第2節(jié)-紫外光譜儀硬件與相關(guān)軟件

Whyshouldwelearnthisstuff?

Afterall,nobodysolvesstructureswithUVanylonger!ManyorganicmoleculeshavechromophoresthatabsorbUVUVabsorbanceisabout1000xeasiertodetectpermolethanNMRStillusedinfollowingreactionswherethechromophorechanges.Usefulbecausetimescaleissofast,andsensitivitysohigh.Kinetics,esp.inbiochemistry,enzymology.MostquantitativeAnalyticalchemistryinorganicchemistryisconductedusingHPLCwithUVdetectors第一頁(yè)，共60頁(yè)。第一部分紫外光譜儀

-紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)常見(jiàn)紫外光譜儀光譜儀構(gòu)造分光光度計(jì)類(lèi)型測(cè)試前的準(zhǔn)備工作第二頁(yè)，共60頁(yè)。紫外光譜儀：紫外光180～400nm可見(jiàn)光400～1000nm紫外光譜儀：?jiǎn)喂馐?，單光束?duì)電源穩(wěn)定性要求特別高，并且不能自動(dòng)記錄雙光束，雙光束紫外分光光度計(jì)克服了上述缺點(diǎn)，可以自動(dòng)記錄，應(yīng)用廣泛。常見(jiàn)紫外光譜儀第三頁(yè)，共60頁(yè)。常見(jiàn)紫外光譜儀第四頁(yè)，共60頁(yè)。儀器型號(hào)：島津UV－3600●測(cè)試波長(zhǎng)范圍：185-3300nm（范圍寬包括NIR）

●分辨率：0.1nm

●譜帶寬度：UV/Vis:0.1/0.2/0.5/1/2/3/5/8nm8段轉(zhuǎn)換

NIR:0.2,0.5,1,2,3,5,8,12,20,32nm10段轉(zhuǎn)換

●檢測(cè)器：光電倍增管/InGaAs/CooledPbS

●雜散光：0.00008%T以下(220nm,NaI10g/L溶液);

0.00005%T以下(340nm,NaNO2);0.0005%T以下(1420nm,水);

0.005%T以下(2365nm,氯仿);常見(jiàn)紫外光譜儀第五頁(yè)，共60頁(yè)。美國(guó)瓦里安系列1.波長(zhǎng)范圍：175～3300nm；2.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.08nm(UV-vis)，±0.4nm(NIR)3.分辨率：≤0.048nm0.08nm(UV-vis)，≤0.2nm(NIR)4.雜散光：0.00007%T；5.帶寬：0.01～5nm可調(diào)；6.光度范圍：8Abs研究級(jí)和校準(zhǔn)級(jí)的紫外。即插即用的光源管理，方便更換光源。獨(dú)特的LockDown?技術(shù)，可方便快速準(zhǔn)確的安裝各種附件。常見(jiàn)紫外光譜儀檢測(cè)器采用半導(dǎo)體制冷技術(shù)控制的PbS檢測(cè)器，應(yīng)用獨(dú)特的檢測(cè)器控制算法和處理器，實(shí)時(shí)快速的對(duì)信號(hào)、噪聲進(jìn)行最優(yōu)化處理，降低了噪聲，進(jìn)一步增加了線性范圍，達(dá)到PbS檢測(cè)器前所未有的檢測(cè)性能。5.有積分球、固定角（可變角）鏡面反射附件、VW絕對(duì)反射附件、溫度探頭、自動(dòng)進(jìn)樣器、固體樣品架等多種附件和色度軟件，可應(yīng)用于濾光片、光學(xué)薄膜、玻璃、太陽(yáng)能材料等的測(cè)試。第六頁(yè)，共60頁(yè)。美國(guó)熱電波長(zhǎng)范圍190-1100nm

光度范圍-0.3~6A

分光系統(tǒng)單光束

全息衍射母光柵,石英鍍膜

帶寬2.0nm

波長(zhǎng)掃描速度3800nm~1nm/min或智能掃描

0.1nm數(shù)據(jù)采集精度

雜散光<0.05%(220nm)

<0.05%(340nm)

波長(zhǎng)精度±1.0nm(190-1100nm)

±0.1nm(氘燈656.1nm)

常見(jiàn)紫外光譜儀波長(zhǎng)重復(fù)性±0.2nm(190-1100nm)

±0.03nm(氘燈656.1nm)

吸光度精度±0.005Aat1A

吸光度重復(fù)性±0.002Aat1A

光密度噪音0.0001A(RMS)

穩(wěn)定性0.002A/小時(shí)

檢測(cè)器光電二極

第七頁(yè)，共60頁(yè)。美國(guó)安捷倫系列波長(zhǎng)范圍：190～1100nm狹縫寬度：1nm雜散光：<0.03%

340nm(NaNO2,ASTM)

<0.05%

220nm(NaI,ASTM)

<1%

198nm(KCl,EP)波長(zhǎng)精度：<±0.5nm(NIST2034)

<±0.2nm

486.0和656.1nm波長(zhǎng)重復(fù)性：<±0.02nm連續(xù)掃描10次吸光度準(zhǔn)確度：<±0.005A1A(NIST930e)噪聲水平：<0.0002A吸光度重復(fù)性：<0.001A/h（0A,340nm，開(kāi)機(jī)1h后）基線平坦度：<0.001A掃描時(shí)間：1.5s溫度：0–50°C濕度：<95%，25–40°C池是開(kāi)放在空氣中的,不用把外界光遮住,也不會(huì)影響測(cè)量常見(jiàn)紫外光譜儀第八頁(yè)，共60頁(yè)。普析通用1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)1、波長(zhǎng)范圍：190nm～1100nm

2、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.3nm(開(kāi)機(jī)自動(dòng)校準(zhǔn))

3、波長(zhǎng)重復(fù)性：0.2nm(雙光束比例監(jiān)測(cè)光學(xué)系統(tǒng))

≤0.1nm(雙光束光學(xué)系統(tǒng))

4、光譜帶寬：2nm（固定狹縫）

0.5nm,1.0nm,2.0nm,5.0nm（可變狹縫）

5、雜散光：<0.3%T(220nm,NaI;340nm,NaNo2)(雙光束比例監(jiān)測(cè)光學(xué)系統(tǒng))

<0.2%T(220nm,NaI;340nm,NaNo2)（雙光束光學(xué)系統(tǒng))

6、光度方式：透過(guò)率，吸光度，能量

7、光度范圍：-0.3～3.0Abs

8、光度準(zhǔn)確度：±0.002Abs(0～0.5Abs)；±0.004Abs(0.5～1.0Abs)；±0.3%T(0～100%T)

常見(jiàn)紫外光譜儀9、光度重復(fù)性：0.001Abs(0～0.5Abs)；0.002Abs(0.5～1.0Abs)；

0.15%T(0～100%T)

10、基線平直度：±0.002Abs(190nm～1100nm)(雙光束比例監(jiān)測(cè)光學(xué)系統(tǒng))

±0.0015Abs(190nm～1100nm)(雙光束比例監(jiān)測(cè)光學(xué)系統(tǒng))11、基線漂移：0.001Abs/h(500nm,0Abs預(yù)熱2小時(shí)后)(雙光束比例監(jiān)測(cè)光學(xué)系統(tǒng))

0.0007Abs/h(500nm,0Abs預(yù)熱2小時(shí)后)(雙光束光學(xué)系統(tǒng))

12、光度噪聲：±0.001Abs(500nm,0Abs2nm光譜帶寬)北京普析通用系列第九頁(yè)，共60頁(yè)。上海天美系列波長(zhǎng)范圍：190-1100nm

波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.5nm

帶寬：2nm

光度測(cè)定范圍：-0.300～3.000Abs

雜散光：0.050%T

噪聲：±0.0005Abs常見(jiàn)紫外光譜儀第十頁(yè)，共60頁(yè)。北京瑞利系列●波長(zhǎng)范圍：320～1100nm●光譜帶寬：2.0nm(1nm,5nm可選）●波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.5nm●波長(zhǎng)重現(xiàn)性：≤0.3nm●透射比準(zhǔn)確度：±0.3%τ(0～100%τ)±0.002A(0～0.5A)

±0.004A(0.5A～1A●透射比重復(fù)性：0.15%τ

●測(cè)光方式：透過(guò)率、吸光度、濃度、能量●光度范圍：-0.3A～3A●雜散光：≤0.05%τ(360nmNaNO2溶液)常見(jiàn)紫外光譜儀●基線平直度：±0.002A●穩(wěn)定性：≤0.001A/h(500nm預(yù)熱后)●檢測(cè)器：進(jìn)口硅光二極管●光源：進(jìn)口鎢燈●電源：AC：220V/50Hz110V/60Hz●功率：140W●儀器尺寸：530×420×205mm●主機(jī)重量：18kg第十一頁(yè)，共60頁(yè)?！舨ㄩL(zhǎng)范圍：190～900nm

◆光譜帶寬：0.1，0.2，0.5，1.0，2.0nm(5檔)

◆波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.3nm可到0.15nm

◆波長(zhǎng)重現(xiàn)性：0.10nm

◆透射比準(zhǔn)確度：±0.3%τ(0～100%τ)

±0.002A(0～0.5A)±0.004A(0.5～1A)

◆透射比重復(fù)性：0.15%τ

◆測(cè)光方式：T、A、C、E

◆光度范圍：-3～4A

◆雜散光：≤0.015%τ(220nmNaI溶液)

◆基線平直度：±0.001A

◆穩(wěn)定性：0.0004A/h(500nm預(yù)熱后)

◆檢測(cè)器：進(jìn)口光電倍增管

北京瑞利系列常見(jiàn)紫外光譜儀◆光源：進(jìn)口氘燈、鎢燈

◆電源：AC220V/50Hz110V/60Hz

◆功率：400W

◆儀器尺寸：670×470×210mm

◆主機(jī)重量：45kg光學(xué)系統(tǒng)不穩(wěn)定，分光系統(tǒng)容易污染，電路設(shè)計(jì)不太好第十二頁(yè)，共60頁(yè)。如何選擇紫外光譜儀呢光度準(zhǔn)確度

光度準(zhǔn)確度指實(shí)際測(cè)量的光度讀數(shù)值與真值之差。它是用戶對(duì)儀器的直接要求，每個(gè)用戶都必須重視。雜散光

它指不應(yīng)該有光的地方有了光。它是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。越小越好。光譜帶寬

指從單色器射出的單色光譜線強(qiáng)度輪廓曲線的1/2高度處的譜帶寬度。表征儀器的光譜分辨率。按照比耳定律，光譜帶寬應(yīng)該是越小越好的，但是如果儀器的光源能量弱，光學(xué)傳感器的靈敏度低時(shí)，光譜帶寬小了，也得不到理想的測(cè)量結(jié)果的。穩(wěn)定性

穩(wěn)定性是使用者最關(guān)注的指標(biāo)之一。儀器的宗旨就是穩(wěn)定可靠。噪聲

噪聲也是儀器的重要指標(biāo)之一。它表征儀器的做稀溶液的能力。越小越好。

波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度和重復(fù)性

儀器的每個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的，如果所示的波長(zhǎng)和實(shí)際波長(zhǎng)偏差萬(wàn)里，那么測(cè)出的值和真值的吻合度從何談起呢？可見(jiàn)這個(gè)指標(biāo)的重要性。一分錢(qián)一分貨

常見(jiàn)紫外光譜儀第十三頁(yè)，共60頁(yè)。紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的構(gòu)造及分類(lèi)介紹紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第十四頁(yè)，共60頁(yè)。光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示（一）、紫外可見(jiàn)光譜儀構(gòu)造介紹紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第十五頁(yè)，共60頁(yè)。

1.光源

在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第十六頁(yè)，共60頁(yè)。

紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第十七頁(yè)，共60頁(yè)。2.單色器將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器（調(diào)整純度、光強(qiáng)分辨率以及信號(hào)強(qiáng)度）；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。棱鏡-對(duì)不同波長(zhǎng)的光折射率不同分出光波長(zhǎng)不等距光柵——衍射和干涉分出光波長(zhǎng)等距紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第十八頁(yè)，共60頁(yè)。3.樣品室

樣品室放置各種類(lèi)型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池。紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第十九頁(yè)，共60頁(yè)。4.檢測(cè)器

利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。光電池對(duì)光的敏感范圍為300～800nm，其中又以500～600nm最為靈敏。這種光電池的特點(diǎn)是能產(chǎn)生可直接推動(dòng)微安表或檢流計(jì)的光電流，但由于容易出現(xiàn)疲勞效應(yīng)而只能用于低檔的分光光度計(jì)中。光電管分為藍(lán)敏和紅敏兩種，前者是在鎳陰極表面上沉積銻和艷，可用于波長(zhǎng)范困為210～625nm;后者是在陰極表面上沉積了銀和氧化艷?？捎梅秶鸀?25～1000nm。與光電池比較，它有靈敏度高、光敏范圍寬、不易疲勞等優(yōu)點(diǎn)。光電倍增管是檢測(cè)微弱光最常用的光電元件，它的靈敏度比一般的光電管要高200倍，因此可使用較窄的單色器狹縫，從而對(duì)光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較好的分辨能力。在測(cè)定的光譜范圍內(nèi)具有高的靈敏度;對(duì)輻射能量的響應(yīng)時(shí)間短，線性關(guān)系好;對(duì)不同彼長(zhǎng)的輻射響應(yīng)均相同，且可靠;噪音低，穩(wěn)定性好等。紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第二十頁(yè)，共60頁(yè)。5.結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)

檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理紫外光譜儀構(gòu)造及檢測(cè)原理第二十一頁(yè)，共60頁(yè)。1.單光束

簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。分光光度計(jì)的類(lèi)型這類(lèi)儀器有國(guó)產(chǎn)710型、730型和740型，日立220系列，島津-210，英國(guó)UNICAMSP-700等等。第二十二頁(yè)，共60頁(yè)。

分光光度計(jì)的類(lèi)型2.雙光束

自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。第二十三頁(yè)，共60頁(yè)。Twophotomultiplierinputs,differentialvoltagedrivesamplifier.MatchedquartzcuvettesSampleinsolutionatca.10-5

M.；SystemprotectsPMtubefromstraylightD2lamp-UV；Tungstenlamp-Vis；DoubleBeammakesitadifferencetechniqueRotates,toachievescanHowDoUVspectrometerswork?第二十四頁(yè)，共60頁(yè)。雙光束可見(jiàn)－紫外分光光度計(jì)：通常由四部分組成：光源、單色器、樣品室、檢測(cè)室。

光源→單色器→光斷續(xù)器→樣品室、參比室→光電管→放大器→記錄儀1、光源室紫外光譜的光源是一個(gè)氫放電管（當(dāng)測(cè)定可見(jiàn)光范圍時(shí)用鎢燈），可以手動(dòng)M1鏡，使二個(gè)光源中的任一個(gè)發(fā)射的光經(jīng)M2鏡反射，經(jīng)過(guò)入射狹縫S1進(jìn)入單色器。分光光度計(jì)的類(lèi)型第二十五頁(yè)，共60頁(yè)。2、單色器來(lái)自光源的光通過(guò)入射狹縫S1，曲球面鏡M3轉(zhuǎn)為單色光，再反射到石英棱鏡P1上，這束光被棱鏡背面反射回來(lái)，發(fā)生了色散作用，由P1出射的光線被M3、M4鏡反射到中間狹縫S2，而后又射到M5鏡，再經(jīng)M6轉(zhuǎn)化為單色光，反射到石英棱鏡P2上，經(jīng)P2再次色散，由出射狹縫S3出射。P1、P2兩個(gè)棱鏡可以同時(shí)發(fā)生轉(zhuǎn)動(dòng)，因此，再出射狹縫S3處出現(xiàn)的光的波長(zhǎng)是由棱鏡角度位置確定的，棱鏡轉(zhuǎn)動(dòng)機(jī)構(gòu)與記錄裝置是聯(lián)動(dòng)的。雙光束單色器的優(yōu)點(diǎn)是：經(jīng)兩次色散，可大大減少雜散光，提高分辨率。分光光度計(jì)的類(lèi)型第二十六頁(yè)，共60頁(yè)。3、光度計(jì)由狹縫S3射出的單色光由截光器以脈沖輸送，并由光束劈分器分裂成兩束光，一束是樣品光束，另一束是參比光束，兩束光由辟分器反射到M7、M8，再由M7、M8反射到透鏡L1、L2到達(dá)樣品室及參比室，L1、L2是使兩束光具有良好的平行性質(zhì)。4、檢測(cè)室進(jìn)入檢測(cè)室的光束被聚焦在獨(dú)立的光電倍增管上，產(chǎn)生的電流大小與照射到檢測(cè)器的能量成正比。由于樣品光束吸收能量，所以使樣品室與參比室之間產(chǎn)生不平衡電壓，此比平衡電壓被一個(gè)滑線電阻的等價(jià)電壓所平衡，記錄筆隨滑線電阻的觸點(diǎn)移動(dòng)，記錄筆的移動(dòng)即反應(yīng)了樣品吸收能量的大小，記錄下來(lái)的是波長(zhǎng)與透射率關(guān)系的紫外光譜圖。

分光光度計(jì)的類(lèi)型第二十七頁(yè)，共60頁(yè)。3.雙波長(zhǎng)

將不同波長(zhǎng)的兩束單色光(λ1、λ2)快束交替通過(guò)同一吸收池而后到達(dá)檢測(cè)器。產(chǎn)生交流信號(hào)。無(wú)需參比池?！?1～2nm。兩波長(zhǎng)同時(shí)掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜。分光光度計(jì)的類(lèi)型第二十八頁(yè)，共60頁(yè)。雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的優(yōu)點(diǎn)：對(duì)于多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)的分析，以及存在背景于擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長(zhǎng)分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換，使雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)能很方便地轉(zhuǎn)化為單波長(zhǎng)工作方式。如果能在兩波長(zhǎng)處分別記錄吸光度隨時(shí)間變化的曲線，還能進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究。其基本光路如下圖所示。由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過(guò)兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長(zhǎng)的單色光;再利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過(guò)光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，最后由顯示器顯示出兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度差值ΔA(ΔA=A1-A2)。分光光度計(jì)的類(lèi)型第二十九頁(yè)，共60頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有紫外-可見(jiàn)光譜儀器型號(hào)：Helios系列

廠家：美國(guó)熱電

分光光度計(jì)的類(lèi)型-Helios系列第三十頁(yè)，共60頁(yè)。技術(shù)參數(shù)

波長(zhǎng)范圍:190-1100nm

光度范圍:-0.3~6A

分光系統(tǒng):單光束

全息衍射母光柵,石英鍍膜

帶寬:2.0nm

波長(zhǎng)掃描速度:3800nm~1nm/min或智能掃描

0.1nm數(shù)據(jù)采集精度

雜散光:<0.05%(220nm)

<0.05%(340nm)波長(zhǎng)精度:±1.0nm(190-1100nm)

±0.1nm(氘燈656.1nm)

波長(zhǎng)重復(fù)性:±0.2nm(190-1100nm)

±0.03nm(氘燈656.1nm)

吸光度精度:±0.005Aat1A

吸光度重復(fù)性:±0.002Aat1A

光密度噪音:0.0001A(RMS)

穩(wěn)定性:0.002A/小時(shí)

檢測(cè)器:光電二極管分光光度計(jì)的類(lèi)型-Helios系列參數(shù)第三十一頁(yè)，共60頁(yè)?！?/p>

儀器設(shè)計(jì)小巧，樣品室大。

◆

卓越的設(shè)計(jì):

2nm帶寬步進(jìn)單色器，獨(dú)家采用全息母光柵（MIG），提供無(wú)與倫比的精度、線性、穩(wěn)定性。石英涂層密封光路自始自終保持儀器性能;

精確地澆鑄鋁底座，保證結(jié)實(shí)耐用及高穩(wěn)定性

◆

多功能軟件

:

本機(jī)控制軟件，用戶可編輯方法；掃描速度可調(diào)，最大速度為3800nm/min，有判峰選擇，容易識(shí)別；自動(dòng)存盤(pán)及自動(dòng)打印，可快速處理結(jié)果；字母數(shù)字樣品號(hào)自動(dòng)識(shí)別并自動(dòng)增加，用于提高批量樣品處理；打印和存盤(pán)前數(shù)據(jù)綜合處理。

◆

標(biāo)準(zhǔn)功能齊全:

掃描，固定波長(zhǎng)，定量分析，濃度因子，比率和校正比率，一系列波長(zhǎng)，多波長(zhǎng)（多達(dá)20個(gè)），多組份分析（多達(dá)20組份），動(dòng)力學(xué)研究。

◆

多種數(shù)據(jù)輸出方式

存入儀器內(nèi)存或內(nèi)置軟驅(qū)，可把數(shù)據(jù)傳到其他Helios儀器；或通過(guò)內(nèi)置和外部打印機(jī)打印出硬拷貝，通過(guò)RS232輸出到LIMS，傳到Vision

PC軟件和其他PC程序（ASCII格式），來(lái)進(jìn)行離線數(shù)據(jù)處理。

◆

測(cè)量樣品量可低至5μl。做非平行和平行動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，可選恒溫7池編程器。

分光光度計(jì)的類(lèi)型-Helios系列特點(diǎn)第三十二頁(yè)，共60頁(yè)。1.分離提純:紫外光譜一般只用于單純定性分析。進(jìn)行樣品測(cè)試時(shí)應(yīng)該先進(jìn)行樣品的分離提純。TLC檢測(cè)提純情況。2.樣品溶解：使用適當(dāng)溶劑溶解。3.選擇樣品池紫外光譜吸收帶的數(shù)目少而且寬，對(duì)結(jié)構(gòu)變化不敏感。測(cè)試前的準(zhǔn)備工作-樣品盡量選擇在紫外透明或者在測(cè)定最大波長(zhǎng)處無(wú)吸收的溶劑紫外區(qū)域使用石英樣品池；可見(jiàn)光區(qū)可選擇玻璃/塑料材質(zhì)樣品池第三十三頁(yè)，共60頁(yè)。波長(zhǎng)校正可采用輻射光源法校正。常用氫燈(486.13,656.28nm)、氘燈(486.00,656.10nm)或石英低壓汞燈(253.65,435.88,546.07nm)校正。鐠釹玻璃在可見(jiàn)區(qū)有特征吸收峰，也可用來(lái)校正。苯蒸汽在紫外區(qū)的特征吸收峰可用于校正。在吸收池內(nèi)滴一滴液體苯，蓋上吸收池蓋，待苯揮發(fā)后繪制苯蒸汽的吸收光譜。測(cè)試前的準(zhǔn)備工作-紫外光譜儀第三十四頁(yè)，共60頁(yè)。吸光度校正:以重鉻酸鉀水溶液的吸收曲線為標(biāo)準(zhǔn)值校正。將0.0303克重鉻酸鉀溶于1升的0.05mol/l氫氧化鉀中，以1cm吸收池，5°C測(cè)定吸收光譜。表重鉻酸鉀溶液的吸光度測(cè)試前的準(zhǔn)備工作-紫外光譜儀第三十五頁(yè)，共60頁(yè)。第二部分紫外光譜軟件的功能、使用以及譜圖的解析工作紫外光譜軟件Vison32的使用(美國(guó)熱電helios配套)第三十六頁(yè)，共60頁(yè)。光譜軟件及儀器參數(shù)設(shè)定（剛進(jìn)入軟件時(shí)的頁(yè)面）菜單欄快捷鍵欄固定波長(zhǎng)檢測(cè)燈光波長(zhǎng)設(shè)定（未檢測(cè)到光具座；光源未打開(kāi)）檢測(cè)（批量）作業(yè)設(shè)定顯示固定波長(zhǎng)掃描結(jié)果列表第三十七頁(yè)，共60頁(yè)。光譜軟件及儀器參數(shù)設(shè)定（常用按鈕）如果使用朗伯比爾定律進(jìn)行定性或者定量，選用固定波長(zhǎng)方法（此圖標(biāo)）所需波長(zhǎng)在此設(shè)定（單位為nm），如何確定所需波長(zhǎng)呢？可以設(shè)定10組所需波長(zhǎng)(1)從文獻(xiàn)查得。例如苯系物的波長(zhǎng)一般在250-270nm，蛋白質(zhì)DNA測(cè)定在260和280nm（2）通過(guò)掃描法進(jìn)行最大波長(zhǎng)檢測(cè)數(shù)值記錄方式（吸收or透過(guò)率）正常or峰高積分時(shí)間（一般不設(shè)定）換燈方式（選擇波長(zhǎng)或者直接選擇鎢燈或者氘燈）經(jīng)過(guò)單色器成為單色光所具有的一定譜帶寬度（如紅色622～597nm）有效帶寬是指透過(guò)率極大值1/2處透射帶的寬度。有效帶寬越窄，單色性越好，紫外光譜區(qū)域的有效帶寬可lnm，精確度（結(jié)構(gòu)分辨率）高，但透過(guò)能量小，影響測(cè)試靈敏度檢測(cè)結(jié)果是否自動(dòng)存儲(chǔ)數(shù)據(jù)保存的文件名稱掃描是否循環(huán)，循環(huán)次數(shù)幾個(gè)樣品？第三十八頁(yè)，共60頁(yè)。（后面章節(jié)以美國(guó)熱電的vison32為例進(jìn)行設(shè)定說(shuō)明），測(cè)定lmax或者吸收系數(shù)k。光譜軟件及儀器參數(shù)設(shè)定（波長(zhǎng)及其他重要參數(shù)的設(shè)定）設(shè)置完畢，點(diǎn)擊Run或圖標(biāo)第三十九頁(yè)，共60頁(yè)。（后面章節(jié)以美國(guó)熱電的vison32為例進(jìn)行設(shè)定說(shuō)明），測(cè)定lmax或者吸收系數(shù)k。光譜軟件及儀器參數(shù)設(shè)定（數(shù)據(jù)的輸出）支持*.txt(純文本)*.csv(excel)輸出。或者直接打印也可第四十頁(yè)，共60頁(yè)。（后面章節(jié)以美國(guó)熱電的vison32為例進(jìn)行設(shè)定說(shuō)明），測(cè)定lmax或者吸收系數(shù)k。光譜軟件及儀器參數(shù)設(shè)定（檢測(cè)及譜圖輸出）如需要進(jìn)行未知樣的掃描測(cè)量掃描結(jié)果表示方式(吸收or透過(guò))掃描起始波長(zhǎng)掃描終止波長(zhǎng)狹縫帶寬掃描速度(固定,智能等)數(shù)據(jù)間隔(每隔多少nm采樣；正?；蛘?nmok)換燈波長(zhǎng)（基本不變）是否清除上次掃描結(jié)果最低最高吸收峰強(qiáng)度(if定量ABSopt.<1)是否需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行平滑處理結(jié)果表示設(shè)置譜圖輸出區(qū)域第四十一頁(yè)，共60頁(yè)。光譜軟件及儀器參數(shù)設(shè)定（數(shù)據(jù)的輸出）支持.txt,.csv數(shù)據(jù)點(diǎn)輸出Vision32自識(shí)別數(shù)據(jù)格式第四十二頁(yè)，共60頁(yè)。第三部分紫外光譜譜圖的解析以及應(yīng)用譜圖解析紫外光譜應(yīng)用定性，定量分析，例如測(cè)定lmax或者吸收系數(shù)k。將在下一章詳細(xì)介紹。第四十三頁(yè)，共60頁(yè)。與標(biāo)準(zhǔn)譜圖或者數(shù)據(jù)手冊(cè)進(jìn)行對(duì)照（后面章節(jié)將舉例說(shuō)明），再結(jié)合元素分析，官能團(tuán)定性分析可確定物質(zhì)種類(lèi)。紫外譜圖解第四十四頁(yè)，共60頁(yè)。若在200-800nm無(wú)吸收，證明不會(huì)含有共軛雙鍵（包括芳環(huán)，醛酮等，也可能不含有孤立的雙鍵）若在200-250nm有強(qiáng)吸收帶（10000左右），證明含有a共軛二烯或者a，b不飽和酮若在260,300,or330nm附近有強(qiáng)的吸收帶，證明會(huì)含有4個(gè)或者五個(gè)共軛系若在260-300nm有中等強(qiáng)度（e200-1000）吸收帶，就很可能含有芳環(huán)若在290nm附近有弱的吸收帶（e=20-100），可能含有醛或者酮。如果有顏色，共軛體系比較長(zhǎng)譜圖解析一般規(guī)則第四十五頁(yè)，共60頁(yè)。常用重要手冊(cè)-1《有機(jī)電子光譜數(shù)據(jù)》(i.e.<Organicelectronicspectraldata>)editedbyM.J.卡姆萊特，J.P.菲利普斯等主編。收集了近30萬(wàn)種化合物的光譜數(shù)據(jù)，這些參數(shù)來(lái)自100多種刊物，每?jī)?cè)都按照化合物的分子式進(jìn)行排列，編排方法和美國(guó)化學(xué)文摘的分子式索引一樣，把CH派在最前，其他元素按照英文字母表的順序和數(shù)目依次排列。每一種分子式下列出各化合物的名稱，lmax,Emax,溶劑，參考文獻(xiàn)等。目前為27卷（1985年，thelatestversion-noupdate）。WileyListPrice:US$495.00第四十六頁(yè)，共60頁(yè)。常用重要手冊(cè)-2《光譜手冊(cè)》(i.e.<Handbookofspectroscopy>)，J.P.菲利普斯主編。該書(shū)收集5000種化合物的電子光譜數(shù)據(jù)。現(xiàn)按照吸收系數(shù)的大小分成幾大類(lèi)，然后在每一類(lèi)中按照化合物的吸收波長(zhǎng)的大小依次排列，并給出化合物的名稱。由于采取波長(zhǎng)為索引，對(duì)于未職務(wù)的檢索分析具有一定的方便之處。Latestversion:(2volumes)WileyListPrice:US$560.00第四十七頁(yè)，共60頁(yè)。常用重要手冊(cè)-3《薩德勒標(biāo)準(zhǔn)紫外光譜圖》(i.e.<Thesadtlerstandardspectraultraviolet>)，收集了數(shù)萬(wàn)種的化合物標(biāo)準(zhǔn)光譜，該書(shū)由薩德勒研究室出版，附有多種索引，并由波長(zhǎng)索引，波長(zhǎng)探知表，便于查找（1978?）。Ref:

/chem/info/sadtler.html；

第四十八頁(yè)，共60頁(yè)。紫外光譜數(shù)據(jù)庫(kù)輔助工具應(yīng)用方法介紹第四十九頁(yè)，共60頁(yè)。常用屬性查詢-網(wǎng)絡(luò)資源化學(xué)之門(mén)：中國(guó)國(guó)家科學(xué)數(shù)字圖書(shū)館：SigmaAldrich：MatWeb,YourSourceforMaterialsInformation：維基百科全書(shū)：豊橋技術(shù)科學(xué)大學(xué)神野研究室

science-softConUV/Vis+SpectraDataBase

http://www.science-softcon.de/frame-e.html第五十頁(yè)，共60頁(yè)。第四部分特殊樣品(固體)的紫外光譜/反射光譜原理介紹簡(jiǎn)單應(yīng)用（下一章節(jié)介紹）第五十一頁(yè)，共60頁(yè)。原理介紹測(cè)定吸收光譜的方法一般有兩種，一種透射法，一種反射法。透射法由于實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)單、操作方便重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)而得到廣泛采用。反射法由于不具備上述優(yōu)點(diǎn)而不受重視、研究得少。透射法雖然訂許多優(yōu)點(diǎn)，但它還不是萬(wàn)能的。如難溶物質(zhì)，不透明物質(zhì)、無(wú)法做成單晶的物質(zhì)，就無(wú)法測(cè)得它們的透射光譜。另外有些物質(zhì)，一旦做成溶液，它的結(jié)構(gòu)就被破壞了，而這些缺點(diǎn)用反射光譜可以克服。反射光譜是透射光譜的一個(gè)補(bǔ)充。它可以不改變固體物質(zhì)的狀態(tài)而直接測(cè)定其光譜。第五十二頁(yè)，共60頁(yè)。與普通紫外的區(qū)別測(cè)定試樣不同（液體-固體）測(cè)定原理不通（吸收/透過(guò)-反射）測(cè)定所用光學(xué)器件有區(qū)別（樣品池-積分球內(nèi)特定固體容器）用途也存在不同（紫外固體漫反射光譜的應(yīng)用將在下一章中進(jìn)行介紹）原理介紹第五十三頁(yè)，共60頁(yè)。積分球附件是光度測(cè)最中測(cè)量漫反射光譜的一個(gè)常用部件。它的作用是把光通量測(cè)量轉(zhuǎn)變?yōu)檎昭聹y(cè)量。進(jìn)入積分球的光通量被球內(nèi)表面多次漫反射后，在內(nèi)表面上形成均勻的照度，通過(guò)測(cè)量?jī)?nèi)表面照度，求得被測(cè)試樣的反射光譜。積分球的結(jié)構(gòu)是由兩個(gè)半球殼組成的空心球殼，其太小視使用要求而定(島津uV一240型上配有的積分球內(nèi)徑為~60mm)，球內(nèi)表面涂有漫反射材料。一般先涂一層白漆，再滌一層厚度為1mm左右的氧化鎂或硫酸鋇。涂層的作用是把投射到它表面的光對(duì)渡長(zhǎng)無(wú)選擇地漫反射。原理介紹積分球附件介紹第五十四頁(yè)，共60頁(yè)。用于雙光束分光光度計(jì)上的積分球，四周開(kāi)有四個(gè)窗口互成直角，其中兩個(gè)窗口進(jìn)試樣光束和參比光束。另兩個(gè)窗口裝上參比白板和試樣板架。積