亞硝酸還原酶（NiR）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4523

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁亞硝酸還原酶（NiR）活性檢測試劑盒說明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4523規(guī)格：100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體3mL×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×2瓶2-8℃保存試劑三粉劑×1瓶2-8℃保存試劑四液體10mL×1瓶2-8℃保存試劑五液體10mL×1瓶2-8℃保存標準品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、試劑二：每瓶臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存2周；2、試劑三：臨用前加入5mL蒸餾水，可70-80℃加熱溶解；2-8℃可以保存3個月3、試劑五：若出現(xiàn)沉淀，可70-80℃加熱溶解；4、標準品：10μmol/mL亞硝酸鈉標準溶液；5、工作液：臨用前根據(jù)樣本量將試劑四和試劑五按1:1的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說明：（Nitritereductase，NiR）2 亞硝酸還原酶可將NO-還原為NO，使樣本中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的NO-減少，即2 注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計//96/冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）（g）:提取液體積（mL）1:5~10比例（0.1g1.0mL提取液）4℃，10000g10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。（mL）500~1000:1的比例（5001.0mL提取液）加入提取液，冰浴超聲破碎細胞（200w3s7s3min10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。二、測定步驟1、分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。2、標準液的稀釋：將10μmol/mL的標準溶液用蒸餾水等比稀釋至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL標準溶液待測。3、標準液稀釋可參考下表：序號（μmol/mL）標準液體積（μL）蒸餾水體積（μL）（μmol/mL）110201801211004000.230.22002000.140.12002000.0550.052002000.02560.0252002000.012570.01252002000.0062580.006252002000.003125試劑名稱（μL）基質(zhì)管對照管測定管試劑名稱（μL）基質(zhì)管對照管測定管標準管空白管樣本-2020--蒸餾水2040試劑一40-40--試劑二404040--混勻后，25℃反應1h試劑三404040--充分震蕩30s，常溫靜置5min，取上清--上清液707070--標準品70-蒸餾水70工作液140140140140140充分混勻，常溫靜置5min，于微量玻璃比色皿或96孔板中測定540nm各管吸光值，分別記為A質(zhì)管、對照管、測定管、A標準管和空白管，計算測定=A基質(zhì)管-（測定管-A對照管，標準=A標準管-空白管?？瞻坠堋藴使芎突|(zhì)管只需測1-2次，每個測定管需設(shè)一個對照管。三、亞硝酸還原酶活性計算標準曲線的繪制x（xLAy（yA標準y=kx+bAx（。酶活計算按照蛋白濃度計算2酶活單位定義：每mg組織蛋白每小時還原1μmolNOˉ的量為一個酶活力單位。2NiR（U/mgprot）=x×V1÷V2÷Cpr÷T=x×7÷Cpr按照樣本質(zhì)量計算2酶活單位定義：每g組織每小時還原1μmolNOˉ的量為一個酶活力單位。2NiR（U/g質(zhì)量）=x×V1÷V2×V提÷W÷T=x×7÷W按照細菌/細胞數(shù)量計算2酶活單位定義：每104個細菌/細胞每小時還原1μmolNOˉ的量為一個酶活力單位。2N