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內(nèi)容重點(diǎn)1.理解根據(jù)碳源和能源對(duì)微生物分類(lèi)。2.理解不同微生物對(duì)C/N/P比需求不同。3.理解培養(yǎng)基的定義。4.理解培養(yǎng)基制備原則(五步)。5.理解根據(jù)物理狀態(tài)不同對(duì)培養(yǎng)基分類(lèi)及其用途。6.理解微生物營(yíng)養(yǎng)運(yùn)輸?shù)姆绞郊案髯蕴攸c(diǎn)。7.酶的催化反應(yīng)的特性。(二)酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)第二節(jié)酶及其作用酶促動(dòng)力學(xué)酶促反應(yīng)方程:k1k3E+SESE+Pk2k4

酶底物中間產(chǎn)物酶最終產(chǎn)物k1、k2、k3、k4分別是各步反應(yīng)的速(率)度常數(shù),此常數(shù)不隨反應(yīng)物的濃度變化,其只和反應(yīng)條件如溫度、酶的種類(lèi)等有關(guān)。[E]、[S]、[ES]、[P]分別表示反應(yīng)生成物的濃度。[E0]表示初始酶濃度。原反應(yīng)過(guò)程轉(zhuǎn)換為下列反應(yīng):k1k3E+SESE+Pk2各步反應(yīng)的速度常數(shù)k1、k2、k3、k4。整個(gè)反應(yīng)過(guò)程經(jīng)過(guò)兩步完成,第一步:E和S生成ES第二步:ES生成E和P因此得出:k1>k2和k3>k4,另外k1≥k3推出:k1>>k4,可忽略k4。ES的生成速度=k1{[E0]-[ES]}[S]ES的分解速度=(k2+k3)[ES]由質(zhì)量作用定律,該反應(yīng)最終反應(yīng)速度v=k3[ES]即得:V——最終反應(yīng)速度;Vm——最大反應(yīng)速度;S——基質(zhì)濃度;Km——米氏系數(shù)/米氏常數(shù);當(dāng)Km=S時(shí),v=Vm/2,Km又稱(chēng)半飽和常數(shù),其只與酶的種類(lèi)、反應(yīng)溫度、pH等因素有關(guān)。(米-門(mén)公式)公式討論:2)當(dāng)S>>Km時(shí),反應(yīng)呈零級(jí)反應(yīng)。(p97圖6-3)1)當(dāng)S<<Km時(shí),反應(yīng)呈一級(jí)反應(yīng)。(三)實(shí)際試驗(yàn)中如何求Km和Vm由得:這樣,利用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)v和S(3到5組),就可以畫(huà)出上式的一元一次方程的圖線(xiàn)。公式推廣:1942年Monod根據(jù)基質(zhì)濃度和微生物的比生長(zhǎng)速度,得出了著名的莫諾公式:μ——微生物比增長(zhǎng)速度;μmax——微生物最大增長(zhǎng)速度;S——基質(zhì)濃度;Ks——半飽和常數(shù)。[E]對(duì)酶促反應(yīng)的影響理論:酶促反應(yīng)速度與[E]成正比,即當(dāng)[S]足夠大時(shí),[E]越大,酶促反應(yīng)速度越快。

實(shí)際:當(dāng)[E]達(dá)到一定濃度時(shí),酶促反應(yīng)速度就趨于平緩。酶濃度與v的關(guān)系[E]v激活劑對(duì)酶促反應(yīng)的影響能夠?qū)γ钙浼せ钭饔玫奈镔|(zhì)稱(chēng)為激活劑。如:Fe2+、Cu2+、Br-、SO42-、維生素等。抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)的影響有些物質(zhì)可減弱、抑制、破壞酶活性,稱(chēng)為抑制劑。如:重金屬離子Ag+、Hg2+、CO、H2S等。第三節(jié)微生物的代謝

新陳代謝簡(jiǎn)稱(chēng)代謝是推動(dòng)一切生命活動(dòng)的動(dòng)力源。通常指細(xì)胞中的合成代謝與分解代謝的總合。合成代謝/同化作用微生物不斷從外界吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并合成細(xì)胞物質(zhì)的過(guò)程,在此過(guò)程中需要吸收能量。分解代謝/異化作用微生物將自身或外來(lái)的各種復(fù)雜有機(jī)物分解為簡(jiǎn)單化合物的過(guò)程,在此過(guò)程中釋放能量。一、微生物的新陳代謝微生物生長(zhǎng)繁殖需要營(yíng)養(yǎng),合成細(xì)胞需要能量,最終靠產(chǎn)能代謝提供。新陳代謝有機(jī)物還原態(tài)無(wú)機(jī)物光化能異養(yǎng)微生物化能自養(yǎng)微生物光能營(yíng)養(yǎng)微生物ATP(通用能源)同化作用新陳代謝異化作用細(xì)胞物質(zhì)合成(營(yíng)養(yǎng)被轉(zhuǎn)變?yōu)闄C(jī)體組分)產(chǎn)生能量需要能量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解或簡(jiǎn)單化合物ATPADP二、呼吸的本質(zhì)呼吸本質(zhì):氧化還原的統(tǒng)一過(guò)程。其中有能量的產(chǎn)生與轉(zhuǎn)移。呼吸作用是微生物在氧化分解基質(zhì)的過(guò)程中,釋放電子,生成水或其他還原物質(zhì),并釋放能量的過(guò)程。三、呼吸的類(lèi)型在呼吸過(guò)程中,都會(huì)發(fā)生電子轉(zhuǎn)移。提供電子的物質(zhì)被氧化,接受電子的物質(zhì)被還原。根據(jù)基質(zhì)脫氫后,基質(zhì)最終受氫體不同,微生物的呼吸類(lèi)型分為好氧呼吸、厭氧呼吸和發(fā)酵。(p100)微生物根據(jù)與氧氣的關(guān)系分為:好氧微生物(aerobicmicrobe)、厭氧微生物(anaerobicmicrobe)和兼性微生物(facultativemicrobe)。ATP——生物能量轉(zhuǎn)移中心物質(zhì)氧化放出能量細(xì)胞合成需要能量ATPATP是在發(fā)酵、好氧呼吸、無(wú)氧呼吸中形成。具體方式:1).底物水平磷酸化厭氧微生物或兼性微生物作用,底物被氧化,會(huì)產(chǎn)生高能中間體,并把高能鍵(~)交給ADP,從而形成ATP。2).氧化磷酸化好氧微生物呼吸,通過(guò)電子傳遞體系形成ATP。3).光合磷酸化光可引發(fā)葉綠素、菌綠素等放出電子,電子在被傳遞過(guò)程中形成ATP。好氧微生物生活需要氧氣,沒(méi)有氧氣就無(wú)法生存,并且它們?cè)谟醒醯臈l件下把有機(jī)物分解成二氧化碳和水。有機(jī)物CO2+H2OO2好氧微生物厭氧微生物生活不需要氧氣,有氧氣就無(wú)法生存產(chǎn)生毒害作用,并且它們?cè)跓o(wú)氧的條件下把復(fù)雜有機(jī)物分解成二氧化碳和簡(jiǎn)單有機(jī)物。反應(yīng)受氫體仍未有機(jī)物。復(fù)雜有機(jī)物

CO2+簡(jiǎn)單有機(jī)物無(wú)氧厭氧微生物糖酵解是微生物所共有的代謝途徑。糖酵解分為兩大步驟:1.預(yù)備反應(yīng),不發(fā)生氧化還原反應(yīng)。產(chǎn)物是3-磷酸甘油醛。2.氧化還原反應(yīng),產(chǎn)生ATP,產(chǎn)物為丙酮酸,進(jìn)一步發(fā)酵可產(chǎn)生乙醇和CO2。整個(gè)過(guò)程,1mol葡萄糖產(chǎn)生4molATP,用去2mol,凈剩2molATP,即產(chǎn)生能量2×31.4KJ=62.8KJ。產(chǎn)能斜率為62.8/238.3=26%糖酵解是效率低,但生理功能極其重要。提供ATP和還原力;是其他幾個(gè)代謝途徑的橋梁;提供較多的中間代謝產(chǎn)物;逆反應(yīng)可以合成多糖。(2)第二階段:

1,6-二磷酸果糖3-磷酸甘油醛(3)第三階段:3-磷酸甘油醛2-磷酸甘油酸丙酮酸是微生物糖酵解的必然產(chǎn)物,如果進(jìn)一步發(fā)酵,可形成多種產(chǎn)物。因此,有可將發(fā)酵分為很多類(lèi)型:如乙醇發(fā)酵;混合酸發(fā)酵等。其中,混合酸發(fā)酵是多數(shù)大腸桿菌的特征。人們利用V.P試驗(yàn)進(jìn)行大腸埃希氏桿菌和產(chǎn)氣桿菌的區(qū)分。大腸埃希氏桿菌的發(fā)酵產(chǎn)物為甲酸、乙酸、乳酸、CO2等。產(chǎn)氣桿菌也能進(jìn)行混合酸發(fā)酵,丙酮酸經(jīng)過(guò)縮合、脫羧后形成乙酰甲基甲醇,可在堿性條件下被

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