蔗糖磷酸化酶（SP）活性檢測試劑盒說明書- 紫外分光光度法UPLC-MS-5029

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紫外分光光度法產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶4℃保存試劑一液體20mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶4℃保存試劑三液體2mL×1支4℃保存試劑四粉劑×2瓶-20℃保存試劑五粉劑×1瓶-20℃保存試劑六粉劑×3支-20℃保存試劑七粉劑×4支-20℃保存溶液的配制：1、試劑二：臨用前加入15mL蒸餾水，充分混勻。4℃可以保存4周；211.5mL-20℃2310mL-20℃4周；411mL-20℃保存，避免反復(fù)凍融，-20℃2周；臨用前按試劑六：蒸餾水=1:1的比例稀釋試劑六，現(xiàn)用現(xiàn)配；510.7mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融，-20℃2周；臨用前按試劑七：蒸餾水=1:1的比例稀釋試劑七，現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說明：（SucrosePhosphorylase13家族，是一種催化轉(zhuǎn)移葡萄糖苷鍵的酶，能夠催化蔗糖和無機(jī)磷酸鹽合成1-磷酸-葡萄糖。該酶主要以蔗糖、1-磷酸葡萄糖為供體，多類物質(zhì)如多羥基的糖和糖醇、酚羥基、羧基等為受體，催化合成各種糖苷。SP1-6-6-磷酸葡萄糖脫NADP+340nm340nmSP活性。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、1mL石英比色皿、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1(g)︰提取液體積(mL)1︰5-10的比例（0.1g1mL提取液10000g，4℃10min，取上清置于冰上待測。25min（104個(gè)提取液體積（mL）500-1000︰1的比例（5001mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌（200W3710000g，4℃10min，取上清置于冰上待測。3、液體：直接檢測。若液體渾濁可離心后取上清測定。二、測定步驟1、紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。2、試劑一37℃預(yù)熱10min。3、操作表：試劑名稱（μL）測定管空白管試劑一325425試劑二250250試劑三2525試劑四5050試劑五5050試劑六100100試劑七100100混勻，37℃水浴預(yù)熱5min樣本100-15sA1（A1空白37℃2min2min15sA2測定（A2空白），ΔA=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）。空白管只需測定1-2次，如果樣本數(shù)量過多也可以將試劑一到試劑七按上述比例混勻后進(jìn)行測定。三、蔗糖磷酸化酶（SP）活性計(jì)算按照蛋白濃度計(jì)算酶活定義：37℃，每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化產(chǎn)生1nmolNADPH為一個(gè)酶活單位。SP活性（U/mgprot）=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷（V樣×Cpr）÷T=803.85×ΔA÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活定義：37℃，每克樣本每分鐘催化產(chǎn)生1nmolNADPH為一個(gè)酶活單位。SP活性（U/g質(zhì)量）=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T=803.85×ΔA÷W按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算酶活定義：37℃，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmolNADPH為一個(gè)酶活單位。SP活性（U/104cell）=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）)÷T=803.85×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）摩爾消光系數(shù)，62201mLmg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；109：1mol