微生物計生課件

陰道分泌物檢查武漢大學(xué)中南醫(yī)院檢驗科周俊英陰道分泌物檢查陰道分泌物（vaginaldischarge）

陰道分泌物是女性生殖系統(tǒng)分泌的液體。

主要有：分泌物的混合物，俗稱“白帶”(leucorrhea).

陰道粘液宮頸腺體前庭大腺子宮內(nèi)膜白帶常規(guī)的檢查1、陰道PH值：正常陰道PH值在4--4.5之間，呈弱酸性，可防止致病菌在陰道內(nèi)繁殖，患有滴蟲性或細菌性陰道炎時白帶的pH值上升，可大于5～6。2、陰道清潔度：一般分為四度，一般Ⅰ、Ⅱ度為正常的，Ⅲ、Ⅳ度提示有陰道炎，即分泌物圖片上可以看到大量白細胞或雜菌。3、微生物檢查：4、胺試驗：患細菌性陰道病的白帶可發(fā)出魚腥味，它是由存在于白帶中的胺通過氫氧化鉀堿化后揮發(fā)出來所致。5、線索細胞：線索細胞是細菌性陰道病的最敏感最特異的體征。微生物學(xué)檢查(一)真菌陰道真菌多為白色念球菌，可通過性傳播，引起真菌性陰道炎。(二)淋病奈瑟菌直接涂片、染色；淋球菌培養(yǎng)；凝集法或其他（PCR技術(shù)）；(三)陰道加德納菌（Gardnerellavaginalis，GV）加德納菌為革蘭染色陰性或染色不定的細長桿菌。加德納菌以非性行為方式傳播，還可引起孕婦系列病癥。分泌物（陰道、宮頸）新鮮濕片（找線索細胞）涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)（5%人血平板）溶血菌落純培養(yǎng)（5%人血平板）觸酶（-）氧化酶（-）GV的主要鑒定試驗初步報告最后報告GV的檢驗程序細菌性陰道炎診斷標準⑴陰道分泌物呈灰白色，粘稠，甚至象面糊狀，均勻一致⑵分泌物pH＞4.5⑶胺試驗陽性⑷濕片檢出線索細胞BV細菌性陰道病快速檢測根據(jù)BV患者陰道分泌物中存在的特異性唾液酸酶與特殊的唾液酸酶底物作用,使該底物迅速水解,加入適當?shù)娘@色劑后,發(fā)生明顯的顏色變化,黃色為陰性,藍色或綠色為陽性,顏色越深說明酶活性越高。(四)衣原體與支原體的檢查是引起性傳播疾病常見的病原體，也稱非淋病性尿道炎。檢查方法：(五)梅毒螺旋體的檢查梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種性傳播疾病。梅毒主要通過三種途徑傳播：直接接觸(性接觸傳播與非性接觸傳播)；間接接觸；經(jīng)血傳染

。血清學(xué)方法：非特異性反應(yīng)素試驗（USR、RPR），特異性的螺旋體抗體試驗（TPHA)。(六)病病毒的的檢查⒈單純純皰疹病病毒（HSV））有HSV-I和和HSV-II，生殖殖道感染染以HSV-II為為主。⒉巨細細胞病毒毒（HCMV））是最常見的的先天性性感染病病毒，孕婦檢檢測HCMV有重要意意義。⒊人乳乳頭瘤病病毒（HPV））HPV有有23個個型，引引起女性性生殖道道感染的的主要有有6、11、16、18、31、、33型。實驗方法法與技巧巧1．滴蟲蟲檢查：：將白帶帶用生理理鹽水涂涂片，用用高倍鏡鏡檢查，，見到有有活動的的滴蟲為為確診滴滴蟲性陰陰道炎的的依據(jù)。。陰道滴滴蟲呈梨梨形，一一般比白白細胞大大2倍，，頂端有有4根鞭鞭毛借以以運動。。注意事項項l．檢查查前24小時避避免性生生活及陰陰道沖洗洗。2．天冷冷時試管管內(nèi)鹽水水保持在在37度度或接近近體溫，，以防滴滴蟲死亡亡。實驗方法法與技巧巧2．假絲絲酵母菌菌檢查：：取白帶帶用生理理鹽水涂涂片，高高倍鏡檢檢查，鏡鏡下多為為白色假假酵母菌菌，在濕濕片中可可見到卵卵圓形孢孢子，革革蘭染色色可見假假菌絲與與出芽細細胞連接接。實驗方法法與技巧巧3．陰道道清潔度度：將白白帶用生生理鹽水水涂片，，用高倍鏡鏡檢查，，按陰道道桿菌、、白細胞胞、上皮皮細胞的的多少分分四度。。清潔度桿菌上皮細胞白細胞雜菌臨床意義Ⅰ++++++++0~5?

正常Ⅱ++++5~15

?正常Ⅲ

?

?15~30?

提示炎癥Ⅳ

?

?>30++++嚴重陰道炎實驗方法法與技巧巧4．線索索細胞：：取白帶帶放入裝裝有生理理鹽水的的試管中中，制成成混懸于于鹽水中中的分泌泌物涂片片，在顯顯微鏡下下可見大大量脫落落上皮細細胞內(nèi)粘粘附大量量細小細細菌，使使上皮細細胞呈鋸鋸齒狀而而不清晰晰，形成成所謂的的線索細細胞（cluecell））。實驗方法法與技巧巧5．沙眼眼衣原體體：檢查查方法有有酶免疫疫（EIA）、、直接熒熒光素標標記抗體體法（DFA））、PCR等，，EIA特異性性強，陽陽性預(yù)期期值基本本可靠。。DFA是應(yīng)用用最多的的檢測方方法之一一，熒光光素標記記抗體和和衣原體體結(jié)合后后發(fā)出蘋蘋果綠色色熒光，，此法操操作簡單單、特異異性強，，需要有有經(jīng)驗的的實驗室室技術(shù)人人員完成成。沙眼衣原原體膠體金法法沙眼衣原原體膠體金法法檢驗原理理：用抗衣原原體脂多多糖單克克隆抗體體和羊抗抗鼠IgG多克克隆抗體體分別固固定于固固相硝酸酸纖維素素膜，并并和膠體體金標記記的另一一抗衣原原體脂多多糖單克克隆抗體體及其他他試劑，，應(yīng)用膠膠體金免免疫層析析技術(shù)，，采用雙雙抗體夾夾心的形形式建立立的衣原原體檢測測方法。。Colloidalgoldimmunochromatographystri要組成成成份沙眼衣原原體抗原原快速檢檢測試劑劑卡；溶液A1瓶（（含0.2MNaOH溶液液，7.5ml）。溶溶液液B1瓶（含含0.2MHCl溶溶液，7.5ml）。。樣樣品處理理管。檢驗方法法A.處理理樣品①①加入入6滴溶溶液A于于反應(yīng)管管中。②②將將采樣拭拭子放入入含有溶溶液A的的樣品處處理管中中，不斷斷旋轉(zhuǎn)并并在管壁壁擠壓拭拭子，使使液體不不斷被擠擠出，重重復(fù)多次次，處理理2分鐘鐘。③③

加入入6滴溶溶液B，，旋轉(zhuǎn)并并擠壓拭拭子，盡盡量使液液體流出出，然后后按感染染物品的的處理方方法將拭拭子丟棄棄。④④

處理理后的樣樣品如在在60分分鐘內(nèi)使使用，并并不影響響試劑盒盒的檢測測結(jié)果。。

注意意：用A、B液液處理樣樣本拭子子滴加的的溶液量量應(yīng)相等等。B.檢測測步驟將已處理理的樣品品滴加2～3滴滴至檢測測試劑盒盒的加樣樣孔中，，10分分鐘時可可判讀結(jié)結(jié)果。為了確保保陰性結(jié)結(jié)果，請請勿在15分鐘鐘后判斷斷結(jié)果。。為保證檢檢測結(jié)果果的正確確性，須須做陽性性、陰性性質(zhì)控對對照品檢檢測。檢驗結(jié)果果的解釋釋陰性結(jié)果果：僅質(zhì)質(zhì)控線（（C）有有一條紅紅線。陽性結(jié)果果：C和T都有有一條紅紅線。無效結(jié)果果：質(zhì)控控線不出出現(xiàn)紅線線。注意：檢檢測線很很強時，，質(zhì)控線線可能相相對減弱弱，屬正正?，F(xiàn)象象。實驗方法法與技巧巧6．生殖殖道支原原體：取取子宮頸頸管內(nèi)的的分泌物物（拭子子或刮片片）。把把標本直直接分離離接種于于支原體體鑒別培培養(yǎng)基和和增菌培培養(yǎng)于一一組含有有指示劑劑（酚紅紅）和尿尿素或精精氨酸或或葡萄糖糖的培養(yǎng)養(yǎng)基中觀觀察其分分解反應(yīng)應(yīng)，是診診斷支原原體感染染的唯一一可靠方方法。生殖道支支原體R1=支原體標標本處理理液營養(yǎng)低è僅維持存存活含抗生素素è抑制其他他菌生長長保存:2-8°C標本采集集后,20-25°C4~5h內(nèi)必須轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)種2-8°C48h內(nèi)必須轉(zhuǎn)種種生殖道支原原體R2=尿素-精氨酸凍干干肉湯非平衡營養(yǎng)養(yǎng)適合支原原體生長針對性強的的抗生素馬血清:富含膽固醇醇添加營養(yǎng)素素底物:尿素,精氨酸pH指示劑:酚紅用3mlR1溶解è尿素-精氨酸肉湯湯用渦旋振蕩蕩器生殖道支原原體方法R1R2運送溶解R1+R2接種試劑條條(55μμl)+2滴礦物油O UuMhUu Mh>104>1044 21 14 10.121 2MycoplasmaIST237°C培養(yǎng)24~48h生殖道支原原體鑒定生長對照:首先判斷如果(+)è觀察其他孔孔如果(-)è不再判斷1孔鑒定解脲脲脲原體:高濃度林可可霉素抑制制Mh生長1孔鑒定人型型支原體:高濃度紅霉霉素抑制Uu生長紅色è陽性(+)黃色è陰性(-)生殖道支原原體計數(shù)原理:含標準抑制制劑濃度104CCU(顏色變化單單位)結(jié)果:如果標本中中菌數(shù)等于于或大于104顏色發(fā)生變變化紅色(+)è計數(shù)>104CCU黃色(-)è計數(shù)<104CCUUu:結(jié)果判斷必必須在20和24hMh:結(jié)果判斷在在24和48h后生殖道支原原體藥敏試驗治療常用的的9種抗生素:環(huán)素類:四環(huán)素和多多西環(huán)素大環(huán)內(nèi)酯類類:交沙霉素,紅霉素,阿奇霉素,克拉霉喹諾酮類:氧氟沙星,環(huán)丙沙星林可酰胺類類:原始霉素檢測2個濃度:結(jié)果以S,I,或R表示生殖道支原原體結(jié)果判斷首先檢查尿尿素-精氨酸肉湯湯:確認肉湯不不混濁(污染)觀察顏色試劑條:即使顏色由由黃色至橙橙