DNA片段分析常見實驗故障排除

片段分析常見實驗故障排除肖懷東FieldApplicationSpecialistTel:8008208982;4008208982E-mail:CNAPMsupport@lifetech.DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!概要提供線索的軟件界面實驗注意事項DNA提取重要性常見問題DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!提供線索的軟件頁面DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!信息(Info)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!電泳參數(shù)(EPT)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!SizeMatchEditorDNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!雜峰出現(xiàn)的可能原因污染的原因電泳系統(tǒng)污染樣品污染PCR反應的原因DNA用量DNA質(zhì)量操作不精確軟件設置的原因閾值設置過低試劑的原因試劑、緩沖液、膠保存不當DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!甲酰胺推薦使用Hi-DiFormamide，避免電進樣時的離子競爭甲酰胺容易氧化，小管分裝，-

20C保存DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!POP膠出現(xiàn)尿素結晶可以不作處理直接使用，不影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。建議的方法：讓瓶子在室溫下升溫，逐漸溶解。切勿讓溫度達到或超過50C，這會導致POP膠的變質(zhì)。盡量減少膠處于室溫的時間。DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!DNA提取重要性DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!安全；快速；經(jīng)濟；易于操作；避免交叉污染；可靠和可重復；適用于不同的樣本載體；得到高質(zhì)量、高純度DNA；可自動化操作。DNA提取技術應該滿足下列要求DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!DNA提取過程中常見問題1——

抑制物過多DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!DNA提取過程中常見問題2——交叉污染DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!常見問題DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!2熒光污染DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!4模板過量(Overamplification)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!6拔起峰(PullUp)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!8弱擴增(Weakamplification)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!10出峰延遲DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!11微突變(Microvariation)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!13OL太多DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!應用MiniFiler試劑盒優(yōu)勢：擴增片段小，可顯著提高困難模板的分析成功率。DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!樣品圖譜(SamplesPlot)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!AnalysisStartPoint

-pastprimerpeak-before75peakAnalysisStopPoint

Anywhereafter450peak**原始數(shù)據(jù)（RawData）DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!分子量內(nèi)標（SizingQuality）DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!實驗注意事項DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!雜峰出現(xiàn)的可能原因及解決方案污染的原因電泳系統(tǒng)污染：更換污染的水、緩沖液、試劑……樣品污染：避免交叉污染，勤更換用具……

PCR反應的原因DNA用量：避免加入過多DNA模板操作不精DNA質(zhì)量：使用高純度DNA，OD260/OD280>1.6操作部正確：對懷疑結果進行重復實驗軟件設置的原因

-閾值設置過低：建議設置為平均峰高的10%試劑的原因試劑、緩沖液、膠保存不當：按推薦的方法保存試劑DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!BufferBuffer：新鮮配制，不要使用過期的buffer。(3500為預裝好的）DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!注意保養(yǎng)毛細管。不能讓毛細管的兩端長時間暴露在空氣中。干燥使毛細管內(nèi)的膠凝固，膠凝固導致毛細管報廢，無法逆轉。不走電泳的時候，注意儀器上的緩沖液不要干涸；取下來的時候，毛細管兩端浸在水或者緩沖液里。注意樣品純度。DNA越純，毛細管壽命越長。蛋白質(zhì)等成分長期進入毛細管，會滯留在管內(nèi)阻塞管腔，減少毛細管壽命。毛細管DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!DNA純度對最終結果的質(zhì)量有重要影響；在給定樣品時，良好的提取方案可以最大量地得到高質(zhì)量DNA；不同的樣本類型會影響到DNA提取方案的選擇；所有應用于法庭DNA科學的提取方案在使用前都應得到充分的優(yōu)化和認證。DNA提取在法醫(yī)DNA工作中的重要性DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!Chelex貯存液的pH值Chelex貯存液的理想pH是10-11如果pH<9PCR結果很差

PCR產(chǎn)率很低建議：現(xiàn)配現(xiàn)用、少量配制，迅速用完DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!無法得到完整的STR分型；可能產(chǎn)生錯的STR分型；降低毛細管的壽命；解決方案：選擇適合的DNA提取方法純化DNA使用IDPlus、MiniFiler試劑盒DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!無法得到準確的STR分型可能產(chǎn)生錯的STR分型解決方案：經(jīng)常更換常用試劑如水、chelex、甲酰胺等；避免移液器、鑷子等污染；避免臺面污染；DNA單向流動。DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!1寬峰(BroadPeak)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!3釘子峰(Spike)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!5分裂峰(Splitpeaks)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!7弱擴增(Weakamplification)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!9無擴增(Noamplification)DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!DNA片段分析常見實驗故障排除共42頁，