基因工程抗體和抗體工程課件

第五節(jié)抗體工程抗體研究進(jìn)展3個階段：①1890年白喉抗毒素，多克隆抗體；②1975年雜交瘤技術(shù)單克隆抗體；③1994年基因工程抗體；第五節(jié)抗體工程抗體研究進(jìn)展3個階段：1Cgenescodefortheconstantregionsofimmunoglobulinproteinchains.

Vgeneissequencecodingforthemajorpartofthevariable(N-terminal)regionofanimmunoglobulinchain.Immunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytes

Cgenescodefortheconstant2Figure24.4Heavyandlightchainscombinetogenerateanimmunoglobulinwithseveraldiscretedomains.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.4Heavyandlightch3Figure24.4Heavyandlightchainscombinetogenerateanimmunoglobulinwithseveraldiscretedomains.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.4Heavyandlightch4Table24.1EachimmunoglobulinfamilyconsistsofaclusterofVgeneslinkedtoitsCgene(s).Immunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytes

FamilyVGenesCGenesManMouseManMouseLambda<3002>64Kappa<300~100011Heavy~300>100098Table24.1Eachimmunoglobulin5Figure24.5ThelambdaCgenesegmentisprecededbyaJsegment,sothatV-Jrecombinationgeneratesafunctionallambdalight-chaingene.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.5ThelambdaCgene6Figure24.6ThekappaCgenesegmentisprecededbymultipleJsegmentsinthegermline.V-JjoiningmayrecognizeanyoneoftheJsegments,whichisthensplicedtotheCgenesegmentduringRNAprocessing.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.6ThekappaCgenes7Figure24.7Heavygenesareassembledbysequentialjoiningreactions.FirstaDsegmentisjoinedtoaJsegment;thenaVgenesegmentisjoinedtotheDsegment.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.7Heavygenesareas8Figure24.8ThelambdafamilyconsistsofVgenesegmentslinkedtoasmallnumberofJ-Cgenesegments.Thediversityofgermlineinformation

Figure24.8Thelambdafamily9Figure24.9ThehumanandmousekappafamiliesconsistofVgenesegmentslinkedto5JsegmentsconnectedtoasingleCgenesegment.Thediversityofgermlineinformation

Figure24.9Thehumanandmous10Figure24.10Asinglegeneclusterinmancontainsalltheinformationforheavy-chaingeneassembly.Thediversityofgermlineinformation

Figure24.10Asinglegeneclu11Figure24.12Consensussequencesarepresentininvertedorientationateachpairofrecombiningsites.Onememberofeachpairhasaspacingof12bpbetweenitscomponents;theotherhas23bpspacing.RecombinationbetweenVandCgenesegmentsgeneratesdeletionsandrearrangements

Figure24.12Consensussequenc12Figure24.13Breakageandreunionatconsensussequencesgeneratesimmunoglobulingenes.RecombinationbetweenVandCgenesegmentsgeneratesdeletionsandrearrangementsFigure24.13Breakageandreun13Figure15.8Reciprocalrecombinationbetweendirectrepeatsexcisesthematerialbetweenthem;eachproductofrecombinationhasonecopyofthedirectrepeat.RecombinationbetweenVandCgenesegmentsgeneratesdeletionsandrearrangementsFigure15.8Reciprocalrecombi14Figure15.9Reciprocalrecombinationbetweeninvertedrepeatsinvertstheregionbetweenthem.Figure15.9Reciprocalrecombi15一、噬菌體抗體庫技術(shù)的

基本方法⒈獲取目的基因⒉抗體庫技術(shù)的載體⒊淘篩⒋表達(dá)與鑒定一、噬菌體抗體庫技術(shù)的

基本方法⒈獲取目的基因16

它是在PCR技術(shù)和PhageDisplay的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的。其過程是把用PCR法得到的抗體基因插入絲狀噬菌體的DNA，與噬菌體外殼蛋白的基因相連，在輔助噬菌體的幫助下，噬菌粒包裝成絲狀噬菌體，抗體分子通過與PⅢ或PⅧ相連，在噬菌體表面的一端或分散分布，然后可直接對噬菌體表面的抗體分子進(jìn)行篩選。噬菌體抗體庫技術(shù)它是在PCR技術(shù)和PhageDisplay的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)17

1990年McCafferty等成功地建立了噬菌體表面展示系統(tǒng)，通過將抗溶菌酶單鏈抗體基因克隆于fd噬菌體基因3的下游，使ScFv以融合蛋白的形式展示于噬菌體表面，利用親和層析，兩輪富集達(dá)106倍。該技術(shù)的成功給抗體基因的篩選工作帶來了革命性的變革。噬菌體表面展示系統(tǒng)(phagesurfacedisplaysystem)1990年McCafferty等成功地建立了噬菌體表面18基因工程抗體和抗體工程課件19

噬菌體表面展示文庫技術(shù)的要點(diǎn):

外源基因表達(dá)多肽以融合蛋白形式展示在外殼蛋白N端將基因組合文庫插入噬菌體編碼膜蛋白的基因g3或g8的先導(dǎo)系列的緊靠下游隨機(jī)克隆入相應(yīng)載體形成組合文庫從免疫或未被免疫的B細(xì)胞中PCR擴(kuò)增抗體全套基因片段噬菌體表面展示文庫技術(shù)的要點(diǎn):20用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個循環(huán)直接、方便、簡捷、高效地篩選出表達(dá)特異性好、親和力強(qiáng)的抗體噬菌體庫。使翻譯出的抗體分泌到細(xì)菌的質(zhì)周腔內(nèi)，形成游離的抗體片段，經(jīng)過純化即可獲得目的抗體。篩選到的噬菌體再將基因g3或g8切除后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個循環(huán)直接、方便、簡21該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):

將抗體的基因型和表型緊密聯(lián)系起來;可繞過雜交瘤技術(shù)，不需要復(fù)雜的基因工程技術(shù);抗體基因篩選的范圍廣;技術(shù)穩(wěn)定、可靠、生產(chǎn)周期短;可規(guī)?；a(chǎn);適用范圍廣，既可用于抗體制備，也適用于其它蛋白如激素、酶、藥物、隨機(jī)多肽等的生產(chǎn)。該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):22

噬菌體抗體庫技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。它簡單易行，篩選容量大，效率高，繞過了細(xì)胞融合及免疫等步驟，而且在表型一基因型的統(tǒng)一和識別一增殖過程上模擬了B細(xì)胞的成熟過程，從而在實(shí)際應(yīng)用上具有很大意義。噬菌體抗體庫技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。它簡單易行，篩選容23基因工程抗體和抗體工程課件24基因工程抗體和抗體工程課件25基因工程抗體和抗體工程課件26二、噬菌體抗體庫技術(shù)的

特點(diǎn)⒈模擬天然全套抗體庫⒉避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)⒊可獲得高親和力的人源化抗體二、噬菌體抗體庫技術(shù)的

特點(diǎn)⒈模擬天然全套抗體庫27 單克隆抗體噬菌體抗體

雜交瘤技術(shù)展示技術(shù)宿主細(xì)胞:雜交瘤細(xì)菌篩選范圍:~103107109時間:幾個月幾周操作:繁雜相對簡單免疫:必須可避免人源抗體:+費(fèi)用:高低生產(chǎn)量:有限無限基因獲取:再克隆直接應(yīng)用前景:有限不可估

單克隆抗體噬菌體抗體

雜交瘤技術(shù)28三、基因工程抗體表達(dá)⒈原核細(xì)胞表達(dá)⒉真核細(xì)胞表達(dá)⒊轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)⒋轉(zhuǎn)基因動物表達(dá)三、基因工程抗體表達(dá)⒈原核細(xì)胞表達(dá)29第六節(jié)抗體診斷試劑一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑⒈鑒定病原菌的抗體試劑⑴常用診斷血清的品種和用途①沙門氏菌屬診斷血清②志賀氏菌屬診斷血清③病原性大腸埃希氏菌診斷血清第六節(jié)抗體診斷試劑一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑30⑵診斷血清的制備步驟①制備細(xì)菌抗原②免疫動物和制備抗體血清⑶診斷血清診斷方法⑵診斷血清的制備步驟31基因工程抗體和抗體工程課件32⒉乙型肝炎病毒表面抗原的反向被動血凝診斷試劑⒊妊娠診斷試劑⒋抗ABO血型系統(tǒng)血清⒉乙型肝炎病毒表面抗原的33基因工程抗體和抗體工程課件34二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體

類試劑⒈熒光抗體診斷試劑⑴熒光抗體的制備⑵免疫熒光測定方法⒉免疫酶抗體診斷試劑⑴免疫酶染色法用抗體診斷試劑⑵酶免疫測定用抗體診斷試劑①HBsAg酶標(biāo)診斷試劑②HBeAg酶標(biāo)診斷試劑二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體

類試劑⒈熒光抗體診斷試劑35③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）酶標(biāo)診斷試劑④測定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標(biāo)抗體診斷試劑⑤甲胎蛋白（AFP）酶標(biāo)抗體診斷試劑⑥癌胚抗原（CEA）的酶標(biāo)抗體診斷試劑③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）36基因工程抗體和抗體工程課件37⒊放射免疫用抗體診斷試劑放射免疫技術(shù)是將放射性核素分析的高度靈敏性與抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來建立的檢測技術(shù)。放射性核素標(biāo)記抗體的方法：①氯胺-T法②Iodogen氏法⒊放射免疫用抗體診斷試劑38抗原的測定有：①夾心法②間接法③竟?fàn)幏乖臏y定有：393.競爭法Ag※Ag※Ab+AbAg(標(biāo)本)(定量)AgAbEE終止液標(biāo)本酶標(biāo)抗體底物顯色顯色固相固相標(biāo)本酶標(biāo)二抗底物1.夾心法2.間接法EE終止液標(biāo)本酶標(biāo)抗體底物顯色顯色固相固相標(biāo)本酶標(biāo)二抗底40①HBsAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑②HBeAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑③HAV抗原放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑④AFP放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑⑤CEA放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑常用標(biāo)記抗體試劑有：常用標(biāo)記抗體試劑有：41三、導(dǎo)向診斷藥物放射性核素標(biāo)記抗體腫瘤放射免疫顯像放射免疫顯像優(yōu)點(diǎn)：①在體內(nèi)確切腫瘤定位作用，準(zhǔn)確性達(dá)90%，靈敏度達(dá)100%。②在體內(nèi)可檢出0.5cm大小的病灶，并可檢出肺腦的轉(zhuǎn)移灶。三、導(dǎo)向診斷藥物放射性核素標(biāo)記抗體42③小分子抗體易到達(dá)腫瘤部位，可顯著提高N/NT值。④抗體在腫瘤部位可保留6～9日⑤能觀擦抗體在血中的半衰期和可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)。③小分子抗體易到達(dá)腫瘤部位，43放射免疫顯像定位技術(shù)將抗腫瘤單克隆抗體（Ab）與二乙基三胺五乙酸（DTPA）在體外偶聯(lián)成Ab-DTPA，再注入體內(nèi)后，就能與體內(nèi)組織相結(jié)合。由于抗體分子量大，需3天完成。3天后注入放射性核素In-113M（半衰期100m），因DTPA是重金屬離子絡(luò)合劑，所以In-113M可以結(jié)合到DTPA分子上，使腫瘤組織顯像。這一過程在2小時內(nèi)可完成。放射免疫顯像定位技術(shù)44建立預(yù)定位技術(shù)需解決3個問題：①抗體在腫瘤組織滯留要7天以上。②Ab-DTPA偶聯(lián)物比較穩(wěn)定；③內(nèi)源性金屬離子對DTPA的封閉作用要小。建立預(yù)定位技術(shù)需解決3個問題：45第六節(jié)抗體治療藥物以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物，還不成熟。一、放射性核素標(biāo)記的抗體治療藥物抗體作為放射性核素的導(dǎo)向載體，標(biāo)記操作簡便用量小。放射性核素標(biāo)記的抗體對腫瘤細(xì)胞殺傷較大。第六節(jié)抗體治療藥物以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物，還不成熟。46二、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物⒈常用的抗癌藥物氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADM）、絲裂霉素（MMC）等。以人血漿白蛋白作為中間載體，可明顯提高每分子抗體所攜帶的MTX量，使體外細(xì)胞毒性體高二倍。二、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物47⒉抗體類藥物逆轉(zhuǎn)耐藥性腫瘤細(xì)胞對抗原藥物可產(chǎn)生多藥耐藥性（MDR）。MDR是由基因調(diào)控的，其編碼蛋白稱為P糖蛋白，其中P170是與腫瘤耐藥相關(guān)的主要蛋白，由Mdr1基因編碼，1280氨基酸殘基，分子量170K。⒉抗體類藥物逆轉(zhuǎn)耐藥性48認(rèn)為P蛋白是ATP酶依賴性藥泵，藥物進(jìn)入細(xì)胞后與P蛋白結(jié)合，利用ATP水解釋放的能量將藥物泵出胞外，使胞內(nèi)藥物蓄積減少，因而產(chǎn)生耐藥性。認(rèn)為P蛋白是ATP酶依賴性藥泵，藥物進(jìn)入細(xì)胞后與P蛋白49三、毒素偶聯(lián)的抗體藥物⒈免疫毒素及其換代制品在導(dǎo)向藥物中，毒素和抗體的交聯(lián)物稱為免疫毒素。第一代免疫毒素是包含有A、B鏈完整毒素和抗體的交聯(lián)物，其中B鏈非特異性結(jié)合，使其僅在體外應(yīng)用。三、毒素偶聯(lián)的抗體藥物50第二代免疫毒素是利用抗體或抗體片段與毒素的A鏈或與A鏈相似的單鏈核糖體失活蛋白的結(jié)合物。因避免了第一代免疫毒素的非特異性，故能在體內(nèi)有一定的抗腫瘤作用。第三代免疫毒素重組免疫毒素用基因克隆方法改造毒素基因和小分子抗體基因重組表達(dá)。特異性好、穩(wěn)定性強(qiáng)、滲透性佳、免疫源性低、可大量制備。第二代免疫毒素是利用抗體或抗體片段與毒素的A鏈或與A鏈51⒉免疫毒素的制備方法⑴毒素的來源細(xì)菌毒素植物毒素⑵載體的種類①小分子抗體FV或SCFV②細(xì)胞生長因子③激素④CD4⒉免疫毒素的制備方法52⑶制備方法先克隆毒素基因，再利用基因重組技術(shù)去除毒素中非特異性細(xì)胞結(jié)合部位基因。經(jīng)改造的毒素基因，再與載體基因重組，轉(zhuǎn)入受體菌中表達(dá)，形成融合蛋白，再經(jīng)過純化就得到重組免疫毒素。⑶制備方法53⒊免疫毒素的臨床應(yīng)用治療腫瘤、自身免疫病并能克復(fù)組織移植排斥反應(yīng)，可單獨(dú)給藥也可包裹在脂質(zhì)體及其它微粒中給藥。⒊免疫毒素的臨床應(yīng)用54演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！55第五節(jié)抗體工程抗體研究進(jìn)展3個階段：①1890年白喉抗毒素，多克隆抗體；②1975年雜交瘤技術(shù)單克隆抗體；③1994年基因工程抗體；第五節(jié)抗體工程抗體研究進(jìn)展3個階段：56Cgenescodefortheconstantregionsofimmunoglobulinproteinchains.

Vgeneissequencecodingforthemajorpartofthevariable(N-terminal)regionofanimmunoglobulinchain.Immunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytes

Cgenescodefortheconstant57Figure24.4Heavyandlightchainscombinetogenerateanimmunoglobulinwithseveraldiscretedomains.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.4Heavyandlightch58Figure24.4Heavyandlightchainscombinetogenerateanimmunoglobulinwithseveraldiscretedomains.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.4Heavyandlightch59Table24.1EachimmunoglobulinfamilyconsistsofaclusterofVgeneslinkedtoitsCgene(s).Immunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytes

FamilyVGenesCGenesManMouseManMouseLambda<3002>64Kappa<300~100011Heavy~300>100098Table24.1Eachimmunoglobulin60Figure24.5ThelambdaCgenesegmentisprecededbyaJsegment,sothatV-Jrecombinationgeneratesafunctionallambdalight-chaingene.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.5ThelambdaCgene61Figure24.6ThekappaCgenesegmentisprecededbymultipleJsegmentsinthegermline.V-JjoiningmayrecognizeanyoneoftheJsegments,whichisthensplicedtotheCgenesegmentduringRNAprocessing.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.6ThekappaCgenes62Figure24.7Heavygenesareassembledbysequentialjoiningreactions.FirstaDsegmentisjoinedtoaJsegment;thenaVgenesegmentisjoinedtotheDsegment.ImmunoglobulingenesareassembledfromtheirpartsinlymphocytesFigure24.7Heavygenesareas63Figure24.8ThelambdafamilyconsistsofVgenesegmentslinkedtoasmallnumberofJ-Cgenesegments.Thediversityofgermlineinformation

Figure24.8Thelambdafamily64Figure24.9ThehumanandmousekappafamiliesconsistofVgenesegmentslinkedto5JsegmentsconnectedtoasingleCgenesegment.Thediversityofgermlineinformation

Figure24.9Thehumanandmous65Figure24.10Asinglegeneclusterinmancontainsalltheinformationforheavy-chaingeneassembly.Thediversityofgermlineinformation

Figure24.10Asinglegeneclu66Figure24.12Consensussequencesarepresentininvertedorientationateachpairofrecombiningsites.Onememberofeachpairhasaspacingof12bpbetweenitscomponents;theotherhas23bpspacing.RecombinationbetweenVandCgenesegmentsgeneratesdeletionsandrearrangements

Figure24.12Consensussequenc67Figure24.13Breakageandreunionatconsensussequencesgeneratesimmunoglobulingenes.RecombinationbetweenVandCgenesegmentsgeneratesdeletionsandrearrangementsFigure24.13Breakageandreun68Figure15.8Reciprocalrecombinationbetweendirectrepeatsexcisesthematerialbetweenthem;eachproductofrecombinationhasonecopyofthedirectrepeat.RecombinationbetweenVandCgenesegmentsgeneratesdeletionsandrearrangementsFigure15.8Reciprocalrecombi69Figure15.9Reciprocalrecombinationbetweeninvertedrepeatsinvertstheregionbetweenthem.Figure15.9Reciprocalrecombi70一、噬菌體抗體庫技術(shù)的

基本方法⒈獲取目的基因⒉抗體庫技術(shù)的載體⒊淘篩⒋表達(dá)與鑒定一、噬菌體抗體庫技術(shù)的

基本方法⒈獲取目的基因71

它是在PCR技術(shù)和PhageDisplay的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的。其過程是把用PCR法得到的抗體基因插入絲狀噬菌體的DNA，與噬菌體外殼蛋白的基因相連，在輔助噬菌體的幫助下，噬菌粒包裝成絲狀噬菌體，抗體分子通過與PⅢ或PⅧ相連，在噬菌體表面的一端或分散分布，然后可直接對噬菌體表面的抗體分子進(jìn)行篩選。噬菌體抗體庫技術(shù)它是在PCR技術(shù)和PhageDisplay的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)72

1990年McCafferty等成功地建立了噬菌體表面展示系統(tǒng)，通過將抗溶菌酶單鏈抗體基因克隆于fd噬菌體基因3的下游，使ScFv以融合蛋白的形式展示于噬菌體表面，利用親和層析，兩輪富集達(dá)106倍。該技術(shù)的成功給抗體基因的篩選工作帶來了革命性的變革。噬菌體表面展示系統(tǒng)(phagesurfacedisplaysystem)1990年McCafferty等成功地建立了噬菌體表面73基因工程抗體和抗體工程課件74

噬菌體表面展示文庫技術(shù)的要點(diǎn):

外源基因表達(dá)多肽以融合蛋白形式展示在外殼蛋白N端將基因組合文庫插入噬菌體編碼膜蛋白的基因g3或g8的先導(dǎo)系列的緊靠下游隨機(jī)克隆入相應(yīng)載體形成組合文庫從免疫或未被免疫的B細(xì)胞中PCR擴(kuò)增抗體全套基因片段噬菌體表面展示文庫技術(shù)的要點(diǎn):75用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個循環(huán)直接、方便、簡捷、高效地篩選出表達(dá)特異性好、親和力強(qiáng)的抗體噬菌體庫。使翻譯出的抗體分泌到細(xì)菌的質(zhì)周腔內(nèi)，形成游離的抗體片段，經(jīng)過純化即可獲得目的抗體。篩選到的噬菌體再將基因g3或g8切除后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個循環(huán)直接、方便、簡76該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):

將抗體的基因型和表型緊密聯(lián)系起來;可繞過雜交瘤技術(shù)，不需要復(fù)雜的基因工程技術(shù);抗體基因篩選的范圍廣;技術(shù)穩(wěn)定、可靠、生產(chǎn)周期短;可規(guī)?；a(chǎn);適用范圍廣，既可用于抗體制備，也適用于其它蛋白如激素、酶、藥物、隨機(jī)多肽等的生產(chǎn)。該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):77

噬菌體抗體庫技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。它簡單易行，篩選容量大，效率高，繞過了細(xì)胞融合及免疫等步驟，而且在表型一基因型的統(tǒng)一和識別一增殖過程上模擬了B細(xì)胞的成熟過程，從而在實(shí)際應(yīng)用上具有很大意義。噬菌體抗體庫技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。它簡單易行，篩選容78基因工程抗體和抗體工程課件79基因工程抗體和抗體工程課件80基因工程抗體和抗體工程課件81二、噬菌體抗體庫技術(shù)的

特點(diǎn)⒈模擬天然全套抗體庫⒉避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)⒊可獲得高親和力的人源化抗體二、噬菌體抗體庫技術(shù)的

特點(diǎn)⒈模擬天然全套抗體庫82 單克隆抗體噬菌體抗體

雜交瘤技術(shù)展示技術(shù)宿主細(xì)胞:雜交瘤細(xì)菌篩選范圍:~103107109時間:幾個月幾周操作:繁雜相對簡單免疫:必須可避免人源抗體:+費(fèi)用:高低生產(chǎn)量:有限無限基因獲取:再克隆直接應(yīng)用前景:有限不可估

單克隆抗體噬菌體抗體

雜交瘤技術(shù)83三、基因工程抗體表達(dá)⒈原核細(xì)胞表達(dá)⒉真核細(xì)胞表達(dá)⒊轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)⒋轉(zhuǎn)基因動物表達(dá)三、基因工程抗體表達(dá)⒈原核細(xì)胞表達(dá)84第六節(jié)抗體診斷試劑一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑⒈鑒定病原菌的抗體試劑⑴常用診斷血清的品種和用途①沙門氏菌屬診斷血清②志賀氏菌屬診斷血清③病原性大腸埃希氏菌診斷血清第六節(jié)抗體診斷試劑一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑85⑵診斷血清的制備步驟①制備細(xì)菌抗原②免疫動物和制備抗體血清⑶診斷血清診斷方法⑵診斷血清的制備步驟86基因工程抗體和抗體工程課件87⒉乙型肝炎病毒表面抗原的反向被動血凝診斷試劑⒊妊娠診斷試劑⒋抗ABO血型系統(tǒng)血清⒉乙型肝炎病毒表面抗原的88基因工程抗體和抗體工程課件89二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體

類試劑⒈熒光抗體診斷試劑⑴熒光抗體的制備⑵免疫熒光測定方法⒉免疫酶抗體診斷試劑⑴免疫酶染色法用抗體診斷試劑⑵酶免疫測定用抗體診斷試劑①HBsAg酶標(biāo)診斷試劑②HBeAg酶標(biāo)診斷試劑二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體

類試劑⒈熒光抗體診斷試劑90③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）酶標(biāo)診斷試劑④測定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標(biāo)抗體診斷試劑⑤甲胎蛋白（AFP）酶標(biāo)抗體診斷試劑⑥癌胚抗原（CEA）的酶標(biāo)抗體診斷試劑③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）91基因工程抗體和抗體工程課件92⒊放射免疫用抗體診斷試劑放射免疫技術(shù)是將放射性核素分析的高度靈敏性與抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來建立的檢測技術(shù)。放射性核素標(biāo)記抗體的方法：①氯胺-T法②Iodogen氏法⒊放射免疫用抗體診斷試劑93抗原的測定有：①夾心法②間接法③竟?fàn)幏乖臏y定有：943.競爭法Ag※Ag※Ab+AbAg(標(biāo)本)(定量)AgAbEE終止液標(biāo)本酶標(biāo)抗體底物顯色顯色固相固相標(biāo)本酶標(biāo)二抗底物1.夾心法2.間接法EE終止液標(biāo)本酶標(biāo)抗體底物顯色顯色固相固相標(biāo)本酶標(biāo)二抗底95①HBsAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑②HBeAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑③HAV抗原放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑④AFP放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑⑤CEA放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑