中性木聚糖酶（NEX）活性檢測(cè)試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-4234

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁中性木聚糖酶（NEX）活性檢測(cè)試劑盒說明書UPLC-MS-423450T/24S

可見分光光度法試劑名稱規(guī)格保存條件緩沖液液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體10mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體15mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配成100μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，2-8℃保存兩周。(EC)\hβ-\h（NEX）pH6-8NEX3,5-540nm540nm吸光值增加速率，可計(jì)算NEX活力。Xylan

NEX

ReducingSugarReducingSugar+3,5-DinitrosalicylicAcid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、細(xì)胞或微生物樣本發(fā)酵液的制備：發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，置于冰上待測(cè)。2、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL緩沖液，冰上充分研磨。8000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測(cè)。31mg1mL130min540nm2、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：取20μL100μmol/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)液，加入980μL蒸餾水，充分混勻，配制成2μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要200μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）3/即取50μL/450μL。4、樣本測(cè)定：加入試劑對(duì)照管測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本（μL）200200標(biāo)準(zhǔn)溶液（μL）200蒸餾水（μL）200緩沖液（μL）300300300300試劑一（μL）-200200200混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應(yīng)30min，立即沸水浴10min滅活。（注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水，改變了反應(yīng)體系）試劑一（μL）200-試劑二（μL）300300300300混勻，沸水浴顯色5min（注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系），冰浴冷卻后盡快測(cè)量540nm波長(zhǎng)下的吸光值A(chǔ)對(duì)照管、A測(cè)定管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。三、NEX計(jì)算公式NEX50℃，pH6.01μmolNEX活力（U/mL）=[ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))]÷T=0.067×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)酶干粉NEX50℃，pH6.01μmolNEX活力（U/mg）=[ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))]×V樣本×10÷(V樣本×W酶÷V提取)÷T=0.67×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W酶組織中NEXmg1μmolNEX活力（U/mgprot）=[ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))]×V樣本×10÷(V樣本×Cpr)÷T=0.67×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每g組織每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個(gè)中性木聚糖酶的活力單位。NEX活力（U/g質(zhì)量）=[ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))]×V樣本×10÷(V樣本×W÷V提取)÷T=0.67×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷WC標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，2μmol/mL；V樣本：加入的樣本體積，0.2mL；W酶：酶干粉的質(zhì)量，mg；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：組織樣本質(zhì)量，g；V提?。杭尤刖彌_