)雜介質(zhì)中痕量成分準(zhǔn)確定量的要求。LC-MS技術(shù)的高靈敏度使之在這一領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛并趨于常規(guī)化。LC-MS在藥物動力學(xué)中的應(yīng)用介紹藥物動力學(xué)35舉例：閆小華等人用LC/MS聯(lián)用法測定人血漿中氟西汀的濃度：舉例：閆小華等人用LC/MS聯(lián)用法測定人血漿中氟西36色譜條件色譜柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)柱溫：30℃流動相：10mmol/L醋酸銨緩沖液-甲醇（20：80）流速：1.0ml/min色譜條件色譜柱：C18（250mm*4.6mm,5μm)37質(zhì)譜條件離子檢測方式：選擇性離子檢測；離子極性：正離子離子化方式：氣動輔助電噴霧離子化檢測對象：苯磺酸氨氯地平傳輸區(qū)電壓：100V干燥氣流速：10L/min霧化室壓力：40psi干燥氣溫度：350℃質(zhì)譜條件離子檢測方式：選擇性離子檢測；38以往文獻(xiàn)中均以紫外檢測器檢測氨氯地平的濃度,但口服10mg氨氯地平后體內(nèi)最高血漿濃度不到10ng·mL–1,最低只有0.2ng·mL–1,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了紫外的檢測范圍,而本實驗采用LC-MS法測定,結(jié)果最低檢測濃度為0.12ng·mL–1，本法簡便,靈敏,能滿足測定血漿中藥物濃度的要求。以往文獻(xiàn)中均以紫外檢測器檢測氨氯地平39LC-MS在代謝物研究中的應(yīng)用在新藥開發(fā)過程中，為了預(yù)防潛在的毒性，測定是否有代謝物和已知藥物相關(guān)，是否和原藥具有相同的治療作用或?qū)ζ渌委熡袃?nèi)在的活性，有必要對代謝物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。LC-MS在代謝物研究中的應(yīng)用在新藥40舉例：陳懷俠等人運用液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MSn)聯(lián)用技術(shù)研究了樟柳堿大鼠肝勻漿中的代謝物：舉例：陳懷俠等人運用液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(L41色譜條件：色譜柱：C18柱(150mm×2mmi.d.,5μm),流動相：甲醇/0.01%三乙胺溶液(用甲酸調(diào)節(jié)pH3.5)(60∶40,V/V)柱溫：40℃流速：0.2mL/min。色譜條件：色譜柱：C18柱(150mm×2mmi.42質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子化方式,檢測離子為正離子。離子源噴射電壓5.0kV,毛細(xì)管電壓45V,毛細(xì)管溫度200℃,氮氣為鞘氣,其流速40個單位,其它通過碰撞誘導(dǎo)解離獲得母分子離子的多級質(zhì)譜,優(yōu)化的多級質(zhì)譜相對碰撞能量為30%。采用全掃描一級質(zhì)譜及其源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離、全掃描二級質(zhì)譜及三級質(zhì)譜等方式進(jìn)行測定。質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子化方式,檢測離子為正離子。離43依據(jù)上述實驗方法,在樟柳堿的大鼠肝勻漿培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了原藥及其代謝物。本實驗首先總結(jié)出樟柳堿電噴霧質(zhì)譜的電離和裂解規(guī)律,由原藥的特征碎片及特征中性丟失為依據(jù),通過