微生物培訓課件

微生物相關知識培訓微生物相關知識4目的了解以下內(nèi)容：一、微生物基礎知識二、微生物污染的相關知識三、潔凈室主要微生物污染源及相關檢測目的了解以下內(nèi)容：一、微生物基礎知識5一、微生物基礎知識

什么是微生物微生物的存在微生物的益處微生物的危害一、微生物基礎知識什么是微生物6什么是微生物

它們是非常小的單細胞或多細胞生物，不借助顯微鏡用肉眼無法看到。它們對營養(yǎng)的要求非常低。它們是一類繁殖非?？斓纳?。它們非常容易發(fā)生變異。它們無處不在。大多數(shù)微生物對人類有益。有些微生物對人類有害。什么是微生物7微生物的種類具有細胞結構的微生物沒有細胞結構的微生物：病毒原核生物：（由原核細胞構成的）真核微生物（由真核細胞構成的）真菌顯微藻類原生動物細菌草履蟲水綿放線菌微生物的種類具有細胞結沒有細胞結構的原核生物：真核微生物真菌8碳疽桿菌大腸桿菌大腸桿菌（帶鞭毛）沙門氏菌一、細菌：分為桿菌、球菌和螺形菌三類葡萄球菌鏈球菌弧狀菌螺旋菌四聯(lián)球菌碳疽桿菌大腸桿菌大腸桿菌（帶鞭毛）沙門氏菌一、細菌：葡萄球菌9

細菌群體形態(tài)1.固體培養(yǎng)菌落：在固體培養(yǎng)基上,由單個細胞繁殖形成的肉眼可見的子細胞群體。菌苔:大量細胞密集生長,結果長成的各“菌落”連接成一片。

2.液體培養(yǎng)基3.半固體培養(yǎng)細菌群體形態(tài)菌落：在固體培養(yǎng)基上,由單個細胞繁殖形成的肉眼10

二、真菌

效應：引起物質變質腐爛的主要原因；發(fā)酵、制藥、食品工業(yè)等中具有重要作用；少數(shù)致病。真菌單細胞多細胞酵母菌類酵母菌霉菌黑曲霉菌絲狀真菌二、真菌真單細胞多細胞酵母菌類酵母菌霉菌黑曲霉菌絲111.酵母菌固體培養(yǎng)

菌落特征：菌落大而厚，圓形，光滑濕潤，粘性，顏色單調。常見白色、土黃色、紅色。啤酒酵母菌落1.酵母菌固體培養(yǎng)菌落特征：啤酒酵母菌落12霉菌：為絲狀真菌的統(tǒng)稱。凡是在營養(yǎng)基質上能形成絨毛狀、網(wǎng)狀或絮狀菌絲體的真菌（除少數(shù)外），統(tǒng)稱為霉菌。2.霉菌

一般情況下，霉菌在潮濕的環(huán)境下易于生長，特別是偏酸性的基質當中。菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，有的呈絨毛狀或絮狀或網(wǎng)狀等，菌體可沿培養(yǎng)基表面蔓延生長，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈現(xiàn)紅、黃、綠、青綠、青灰、黑、白、灰等多種顏色。霉菌：為絲狀真菌的統(tǒng)稱。凡是在營養(yǎng)基質上能形成絨毛狀、網(wǎng)狀或13微生物的存在----水土壤空氣衣服地板海水油膜廢水排水口洗手池汽油罐嘴頭發(fā)皮膚鼻子腸道食物昆蟲動物南極(<00C)火山口(>2500C)無處不在！微生物的存在----水嘴無處不在！14微生物的益處啤酒，葡萄酒的生產(chǎn)面包酵母的生產(chǎn)奶酪的生產(chǎn)醋的生產(chǎn)酸奶的生產(chǎn)維生素的生產(chǎn)類固醇的生產(chǎn)抗菌素、干擾素的生產(chǎn)分解廢物，循環(huán)利用幫助腸道中的食物消化除蟲微生物的益處啤酒，葡萄酒的生產(chǎn)分解廢物，循環(huán)利用15微生物的害處1、可引起局部感染----葡萄球菌2、膽道和尿道感染----大腸桿菌3、化膿性感染、中耳炎、肺炎----綠膿桿菌4、結膜炎----枯草桿菌5、使糖分解，藥液產(chǎn)生有機酸----酵母菌6、使制劑霉壞，酸敗變質----霉菌微生物的害處1、可引起局部感染----葡萄球菌16污染：在生產(chǎn)、取樣、包裝或重新包裝、貯存或運輸?shù)炔僮鬟^程中，原輔料、中間產(chǎn)品、待包裝產(chǎn)品、成品受到具有化學或微生物特性的雜質或異物的不利影響。二、微生物污染的相關知識污染：在生產(chǎn)、取樣、包裝或重新包裝、貯存或運輸?shù)炔僮鬟^程中，17污染的形式和載體:污染的形式:

塵埃粒子微生物污染的載體:空氣、水、表面、人。污染的形式和載體:污染的形式:18微生物的污染途徑a)自身污染：由于患者和員工自身攜帶微生物而污染。b)接觸污染：由于和非無菌的用具、器械或人的接觸而污染。c)空氣污染：由于空氣中所含微生物的沉降、附著或被吸入而污染。d)其他污染：由于其他因素（如昆蟲）而污染。微生物的污染途徑a)自身污染：由于患者和員工自身攜帶微生19控制微生物的污染途徑

有效地阻止室外的污染侵入室內(nèi)。迅速有效地排除室內(nèi)已發(fā)生的污染?？刂莆廴驹?，減少污染發(fā)生量?？刂莆⑸锏奈廴就緩?0微生物污染的特殊性是能繁殖的活細胞生物。數(shù)量少而分布不均勻。多數(shù)處于受損傷狀態(tài)。生存環(huán)境的多樣性及復雜性。微生物污染的特殊性21防止交叉污染？有需要時要洗手及消毒；盡量減少直接以雙手接觸藥品；接觸產(chǎn)品的表面及用具用后清洗轉換產(chǎn)品時清洗防止交叉污染？有需要時要洗手及消毒；22三、潔凈室主要微生物污染源

及相關檢測三、潔凈室主要微生物污染源

及相關檢測23潔凈室主要微生物污染源

空氣水設備原輔料人員潔凈室主要微生物污染源空氣24主要的微生物污染源-空氣潔凈度測定包括：懸浮粒子微生物-浮游菌-沉降菌

-表面微生物

主要的微生物污染源-空氣潔凈度測定包括：25潔凈區(qū)空氣潔凈度等級---懸浮粒子潔凈區(qū)空氣潔凈度等級---懸浮粒子26微生物檢測菌落：微生物培養(yǎng)后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU，通常用個數(shù)表示。1.浮游菌1.1定義：1.2濃度：單位體積空氣中含浮游菌菌落的多少，以計數(shù)濃度表示，單位是個/m3或個/L。1.3測試步驟：（參照GB/T16293-2010）1.3.1采樣器、培養(yǎng)皿進入被測房間消毒滅菌；1.3.2采用儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min,并檢查流量并根據(jù)采樣量調整設定采用時間；1.3.3關閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子；置采樣口于采樣點后，開啟采樣。微生物檢測菌落：微生物培養(yǎng)后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的271.4培養(yǎng)：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），在30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d。1.5標準:1.4培養(yǎng)：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），在30-35℃282.沉降菌1.1定義：用GB/T16294-2010提及的方法收集空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。1.2菌落數(shù)：規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以個/皿表示。1.3原理：采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，培養(yǎng)不少于2d的時間，讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定結凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室的潔凈度。1.4步驟：1.4.1測試前培養(yǎng)基表面必須嚴格消毒；1.4.2將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中，在100000級，10000級按面積大小一般放2個培養(yǎng)皿；1.4.4靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30min以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間不大于4h；2.沉降菌1.1定義：1.2菌落數(shù)：1.3原理：1.4步驟：291.4.5全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；1.4.6采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），在30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d。（每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本事是否污染，每批可選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。）1.4.7沉降菌測試前，被測潔凈室已消毒。被測潔凈室溫濕度須達到規(guī)定要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。1.5采樣位置（參照GB/T16292-2010）a)工作區(qū)采樣點位置離地0.8-1.5m左右（略高于工作面）；b)可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。1.6標準：1.4.5全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；1303.表面微生物3.1采樣位置：關鍵表面（與產(chǎn)品、容器及密封件直接接觸或暴露于產(chǎn)品、容器及密封件的表面）、一般表面（如設備的外表面、墻壁等）和地板。3.2測試方法：擦拭法3.3取樣點：對于同一潔凈區(qū)，每個相同的取樣物體在其不同的地方采2個樣，如墻面2個采樣點，地面2個采樣點，潔凈區(qū)主要設備2個采樣點。3.4步驟：3.4.1在動態(tài)下監(jiān)測；3.4.2依據(jù)測試區(qū)域的取樣點數(shù)，制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;3.4.3將滅菌的棉簽用滅菌注射用水潤濕（棉簽容易脫落纖維，故在使用前應先用注射用水預先清洗，以免纖維遺留在取樣表面），并將其靠在瓶上擠壓以除去多余的水分;

3.表面微生物3.1采樣位置：關鍵表面（與產(chǎn)品、容器及密封件31

3.4.4將棉簽按在取樣物表面上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣表面約25cm2，擦拭過程應覆蓋整個表面;3.4.5翻轉棉簽，讓棉簽的另一面也進行擦拭。但與前次擦拭移動方向垂直;3.4.6擦拭方法如圖：

3.4.7擦拭完成后，將棉簽放入無菌試管中并密封，檢測時，加入15ml滅菌生理鹽水，充分振蕩混勻，取1ml樣液注入到培養(yǎng)平皿中，加入約15ml配置好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混勻，待培養(yǎng)基凝固;

3.4.8培養(yǎng)：取樣結束后將平皿復倒置于培養(yǎng)箱內(nèi)30-35℃培養(yǎng)72小時，并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。

3.4.4將棉簽按在取樣物表面上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩323.5標準：3.5標準：33主要的微生物污染源-水

《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則》第三章《設施、設備與生產(chǎn)環(huán)境控制》第二十六條中明確規(guī)定：工藝用水制水設備應滿足水質要求并通過驗證，其制備、儲存、輸送應能防止微生物污染和滋生，并不應對產(chǎn)品質量和性能造成影響。制水設備應定期清洗、消毒、維護。應配備水質監(jiān)控的儀器與設備，并定期記錄監(jiān)控結果。主要的微生物污染源-水《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則34純化水微生物檢測：標準：細菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個。步驟：取本品10ml，采用薄膜過濾法處理后，取出濾膜，菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，再同上法操作后取出濾膜，菌面朝上貼于玫瑰紅鈉瓊脂平板上，營養(yǎng)瓊脂平板放入30～35℃培養(yǎng)3天，玫瑰紅鈉瓊脂平板放入23～28℃培養(yǎng)5天后分別計數(shù)。純化水微生物檢測：標準：細菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過35主要的微生物污染源-設備幾乎沒有細菌不“吃”的東西設備和器具與藥品直接接觸--設備和器具的清洗清潔程序必須經(jīng)過驗證按清洗周期清洗清洗和存放設備、器具處應與生產(chǎn)區(qū)域潔凈等級相同主要的微生物污染源-設備幾乎沒有細菌不“吃”的東西36主要的微生物污染源-原輔料

包括厡輔料、內(nèi)包裝材料。-厡輔料微生物的限度標準？-內(nèi)包裝材料微生物的限度標準？符合藥典或行業(yè)標準厡輔料、內(nèi)包裝材料的貯存：-包裝嚴密，不得破損，污染。-清潔貯存。主要的微生物污染源-原輔料包括厡輔料、內(nèi)包裝材37主要的微生物污染源-人員

No……潔凈區(qū)生產(chǎn)人員要求：進入潔凈室必須更換潔凈服；并按照規(guī)定程序進出潔凈室；在潔凈區(qū)生產(chǎn)操作動作要準、穩(wěn)、輕、少，減少不必要的談話和活動；生產(chǎn)人員應定期進行微生物基礎知識培訓和衛(wèi)生教育。主要的微生物污染源-人員No……潔凈區(qū)生產(chǎn)人員要求：進38手的衛(wèi)生每只手可攜帶40萬個細菌；剛洗過的手，每平方厘米也可檢驗出3200個細菌。1～10萬個細菌/cm2

皮膚表面!手的衛(wèi)生每只手可攜帶40萬個細菌；剛洗過的手，每平方厘米也可39洗手的重要性:用流水（如自來水）洗手，能使手上的致病微生物減少80%；用皂液充分洗手，再用自來水沖洗能使致病微生物減少95%。洗手后正確使用消毒劑能使致病微生物減少到99%。正確洗手的步驟：洗手的重要性:用流水（如自來水）洗手，能使手上的致病微生物減401.一次更鞋：阻斷外界粘在鞋底的垃圾、顆粒及微生物。相對而言，腳底是最臟的部分。2.脫去外套：阻斷外界沉降在外套上的顆粒和微生物。3.一更洗手：規(guī)范的洗手能消除手部皮膚的污垢和大部分的微生物。洗手一定要用洗手液和充足的流水。4.二更帶口罩：阻斷鼻腔、呼吸道的微生物發(fā)散，潔凈區(qū)內(nèi)不能脫下口罩帶發(fā)套：阻斷頭發(fā)、頭皮表面的微生物發(fā)散。保證發(fā)套完整的包裹頭發(fā)。穿連體服：阻斷體表皮膚的微生物發(fā)散。潔凈區(qū)內(nèi)不能解開連體服手消毒：再次消除手部的細菌和微生物。75%的酒精能殺滅99%的微生物。二次更鞋：阻斷一更、二更內(nèi)沉降在地板上的顆粒和微生物。潔凈區(qū)工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。我們的更衣流程想混進去，沒門！1.一次更鞋：阻斷外界粘在鞋底的垃圾、顆粒及微生物。相41人體散發(fā)的塵粒數(shù):

（萬個/每分鐘）

1050100-250人體散發(fā)的塵粒數(shù):

（萬個/每分鐘）42人員不良行為所產(chǎn)生的污染:當有如下行為時將相應增加微粒的產(chǎn)生量:-吸煙者的呼吸500%噴嚏2000%搓手200%行走200%跺腳5000%人員不良行為所產(chǎn)生的污染:當有如下行為時將相應增加微粒的產(chǎn)生43謝謝大家！

謝謝大家！44

微生物相關知識培訓微生物相關知識45目的了解以下內(nèi)容：一、微生物基礎知識二、微生物污染的相關知識三、潔凈室主要微生物污染源及相關檢測目的了解以下內(nèi)容：一、微生物基礎知識46一、微生物基礎知識

什么是微生物微生物的存在微生物的益處微生物的危害一、微生物基礎知識什么是微生物47什么是微生物

它們是非常小的單細胞或多細胞生物，不借助顯微鏡用肉眼無法看到。它們對營養(yǎng)的要求非常低。它們是一類繁殖非?？斓纳?。它們非常容易發(fā)生變異。它們無處不在。大多數(shù)微生物對人類有益。有些微生物對人類有害。什么是微生物48微生物的種類具有細胞結構的微生物沒有細胞結構的微生物：病毒原核生物：（由原核細胞構成的）真核微生物（由真核細胞構成的）真菌顯微藻類原生動物細菌草履蟲水綿放線菌微生物的種類具有細胞結沒有細胞結構的原核生物：真核微生物真菌49碳疽桿菌大腸桿菌大腸桿菌（帶鞭毛）沙門氏菌一、細菌：分為桿菌、球菌和螺形菌三類葡萄球菌鏈球菌弧狀菌螺旋菌四聯(lián)球菌碳疽桿菌大腸桿菌大腸桿菌（帶鞭毛）沙門氏菌一、細菌：葡萄球菌50

細菌群體形態(tài)1.固體培養(yǎng)菌落：在固體培養(yǎng)基上,由單個細胞繁殖形成的肉眼可見的子細胞群體。菌苔:大量細胞密集生長,結果長成的各“菌落”連接成一片。

2.液體培養(yǎng)基3.半固體培養(yǎng)細菌群體形態(tài)菌落：在固體培養(yǎng)基上,由單個細胞繁殖形成的肉眼51

二、真菌

效應：引起物質變質腐爛的主要原因；發(fā)酵、制藥、食品工業(yè)等中具有重要作用；少數(shù)致病。真菌單細胞多細胞酵母菌類酵母菌霉菌黑曲霉菌絲狀真菌二、真菌真單細胞多細胞酵母菌類酵母菌霉菌黑曲霉菌絲521.酵母菌固體培養(yǎng)

菌落特征：菌落大而厚，圓形，光滑濕潤，粘性，顏色單調。常見白色、土黃色、紅色。啤酒酵母菌落1.酵母菌固體培養(yǎng)菌落特征：啤酒酵母菌落53霉菌：為絲狀真菌的統(tǒng)稱。凡是在營養(yǎng)基質上能形成絨毛狀、網(wǎng)狀或絮狀菌絲體的真菌（除少數(shù)外），統(tǒng)稱為霉菌。2.霉菌

一般情況下，霉菌在潮濕的環(huán)境下易于生長，特別是偏酸性的基質當中。菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，有的呈絨毛狀或絮狀或網(wǎng)狀等，菌體可沿培養(yǎng)基表面蔓延生長，由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈現(xiàn)紅、黃、綠、青綠、青灰、黑、白、灰等多種顏色。霉菌：為絲狀真菌的統(tǒng)稱。凡是在營養(yǎng)基質上能形成絨毛狀、網(wǎng)狀或54微生物的存在----水土壤空氣衣服地板海水油膜廢水排水口洗手池汽油罐嘴頭發(fā)皮膚鼻子腸道食物昆蟲動物南極(<00C)火山口(>2500C)無處不在！微生物的存在----水嘴無處不在！55微生物的益處啤酒，葡萄酒的生產(chǎn)面包酵母的生產(chǎn)奶酪的生產(chǎn)醋的生產(chǎn)酸奶的生產(chǎn)維生素的生產(chǎn)類固醇的生產(chǎn)抗菌素、干擾素的生產(chǎn)分解廢物，循環(huán)利用幫助腸道中的食物消化除蟲微生物的益處啤酒，葡萄酒的生產(chǎn)分解廢物，循環(huán)利用56微生物的害處1、可引起局部感染----葡萄球菌2、膽道和尿道感染----大腸桿菌3、化膿性感染、中耳炎、肺炎----綠膿桿菌4、結膜炎----枯草桿菌5、使糖分解，藥液產(chǎn)生有機酸----酵母菌6、使制劑霉壞，酸敗變質----霉菌微生物的害處1、可引起局部感染----葡萄球菌57污染：在生產(chǎn)、取樣、包裝或重新包裝、貯存或運輸?shù)炔僮鬟^程中，原輔料、中間產(chǎn)品、待包裝產(chǎn)品、成品受到具有化學或微生物特性的雜質或異物的不利影響。二、微生物污染的相關知識污染：在生產(chǎn)、取樣、包裝或重新包裝、貯存或運輸?shù)炔僮鬟^程中，58污染的形式和載體:污染的形式:

塵埃粒子微生物污染的載體:空氣、水、表面、人。污染的形式和載體:污染的形式:59微生物的污染途徑a)自身污染：由于患者和員工自身攜帶微生物而污染。b)接觸污染：由于和非無菌的用具、器械或人的接觸而污染。c)空氣污染：由于空氣中所含微生物的沉降、附著或被吸入而污染。d)其他污染：由于其他因素（如昆蟲）而污染。微生物的污染途徑a)自身污染：由于患者和員工自身攜帶微生60控制微生物的污染途徑

有效地阻止室外的污染侵入室內(nèi)。迅速有效地排除室內(nèi)已發(fā)生的污染。控制污染源，減少污染發(fā)生量?？刂莆⑸锏奈廴就緩?1微生物污染的特殊性是能繁殖的活細胞生物。數(shù)量少而分布不均勻。多數(shù)處于受損傷狀態(tài)。生存環(huán)境的多樣性及復雜性。微生物污染的特殊性62防止交叉污染？有需要時要洗手及消毒；盡量減少直接以雙手接觸藥品；接觸產(chǎn)品的表面及用具用后清洗轉換產(chǎn)品時清洗防止交叉污染？有需要時要洗手及消毒；63三、潔凈室主要微生物污染源

及相關檢測三、潔凈室主要微生物污染源

及相關檢測64潔凈室主要微生物污染源

空氣水設備原輔料人員潔凈室主要微生物污染源空氣65主要的微生物污染源-空氣潔凈度測定包括：懸浮粒子微生物-浮游菌-沉降菌

-表面微生物

主要的微生物污染源-空氣潔凈度測定包括：66潔凈區(qū)空氣潔凈度等級---懸浮粒子潔凈區(qū)空氣潔凈度等級---懸浮粒子67微生物檢測菌落：微生物培養(yǎng)后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU，通常用個數(shù)表示。1.浮游菌1.1定義：1.2濃度：單位體積空氣中含浮游菌菌落的多少，以計數(shù)濃度表示，單位是個/m3或個/L。1.3測試步驟：（參照GB/T16293-2010）1.3.1采樣器、培養(yǎng)皿進入被測房間消毒滅菌；1.3.2采用儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min,并檢查流量并根據(jù)采樣量調整設定采用時間；1.3.3關閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子；置采樣口于采樣點后，開啟采樣。微生物檢測菌落：微生物培養(yǎng)后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的681.4培養(yǎng)：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），在30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d。1.5標準:1.4培養(yǎng)：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），在30-35℃692.沉降菌1.1定義：用GB/T16294-2010提及的方法收集空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。1.2菌落數(shù)：規(guī)定時間內(nèi)每個平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目，以個/皿表示。1.3原理：采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，培養(yǎng)不少于2d的時間，讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定結凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室的潔凈度。1.4步驟：1.4.1測試前培養(yǎng)基表面必須嚴格消毒；1.4.2將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中，在100000級，10000級按面積大小一般放2個培養(yǎng)皿；1.4.4靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30min以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間不大于4h；2.沉降菌1.1定義：1.2菌落數(shù)：1.3原理：1.4步驟：701.4.5全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；1.4.6采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），在30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d。（每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本事是否污染，每批可選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。）1.4.7沉降菌測試前，被測潔凈室已消毒。被測潔凈室溫濕度須達到規(guī)定要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。1.5采樣位置（參照GB/T16292-2010）a)工作區(qū)采樣點位置離地0.8-1.5m左右（略高于工作面）；b)可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。1.6標準：1.4.5全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；1713.表面微生物3.1采樣位置：關鍵表面（與產(chǎn)品、容器及密封件直接接觸或暴露于產(chǎn)品、容器及密封件的表面）、一般表面（如設備的外表面、墻壁等）和地板。3.2測試方法：擦拭法3.3取樣點：對于同一潔凈區(qū)，每個相同的取樣物體在其不同的地方采2個樣，如墻面2個采樣點，地面2個采樣點，潔凈區(qū)主要設備2個采樣點。3.4步驟：3.4.1在動態(tài)下監(jiān)測；3.4.2依據(jù)測試區(qū)域的取樣點數(shù)，制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;3.4.3將滅菌的棉簽用滅菌注射用水潤濕（棉簽容易脫落纖維，故在使用前應先用注射用水預先清洗，以免纖維遺留在取樣表面），并將其靠在瓶上擠壓以除去多余的水分;

3.表面微生物3.1采樣位置：關鍵表面（與產(chǎn)品、容器及密封件72

3.4.4將棉簽按在取樣物表面上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣表面約25cm2，擦拭過程應覆蓋整個表面;3.4.5翻轉棉簽，讓棉簽的另一面也進行擦拭。但與前次擦拭移動方向垂直;3.4.6擦拭方法如圖：

3.4.7擦拭完成后，將棉簽放入無菌試管中并密封，檢測時，加入15ml滅菌生理鹽水，充分振蕩混勻，取1ml樣液注入到培養(yǎng)平皿中，加入約15ml配置好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混勻，待培養(yǎng)基凝固;

3.4.8培養(yǎng)：取樣結束后將平皿復倒置于培養(yǎng)箱內(nèi)30-35℃培養(yǎng)72小時，并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。

3.4.4將棉簽按在取樣物表面上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩733.5標準：3.5標準：74主要的微生物污染源-水

《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則》第三章《設施、設備與生產(chǎn)環(huán)境控制》第二十六條中明確規(guī)定：工藝用水制水設備應滿足水質要求并通過驗證，其制備、儲存、輸送應能防止微生物污染和滋生，并不應對產(chǎn)品質量和性能造成影響。制水設備應定期清洗、消毒、維護。應配備水質監(jiān)控的儀器與設備，并定期記錄監(jiān)控結果。主要的微生物污染源-水《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則75純化水微生物檢測：標準：細菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個。步驟：取本品10ml，采用薄膜過濾法處理后，取出濾膜，菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，再同上法操作后取出濾膜，菌面朝上貼于玫瑰紅鈉瓊脂平板上，營養(yǎng)瓊脂平板放入30～35℃培養(yǎng)3天，玫瑰紅鈉瓊脂平板放入23～28℃培養(yǎng)5天后分別計數(shù)。純化水微生物檢測：標準：細菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過76主要的微生物污染源-設備幾乎沒有細菌不“吃”的東西設備和器具與藥品直接接觸--設備和器具的清洗清潔程序必須經(jīng)過驗證按清洗周期清洗清洗和存放設備、器具處應與生產(chǎn)區(qū)域潔凈等級相同主要的微生物污染源-設備幾乎沒有細菌不“吃”的東西77主要的微生物污染源-原輔料

包括厡輔料、內(nèi)包裝材料。-厡輔料微生物的限度標準？-內(nèi)包裝材料微生物的限度標準？符合藥典或行業(yè)標準厡輔料、內(nèi)包裝材料的貯存：-包裝嚴密，不得破損，污染。-清潔貯存。主要的微生物污染源-原輔料包括厡