細(xì)胞化學(xué)染色課件

細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)

申家輝11精選PPT細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)申家輝11精選

一、概述二、細(xì)胞化學(xué)染色的基本方法三、臨床應(yīng)用

22精選PPT一、概述22精選PPT

1、概念：

細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而成的一門科學(xué)，以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)的原理對(duì)血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（包括酶類、脂類、蛋白質(zhì)、糖類、鐵、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。3一、概述3精選PPT1、概念：3一、概述3精選PPT

2.細(xì)胞化學(xué)染色的目的

（1）輔助判斷急性白血病的類型（2）輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷與鑒別診斷4精選PPT2.細(xì)胞化學(xué)染色的目的4精選PPT

3.細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟：包括固定、顯色反應(yīng)、復(fù)染。（1）固定：為了保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分的穩(wěn)定性而選用的方法。根據(jù)染色的目的，最常用的固定劑有甲醛、甲醇、乙醇等。

55精選PPT3.細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟：包括固定、顯色反應(yīng)、復(fù)染。5

（2）顯色：通過不同的化學(xué)反應(yīng)，最終形成穩(wěn)定的有色沉淀，使被監(jiān)測(cè)的化學(xué)物質(zhì)顯示出來。包括偶氮偶聯(lián)法：如NAP、ACP及各種脂酶染色普魯氏藍(lán)反應(yīng)：如鐵染色雪夫（shiff）反應(yīng)：如PAS染色聯(lián)苯胺法：如POX染色

（3）復(fù)染：使各種目的細(xì)胞能顯示出來更便于觀察

66精選PPT（2）顯色：通過不同的化學(xué)反應(yīng)，最終形成穩(wěn)定的有色沉淀，使過氧化物酶染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色糖原染色非特異性酯酶染色特異性酯酶染色骨髓鐵染色7二、細(xì)胞化學(xué)染色的基本方法7精選PPT過氧化物酶染色7二、細(xì)胞化學(xué)染色的基本方法7精選PPT

1、原理：poxH2O2

O

聯(lián)苯胺聯(lián)苯胺藍(lán)+

亞硝基鐵氰化鈉8藍(lán)黑色顆粒（一)過氧化物酶(POX)染色8精選PPT8藍(lán)黑色顆粒（一)過氧化物酶(POX)染色8精選PPT

2.試劑

(1)聯(lián)苯胺酒精溶液：取0.3g聯(lián)苯胺加亞硝基鐵氰化鈉飽合液（36%）1ml,再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。

(2)稀過氧化氫（新鮮配制）：取50ml蒸餾水加30%H2O21滴。（3）瑞吉氏復(fù)染液

99精選PPT2.試劑99精選PPT

3、染色方法

1、新鮮干燥涂片加聯(lián)苯胺酒精溶液10滴，覆蓋整個(gè)髓膜，固定1-2min。2、再加等量的稀H2O2，混勻后染色4－5min,勿倒去染液直接流水沖洗。3、瑞氏染液復(fù)染。1010精選PPT3、染色方法1010精選PPT

4、注意事項(xiàng)

（1）H2O2要新鮮配制，注意有效性（2）標(biāo)本要新鮮，最長不超過一周，時(shí)間長了酶活性減弱。（3）POX染色后，一定要沖洗干凈，否則染料堆積或浮于表面，影響瑞氏染色結(jié)果觀察。1111精選PPT4、注意事項(xiàng)1111精選PPT

5、結(jié)果判定：中性粒細(xì)胞桿狀及分葉核呈強(qiáng)陽性是染色成功的標(biāo)志(設(shè)對(duì)照片）。在細(xì)胞的胞漿中出現(xiàn)藍(lán)綠色或藍(lán)棕色顆粒為陽性反應(yīng)。1212精選PPT5、結(jié)果判定：中性粒細(xì)胞桿狀及分葉核呈強(qiáng)陽性是染色成功的1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；2.晚幼紅細(xì)胞，呈陰性；3.單核細(xì)胞，呈弱陽性；4.漿細(xì)胞，呈陰性13精選PPT1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；2.晚幼紅細(xì)胞，呈陰性；3.單1414精選PPT1414精選PPT急性粒細(xì)胞白血?。∕2a)的POX染色原始粒細(xì)胞均呈陽性

15精選PPT急性粒細(xì)胞白血?。∕2a)的POX染色15精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；其他原始淋巴細(xì)胞均呈陰性

16精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病的POX染色16精選PPT急性早幼粒細(xì)胞白血病的POX染色１.原始紅細(xì)胞，呈陰性；其他早幼粒細(xì)胞均呈強(qiáng)陽性

17精選PPT急性早幼粒細(xì)胞白血病的POX染色17精選PPT急性單核細(xì)胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；2.原始單核細(xì)胞，呈陽性；3.原始單核細(xì)胞，呈弱陽性；其他原幼單核細(xì)胞呈陰性18精選PPT急性單核細(xì)胞白血病的POX染色18精選PPT

6、臨床意義

（1）正常分布

粒系:早期原粒陰性，晚期原粒及以下各階段呈不同程度陽性。

單核系:早期原單陰性，其它階段皆呈弱陽性。

淋巴、紅系、漿細(xì)胞、巨核均呈陰性。1919精選PPT6、臨床意義1919精選PPT

（2）急性白血病的鑒別診斷

幼稚細(xì)胞POX陽性率≥3%：急非淋（AML)

幼稚細(xì)胞POX陽性率＜3%：急淋（ALL)

2020精選PPT（2）急性白血病的鑒別診斷2020精選PPT

（二）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（偶氮偶聯(lián)法）1.原理磷酸奈酚鈉磷酸+萘酚

偶聯(lián)萘酚+重氮鹽不溶性有色沉淀物定位于胞漿(堅(jiān)固藍(lán)RR鹽)

21NAPPH9.2～9.821精選PPT（二）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

222.試劑（1）固定劑：10％甲醛甲醇溶液（2）Tris-Hcl緩沖液的配制：Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸餾水中,加濃HCL1-2滴，PH調(diào)至9.2，4℃保存?。?）作用(基質(zhì)液):磷酸萘酚鈉5mg

N-N二甲基酰胺1ml

Tris-Hcl液4ml

堅(jiān)固藍(lán)RR鹽5mg

（4）復(fù)染液：1%中性紅22精選PPT222.試劑22精選PPT

3.操作步驟

1、新鮮、干燥的外周血或骨髓涂片（標(biāo)本片及對(duì)照片）加固定劑作用30秒（染缸），水洗待干；2、滴加作用液，室溫染色15min，水洗待干；3、1%中性紅復(fù)染1min2323精選PPT3.操作步驟2323精選PPT4.注意事項(xiàng)

(1)重氮鹽以堅(jiān)固藍(lán)RR鹽為最佳；(2)堅(jiān)固藍(lán)RR鹽應(yīng)適量：過多易造成染色失敗，過少使反應(yīng)減弱；(3)每次都要做陽性對(duì)照；(4)作用液新鮮配制，配好后要立即使用2424精選PPT4.注意事項(xiàng)2424精選PPT

5.結(jié)果觀察:(對(duì)照片成熟中性粒細(xì)胞中出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽性細(xì)胞，說明染色成功)正常人除成熟中性粒細(xì)胞NAP可見陽性外，其它血細(xì)胞均為陰性。且正常陽性率＜40%，積分值30～130分。

2525精選PPT5.結(jié)果觀察:(對(duì)照片成熟中性粒細(xì)胞中出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽6.NAP陽性結(jié)果及積分判斷標(biāo)準(zhǔn)“－”0分，胞漿中無陽性顆?！?”1分，胞漿中含有少量顆?！?+”2分，胞漿中含有中等量顆?！?+”3分，胞漿中含有豐富的顆粒，但胞核清楚“4+”4分，胞漿中含有豐富粗大的顆粒，但胞核不清楚26精選PPT6.NAP陽性結(jié)果及積分判斷標(biāo)準(zhǔn)“－”0分，胞漿中無陽性中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色1.中性成熟粒細(xì)胞（+）；2.中性成熟粒細(xì)胞（++）；3.中性成熟粒細(xì)胞（+++）；4.中性成熟粒細(xì)胞（++++）；5.淋巴細(xì)胞（-）27精選PPT中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色27精選PPT2828精選PPT2828精選PPT29NAP分級(jí)29精選PPT29NAP分級(jí)29精選PPT

7.臨床意義

增高：細(xì)菌感染、類白、AA、急淋、慢粒急變、骨髓增殖性疾病，惡性淋巴瘤。

降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、惡組3030精選PPT7.臨床意義3030精選PPT

8.鑒別診斷

慢粒與類白：前↓；后↑。PNH與AA：前↓；后↑。

急粒與急淋：前↓；后↑。MDS與慢性再障：前↓；后↑。病毒感染與細(xì)菌感染：前者無明顯變化，后者↑。惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多：前↓；后↑。

3131精選PPT8.鑒別診斷3131精選PPT（三）酯酶染色概述特異性酯酶染色非特異性酯酶染色32精選PPT（三）酯酶染色概述32精選PPT

概述

根據(jù)各類細(xì)胞所含酯酶特異性高低分為特異性酯酶(SE)和非特異性酯酶(NSE)；特異性酯酶是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）；非特異性酯酶根據(jù)水解基質(zhì)液的PH不同，又分為中性NSE（α-醋酸萘酚酯酶

），酸性NSE（酸性α-醋酸萘酚酯酶），堿性NSE（α-丁酸萘酚酯酶）。目前常用的是氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色NAS-DCE和α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）+NaF抑制試驗(yàn)。33精選PPT概述根據(jù)各類細(xì)胞所含1.原理（偶氮偶聯(lián)法）氯乙酸AS－D萘酚AS－D萘酚

+重氮鹽(堅(jiān)固藍(lán)B鹽)34NAS-DCE不溶性有色沉淀物定位于胞漿內(nèi)酶所在位特異性酯酶(CE)染色基質(zhì)液基質(zhì)液34精選PPT1.原理（偶氮偶聯(lián)法）34NAS-DCE不溶性有色沉淀物定位

2.試劑：

（1）固定液：10％甲醛甲醇溶液（2）作用液（基質(zhì)液）氯乙酸AS－D萘酚5mg丙酮5-8ml磷酸鹽緩沖液19ml

堅(jiān)固藍(lán)B鹽10mg（3）復(fù)染液：1%中性紅

3535精選PPT2.試劑：

3.染色方法（1）固定：10%甲醛甲醇液固定30秒，水洗晾干（2）滴加作用液37℃孵育30min，水洗（3）1%中性紅復(fù)染1min，水洗晾干鏡檢。3636精選PPT3.染色方法3636精選PPT

4.注意事項(xiàng)：

1.氯乙酸AS-D萘酚溶液應(yīng)避光，4℃冰箱保存，變黃或混濁即失效。

2.染色溫度37℃效果最好3737精選PPT3737精選PPT5.結(jié)果判斷

中性分葉核粒細(xì)胞胞漿中見細(xì)小，彌漫分布的藍(lán)色顆粒為染色成功的標(biāo)志。6.臨床意義

粒系除早期原粒外，其余階段細(xì)胞均為陽性，其它各系均為陰性。CE染色對(duì)粒細(xì)胞白血病有特異性的診斷價(jià)值。3838精選PPT5.結(jié)果判斷3838精選PPT39CE39精選PPT39CE39精選PPT

非特異性酯酶染色（α-NAE）1.原理：α-醋酸萘酚α-萘酚重氮鹽40α-NAE形成不溶性有色沉淀定位于胞漿內(nèi)酶所在位置7.4~7.6(堅(jiān)固鹽B)40精選PPT非特異性酯酶染色（α-NAE）1.原理：4

2.試劑（1）固定液：甲醛（2）作用液:

α-醋酸萘酚5mg丙酮5-8ml磷酸鹽緩沖液10ml固藍(lán)B鹽10mg

（3）復(fù)染液：10g/L甲基綠水溶液4141精選PPT2.試劑4141精選PPT423.染色步驟（1）甲醛蒸氣固定5-10min，流水沖洗5min晾干（2）放入作用液37℃1h,流水沖洗。（3）10g/L的甲基綠溶液復(fù)染5min,水洗待干鏡檢

（4）NaF抑制試驗(yàn)：在40ml作用液中加NaF15mg同樣染色后，油鏡計(jì)數(shù)100個(gè)被檢細(xì)胞，分別計(jì)算出抑制前和抑制后的陽性率和積分，按公式計(jì)算出抑制率，正常小于50%。42精選PPT423.染色步驟42精選PPT

A圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色

原始、幼稚單核細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性

B圖：急性單核細(xì)胞白血病

α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細(xì)胞陽性反應(yīng)被氟化鈉抑制（與A圖為同一標(biāo)本）

A

B43精選PPTA圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色B圖：急性單核細(xì)胞

4.結(jié)果判斷：胞漿內(nèi)有棕色或棕黑色沉淀物為陽性

染色成功指標(biāo)：正常部分原始、幼稚及成熟單核細(xì)胞呈陽性；部分粒細(xì)胞為弱陽性反應(yīng)；部分成熟淋巴或個(gè)別中、晚幼紅呈陽性。

4444精選PPT4.結(jié)果判斷：胞漿內(nèi)有棕色或棕黑色沉淀物為陽性44444545精選PPT4545精選PPT

5.臨床意義：鑒別急性白血病

（1）急單時(shí)，原始至成熟單核大多為α-NAE陽性，且易被NaF抑制，抑制率正常大于50%。

（2）急粒時(shí)，白血病細(xì)胞多呈陰性或弱陽性，M3呈陽性，但均不被NaF抑制。

酯酶雙染：同一張血涂片上的細(xì)胞分別在兩種不同的基質(zhì)液中作用一定時(shí)間，復(fù)染鏡檢。主用于鑒別診斷AML-M4亞型。

4646精選PPT5.臨床意義：鑒別急性白血病

（1）急單時(shí)，原始至成熟骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染色顯示，原始粒細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色CE陽性反應(yīng)；而原始單核細(xì)胞胞漿呈棕色的NAE陽性反應(yīng)。47精選PPT骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染（四）糖原染色(PAS)細(xì)胞內(nèi)糖原中的乙二醇基48氧化過碘酸二醛基

1.原理（過碘酸-雪夫氏反應(yīng)）二醛基經(jīng)過加成和縮合使無色亞硫酸品紅恢復(fù)品紅的紅色失去亞硫酸定位于含有糖原的細(xì)胞內(nèi)48精選PPT（四）糖原染色(PAS)細(xì)胞內(nèi)糖原中的乙二醇基48氧化2.試劑

（1）10g/L的過碘酸氧化劑⑵雪夫氏試劑（schiff）：紅色品紅與偏重亞硫酸鈉，變成了無色品紅。

⑶20/L甲基綠復(fù)染液4949精選PPT2.試劑4949精選PPT3.操作

（1）新鮮髓片放在95％乙醇中固定10分鐘；蒸餾水沖洗待干；（2）10g/L過碘酸氧化15分鐘；蒸餾水沖洗；（3）置雪夫氏試劑浸泡45分鐘，水洗后涼干；（4）甲基綠復(fù)染15分鐘，水洗待干鏡檢。

5050精選PPT3.操作5050精選PPT

4.注意事項(xiàng)

（1）所用染色缸及器具應(yīng)十分清潔、干燥。（2）雪夫氏染液應(yīng)避光密封保存，變紅則失效。（3）放入雪夫氏溶液之前，用蒸餾水洗涂片，而且一定要完全干燥，若有水，試劑變色失效。5151精選PPT4.注意事項(xiàng)5151精選PPT

（4）染色時(shí)間和溫度應(yīng)相對(duì)恒定，一般37℃效果最好。（5）染好的標(biāo)本不能久放，8天后漸退色，因此應(yīng)及時(shí)觀察。5252精選PPT（4）染色時(shí)間和溫度應(yīng)相對(duì)恒定，一般37℃效果最好。525

5.結(jié)果觀察

陽性：細(xì)胞漿內(nèi)的紅色陽性物呈彌散狀、顆粒狀或塊狀，胞核染綠色。陰性：胞漿無色或無紅色顆粒。

5353精選PPT5.結(jié)果觀察5353精選PPT

6.臨床意義

正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（1）粒系：原始細(xì)胞多為陰性，隨著細(xì)胞成熟，陽性逐漸增強(qiáng)。（2）淋系：正常人陽性率10-50%之間，多為20%以下。（3）紅系：PAS呈陰性反應(yīng)（4）巨核：PAS呈陽性反應(yīng)（5）單核系:呈陰性或細(xì)顆粒狀弱陽性。5454精選PPT6.臨床意義5454精選PPT正常血細(xì)胞PAS染色1.原始粒細(xì)胞（-）2.早幼粒細(xì)胞（+）3.中性中幼粒細(xì)胞（++）4.中性晚幼粒細(xì)胞（+++）5.中性桿狀核粒細(xì)胞（++++）6.中性分葉核粒細(xì)胞（++++）

7.嗜堿性粒細(xì)胞（+++）8.嗜酸性粒細(xì)胞（+++）9.單核細(xì)胞（±）

10.淋巴細(xì)胞（++++）55精選PPT正常血細(xì)胞PAS染色55精選PPT

疾病鑒別

（1）紅細(xì)胞系統(tǒng)疾病：M6、MDS呈陽性（均勻或塊狀紅色）；巨幼貧、再障呈陰性。

（2）白血?。杭绷芗奥埽捍诸w粒或塊狀陽性急粒：陰性或弱陽性（彌散細(xì)顆粒）急單：陽性，多為細(xì)顆粒有時(shí)可見粗顆粒急性巨核細(xì)胞白血病：陽性（塊狀）

5656精選PPT疾病鑒別5656精選PPTPASAML-M6幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)MA幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)57精選PPTPASAML-M6MA57精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細(xì)胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性58精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色58精選PPT59急淋PAS陽性細(xì)胞59精選PPT59急淋PAS陽性細(xì)胞59精選PPT60PAS陽性的幼紅細(xì)胞60精選PPT60PAS陽性的幼紅細(xì)胞60精選PPT

1.原理(普魯氏藍(lán)反應(yīng))4Fe3++K4[Fe(CN)6]Fe4[Fe(CN)6]3+12K+

(亞鐵氰化鉀)(藍(lán)色亞鐵氰化鐵)61（六）骨髓鐵染色

稀鹽酸細(xì)胞外鐵：主要存在于骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)鐵：主要存在于有核紅細(xì)胞中61精選PPT1.原理(普魯氏藍(lán)反應(yīng))61（六）骨髓鐵染色稀鹽酸細(xì)胞外

2.試劑

（1）固定液：甲醇

（2）酸性亞鐵氰化鉀溶液：200g/L亞鐵氰化鉀5份，濃鹽酸1份。取200g/L亞鐵氰化鉀溶液置于試管中，緩慢加入濃鹽酸，邊滴邊搖由開始的白色沉淀消失為至。

（3）復(fù)染劑：0.5%沙黃

6262精選PPT2.試劑6262精選PPT

3.操作步驟

（1）選片做標(biāo)記，甲醇固定10min

（2）37℃滴加酸性亞鐵氰化鉀溶液染色30min

（3）蒸餾水沖洗2min后沙黃復(fù)染1min，待干鏡檢。

6363精選PPT3.操作步驟6363精選PPT4.注意事項(xiàng)（1）所用的玻片及器具必須清潔，無鐵污染。（2）應(yīng)選有骨髓小粒的髓片做鐵染色，以便觀察細(xì)胞外鐵。（3）作用液必須新鮮配制。（4）亞鐵氰化鉀暴露于空氣中，易氧化變質(zhì)，貯于棕色瓶中，避光密封保存。

6464精選PPT4.注意事項(xiàng)6464精選PPT

（5）復(fù)染前應(yīng)充分沖洗，否則鐵粒狀結(jié)晶過多，影響觀察。（6）計(jì)數(shù)時(shí)要不停地旋轉(zhuǎn)細(xì)螺旋器，因?yàn)殍F粒在細(xì)胞內(nèi)的高低度不一致，每看一個(gè)中、晚幼紅細(xì)胞要旋轉(zhuǎn)幾次，直到看清為止。（7）觀察內(nèi)鐵時(shí)，幼紅及淋巴細(xì)胞要分清，幼紅細(xì)胞核為鮮紅色，淋巴細(xì)胞核為淡紅色，（8）與污染鐵的鑒別：污染鐵不在髓小粒和細(xì)胞內(nèi)，而是浮在上邊，而且藍(lán)中帶黑。6565精選PPT（5）復(fù)染前應(yīng)充分沖洗，否則鐵粒狀結(jié)晶過多，影響觀察。65

5.結(jié)果觀察：

（1）正常幼紅細(xì)胞核呈鮮紅、漿淡黃、鐵顆粒呈藍(lán)綠色（2）低倍鏡觀察細(xì)胞外鐵：涂片尾部和髓小粒附近陰性：無藍(lán)綠色鐵粒。陽性：含有不同程度的鐵粒、鐵小珠、鐵小塊。根據(jù)陽性程度不同分四級(jí)。

6666精選PPT5.結(jié)果觀察：6666精選PPT67細(xì)胞外鐵——幼紅細(xì)胞外的骨髓鐵

(+)少量鐵粒

偶見鐵小珠

（2＋）

較多鐵粒較多鐵小珠

(3+)許多鐵粒許多鐵小珠少量小塊狀。

(4+)極多的鐵顆粒

鐵小珠

許多小塊密集

成堆。67精選PPT67細(xì)胞外鐵——幼紅細(xì)胞外的骨髓鐵(+)細(xì)胞外鐵觀察陽性為藍(lán)綠色沉淀68精選PPT細(xì)胞外鐵觀察陽性為藍(lán)綠色沉淀68精選PPT（3）細(xì)胞內(nèi)鐵：油鏡計(jì)數(shù)100個(gè)中晚幼紅細(xì)胞；并記錄含有藍(lán)色顆粒的鐵粒幼紅細(xì)胞百分率。Ⅰ型胞漿內(nèi)1-2個(gè)鐵小粒Ⅱ型胞漿內(nèi)3-5個(gè)鐵小粒Ⅲ型胞漿內(nèi)6-10個(gè)鐵小?；?-4粗大顆粒Ⅳ型含鐵小粒10個(gè)以上或5個(gè)以上粗大顆粒

環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞：含鐵粒在6粒以上，其中2/3以上鐵粒圍繞核排列，超過1/2周。6969精選PPT（3）細(xì)胞內(nèi)鐵：油鏡計(jì)數(shù)100個(gè)中晚幼紅細(xì)胞；并記696骨髓細(xì)胞內(nèi)鐵染色1.環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；2.鐵粒幼紅細(xì)胞

70精選PPT骨髓細(xì)胞內(nèi)鐵染色70精選PPT7171精選PPT7171精選PPT

5.正常參考值

細(xì)胞外鐵：+～++（2/3為+，1/3為++）細(xì)胞內(nèi)鐵：20%～40%（正常人Ⅰ型多見，少數(shù)為Ⅱ型）7272精選PPT5.正常參考值7272精選PPT7.臨床意義：

(1)缺鐵性貧血:外鐵↓或(－)，內(nèi)鐵＜15%。此方法是診斷IDA及指導(dǎo)鐵劑治療的一種輔助方法；經(jīng)鐵劑治療后細(xì)胞內(nèi)外鐵迅速增多。(2)鐵粒幼細(xì)胞性貧血：內(nèi)鐵陽性率高于40%，可達(dá)70%以上，鐵粒數(shù)目增多，顆粒粗大，可見環(huán)鐵；外鐵多為+2，可達(dá)+3～+4。（3）MDS-RAS：內(nèi)鐵陽性率↑，環(huán)鐵＞15%。7373精選PPT7.臨床意義：7373精選PPT（4）感染性貧血：外鐵↑，內(nèi)鐵↓（5）地中海貧血：內(nèi)鐵↑，外鐵↑（6）巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再障、白血?。和忤F、內(nèi)鐵正?；蛏?。7474精選PPT（4）感染性貧血：外鐵↑，內(nèi)鐵↓7474精選PPT三、臨床應(yīng)用75精選PPT三、臨床應(yīng)用75精選PPT

對(duì)于貧血病例鐵染色應(yīng)作為常規(guī)染色外鐵↓或(-)，內(nèi)鐵↓：在缺鐵性貧血。

內(nèi)、外鐵正?；蛟龆啵壕抻准?xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血。外鐵增多，內(nèi)鐵減少：感染性貧血、肝病性貧血、腎病性貧血。內(nèi)、外鐵均增多：增生異常綜合癥（MDS）、鐵粒幼細(xì)胞性貧血。76一、在貧血診斷中的應(yīng)用76精選PPT對(duì)于貧血病例鐵染色應(yīng)作為常規(guī)染色76一、在貧血診斷

在巨幼細(xì)胞性貧血和紅血病或紅白血病，作PAS染色。

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿骨髓增生減低者與再生障礙性貧血，NAP染色77M6PAS染色陽性，而巨幼貧幼紅細(xì)胞陰性PNH的NAP減低，而AA的NAP活性升高77精選PPT在巨幼細(xì)胞性貧血和紅血病或紅白血病，作P

首選化學(xué)染色為POX或蘇丹黑B染色：

急淋病人POX陽性細(xì)胞＜3％急非淋POX或SB陽性細(xì)胞＞3％PAS反應(yīng)進(jìn)一步鑒別確認(rèn)：

原淋細(xì)胞陽性物多為粗大顆?；驁F(tuán)塊狀原粒細(xì)胞呈小顆?；驈浡旧?/p>

78二、在白血病診斷中的應(yīng)用78精選PPT首選化學(xué)染色為POX或蘇丹黑B染色：78二、在白血病診斷中

急非淋病人：M2、M3POX呈強(qiáng)陽性，M1、M4、M5呈弱陽性。

酯酶染色為急非淋的進(jìn)一步分型提供了可靠的客觀指標(biāo)：CE為粒系標(biāo)志酶，ANAE為單核系標(biāo)志酶（NaF抑制實(shí)驗(yàn)）。慢性粒細(xì)胞性白血病和類白血病反應(yīng)鑒別的有效辦法是NAP：慢粒時(shí)減低，類白時(shí)顯著增高。7979精選PPT急非淋病人：M2、M3POX呈強(qiáng)陽性，M1、M4、

80

急性白血病

急淋

急非淋

L1

L2

L3M1

M2M3

M4M5

M6M7PoxPAS+NAPCEANAE染色＋NAF80精選PPT80急性白血病急淋急非淋L1L2L3M1M2

81PAS:陽性，顆粒狀NAP:積分增高PAS:大小不定塊狀陽性NAP:積分增高L1、L2、L3形態(tài)區(qū)分M7，可做免疫分型ANAE+NaF抑制M5：陽性～強(qiáng)陽性，抑制率＞50％M4:陽性，抑制率＞50％（形態(tài)、做酯酶雙染）NAP:積分減低

涂片可見較多幼稚細(xì)胞POX染色陰性（陽性率<3%)陽性，強(qiáng)陽性

陰性或弱陽性（部分陰性，部分陽性）PAS+NAPM2、M3最強(qiáng)M1、M5最弱（CE陽性，形態(tài)區(qū)分）

NAP:積分減低CE81精選PPT81PAS:陽性，顆粒狀PAS:大小不定塊狀陽性L1、基礎(chǔ)理論：造血器官、造血干細(xì)胞、造血微環(huán)境、造血調(diào)控?；痉椒ǎ貉?xì)胞發(fā)育與成熟（規(guī)律）、正常血細(xì)胞形態(tài)學(xué)、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)、細(xì)胞化學(xué)染色。臨床應(yīng)用：血液病診斷中的應(yīng)用、血液病治療監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用。82精選PPT基礎(chǔ)理論：造血器官、造血干細(xì)胞、造血微環(huán)境、造血調(diào)控。8283謝謝83精選PPT83謝謝83精選PPT細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)

申家輝8484精選PPT細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)申家輝11精選

一、概述二、細(xì)胞化學(xué)染色的基本方法三、臨床應(yīng)用

8585精選PPT一、概述22精選PPT

1、概念：

細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而成的一門科學(xué)，以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)的原理對(duì)血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（包括酶類、脂類、蛋白質(zhì)、糖類、鐵、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。86一、概述86精選PPT1、概念：3一、概述3精選PPT

2.細(xì)胞化學(xué)染色的目的

（1）輔助判斷急性白血病的類型（2）輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷與鑒別診斷87精選PPT2.細(xì)胞化學(xué)染色的目的4精選PPT

3.細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟：包括固定、顯色反應(yīng)、復(fù)染。（1）固定：為了保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分的穩(wěn)定性而選用的方法。根據(jù)染色的目的，最常用的固定劑有甲醛、甲醇、乙醇等。

8888精選PPT3.細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟：包括固定、顯色反應(yīng)、復(fù)染。5

（2）顯色：通過不同的化學(xué)反應(yīng)，最終形成穩(wěn)定的有色沉淀，使被監(jiān)測(cè)的化學(xué)物質(zhì)顯示出來。包括偶氮偶聯(lián)法：如NAP、ACP及各種脂酶染色普魯氏藍(lán)反應(yīng)：如鐵染色雪夫（shiff）反應(yīng)：如PAS染色聯(lián)苯胺法：如POX染色

（3）復(fù)染：使各種目的細(xì)胞能顯示出來更便于觀察

8989精選PPT（2）顯色：通過不同的化學(xué)反應(yīng)，最終形成穩(wěn)定的有色沉淀，使過氧化物酶染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色糖原染色非特異性酯酶染色特異性酯酶染色骨髓鐵染色90二、細(xì)胞化學(xué)染色的基本方法90精選PPT過氧化物酶染色7二、細(xì)胞化學(xué)染色的基本方法7精選PPT

1、原理：poxH2O2

O

聯(lián)苯胺聯(lián)苯胺藍(lán)+

亞硝基鐵氰化鈉91藍(lán)黑色顆粒（一)過氧化物酶(POX)染色91精選PPT8藍(lán)黑色顆粒（一)過氧化物酶(POX)染色8精選PPT

2.試劑

(1)聯(lián)苯胺酒精溶液：取0.3g聯(lián)苯胺加亞硝基鐵氰化鈉飽合液（36%）1ml,再加95%乙醇至100ml，存在于棕色瓶中，可存一年。

(2)稀過氧化氫（新鮮配制）：取50ml蒸餾水加30%H2O21滴。（3）瑞吉氏復(fù)染液

9292精選PPT2.試劑99精選PPT

3、染色方法

1、新鮮干燥涂片加聯(lián)苯胺酒精溶液10滴，覆蓋整個(gè)髓膜，固定1-2min。2、再加等量的稀H2O2，混勻后染色4－5min,勿倒去染液直接流水沖洗。3、瑞氏染液復(fù)染。9393精選PPT3、染色方法1010精選PPT

4、注意事項(xiàng)

（1）H2O2要新鮮配制，注意有效性（2）標(biāo)本要新鮮，最長不超過一周，時(shí)間長了酶活性減弱。（3）POX染色后，一定要沖洗干凈，否則染料堆積或浮于表面，影響瑞氏染色結(jié)果觀察。9494精選PPT4、注意事項(xiàng)1111精選PPT

5、結(jié)果判定：中性粒細(xì)胞桿狀及分葉核呈強(qiáng)陽性是染色成功的標(biāo)志(設(shè)對(duì)照片）。在細(xì)胞的胞漿中出現(xiàn)藍(lán)綠色或藍(lán)棕色顆粒為陽性反應(yīng)。9595精選PPT5、結(jié)果判定：中性粒細(xì)胞桿狀及分葉核呈強(qiáng)陽性是染色成功的1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；2.晚幼紅細(xì)胞，呈陰性；3.單核細(xì)胞，呈弱陽性；4.漿細(xì)胞，呈陰性96精選PPT1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；2.晚幼紅細(xì)胞，呈陰性；3.單9797精選PPT1414精選PPT急性粒細(xì)胞白血?。∕2a)的POX染色原始粒細(xì)胞均呈陽性

98精選PPT急性粒細(xì)胞白血病（M2a)的POX染色15精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；其他原始淋巴細(xì)胞均呈陰性

99精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病的POX染色16精選PPT急性早幼粒細(xì)胞白血病的POX染色１.原始紅細(xì)胞，呈陰性；其他早幼粒細(xì)胞均呈強(qiáng)陽性

100精選PPT急性早幼粒細(xì)胞白血病的POX染色17精選PPT急性單核細(xì)胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽性；2.原始單核細(xì)胞，呈陽性；3.原始單核細(xì)胞，呈弱陽性；其他原幼單核細(xì)胞呈陰性101精選PPT急性單核細(xì)胞白血病的POX染色18精選PPT

6、臨床意義

（1）正常分布

粒系:早期原粒陰性，晚期原粒及以下各階段呈不同程度陽性。

單核系:早期原單陰性，其它階段皆呈弱陽性。

淋巴、紅系、漿細(xì)胞、巨核均呈陰性。102102精選PPT6、臨床意義1919精選PPT

（2）急性白血病的鑒別診斷

幼稚細(xì)胞POX陽性率≥3%：急非淋（AML)

幼稚細(xì)胞POX陽性率＜3%：急淋（ALL)

103103精選PPT（2）急性白血病的鑒別診斷2020精選PPT

（二）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（偶氮偶聯(lián)法）1.原理磷酸奈酚鈉磷酸+萘酚

偶聯(lián)萘酚+重氮鹽不溶性有色沉淀物定位于胞漿(堅(jiān)固藍(lán)RR鹽)

104NAPPH9.2～9.8104精選PPT（二）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

1052.試劑（1）固定劑：10％甲醛甲醇溶液（2）Tris-Hcl緩沖液的配制：Tris粉〔三胺基甲烷〕4.85克溶于200ml蒸餾水中,加濃HCL1-2滴，PH調(diào)至9.2，4℃保存！（3）作用(基質(zhì)液):磷酸萘酚鈉5mg

N-N二甲基酰胺1ml

Tris-Hcl液4ml

堅(jiān)固藍(lán)RR鹽5mg

（4）復(fù)染液：1%中性紅105精選PPT222.試劑22精選PPT

3.操作步驟

1、新鮮、干燥的外周血或骨髓涂片（標(biāo)本片及對(duì)照片）加固定劑作用30秒（染缸），水洗待干；2、滴加作用液，室溫染色15min，水洗待干；3、1%中性紅復(fù)染1min106106精選PPT3.操作步驟2323精選PPT4.注意事項(xiàng)

(1)重氮鹽以堅(jiān)固藍(lán)RR鹽為最佳；(2)堅(jiān)固藍(lán)RR鹽應(yīng)適量：過多易造成染色失敗，過少使反應(yīng)減弱；(3)每次都要做陽性對(duì)照；(4)作用液新鮮配制，配好后要立即使用107107精選PPT4.注意事項(xiàng)2424精選PPT

5.結(jié)果觀察:(對(duì)照片成熟中性粒細(xì)胞中出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽性細(xì)胞，說明染色成功)正常人除成熟中性粒細(xì)胞NAP可見陽性外，其它血細(xì)胞均為陰性。且正常陽性率＜40%，積分值30～130分。

108108精選PPT5.結(jié)果觀察:(對(duì)照片成熟中性粒細(xì)胞中出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽6.NAP陽性結(jié)果及積分判斷標(biāo)準(zhǔn)“－”0分，胞漿中無陽性顆?！?”1分，胞漿中含有少量顆?！?+”2分，胞漿中含有中等量顆?！?+”3分，胞漿中含有豐富的顆粒，但胞核清楚“4+”4分，胞漿中含有豐富粗大的顆粒，但胞核不清楚109精選PPT6.NAP陽性結(jié)果及積分判斷標(biāo)準(zhǔn)“－”0分，胞漿中無陽性中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色1.中性成熟粒細(xì)胞（+）；2.中性成熟粒細(xì)胞（++）；3.中性成熟粒細(xì)胞（+++）；4.中性成熟粒細(xì)胞（++++）；5.淋巴細(xì)胞（-）110精選PPT中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色27精選PPT111111精選PPT2828精選PPT112NAP分級(jí)112精選PPT29NAP分級(jí)29精選PPT

7.臨床意義

增高：細(xì)菌感染、類白、AA、急淋、慢粒急變、骨髓增殖性疾病，惡性淋巴瘤。

降低：慢粒、急粒、PNH、MDS、惡組113113精選PPT7.臨床意義3030精選PPT

8.鑒別診斷

慢粒與類白：前↓；后↑。PNH與AA：前↓；后↑。

急粒與急淋：前↓；后↑。MDS與慢性再障：前↓；后↑。病毒感染與細(xì)菌感染：前者無明顯變化，后者↑。惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多：前↓；后↑。

114114精選PPT8.鑒別診斷3131精選PPT（三）酯酶染色概述特異性酯酶染色非特異性酯酶染色115精選PPT（三）酯酶染色概述32精選PPT

概述

根據(jù)各類細(xì)胞所含酯酶特異性高低分為特異性酯酶(SE)和非特異性酯酶(NSE)；特異性酯酶是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）；非特異性酯酶根據(jù)水解基質(zhì)液的PH不同，又分為中性NSE（α-醋酸萘酚酯酶

），酸性NSE（酸性α-醋酸萘酚酯酶），堿性NSE（α-丁酸萘酚酯酶）。目前常用的是氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色NAS-DCE和α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）+NaF抑制試驗(yàn)。116精選PPT概述根據(jù)各類細(xì)胞所含1.原理（偶氮偶聯(lián)法）氯乙酸AS－D萘酚AS－D萘酚

+重氮鹽(堅(jiān)固藍(lán)B鹽)117NAS-DCE不溶性有色沉淀物定位于胞漿內(nèi)酶所在位特異性酯酶(CE)染色基質(zhì)液基質(zhì)液117精選PPT1.原理（偶氮偶聯(lián)法）34NAS-DCE不溶性有色沉淀物定位

2.試劑：

（1）固定液：10％甲醛甲醇溶液（2）作用液（基質(zhì)液）氯乙酸AS－D萘酚5mg丙酮5-8ml磷酸鹽緩沖液19ml

堅(jiān)固藍(lán)B鹽10mg（3）復(fù)染液：1%中性紅

118118精選PPT2.試劑：

3.染色方法（1）固定：10%甲醛甲醇液固定30秒，水洗晾干（2）滴加作用液37℃孵育30min，水洗（3）1%中性紅復(fù)染1min，水洗晾干鏡檢。119119精選PPT3.染色方法3636精選PPT

4.注意事項(xiàng)：

1.氯乙酸AS-D萘酚溶液應(yīng)避光，4℃冰箱保存，變黃或混濁即失效。

2.染色溫度37℃效果最好120120精選PPT3737精選PPT5.結(jié)果判斷

中性分葉核粒細(xì)胞胞漿中見細(xì)小，彌漫分布的藍(lán)色顆粒為染色成功的標(biāo)志。6.臨床意義

粒系除早期原粒外，其余階段細(xì)胞均為陽性，其它各系均為陰性。CE染色對(duì)粒細(xì)胞白血病有特異性的診斷價(jià)值。121121精選PPT5.結(jié)果判斷3838精選PPT122CE122精選PPT39CE39精選PPT

非特異性酯酶染色（α-NAE）1.原理：α-醋酸萘酚α-萘酚重氮鹽123α-NAE形成不溶性有色沉淀定位于胞漿內(nèi)酶所在位置7.4~7.6(堅(jiān)固鹽B)123精選PPT非特異性酯酶染色（α-NAE）1.原理：4

2.試劑（1）固定液：甲醛（2）作用液:

α-醋酸萘酚5mg丙酮5-8ml磷酸鹽緩沖液10ml固藍(lán)B鹽10mg

（3）復(fù)染液：10g/L甲基綠水溶液124124精選PPT2.試劑4141精選PPT1253.染色步驟（1）甲醛蒸氣固定5-10min，流水沖洗5min晾干（2）放入作用液37℃1h,流水沖洗。（3）10g/L的甲基綠溶液復(fù)染5min,水洗待干鏡檢

（4）NaF抑制試驗(yàn)：在40ml作用液中加NaF15mg同樣染色后，油鏡計(jì)數(shù)100個(gè)被檢細(xì)胞，分別計(jì)算出抑制前和抑制后的陽性率和積分，按公式計(jì)算出抑制率，正常小于50%。125精選PPT423.染色步驟42精選PPT

A圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色

原始、幼稚單核細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性

B圖：急性單核細(xì)胞白血病

α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細(xì)胞陽性反應(yīng)被氟化鈉抑制（與A圖為同一標(biāo)本）

A

B126精選PPTA圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色B圖：急性單核細(xì)胞

4.結(jié)果判斷：胞漿內(nèi)有棕色或棕黑色沉淀物為陽性

染色成功指標(biāo)：正常部分原始、幼稚及成熟單核細(xì)胞呈陽性；部分粒細(xì)胞為弱陽性反應(yīng)；部分成熟淋巴或個(gè)別中、晚幼紅呈陽性。

127127精選PPT4.結(jié)果判斷：胞漿內(nèi)有棕色或棕黑色沉淀物為陽性4444128128精選PPT4545精選PPT

5.臨床意義：鑒別急性白血病

（1）急單時(shí)，原始至成熟單核大多為α-NAE陽性，且易被NaF抑制，抑制率正常大于50%。

（2）急粒時(shí)，白血病細(xì)胞多呈陰性或弱陽性，M3呈陽性，但均不被NaF抑制。

酯酶雙染：同一張血涂片上的細(xì)胞分別在兩種不同的基質(zhì)液中作用一定時(shí)間，復(fù)染鏡檢。主用于鑒別診斷AML-M4亞型。

129129精選PPT5.臨床意義：鑒別急性白血病

（1）急單時(shí)，原始至成熟骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染色顯示，原始粒細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色CE陽性反應(yīng)；而原始單核細(xì)胞胞漿呈棕色的NAE陽性反應(yīng)。130精選PPT骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染（四）糖原染色(PAS)細(xì)胞內(nèi)糖原中的乙二醇基131氧化過碘酸二醛基

1.原理（過碘酸-雪夫氏反應(yīng)）二醛基經(jīng)過加成和縮合使無色亞硫酸品紅恢復(fù)品紅的紅色失去亞硫酸定位于含有糖原的細(xì)胞內(nèi)131精選PPT（四）糖原染色(PAS)細(xì)胞內(nèi)糖原中的乙二醇基48氧化2.試劑

（1）10g/L的過碘酸氧化劑⑵雪夫氏試劑（schiff）：紅色品紅與偏重亞硫酸鈉，變成了無色品紅。

⑶20/L甲基綠復(fù)染液132132精選PPT2.試劑4949精選PPT3.操作

（1）新鮮髓片放在95％乙醇中固定10分鐘；蒸餾水沖洗待干；（2）10g/L過碘酸氧化15分鐘；蒸餾水沖洗；（3）置雪夫氏試劑浸泡45分鐘，水洗后涼干；（4）甲基綠復(fù)染15分鐘，水洗待干鏡檢。

133133精選PPT3.操作5050精選PPT

4.注意事項(xiàng)

（1）所用染色缸及器具應(yīng)十分清潔、干燥。（2）雪夫氏染液應(yīng)避光密封保存，變紅則失效。（3）放入雪夫氏溶液之前，用蒸餾水洗涂片，而且一定要完全干燥，若有水，試劑變色失效。134134精選PPT4.注意事項(xiàng)5151精選PPT

（4）染色時(shí)間和溫度應(yīng)相對(duì)恒定，一般37℃效果最好。（5）染好的標(biāo)本不能久放，8天后漸退色，因此應(yīng)及時(shí)觀察。135135精選PPT（4）染色時(shí)間和溫度應(yīng)相對(duì)恒定，一般37℃效果最好。525

5.結(jié)果觀察

陽性：細(xì)胞漿內(nèi)的紅色陽性物呈彌散狀、顆粒狀或塊狀，胞核染綠色。陰性：胞漿無色或無紅色顆粒。

136136精選PPT5.結(jié)果觀察5353精選PPT

6.臨床意義

正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)（1）粒系：原始細(xì)胞多為陰性，隨著細(xì)胞成熟，陽性逐漸增強(qiáng)。（2）淋系：正常人陽性率10-50%之間，多為20%以下。（3）紅系：PAS呈陰性反應(yīng)（4）巨核：PAS呈陽性反應(yīng)（5）單核系:呈陰性或細(xì)顆粒狀弱陽性。137137精選PPT6.臨床意義5454精選PPT正常血細(xì)胞PAS染色1.原始粒細(xì)胞（-）2.早幼粒細(xì)胞（+）3.中性中幼粒細(xì)胞（++）4.中性晚幼粒細(xì)胞（+++）5.中性桿狀核粒細(xì)胞（++++）6.中性分葉核粒細(xì)胞（++++）

7.嗜堿性粒細(xì)胞（+++）8.嗜酸性粒細(xì)胞（+++）9.單核細(xì)胞（±）

10.淋巴細(xì)胞（++++）138精選PPT正常血細(xì)胞PAS染色55精選PPT

疾病鑒別

（1）紅細(xì)胞系統(tǒng)疾?。篗6、MDS呈陽性（均勻或塊狀紅色）；巨幼貧、再障呈陰性。

（2）白血?。杭绷芗奥埽捍诸w?；驂K狀陽性急粒：陰性或弱陽性（彌散細(xì)顆粒）急單：陽性，多為細(xì)顆粒有時(shí)可見粗顆粒急性巨核細(xì)胞白血?。宏栃裕▔K狀）

139139精選PPT疾病鑒別5656精選PPTPASAML-M6幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)MA幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)140精選PPTPASAML-M6MA57精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細(xì)胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性141精選PPT急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色58精選PPT142急淋PAS陽性細(xì)胞142精選PPT59急淋PAS陽性細(xì)胞59精選PPT143PAS陽性的幼紅細(xì)胞143精選PPT60PAS陽性的幼紅細(xì)胞60精選PPT

1.原理(普魯氏藍(lán)反應(yīng))4Fe3++K4[Fe(CN)6]Fe4[Fe(CN)6]3+12K+

(亞鐵氰化鉀)(藍(lán)色亞鐵氰化鐵)144（六）骨髓鐵染色

稀鹽酸細(xì)胞外鐵：主要存在于骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)鐵：主要存在于有核紅細(xì)胞中144精選PPT1.原理(普魯氏藍(lán)反應(yīng))61（六）骨髓鐵染色稀鹽酸細(xì)胞外

2.試劑

（1）固定液：甲醇

（2）酸性亞鐵氰化鉀溶液：200g/L亞鐵氰化鉀5份，濃鹽酸1份。取200g/L亞鐵氰化鉀溶液置于試管中，緩慢加入濃鹽酸，邊滴邊搖由開始的白色沉淀消失為至。

（3）復(fù)染劑：0.5%沙黃

145145精選PPT2.試劑6262精選PPT

3.操作步驟

（1）選片做標(biāo)記，甲醇固定10min

（2）37℃滴加酸性亞鐵氰化鉀溶液染色30min

（3）蒸餾水沖洗2min后沙黃復(fù)染1min，待干鏡檢。

146146精選PPT3.操作步驟6363精選PPT4.注意事項(xiàng)（1）所用的玻片及器具必須清潔，無鐵污染。（2）應(yīng)選有骨髓小粒的髓片做鐵染色，以便觀察細(xì)胞外鐵。（3）作用液必須新鮮配制。（4）亞鐵氰化鉀暴露于空氣中，易氧化變質(zhì)，貯于棕色瓶中，避光密封保存。

147147精選PPT4.注意事項(xiàng)6464精選PPT

（5）復(fù)染前應(yīng)充分沖洗，否則鐵粒狀結(jié)晶過多，影響觀察。（6）計(jì)數(shù)時(shí)要不停地旋轉(zhuǎn)細(xì)螺旋器，因?yàn)殍F粒在細(xì)胞內(nèi)的高低度不一致，每看一個(gè)中、晚幼紅細(xì)胞要旋轉(zhuǎn)幾次，直到看清為止。（7）觀察內(nèi)鐵時(shí)，幼紅及淋巴細(xì)胞要分清，幼紅細(xì)胞核為鮮紅色，淋巴細(xì)胞核為淡紅色，（8）與污染鐵的鑒別：污染鐵不在髓小粒和細(xì)胞內(nèi)，而是浮在上邊，而且藍(lán)中帶黑。148148精選PPT（5）復(fù)染前應(yīng)充分沖洗，否則鐵粒狀結(jié)晶過多，影響觀察。65

5.結(jié)果觀察：

（1）正常幼紅細(xì)胞核呈鮮紅、漿淡黃、鐵顆粒呈藍(lán)綠色（2）低倍鏡觀察細(xì)胞外鐵：涂片尾部和髓小粒附近陰性：無藍(lán)綠色鐵粒。陽性：含有不同程度的鐵粒、鐵小珠、鐵小塊。根據(jù)陽性程度不同分四級(jí)。

149149精選PPT5.結(jié)果觀察：6666精選PPT150細(xì)胞外鐵——幼紅細(xì)胞外的骨髓鐵

(+)少量鐵粒

偶見鐵小珠

（2＋）

較多鐵粒較多鐵小珠

(3+)許多鐵粒許多鐵小珠少量小塊狀。

(4+)極多的鐵顆粒

鐵小珠

許多小塊密集

成堆。150