骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件

骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件1骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件2

3

骨髓標(biāo)本采集要求[標(biāo)本采集的注意事項]：①形態(tài)檢查抽吸量不超過0.2ml；②同時進(jìn)行多項檢查應(yīng)優(yōu)先抽吸形態(tài)檢查標(biāo)本；③涂片厚薄適宜，不少于4張，并同時制作配套的血片；④作好標(biāo)記；⑤如干抽，此時應(yīng)考慮作骨髓活檢；⑥多部位或?qū)τ袎和袋c或根據(jù)X線檢查提示進(jìn)行穿刺，以提高陽性率。

骨髓標(biāo)本采集要求4判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；②有骨髓小粒和脂肪滴；③顯微鏡下可見到骨髓特有細(xì)胞，如巨核細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、漿細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、纖維細(xì)胞和大量紅系、粒系幼稚細(xì)胞等。判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；5骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返回骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返6二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查1、確定骨髓標(biāo)本的取材和涂片制作是否滿意骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼觀察，在涂尾部見到散在的約粟粒大小呈淺肉色半透明的骨髓小粒及少量脂肪小滴；在顯微鏡下見到較多骨髓特有的細(xì)胞如各系幼稚細(xì)胞及巨核細(xì)胞等，是穿刺成功的標(biāo)志。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋，為取材不良如脂肪滴增多，則表示紅髓成份減少，反映骨髓增生減低插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查插圖7正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周圍可見到1~5個呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%c.含有鐵顆粒的幼紅細(xì)胞稱為鐵粒幼細(xì)胞。急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。4、再障時NAP活性增高；醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。5、其他血液病時NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。因此，POX染色對急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價值。4、用于識別不同分化階段的細(xì)胞t(6;9)(p21-22;q34)2、種類②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。CD34,33,13+[結(jié)果]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團塊、均勻紅色為陽性。②有骨髓小粒和脂肪滴；

2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）骨髓增生程度通常以骨髓中有核細(xì)胞的量來反映。采用五級法正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周圍可見到1~5個呈8骨髓增生程度分級

有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有核細(xì)胞占全部細(xì)胞百分率有核細(xì)胞/1000個成熟紅細(xì)胞常見原因范圍平均范圍平均極度活躍1:0.5~2.01:1>50238.96~521.07351.96白血病明顯活躍1:5~121:10>1043.78~230.77114.51增生貧血增生活躍1.16~321:201~11021.53~63.6735.34正常骨髓增生減低1:35~701:500.5~17.41~19.6110.53慢性再障明顯減低1:3001:200<0.51.96~7.414.85急性再障下一頁骨髓增生程度分級有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有9骨髓增生程度分級(高倍鏡）明顯減低1~5/HP增生減低5~20/HP增生活躍20~50/HP明顯活躍50~100/HP極度活躍>100/HP返回骨髓增生程度分級(高倍鏡）明顯減低增生減低增生活躍明顯活躍極103、觀察巨核細(xì)胞需要注意數(shù)量、成熟程度、產(chǎn)血小板功能及其形態(tài)（包括血小板的形態(tài)）等四個方面。低倍鏡下計數(shù)全部片膜的巨核細(xì)胞數(shù)。并轉(zhuǎn)換油鏡觀察，進(jìn)行分類計數(shù)，注意巨核細(xì)胞及血小板的形態(tài)有無異常。4、注意有無異常細(xì)胞如惡性組織細(xì)胞病的異常組織細(xì)胞、轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞、Gaucher細(xì)胞、Niemann-Pick細(xì)胞等。注意觀察有無散在或成堆分布的體積較大、形態(tài)特殊的異常細(xì)胞出現(xiàn)，尤其應(yīng)注意涂片尾部、邊緣及骨髓小粒周圍。發(fā)現(xiàn)可疑異常細(xì)胞，應(yīng)在油浸鏡下觀察加以確認(rèn)。

3、觀察巨核細(xì)胞11二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查選擇有核細(xì)胞分布均勻、結(jié)構(gòu)清晰、著色良好的涂膜體尾交界處部位作油浸鏡檢查。1、有核細(xì)胞分類計數(shù)在油浸鏡下連續(xù)分?jǐn)?shù)200個或500個有核細(xì)胞，按細(xì)胞的不同系列和不同的發(fā)育階段分別計數(shù)。然后計算出分別占有核細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)。再累計粒系和紅系總數(shù)，計算粒紅比例（G:E）。分類計數(shù)時，巨核細(xì)胞及分裂、退化細(xì)胞不計入。2、觀察細(xì)胞形態(tài)仔細(xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無異常，有無特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時還需注意有無寄生蟲。插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查插圖12㈢、檢查結(jié)果的臨床意義1、骨髓增生程度，其臨床意義如前表所述。2、骨髓中各系列細(xì)胞及其各發(fā)育階段的比例粒細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的50～60%紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%

粒紅比例（G/E）2.76±0.83:1(2-4:1)淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%單核細(xì)胞系統(tǒng)：一般<4%漿細(xì)胞系統(tǒng)：一般<2%巨核細(xì)胞系統(tǒng)：7~35個為正常值(1.5*3cm涂片）。其他細(xì)胞：可見到極少量的非造血細(xì)胞成分㈢、檢查結(jié)果的臨床意義133、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義⑴、粒細(xì)胞系與紅細(xì)胞系比例（粒/紅比例）1)、粒紅比例正常：見于：①正常骨髓象；②粒、紅兩系平等增多或減少，前者如紅白血病，后者如AA；③粒、紅兩系細(xì)胞基本不變化的造血系統(tǒng)疾病，如MM、骨髓轉(zhuǎn)移癌、ITP等。2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1?？梢娏＜?xì)胞系增多，或由紅細(xì)胞系減少所致。常見于：①急性或慢性粒白血病；②急性化膿性感染、中性粒細(xì)胞性類白血病反應(yīng)；③純紅再障。3)、粒紅比例減低：指粒/紅比例小于2:1。可見粒細(xì)胞系減少，或由紅細(xì)胞系增多所致。常見于：①粒細(xì)胞減少，如粒缺；②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。3、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義14⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：1)、粒系細(xì)胞增多：見于：①各型粒細(xì)胞白血病，急性粒細(xì)胞白血病以原粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞增多為主，CML以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主；②大部分急性炎癥和感染性疾病、中性粒細(xì)胞性類白反應(yīng)等，以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主。2)、粒細(xì)胞減少：見于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。⑶、紅細(xì)胞系統(tǒng)：1)紅系增多：見于：①各類增生性貧血如溶血性貧血、失血性貧血、小細(xì)胞低色素性貧血等，以中幼紅及晚幼紅細(xì)胞增多為主；②巨幼細(xì)胞⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：15貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)胞增多為主，并常伴幼紅細(xì)胞巨幼樣變。2)、紅系減少：見于AA（包括PRCA），但部分CAA，骨髓呈灶性增生者，有時可見紅系細(xì)胞比例增多。⑷、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：1)、淋巴細(xì)胞絕對性增多：見于急淋和慢淋、惡性淋巴瘤、傳淋和傳單、其他病毒性感染、淋巴細(xì)胞類白等。2)、淋巴細(xì)胞相對性增多：見于AA、粒缺或粒細(xì)胞減少癥。⑸、單核細(xì)胞系統(tǒng)：增多見于：①血液系統(tǒng)疾病如急單、急粒-單、MDS、惡組、淋巴瘤等；②某些感染性疾病結(jié)核病、布魯菌病、原蟲感染、貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)16感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；④其他如惡性腫瘤、肝硬化、藥物反應(yīng)等。⑹、漿細(xì)胞系統(tǒng)：增多見于：①MM、漿細(xì)胞白血病、巨球蛋白血癥、重鏈病等；②反應(yīng)性漿細(xì)胞增多如慢性炎癥及感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、惡性腫瘤、過敏性疾病等；③AA、粒缺等。⑺、巨核細(xì)胞系統(tǒng)：1)、增多：①ITP、Evans綜合征；②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；③脾功能亢進(jìn)；④巨核細(xì)胞白血病。2)、巨核細(xì)胞減少：見于AA、AL及其他骨髓浸潤或破壞的疾病，以及急性感染、化學(xué)物或藥物中毒、放射病等。感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)17二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察在檢查骨髓時，需同時進(jìn)行血涂片的觀察1、應(yīng)注意WBC分類計數(shù)及形態(tài)觀察；2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常。有核紅。3、估計PLt數(shù)量及注意其形態(tài)有無異常；4、觀察寄生蟲有無（如瘧原蟲）。㈤、填寫檢查報告單根據(jù)骨髓象和血象檢查結(jié)果，按檢查報告單的要求，逐項詳細(xì)填寫及描述骨髓象、血象表現(xiàn)的特征，結(jié)合臨床資料提出形態(tài)學(xué)診斷意見。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察18低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）油鏡觀察骨髓有核細(xì)胞分類計數(shù)200－500個細(xì)胞系形態(tài)學(xué)觀察粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞計算結(jié)果（各細(xì)胞系百分比粒紅比值）觀察血片組織化學(xué)染色填寫骨髓圖文結(jié)果報告單（骨髓細(xì)胞特征血片細(xì)胞特征組化特征）骨髓片存檔保存骨髓象分析步驟示意圖低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)19返回返回20三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：1、有助于了解各種血細(xì)胞的化學(xué)組成及病理生理改變。2、可用作血細(xì)胞類型的鑒別。3、以及對某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機制探討等均有一定價值。三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：214、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。t(11;14)(p13;q11)有CD19、CD20、CD22等。2)、粒細(xì)胞減少：見于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。t/del(11)(q23)t(8;14)(q24;q11)①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；5、其他血液病時NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。3、急性粒細(xì)胞白血病時，NAP積分值減低；正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周圍可見到1~5個呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。3、以及對某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機制探討等均有一定價值。1、應(yīng)注意WBC分類計數(shù)及形態(tài)觀察；醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常。AML-M2（CD33陽性，呈棕黃色沉淀）1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義見第十章分子生物學(xué)檢查中第三節(jié)染色體檢查。低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）M5b伴吞噬細(xì)胞增多2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1。（一）過氧化物酶染色（POX）【原理】

血細(xì)胞中的過氧化物酶（peroxidase，POX）能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中?！窘Y(jié)果】胞質(zhì)中無藍(lán)黑色顆粒者為陰性反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)小顆粒、分布稀疏者為弱陽性反應(yīng)，顆粒粗大而密集者為強陽性反應(yīng)?！九R床意義】過氧化物酶染色主要用于急性白血病類型的鑒別。急性粒細(xì)胞白血病時，白血病細(xì)胞多呈強陽性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病時呈弱陽性或陰性反應(yīng)；急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。因此，POX染色對急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價值。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。（一）22骨髓片POX染色骨髓片POX染色23骨髓片POX染色APL：呈強陽性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽性反應(yīng)，部分成弱陽性反應(yīng)AML-M5：呈弱陽性ALL：呈陰性，<3%骨髓片POX染色APL：呈強陽性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽性24（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的含脂物質(zhì)，使胞漿中的脂類物質(zhì)呈棕黑色或深黑色顆粒。[結(jié)果和意義]：與POX染色大致相同。（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞25

（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）（NeutrophilalkalinePhosphatase，NAP）【原理】偶氮偶聯(lián)法。是血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處。（另有鈣-鈷法略）【結(jié)果】堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞（分葉核及桿狀核），其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)?！緟⒖贾怠砍扇薔AP陽性率10%~40%；積分值40~80（分）。（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）26臨床意義1、感染性疾?。杭?xì)菌感染與病毒感染的鑒別2、慢性粒細(xì)胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為0，類白血病反應(yīng)的NAP活性極度增高。3、急性粒細(xì)胞白血病時，NAP積分值減低；急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細(xì)胞白血病時一般正?；驕p低。臨床意義274、再障時NAP活性增高；PNH時活性減低。5、其他血液病時NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件28系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。根據(jù)顯帶特點，將染色體劃區(qū)分布，一般用4個符號表示特定區(qū)帶，如“8q22”則代表8號染色體長臂2區(qū)2帶。系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋，為取材不良M2/t(8;21)4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋，為取材不良仔細(xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無異常，有無特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時還需注意有無寄生蟲。2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）AML-M4：部分呈陽性反應(yīng)，t(8;21)(q22;q22)包括數(shù)目畸變和結(jié)構(gòu)畸變二類。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常。③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時，可見陰性和陽性二種細(xì)胞。氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞CD34,33,13+核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）+++++++++++++-嗜酸粒細(xì)胞-系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD329（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下（PH5.0)將基質(zhì)中的?-甘油磷酸鈉水解,產(chǎn)生磷酸鈉,然后與硝酸鉛反應(yīng),生成磷酸鉛沉淀,再與硫化銨反應(yīng)形成硫化鉛沉淀,定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果]：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽性反應(yīng)；否則陰性(另有偶氮偶聯(lián)法略）。（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)30臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病2、幫助鑒別T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞：TL（+），BL（-）3、幫助鑒別Gaucher病與Niemanm-Pick病。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病31酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽性反應(yīng)（桔紅色粗大顆粒）提示為T淋巴細(xì)胞白血病酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽性32（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶

氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：

1、急性粒細(xì)胞白血病呈強陽性，不被氟化鈉抑制。

2、急性單核細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病呈陰性。

3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時，可見陰性和陽性二種細(xì)胞。（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶氯乙酸A33（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，NSE為非特異性酯酶)：

1、急性單核細(xì)胞白血病、急性粒-單核細(xì)胞白血病的單核系細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，可被氟化鈉抑制(抑制率＞50%)；

2、急性粒細(xì)胞白血病一般為陰性或呈弱陽性反應(yīng)，不被氟化鈉抑制。（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，N34CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；1、數(shù)量2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常?！緟⒖贾怠砍扇薔AP陽性率10%~40%；M5a/t(11q)重視組化染色和其他實驗檢查表示47條染色體，增加了一條8號染色體，第9號與第22號染色體之間易位，斷裂點分別在第9號染色體長臂3區(qū)4帶和第22號染色體長臂1區(qū)1帶。粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強陽性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；2、種類多讀書（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；2、細(xì)胞內(nèi)鐵觀察幼紅細(xì)胞內(nèi)的鐵。[意義]：紅血病、紅白血病陽性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽性。d.AML-M2（CD33陽性，呈棕黃色沉淀）核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。常見于：①急性或慢性粒白血??；活化T細(xì)胞不表達(dá)CD45RA，而CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58等均強表達(dá)。1、細(xì)胞少時（TB、R-S細(xì)胞）2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）α－醋酸萘酚酯染色（α－NAE，NSE）急單呈陽性反應(yīng)。CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；α－醋酸35（七）糖原染色(periodicacid–Schiff‘sreactionPAS)

[原理]：過碘酸能將血細(xì)胞內(nèi)的糖元氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果

]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團塊、均勻紅色為陽性。[意義]：紅血病、紅白血病陽性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽性。（七）糖原染色(periodicacid–Schiff36臨床意義粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強陽性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；巨核、Plt均呈陽性反應(yīng)。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件37PASAML-M6幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)MA幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)PASAML-M6MA38

（八）鐵染色（普魯氏藍(lán)反應(yīng)）【原理】人體內(nèi)的總鐵有一定量以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞胞質(zhì)的線粒體中也含有含鐵血黃素。這些鐵在酸化的亞鐵氰化鉀溶液中反應(yīng)，生成藍(lán)色的鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。【結(jié)果】1、細(xì)胞外鐵觀察骨髓小粒中貯存在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)的鐵。陽性反應(yīng)為在骨髓小粒上見到呈淺藍(lán)綠色均勻的無形物質(zhì)，或呈藍(lán)色或深藍(lán)色的小珠狀、粗顆粒狀或藍(lán)黑色的小塊狀物質(zhì)。2、細(xì)胞內(nèi)鐵觀察幼紅細(xì)胞內(nèi)的鐵。正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周圍可見到1~5個呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。含有鐵顆粒的幼紅細(xì)胞稱為鐵粒幼細(xì)胞。如含粗大深染的鐵粒在10個以上，并環(huán)繞細(xì)胞核排列超過核周徑2/3以上者，稱環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞。（八）鐵染色（普魯氏藍(lán)反應(yīng)）39

【參考值】1、細(xì)胞外鐵

1+~2+，大多為2+。2、細(xì)胞內(nèi)鐵

20%~90%，平均值為65%。【臨床意義】1、缺鐵性貧血時，早期骨髓中貯存鐵就已耗盡，細(xì)胞外鐵呈“－”。因此，鐵染色是目前診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的一項可靠和切合臨床實用的檢驗方法。2、非缺鐵性貧血如球蛋白生成障礙性貧血，細(xì)胞外鐵多增加，常>3+~4+。3、鐵粒幼細(xì)胞性貧血時，鐵粒幼細(xì)胞增多，并可見到環(huán)狀鐵粒幼細(xì)胞?！緟⒖贾怠?0細(xì)胞外鐵觀察陽性為藍(lán)綠色沉淀++++血色病+++AA、鐵粒幼貧血++感染+++AA、鐵粒幼貧血+NBM正常骨髓—IDA細(xì)胞外鐵觀察陽性為藍(lán)綠色沉淀+++++++++++++—41骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞

骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼42表4-2-10幾種常見急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果急淋急粒急單紅白血病POX－+~+++－~+視合并的白細(xì)胞類型而定SB－++~+++－~+同上AS-DNCE－－~+++－~+同上α-NAE－~++++~+++同上α-NAE-NaF不被NaF抑制被NaF抑制同上NAP增加減少正?；蛟黾油螾AS+++——+++表4-2-10幾種常見急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果急淋急粒急43四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型

細(xì)胞免疫分型也稱細(xì)胞免疫標(biāo)記（表型）檢測，它是用單克隆抗體及免疫學(xué)技術(shù)對細(xì)胞膜表面和/或細(xì)胞質(zhì)存在的特異性抗原進(jìn)行檢測，借以分析細(xì)胞所屬系列，分化程度和功能狀態(tài)的一種方法。四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型細(xì)胞免疫分型也稱細(xì)胞免疫標(biāo)記44人體正常細(xì)胞有46條染色體，根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)命名的國際體制（ISCN），按其長短和著絲粒的位置編為A～G7組，包括1～22號常染色體及X和Y性染色體；【原理】血細(xì)胞中的過氧化物酶（peroxidase，POX）能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中。t/del(11)(q23)醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。M5a/t(11q)2、溶血檢查。②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。CD34+、CD90+、Lin-被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的主要標(biāo)志；②某些感染性疾病結(jié)核病、布魯菌病、原蟲感染、②反應(yīng)性漿細(xì)胞增多如慢性炎癥及感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、惡性腫瘤、過敏性疾病等；二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義2、細(xì)胞內(nèi)鐵20%~90%，平均值為65%。2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1。重視組化染色和其他實驗檢查表示47條染色體，增加了一條8號染色體，第9號與第22號染色體之間易位，斷裂點分別在第9號染色體長臂3區(qū)4帶和第22號染色體長臂1區(qū)1帶。敏感性可高達(dá)10-4水平。3、以及對某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機制探討等均有一定價值。因此，POX染色對急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價值。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義1、教師骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型（一）檢測方法1、免疫熒光法(immunofluoresencetechnigue)2、免疫酶染色法（1）APAAP法（2）PAP法（3）ABC法（二）細(xì)胞免疫分型的臨床應(yīng)用1、有助于識別不同系列的細(xì)胞。如識別髓人體正常細(xì)胞有46條染色體，根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)命名的國際體制45骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型

系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。識別淋巴細(xì)胞系列的抗體有：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD52、CD77等。識別巨核細(xì)胞和血小板的抗體有CD41、CD42、CD61等。識別紅細(xì)胞系列的抗體常用血型糖蛋白A或B。2、識別不同的淋巴細(xì)胞識別成熟T淋巴細(xì)胞的抗體有CD2、CD3、CD7、CD8等。識別成熟B淋巴細(xì)胞的抗體骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD146骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型有CD19、CD20、CD22等。識別NK細(xì)胞的抗體有CD16、CD56等。識別不同的淋巴細(xì)胞除檢測細(xì)胞表面的抗原外，還可以檢測細(xì)胞表面的受體及細(xì)胞表面其他分子，如TCR、MHC等。3、用于檢測T淋巴細(xì)胞亞群臨床上常用CD3、CD4和CD8單抗檢測全T（CD3）細(xì)胞，并可將外周淋巴器官和血液中T細(xì)胞分為TH（CD4+，CD8-）和TS（CD4-、CD8+）兩個主要亞群，計算TH/TS比值作為骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型有CD19、CD20、CD22等。識別NK47骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測治療和判斷預(yù)后的參數(shù)。4、用于識別不同分化階段的細(xì)胞CD34+、CD90+、Lin-被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的主要標(biāo)志；CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；CD34+、TDT+、CD10+、CD7+為T淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志；CD34+、CD19+為B淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志。根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。（參照表）骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測48骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型5、有助于識別不同功能狀態(tài)的細(xì)胞，如記憶T細(xì)胞高表達(dá)CD45RO、不表達(dá)CD45RA?；罨疶細(xì)胞不表達(dá)CD45RA，而CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58等均強表達(dá)。6、有助于對不同系列和不同分化階段的細(xì)胞進(jìn)行分離和研究。用免疫熒光法標(biāo)記和活細(xì)胞可經(jīng)流式細(xì)胞儀或免疫磁珠法將其分離出來，并使對他們的研究成為可能。骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型5、有助于識別不同功能狀態(tài)的細(xì)胞，如記憶T49骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型7、可用于各種白血病細(xì)胞的免疫表型分析（見“急性白血病免疫表型特點”一節(jié)）。8、可用于白血病微小殘留病的檢查一個完全緩解的白血病病人骨髓細(xì)胞中，若出現(xiàn)CD19、CD22、CD10、CD7、CD5、CD13、CD37、CD34等任何一種抗原陽性同時伴有TdT+則診斷微小殘留病存在。敏感性可高達(dá)10-4水平。（三）急性白血病細(xì)胞免疫表型特點1、ALL與AML細(xì)胞免疫表型特點骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型7、可用于各種白血病細(xì)胞的免疫表型分析（見50骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型2、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）免疫表型特點3、急性髓細(xì)胞白血病免疫表型特點4、免疫學(xué)分類對于雙表型白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病（CLL）、毛細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病急變期細(xì)胞的分類和診斷也具有重要作用。骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型2、急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）免疫表型特51ALL和AML的免疫表型CD7CD13CD19CD33HLA-DRTdTMPOe

AML-/+a

+-++-c

+B-ALL--+-++d

-T-ALL+----b

+-注：a.CD7對少部分（10%）AML可陽性

b.<10%T-ALL病例HLA-DR可陽性表達(dá)

c.TdT在少數(shù)（20%）AML（M1）陽性

d.TdT對大多數(shù)成熟B-ALL是陰性ALL和AML的免疫表型CD7CD13CD19CD3352急性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點系列亞型主要的抗原標(biāo)記系列亞型主要的抗原標(biāo)記B系列早期B型CD19+,CD10－T系列前T型CD7+,CD2－普通型CD19+,CD10+T細(xì)胞型CD7+,CD2+前B型CD19+,胞質(zhì)μ鏈+B細(xì)胞型CD19+,胞膜Ig+急性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點系列亞型主要的抗原標(biāo)記系列亞53急性非淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點亞型典型的抗原標(biāo)記亞型典型的抗原標(biāo)記M0CD34,33,13+M4CD34,33,15,14,13+M1同上M5CD33,15,14,13+M2CD34,33,15,13+M6CD33,血型糖蛋白AM3CD33,13+（HLA-DR陰性）M7CD33,41,42,61+急性非淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點亞型典型的抗原標(biāo)記亞型典型54免疫組織化學(xué)染色AML-M2（CD33陽性，呈棕黃色沉淀）免疫組織化學(xué)染色AML-M2（CD33陽性，呈棕黃色55免疫分型（流式細(xì)胞儀）AML-M0（CD5、7、10、19、14、36、GlyA陰性）（CD13、34、38、33、MPO、HLA-DR陽性）免疫分型（流式細(xì)胞儀）AML-M0（CD5、7、10、19、56五、細(xì)胞遺傳學(xué)分析五、細(xì)胞遺傳學(xué)分析57細(xì)胞遺傳學(xué)分析

自從20世紀(jì)70年代以來由于染色體分帶技術(shù)的出現(xiàn)，尤其是高分辨顯帶技術(shù)的應(yīng)用，細(xì)胞遺傳學(xué)研究在血液學(xué)領(lǐng)域內(nèi)才得以迅速發(fā)展，特別是在惡性血液病的研究中不但確定了某些染色體異常與疾病發(fā)生、發(fā)展、診斷、治療及預(yù)后有密切關(guān)系，而且染色斷裂點也往往成為尋找癌基因或抑癌基因的標(biāo)志。因此血細(xì)胞染色體的檢查與分析對遺傳性血液病和惡性血液病的診斷、分型及病因和發(fā)病機制的研究有重要價值，也為遺傳咨詢、優(yōu)生優(yōu)育提供依據(jù)。細(xì)胞遺傳學(xué)分析自從20世紀(jì)70年代以來由于染色體分帶58（一）染色體檢查方法

見第十章分子生物學(xué)檢查中第三節(jié)染色體檢查。（一）染色體檢查方法見第十章分子生物學(xué)檢59（二）染色體分析通常有兩個或兩以上的細(xì)胞分裂相中檢出同一條染色體增加或結(jié)構(gòu)異常；有三個或三個以上細(xì)胞分裂相中有同一條染色體丟失才能作為一個染色體異?？寺　?、染色體命名人體正常細(xì)胞有46條染色體，根據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)命名的國際體制（ISCN），按其長短和著絲粒的位置編為A～G7組，包括1～22號常染色體及X和Y性染色體；根據(jù)顯帶特點，將染色體劃區(qū)分布，一般用4個符號表示特定區(qū)帶，如“8q22”則代表8號染色體長臂2區(qū)2帶。（二）染色體分析通常有兩個或兩以上的細(xì)胞分裂相中檢出同一條染60（二）染色體分析2、核型分析及書寫核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。其格式書寫順序是：染色體數(shù)目、性染色體、染色體異常。各項之間以逗號隔開，性染色體以大寫的X與Y表示，各染色變異以小寫字母表示，見表5-1。一個完整核型書寫方法如下：47，XY，+8，t(9;22)(q34;q11)。表示47條染色體，增加了一條8號染色體，第9號與第22號染色體之間易位，斷裂點分別在第9號染色體長臂3區(qū)4帶和第22號染色體長臂1區(qū)1帶。（二）染色體分析2、核型分析及書寫61（二）染色體分析3、染色體畸變包括數(shù)目畸變和結(jié)構(gòu)畸變二類。正常人體細(xì)胞有23對染色體，其中23條來自父方，另23條來自母方，即含有兩個染色體組或稱為二倍體（2n）。（三）臨床常見白血病的染色體改變臨床常見白血病的染色體改變見表。（二）染色體分析3、染色體畸變（三）臨床常見白血病的染色體改621、數(shù)量<10%T-ALL病例HLA-DR可陽性表達(dá)【原理】人體內(nèi)的總鐵有一定量以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞胞質(zhì)的線粒體中也含有含鐵血黃素。因此血細(xì)胞染色體的檢查與分析對遺傳性血液病和惡性血液病的診斷、分型及病因和發(fā)病機制的研究有重要價值，也為遺傳咨詢、優(yōu)生優(yōu)育提供依據(jù)。醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。t(8;21)(q22;q22)因此，鐵染色是目前診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的一項可靠和切合臨床實用的檢驗方法。AML-M2（CD33陽性，呈棕黃色沉淀）（CD13、34、38、33、MPO、HLA-DR陽性）（二）細(xì)胞免疫分型的臨床應(yīng)用急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；1、應(yīng)注意WBC分類計數(shù)及形態(tài)觀察；陽性反應(yīng)為在骨髓小粒上見到呈淺藍(lán)綠色均勻的無形物質(zhì)，或呈藍(lán)色或深藍(lán)色的小珠狀、粗顆粒狀或藍(lán)黑色的小塊狀物質(zhì)。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。48,XY,+4,t(9;22),+Ph3、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義急性單核細(xì)胞白血病時一般正常或減低。（另有鈣-鈷法略）【參考值】成人NAP陽性率10%~40%；②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。ALL：呈陰性，<3%急性髓細(xì)胞白血病的MIC分型

核型FAB形態(tài)MIC建議分型t(8;21)(q22;q22)M2M2/t(8;21)t(15:17)(q22;q11-12)M3，M3vM3/t(15:17)t/del(11)(q23)M5a（M5b,M4）M5a/t(11q)Inv/del(16)(q22)M4EoM4Eo/inv(16)t(9;22)(q34;q11)M1（M2）M1/t(9;22)t(6;9)(p21-22;q34)M2或M4伴嗜堿粒細(xì)胞增多M2/t(6;9)inv(3)(q21q26)M1(M2、M4、M7)伴血小板增多M1/inv(3)t(8;16)(p11;p13)M5b伴吞噬細(xì)胞增多M5b/t(8;16)t/del(12)(p12-13)M2伴嗜堿粒細(xì)胞增多M2Baso/t(12p)1、數(shù)量急性髓細(xì)胞白血病的MIC分型核型FAB形態(tài)MI63Ph染色體

是CML的特征性異常染色體，檢出率為90-95%，其中絕大多數(shù)為t(9;22)(q34;q11),稱為典型易位。Ph染色體是CML的特征性異常染色體，檢出率為906448,XY,+4,t(9;22),+Ph48,XY,+4,t(9;22),+Ph65急性淋巴細(xì)胞白血病的MIC分型

ALL亞型免疫表型細(xì)胞遺傳學(xué)預(yù)后早B-ALLTdT+、CD19+、CD10+t(9;22)(q34;q11)預(yù)后較好前前B-ALLTdT+、CD19+、CD10-11q23預(yù)后較好B-ALLTdT+、CD20+、SIg+t(8;14)(q24;q11)預(yù)后不良T-ALLt(11;14)(p13;q11)預(yù)后較好T-ALLt(1;14)(p32;q11)同上T-ALLt(10;14)(q24;q11)同上T-ALLt(8;14)(q24;q11)預(yù)后不良急性淋巴細(xì)胞白血病的MIC分型ALL亞型免疫表型細(xì)胞遺66多看

1、數(shù)量

2、種類六、如何學(xué)好血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)多看六、如何學(xué)好血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)67多討論

1、同事

2、老師多討論68多讀書（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）

1、常見病

2、罕見病多讀書（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）69多請教

1、教師

2、圖譜多請教70多會診

1、同級醫(yī)院

2、上級醫(yī)院多會診71多溝通

1、臨床

2、病人多溝通72多觀察

1、細(xì)胞少時（TB、R-S細(xì)胞）

2、細(xì)胞多時（特殊類型：如紅細(xì)胞樣瘤細(xì)胞）多觀察73重視組化染色和其他實驗檢查

1、常規(guī)（POX或SBB、NAP、PAS、Fe)；少見(NSE—中性、酸性、堿性，ACP）；

2、溶血檢查。重視組化染色和其他實驗檢查74二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察在檢查骨髓時，需同時進(jìn)行血涂片的觀察1、應(yīng)注意WBC分類計數(shù)及形態(tài)觀察；2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常。有核紅。3、估計PLt數(shù)量及注意其形態(tài)有無異常；4、觀察寄生蟲有無（如瘧原蟲）。㈤、填寫檢查報告單根據(jù)骨髓象和血象檢查結(jié)果，按檢查報告單的要求，逐項詳細(xì)填寫及描述骨髓象、血象表現(xiàn)的特征，結(jié)合臨床資料提出形態(tài)學(xué)診斷意見。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察75

（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）（NeutrophilalkalinePhosphatase，NAP）【原理】偶氮偶聯(lián)法。是血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處。（另有鈣-鈷法略）【結(jié)果】堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞（分葉核及桿狀核），其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。【參考值】成人NAP陽性率10%~40%；積分值40~80（分）。（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）76臨床意義1、感染性疾?。杭?xì)菌感染與病毒感染的鑒別2、慢性粒細(xì)胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為0，類白血病反應(yīng)的NAP活性極度增高。3、急性粒細(xì)胞白血病時，NAP積分值減低；急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細(xì)胞白血病時一般正?；驕p低。臨床意義77臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病2、幫助鑒別T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞：TL（+），BL（-）3、幫助鑒別Gaucher病與Niemanm-Pick病。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病78（七）糖原染色(periodicacid–Schiff‘sreactionPAS)

[原理]：過碘酸能將血細(xì)胞內(nèi)的糖元氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果

]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團塊、均勻紅色為陽性。[意義]：紅血病、紅白血病陽性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽性。（七）糖原染色(periodicacid–Schiff79骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞

骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼80骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測治療和判斷預(yù)后的參數(shù)。4、用于識別不同分化階段的細(xì)胞CD34+、CD90+、Lin-被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的主要標(biāo)志；CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；CD34+、TDT+、CD10+、CD7+為T淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志；CD34+、CD19+為B淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志。根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。（參照表）骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測81多觀察

1、細(xì)胞少時（TB、R-S細(xì)胞）

2、細(xì)胞多時（特殊類型：如紅細(xì)胞樣瘤細(xì)胞）多觀察82骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件83骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件84

85

骨髓標(biāo)本采集要求[標(biāo)本采集的注意事項]：①形態(tài)檢查抽吸量不超過0.2ml；②同時進(jìn)行多項檢查應(yīng)優(yōu)先抽吸形態(tài)檢查標(biāo)本；③涂片厚薄適宜，不少于4張，并同時制作配套的血片；④作好標(biāo)記；⑤如干抽，此時應(yīng)考慮作骨髓活檢；⑥多部位或?qū)τ袎和袋c或根據(jù)X線檢查提示進(jìn)行穿刺，以提高陽性率。

骨髓標(biāo)本采集要求86判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；②有骨髓小粒和脂肪滴；③顯微鏡下可見到骨髓特有細(xì)胞，如巨核細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、漿細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、纖維細(xì)胞和大量紅系、粒系幼稚細(xì)胞等。判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；87骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返回骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返88二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查1、確定骨髓標(biāo)本的取材和涂片制作是否滿意骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼觀察，在涂尾部見到散在的約粟粒大小呈淺肉色半透明的骨髓小粒及少量脂肪小滴；在顯微鏡下見到較多骨髓特有的細(xì)胞如各系幼稚細(xì)胞及巨核細(xì)胞等，是穿刺成功的標(biāo)志。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋，為取材不良如脂肪滴增多，則表示紅髓成份減少，反映骨髓增生減低插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查插圖89正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周圍可見到1~5個呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%c.含有鐵顆粒的幼紅細(xì)胞稱為鐵粒幼細(xì)胞。急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。4、再障時NAP活性增高；醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。5、其他血液病時NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。因此，POX染色對急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價值。4、用于識別不同分化階段的細(xì)胞t(6;9)(p21-22;q34)2、種類②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。CD34,33,13+[結(jié)果]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團塊、均勻紅色為陽性。②有骨髓小粒和脂肪滴；

2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）骨髓增生程度通常以骨髓中有核細(xì)胞的量來反映。采用五級法正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周圍可見到1~5個呈90骨髓增生程度分級

有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有核細(xì)胞占全部細(xì)胞百分率有核細(xì)胞/1000個成熟紅細(xì)胞常見原因范圍平均范圍平均極度活躍1:0.5~2.01:1>50238.96~521.07351.96白血病明顯活躍1:5~121:10>1043.78~230.77114.51增生貧血增生活躍1.16~321:201~11021.53~63.6735.34正常骨髓增生減低1:35~701:500.5~17.41~19.6110.53慢性再障明顯減低1:3001:200<0.51.96~7.414.85急性再障下一頁骨髓增生程度分級有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有91骨髓增生程度分級(高倍鏡）明顯減低1~5/HP增生減低5~20/HP增生活躍20~50/HP明顯活躍50~100/HP極度活躍>100/HP返回骨髓增生程度分級(高倍鏡）明顯減低增生減低增生活躍明顯活躍極923、觀察巨核細(xì)胞需要注意數(shù)量、成熟程度、產(chǎn)血小板功能及其形態(tài)（包括血小板的形態(tài)）等四個方面。低倍鏡下計數(shù)全部片膜的巨核細(xì)胞數(shù)。并轉(zhuǎn)換油鏡觀察，進(jìn)行分類計數(shù)，注意巨核細(xì)胞及血小板的形態(tài)有無異常。4、注意有無異常細(xì)胞如惡性組織細(xì)胞病的異常組織細(xì)胞、轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞、Gaucher細(xì)胞、Niemann-Pick細(xì)胞等。注意觀察有無散在或成堆分布的體積較大、形態(tài)特殊的異常細(xì)胞出現(xiàn)，尤其應(yīng)注意涂片尾部、邊緣及骨髓小粒周圍。發(fā)現(xiàn)可疑異常細(xì)胞，應(yīng)在油浸鏡下觀察加以確認(rèn)。

3、觀察巨核細(xì)胞93二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查選擇有核細(xì)胞分布均勻、結(jié)構(gòu)清晰、著色良好的涂膜體尾交界處部位作油浸鏡檢查。1、有核細(xì)胞分類計數(shù)在油浸鏡下連續(xù)分?jǐn)?shù)200個或500個有核細(xì)胞，按細(xì)胞的不同系列和不同的發(fā)育階段分別計數(shù)。然后計算出分別占有核細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)。再累計粒系和紅系總數(shù)，計算粒紅比例（G:E）。分類計數(shù)時，巨核細(xì)胞及分裂、退化細(xì)胞不計入。2、觀察細(xì)胞形態(tài)仔細(xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無異常，有無特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時還需注意有無寄生蟲。插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查插圖94㈢、檢查結(jié)果的臨床意義1、骨髓增生程度，其臨床意義如前表所述。2、骨髓中各系列細(xì)胞及其各發(fā)育階段的比例粒細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的50～60%紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%

粒紅比例（G/E）2.76±0.83:1(2-4:1)淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%單核細(xì)胞系統(tǒng)：一般<4%漿細(xì)胞系統(tǒng)：一般<2%巨核細(xì)胞系統(tǒng)：7~35個為正常值(1.5*3cm涂片）。其他細(xì)胞：可見到極少量的非造血細(xì)胞成分㈢、檢查結(jié)果的臨床意義953、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義⑴、粒細(xì)胞系與紅細(xì)胞系比例（粒/紅比例）1)、粒紅比例正常：見于：①正常骨髓象；②粒、紅兩系平等增多或減少，前者如紅白血病，后者如AA；③粒、紅兩系細(xì)胞基本不變化的造血系統(tǒng)疾病，如MM、骨髓轉(zhuǎn)移癌、ITP等。2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1?？梢娏＜?xì)胞系增多，或由紅細(xì)胞系減少所致。常見于：①急性或慢性粒白血??；②急性化膿性感染、中性粒細(xì)胞性類白血病反應(yīng)；③純紅再障。3)、粒紅比例減低：指粒/紅比例小于2:1。可見粒細(xì)胞系減少，或由紅細(xì)胞系增多所致。常見于：①粒細(xì)胞減少，如粒缺；②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。3、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義96⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：1)、粒系細(xì)胞增多：見于：①各型粒細(xì)胞白血病，急性粒細(xì)胞白血病以原粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞增多為主，CML以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主；②大部分急性炎癥和感染性疾病、中性粒細(xì)胞性類白反應(yīng)等，以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主。2)、粒細(xì)胞減少：見于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。⑶、紅細(xì)胞系統(tǒng)：1)紅系增多：見于：①各類增生性貧血如溶血性貧血、失血性貧血、小細(xì)胞低色素性貧血等，以中幼紅及晚幼紅細(xì)胞增多為主；②巨幼細(xì)胞⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：97貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)胞增多為主，并常伴幼紅細(xì)胞巨幼樣變。2)、紅系減少：見于AA（包括PRCA），但部分CAA，骨髓呈灶性增生者，有時可見紅系細(xì)胞比例增多。⑷、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：1)、淋巴細(xì)胞絕對性增多：見于急淋和慢淋、惡性淋巴瘤、傳淋和傳單、其他病毒性感染、淋巴細(xì)胞類白等。2)、淋巴細(xì)胞相對性增多：見于AA、粒缺或粒細(xì)胞減少癥。⑸、單核細(xì)胞系統(tǒng)：增多見于：①血液系統(tǒng)疾病如急單、急粒-單、MDS、惡組、淋巴瘤等；②某些感染性疾病結(jié)核病、布魯菌病、原蟲感染、貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)98感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；④其他如惡性腫瘤、肝硬化、藥物反應(yīng)等。⑹、漿細(xì)胞系統(tǒng)：增多見于：①MM、漿細(xì)胞白血病、巨球蛋白血癥、重鏈病等；②反應(yīng)性漿細(xì)胞增多如慢性炎癥及感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、惡性腫瘤、過敏性疾病等；③AA、粒缺等。⑺、巨核細(xì)胞系統(tǒng)：1)、增多：①ITP、Evans綜合征；②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；③脾功能亢進(jìn)；④巨核細(xì)胞白血病。2)、巨核細(xì)胞減少：見于AA、AL及其他骨髓浸潤或破壞的疾病，以及急性感染、化學(xué)物或藥物中毒、放射病等。感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)99二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察在檢查骨髓時，需同時進(jìn)行血涂片的觀察1、應(yīng)注意WBC分類計數(shù)及形態(tài)觀察；2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常。有核紅。3、估計PLt數(shù)量及注意其形態(tài)有無異常；4、觀察寄生蟲有無（如瘧原蟲）。㈤、填寫檢查報告單根據(jù)骨髓象和血象檢查結(jié)果，按檢查報告單的要求，逐項詳細(xì)填寫及描述骨髓象、血象表現(xiàn)的特征，結(jié)合臨床資料提出形態(tài)學(xué)診斷意見。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察100低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）油鏡觀察骨髓有核細(xì)胞分類計數(shù)200－500個細(xì)胞系形態(tài)學(xué)觀察粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞計算結(jié)果（各細(xì)胞系百分比粒紅比值）觀察血片組織化學(xué)染色填寫骨髓圖文結(jié)果報告單（骨髓細(xì)胞特征血片細(xì)胞特征組化特征）骨髓片存檔保存骨髓象分析步驟示意圖低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)101返回返回102三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：1、有助于了解各種血細(xì)胞的化學(xué)組成及病理生理改變。2、可用作血細(xì)胞類型的鑒別。3、以及對某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機制探討等均有一定價值。三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：1034、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。t(11;14)(p13;q11)有CD19、CD20、CD22等。2)、粒細(xì)胞減少：見于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。t/del(11)(q23)t(8;14)(q24;q11)①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；5、其他血液病時NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。3、急性粒細(xì)胞白血病時，NAP積分值減低；正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周圍可見到1~5個呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。3、以及對某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機制探討等均有一定價值。1、應(yīng)注意WBC分類計數(shù)及形態(tài)觀察；醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常。AML-M2（CD33陽性，呈棕黃色沉淀）1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義見第十章分子生物學(xué)檢查中第三節(jié)染色體檢查。低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）M5b伴吞噬細(xì)胞增多2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1。（一）過氧化物酶染色（POX）【原理】

血細(xì)胞中的過氧化物酶（peroxidase，POX）能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中?！窘Y(jié)果】胞質(zhì)中無藍(lán)黑色顆粒者為陰性反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)小顆粒、分布稀疏者為弱陽性反應(yīng)，顆粒粗大而密集者為強陽性反應(yīng)?！九R床意義】過氧化物酶染色主要用于急性白血病類型的鑒別。急性粒細(xì)胞白血病時，白血病細(xì)胞多呈強陽性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病時呈弱陽性或陰性反應(yīng)；急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。因此，POX染色對急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價值。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。（一）104骨髓片POX染色骨髓片POX染色105骨髓片POX染色APL：呈強陽性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽性反應(yīng)，部分成弱陽性反應(yīng)AML-M5：呈弱陽性ALL：呈陰性，<3%骨髓片POX染色APL：呈強陽性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽性106（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的含脂物質(zhì)，使胞漿中的脂類物質(zhì)呈棕黑色或深黑色顆粒。[結(jié)果和意義]：與POX染色大致相同。（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞107

（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）（NeutrophilalkalinePhosphatase，NAP）【原理】偶氮偶聯(lián)法。是血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處。（另有鈣-鈷法略）【結(jié)果】堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞（分葉核及桿狀核），其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)?！緟⒖贾怠砍扇薔AP陽性率10%~40%；積分值40~80（分）。（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）108臨床意義1、感染性疾?。杭?xì)菌感染與病毒感染的鑒別2、慢性粒細(xì)胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為0，類白血病反應(yīng)的NAP活性極度增高。3、急性粒細(xì)胞白血病時，NAP積分值減低；急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細(xì)胞白血病時一般正?；驕p低。臨床意義1094、再障時NAP活性增高；PNH時活性減低。5、其他血液病時NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件110系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。根據(jù)顯帶特點，將染色體劃區(qū)分布，一般用4個符號表示特定區(qū)帶，如“8q22”則代表8號染色體長臂2區(qū)2帶。系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋，為取材不良M2/t(8;21)4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋，為取材不良仔細(xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無異常，有無特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時還需注意有無寄生蟲。2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）AML-M4：部分呈陽性反應(yīng)，t(8;21)(q22;q22)包括數(shù)目畸變和結(jié)構(gòu)畸變二類。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常。③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時，可見陰性和陽性二種細(xì)胞。氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞CD34,33,13+核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）+++++++++++++-嗜酸粒細(xì)胞-系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD3111（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下（PH5.0)將基質(zhì)中的?-甘油磷酸鈉水解,產(chǎn)生磷酸鈉,然后與硝酸鉛反應(yīng),生成磷酸鉛沉淀,再與硫化銨反應(yīng)形成硫化鉛沉淀,定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果]：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽性反應(yīng)；否則陰性(另有偶氮偶聯(lián)法略）。（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)112臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病2、幫助鑒別T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞：TL（+），BL（-）3、幫助鑒別Gaucher病與Niemanm-Pick病。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病113酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽性反應(yīng)（桔紅色粗大顆粒）提示為T淋巴細(xì)胞白血病酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽性114（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶

氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：

1、急性粒細(xì)胞白血病呈強陽性，不被氟化鈉抑制。

2、急性單核細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病呈陰性。

3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時，可見陰性和陽性二種細(xì)胞。（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶氯乙酸A115（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，NSE為非特異性酯酶)：

1、急性單核細(xì)胞白血病、急性粒-單核細(xì)胞白血病的單核系細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，可被氟化鈉抑制(抑制率＞50%)；

2、急性粒細(xì)胞白血病一般為陰性或呈弱陽性反應(yīng)，不被氟化鈉抑制。（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，N116CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；1、數(shù)量2、注意成熟RBC的形態(tài)有無異常?！緟⒖贾怠砍扇薔AP陽性率10%~40%；M5a/t(11q)重視組化染色和其他實驗檢查表示47條染色體，增加了一條8號染色體，第9號與第22號染色體之間易位，斷裂點分別在第9號染色體長臂3區(qū)4帶和第22號染色體長臂1區(qū)1帶。粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強陽性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；2、種類多讀書（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）①抽吸骨髓液時，病人有特殊酸痛感；2、細(xì)胞內(nèi)鐵觀察幼紅細(xì)胞內(nèi)的鐵。[意義]：紅血病、紅白血病陽性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽性。d.AML-M2（CD33陽性，呈棕黃色沉淀）核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。常見于：①急性或慢性粒白血??；活化T細(xì)胞不表達(dá)CD45RA，而CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58等均強表達(dá)。1、細(xì)胞少時（TB、R-S細(xì)胞）2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）α－醋酸萘酚酯染色（α－NAE，NSE）急單呈陽性反應(yīng)。CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；α－醋酸117（七）糖原染色(periodicacid–Schiff‘sreactionPAS)

[原理]：過碘酸能將血細(xì)胞內(nèi)的糖元氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果

]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團塊、均勻紅色為陽性。[意義]：紅血病、紅白血病陽性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽性。（七）糖原染色(periodicacid–Schiff118臨床意義粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強陽性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；巨核、Plt均呈陽性反應(yīng)。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件119PASAML-M6幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)MA幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)PASAML-M6MA120

（八）鐵染色（普魯氏藍(lán)反應(yīng)）【原理】人體內(nèi)的總鐵有一定量以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞胞質(zhì)的線粒體中也含有含鐵血黃素。這些鐵在酸化的亞鐵氰化鉀溶液中反應(yīng)，生成藍(lán)色的鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位?！窘Y(jié)果】