有關(guān)物質(zhì)檢查常見(jiàn)問(wèn)題的探討課件

藥品質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

-有關(guān)物質(zhì)檢查常見(jiàn)問(wèn)題討論

余立yuliyy8716@藥品質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

-有關(guān)物質(zhì)檢查常見(jiàn)問(wèn)題討論余立1第一次飛躍第二次飛躍純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜控制雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷第一次飛躍第二次飛躍純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷2雜質(zhì)（Impurity）的定義與分類任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。-《中國(guó)藥典》2010年版附錄對(duì)藥品雜質(zhì)的定義原料藥中：化學(xué)結(jié)構(gòu)和該藥品不一樣的任何物質(zhì)制劑中：除原料藥和輔料外的任何其他成分-

ICH對(duì)雜質(zhì)的定義雜質(zhì)（Impurity）的定義與分類任何影響藥品純度的物質(zhì)均3雜質(zhì)按活性分類雜質(zhì)活性雜質(zhì)無(wú)活性雜質(zhì)（無(wú)毒無(wú)效）毒性雜質(zhì)（有毒無(wú)效）（毒大效低）有效雜質(zhì)（有效無(wú)毒）（高效低毒）雜質(zhì)按活性分類雜質(zhì)活性雜質(zhì)毒性雜質(zhì)有效雜質(zhì)4雜質(zhì)按來(lái)源分類雜質(zhì)有關(guān)物質(zhì)

（relatedsubstances）無(wú)關(guān)雜質(zhì)

外源物質(zhì)

雜質(zhì)按來(lái)源分類雜質(zhì)有關(guān)物質(zhì)無(wú)關(guān)雜質(zhì)外源物質(zhì)5雜質(zhì)來(lái)源1

有關(guān)物質(zhì)－起始原料－中間體、副產(chǎn)物異構(gòu)體和聚合物多晶型－降解產(chǎn)物異構(gòu)體和聚合物多晶型－微生物－污染異物－非法添加物3

外源物質(zhì)2無(wú)關(guān)雜質(zhì)－試劑配位體、無(wú)機(jī)鹽、溶劑－重金屬催化劑－過(guò)濾介質(zhì)、活性炭雜質(zhì)來(lái)源1有關(guān)物質(zhì)3外源物質(zhì)2無(wú)關(guān)雜質(zhì)6已鑒定雜質(zhì)IdentifiedImpurity特定雜質(zhì)SpecifiedImpurity潛在雜質(zhì)PotentialImpurity雜質(zhì)譜ImpurityProfile已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查并有自己限度標(biāo)準(zhǔn)的雜質(zhì)。已鑒定或未鑒定理論推測(cè)在生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)實(shí)際產(chǎn)品中不一定存在存在于藥品中的所有雜質(zhì)組成或模式已鑒定雜質(zhì)特定雜質(zhì)潛在雜質(zhì)雜質(zhì)譜已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì)在質(zhì)量7新雜質(zhì)的研究－藥物雜質(zhì)的可能來(lái)源新雜質(zhì)的研究81.原料：紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、紅霉素D、紅霉素E、紅霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺3.副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氫阿奇霉素、O-甲苯磺?；t霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8，

9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種1.原料：紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、紅霉素D、紅霉9附錄ⅩⅨF藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則附錄ⅩⅨA藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則2010年版

藥典中的雜質(zhì)分析2010年版

藥典中的雜質(zhì)分析10Q3A－新原料藥中的雜質(zhì)Q3B－新制劑中的雜質(zhì)ICH中的雜質(zhì)分析Q3A－新原料藥中的雜質(zhì)ICH中的雜質(zhì)分析11其他參考資料《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則

》其他參考資料12有關(guān)物質(zhì)檢查的常用方法適用多種雜質(zhì)（定性＋定量）主要用于沒(méi)有紫外吸收的雜質(zhì)（定性＋半定量）適用不同的特定雜質(zhì)（定性＋定量）TLCHPLC其他方法適用多種主要用于沒(méi)有紫外吸收的雜質(zhì)適用不同的TLCHPLC其13有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法容量滴定原子吸收重量法比色比濁物理常數(shù)紫外其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法容量滴定原子吸收重量法比色比濁物理常數(shù)14物理常數(shù)測(cè)定法

旋光度-檢查具有光學(xué)活性的雜質(zhì)紫外分光光度法

雜質(zhì)吸光度-在特定波長(zhǎng)具有紫外吸收的雜質(zhì)容量滴定法

游離脂肪酸、過(guò)氧化物、還原糖重量法

酸中不溶物、水中可溶物比色比濁法

游離淀粉、碘化物、鐵鹽等；氯化物、硫酸鹽

有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法物理常數(shù)測(cè)定法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法15原子吸收分光光度法：檢查金屬雜質(zhì)毛細(xì)管電泳法：抑肽酶中檢查去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶兩個(gè)特定雜質(zhì)氣相色譜法：檢查揮發(fā)性雜質(zhì)熱分析法：檢查不同晶型的雜質(zhì)拉曼光譜法、紅外光譜法、X-射線粉末衍射生物檢定法、酶聯(lián)免疫試劑盒（抗生素殘留量）有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法原子吸收分光光度法：檢查金屬雜質(zhì)有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)16HPLC方法的建立與驗(yàn)證高效液相色譜法系用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離并依次進(jìn)入檢測(cè)器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。HPLC方法的建立與驗(yàn)證高效液相色譜法系用高壓輸液泵將規(guī)定的17二極管陣列蒸發(fā)光散射示差折光電化學(xué)質(zhì)譜熒光紫外檢測(cè)器的種類二極管蒸發(fā)光示差折光電化學(xué)質(zhì)譜熒光紫外檢測(cè)器的種類18HPLC方法的建立溶液濃度

流動(dòng)相

檢測(cè)波長(zhǎng)

色譜柱

系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)方法進(jìn)樣體積

柱溫

溶劑

HPLC方法的建立溶液濃度流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)色譜柱系統(tǒng)適應(yīng)19新方法分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）原方法中國(guó)抗生素雜志，2009，34：734在對(duì)已有方法比較的基礎(chǔ)上確定最佳分析方法新方法分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）原方法中國(guó)抗生20典型的HPLC方法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（pH6.3）［取磷酸二氫鉀9.07g，加水1000ml使溶解，用無(wú)水磷酸氫二鈉溶液（9.46g→1000ml）調(diào)節(jié)pH值至6.3，臨用前稀釋10倍］-乙腈-甲醇（36：11：3）為流動(dòng)相，流速每分鐘1.5ml；檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm；柱溫40℃。分別取前列地爾對(duì)照品溶液、前列腺素A1和前列腺素B1雜質(zhì)對(duì)照品溶液各適量，按（1：1：1）比例混合，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液。取該溶液25μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)色譜系統(tǒng)，使前列地爾峰的保留時(shí)間約為11～13分鐘，前列腺素A1峰與前列腺素B1峰的分離度應(yīng)符合要求；同時(shí)調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使前列腺素B1峰的高度約為滿量程的10%。

典型的HPLC方法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)照高效液相21

測(cè)定法

精密稱取本品適量，用乙腈-水（9：1）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液作為供試品溶液；精密量取含量測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液適量，用乙腈-水（9：1）稀釋制成每1ml中約含10μg的溶液，作為前列地爾對(duì)照品溶液；另精密稱取前列腺素A1和前列腺素B1雜質(zhì)對(duì)照品各適量，用乙腈-水（9：1）分別溶解并定量稀釋制成每1ml中約含15μg和5μg的溶液作為前列腺素A1和前列腺素B1的雜質(zhì)對(duì)照品溶液。精密量取供試品溶液、前列腺素A1、前列腺素B1雜質(zhì)對(duì)照品溶液和前列地爾對(duì)照品溶液各25μl,分別注入液相色譜儀，記錄供試品溶液的色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍。前列腺素A1和前列腺素B1均按外標(biāo)法計(jì)算，分別不得過(guò)1.5%和0.5%；其他雜質(zhì)按主成分自身對(duì)照法計(jì)算，單個(gè)最大雜質(zhì)的峰面積不得過(guò)前列地爾對(duì)照品溶液的主峰面積（1.0%）；雜質(zhì)總量不得過(guò)2.0%（小于0.01%的色譜峰不計(jì)）。

22HPLC方法的建立與驗(yàn)證溶劑的選擇：溶液穩(wěn)定性考察-溶解度高且穩(wěn)定＞8小時(shí)不需提示＜4小時(shí)提示臨用現(xiàn)配或立即進(jìn)樣＜2小時(shí)改換溶劑-無(wú)背景干擾或小

溶劑峰、倒峰

-低毒價(jià)廉HPLC方法的建立與驗(yàn)證溶劑的選擇：溶液穩(wěn)定性考察23

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇24檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

主波長(zhǎng)、低波長(zhǎng)、雜質(zhì)波長(zhǎng)、權(quán)衡波長(zhǎng)

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇主波25檢出雜質(zhì)的數(shù)與量干擾因素操作的便捷性

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇26色譜柱的選擇反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑C18、C8；氰基柱、氨基柱正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑硅膠柱離子交換填充劑；凝膠或高分子多孔微球；

手性鍵合填充劑色譜柱的選擇反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑27色譜柱的選擇-常見(jiàn)問(wèn)題色譜柱與流動(dòng)相性質(zhì)不匹配100%的水或Buffer最好選水相柱（AQ柱）普通C18柱流動(dòng)相中用到離子對(duì)試劑，用后應(yīng)好好沖最好專用！因色譜柱填料性質(zhì)已與原來(lái)有所不同在該柱上所摸索的色譜條件，可能在其它同類柱子上得不到重現(xiàn)！

色譜柱的選擇-常見(jiàn)問(wèn)題色譜柱與流動(dòng)相性質(zhì)不匹配28流動(dòng)相的選擇-分離能力強(qiáng)

（各種有關(guān)物質(zhì)基本分離）-溫和穩(wěn)定（pH、比例適中對(duì)柱傷害小，性質(zhì)穩(wěn)定）-配制簡(jiǎn)單、易得價(jià)廉-無(wú)毒環(huán)保流動(dòng)相的選擇-分離能力強(qiáng)29頭孢曲松鈉的流動(dòng)相原來(lái)0.8%四庚基溴化銨乙腈溶液-水-磷酸鹽緩沖液-枸櫞酸緩沖液（500：440：55：5），由4種成分組成，需配制3種緩沖液；后改為0.02mol/L正辛胺溶液-乙腈（73：27），用磷酸調(diào)節(jié)pH值為6.5，僅由2種成分組成

流動(dòng)相的選擇頭孢曲松鈉的流動(dòng)相原來(lái)0.8%四庚基溴化銨乙腈溶液-水-磷酸30分離能力的考察-粗產(chǎn)品溶液或配制各種雜質(zhì)混合物

（起始原料，中間體，副產(chǎn)物）

-強(qiáng)制降解（酸、堿、光、熱、氧化）分離能力的考察-粗產(chǎn)品溶液或配制各種雜質(zhì)混合物31二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證強(qiáng)制降解的考察方法誤區(qū)：（酸、堿、光、熱、氧化）

-破壞條件過(guò)于強(qiáng)烈（控制在主成分降低10%~20%為宜）-中和方法-目的不明確，結(jié)論不正確分離能力的考察二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證強(qiáng)制降解的考察方法誤區(qū)：分離能力32二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-不規(guī)定柱溫（不需加溫且對(duì)溫度不敏感）-25℃或30℃

（不需加溫但對(duì)溫度敏感，需保持恒溫）-35℃～70℃（需加溫且對(duì)溫度敏感，需保持恒溫）作為耐用性試驗(yàn)之一且可與溶液穩(wěn)定性同時(shí)進(jìn)行柱溫的確定二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-不規(guī)定柱溫柱溫的確定33溶液的配制需要注意的幾點(diǎn)：-需否避光？-可否超聲、加熱、多久？過(guò)濾？濾材？

-濃度與線性范圍和檢測(cè)限是否匹配？棄20ml初濾液？用xx膜過(guò)濾？用聚四氟酰胺小瓶？機(jī)械振搖xx分鐘等等？溶液的配制需要注意的幾點(diǎn)：34二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-常用10μl～100μl-過(guò)低誤差大，影響重現(xiàn)性-太多過(guò)載，影響峰形與分離

-配合溶液濃度保證檢測(cè)靈敏度進(jìn)樣體積的確定二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證進(jìn)樣體積的確定35色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)-指標(biāo)的應(yīng)用-分離度的保證-靈敏度的測(cè)試

-精密度的要求色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)36CompanyLogo系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求重復(fù)性理論板數(shù)分離度保留時(shí)間拖尾因子常用指標(biāo)CompanyLogo系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求重復(fù)性理論板數(shù)分離37

分離度指標(biāo)性物質(zhì)的選擇

-難分離物質(zhì)對(duì)-最常出現(xiàn)的雜質(zhì)-單獨(dú)規(guī)定限度的特定雜質(zhì)

-結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近且不干擾測(cè)定的物質(zhì)

分離度指標(biāo)性物質(zhì)的選擇

-難分離物質(zhì)對(duì)38二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-準(zhǔn)確定量分析時(shí)通常兩峰間R≥1.5-峰高峰谷比

分離度的要求

二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-準(zhǔn)確定量分析時(shí)通常兩峰間R≥139拖尾因子（T）的要求與應(yīng)用為保證分離效果和測(cè)量精度用于評(píng)價(jià)色譜峰對(duì)稱性的指標(biāo)T=W0.05h/2d1式中W0.05h

為5％峰高處的峰寬；d1為5％峰高出峰頂點(diǎn)至峰前沿之間的距離除另有規(guī)定外，峰高法定量時(shí)T應(yīng)在0.95～1.05

之間。峰面積法測(cè)定時(shí)，若拖尾嚴(yán)重，將影響峰面積的準(zhǔn)確測(cè)量。峰前峰后有緊鄰雜質(zhì)峰時(shí)，對(duì)拖尾因子作出規(guī)定。拖尾因子（T）的要求與應(yīng)用為保證分離效果和測(cè)量精度用于評(píng)價(jià)色40

重復(fù)性（RSD）的要求

用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣后，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標(biāo)法時(shí)，通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%；采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，通常配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3

種不同濃度的溶液，分別至少進(jìn)樣2次，計(jì)算平均校正因子。其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中如果沒(méi)有明確規(guī)定，就是≤2.0%

重復(fù)性（RSD）的要求

用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣后，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值41CompanyLogo特定雜質(zhì)峰定位的方法

雜質(zhì)對(duì)照品混合對(duì)照品臨時(shí)降解相對(duì)保留時(shí)間+參考圖峰定位CompanyLogo特定雜質(zhì)峰定位的方法雜質(zhì)對(duì)照品混42方法的驗(yàn)證驗(yàn)證定量限度-準(zhǔn)確度+--精密度+-

重復(fù)性+-中間精密度（+）

--專屬性++-檢測(cè)限（+）

+-定量限+

-

-線性范圍+-

-耐用性++方法的驗(yàn)證驗(yàn)證定量43CompanyLogo

雜質(zhì)含量的計(jì)算對(duì)照品外標(biāo)法主成分自身對(duì)照法加校正因子的自身對(duì)照法面積歸一化法CompanyLogo雜質(zhì)含量的計(jì)算對(duì)照品主成分自加校正44對(duì)照品外標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位方便定量準(zhǔn)確要求嚴(yán)費(fèi)用高70%有條件時(shí)首選的方法對(duì)照品外標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位定量準(zhǔn)確要求嚴(yán)費(fèi)用70%有條件45主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需定位費(fèi)用低定量粗70%沒(méi)條件時(shí)首選的方法主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需費(fèi)用低定量70%沒(méi)條件時(shí)首46加校正因子的主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位方便定量較準(zhǔn)確需測(cè)定因子定位難70%雜質(zhì)與主成分響應(yīng)因子差異大（超過(guò)0.9~1.1）且對(duì)照品昂貴時(shí)選用的方法加校正因子的主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位定量較需測(cè)定因47面積歸一化法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需定位費(fèi)用低定量粗70%不提倡使用的方法影響多重復(fù)性差面積歸一化法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需費(fèi)用低定量粗70%不提倡使用的48CompanyLogo特定雜質(zhì)

非特定雜質(zhì)有效雜質(zhì)寬管毒性雜質(zhì)嚴(yán)控雜質(zhì)限度的規(guī)定單個(gè)不得過(guò)0.10%根據(jù)生產(chǎn)現(xiàn)狀CompanyLogo特定雜質(zhì)49雜質(zhì)限度的規(guī)定毒性雜質(zhì)嚴(yán)控：-遵守公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)-不超越前期標(biāo)準(zhǔn)

-以相關(guān)安全實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為科學(xué)依據(jù)

-以保證臨床安全為根本目的雜質(zhì)限度的規(guī)定毒性雜質(zhì)嚴(yán)控：50雜質(zhì)限度的規(guī)定有效雜質(zhì)寬管：-不能不管（三磷酸腺苷二鈉、頭孢拉定）-不超越前期標(biāo)準(zhǔn)

-以投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科學(xué)依據(jù)雜質(zhì)限度的規(guī)定有效雜質(zhì)寬管：51雜質(zhì)限度的規(guī)定非特定雜質(zhì)：-不超越前期標(biāo)準(zhǔn)-一般不得過(guò)0.10%（2010年版）

-以安全實(shí)驗(yàn)和投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科學(xué)依據(jù)雜質(zhì)限度的規(guī)定非特定雜質(zhì)：52輔料影響的排除-有關(guān)物質(zhì)檢查前沿色譜峰，易排除少峰，可定位，能排除多峰，難定位，不能排除

輔料對(duì)測(cè)定的干擾輔料影響的排除-有關(guān)物質(zhì)檢查前沿色譜峰，易排除輔料對(duì)測(cè)定的干53輔料對(duì)測(cè)定的干擾1、避免使用（輔料或方法）2、不排除可以（默認(rèn)或校正）3、排除輔料干擾方法要明確、易重現(xiàn)、具可操作性、配混合液4、保證特定雜質(zhì)（最具代表性降解產(chǎn)物）檢出效果-不得已的最后一招

輔料對(duì)測(cè)定的干擾1、避免使用（輔料或方法）54

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-購(gòu)買(mǎi)的對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

權(quán)威性

真實(shí)性

準(zhǔn)確性-發(fā)票、標(biāo)簽、批號(hào)、分析報(bào)告單、鹽基/堿基、水分

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-購(gòu)買(mǎi)的對(duì)照品55詳細(xì)精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告標(biāo)定方法與結(jié)果

詳細(xì)提取精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告、標(biāo)定方法與結(jié)果詳細(xì)合成精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告、標(biāo)定方法與結(jié)果

純化精制提取精制

合成精制

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-非購(gòu)買(mǎi)的對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品詳細(xì)精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告詳細(xì)提取精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)56建立標(biāo)準(zhǔn)時(shí)要考慮的問(wèn)題Growth200820072006200520042003200220012000數(shù)據(jù)標(biāo)定：用正確的方法由至少3位實(shí)驗(yàn)者，不同儀器進(jìn)行不少于10個(gè)數(shù)據(jù)的測(cè)定

待標(biāo)品質(zhì)量考察：證明不僅是對(duì)的而且還是好的

對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計(jì)處理

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)定建立標(biāo)準(zhǔn)時(shí)要考慮的問(wèn)題Growth200820052002數(shù)57標(biāo)定者測(cè)定結(jié)果（%）n均值（%）RSD（%）

1.98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17%599.11%

0.17%2.98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98%599.04%

0.12%3.99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18%599.06%

0.09%經(jīng)Corchan檢驗(yàn)，三位標(biāo)定者的方差沒(méi)有差異，均來(lái)自同一正態(tài)分布。用Dixon法檢驗(yàn)15組數(shù)據(jù)中的最大值99.25%，最小值98.82%均非離群值。

T1-0.05×S置信區(qū)間μ=X±=99.08±0.068n1/2標(biāo)定結(jié)果的置信區(qū)間為99.15~99.01%，因此，本批對(duì)照品的色譜純度總均值為99.08%。標(biāo)定者測(cè)定結(jié)果（%）58對(duì)比研究≠對(duì)比檢驗(yàn)研究項(xiàng)目≠原執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)考察方法≠原法定標(biāo)準(zhǔn)

比較研究的范圍與方法

-考察項(xiàng)目與方法的選擇原則對(duì)比研究≠對(duì)比檢驗(yàn)

比較研究的范圍與方法

59

物料不同－原料、輔料分析對(duì)象｛工藝不同－路線、中間體設(shè)備不同－質(zhì)材、參數(shù)精度不全面－沒(méi)的學(xué)（復(fù)方無(wú)有關(guān)物質(zhì)）已有標(biāo)準(zhǔn)｛不完善－不應(yīng)學(xué)（地標(biāo)升國(guó)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)）不適用－不能學(xué)（廠送設(shè)備）

為什么呢？物料不同－原料、輔料

60產(chǎn)品生產(chǎn)個(gè)性應(yīng)關(guān)注標(biāo)準(zhǔn)隱性變化同類最新動(dòng)態(tài)

如何在已有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上變化拓展產(chǎn)品生產(chǎn)個(gè)性

如何在已有61項(xiàng)目原研廠標(biāo)準(zhǔn)擬定標(biāo)準(zhǔn)EP7.0USP34JP15含量限度按干燥品計(jì)算，每1mg的效價(jià)不得少于150單位按干燥品計(jì)算，每1mg的效價(jià)不得少于150單位按干燥品計(jì)算，每1mg效價(jià)不得少于150I.U.（非口服制劑），每1mg效價(jià)不得少于120I.U.（口服制劑按干燥品計(jì)算，每1mg中效價(jià)不得少于180USP肝素單位每1mg的效價(jià)不得少于110單位。性狀白色或類白色的粉末，有引濕性白色或類白色的粉末，極具引濕性白色或幾乎白色的粉末，有適度的引濕性白色到灰棕色的粉末或顆粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度不小于+35°(40mg/ml,水)應(yīng)不小于+50°(40mg/ml,水)鑒別1、電泳法2、鈉鹽1、電泳法2、鈉鹽A、具有抗凝血作用B、比旋度C、電泳法：D.鈉鹽A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、鈉鹽酸堿度5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.5～8.0（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）6.0～8.0項(xiàng)目原研廠標(biāo)準(zhǔn)擬定標(biāo)準(zhǔn)EP7.0USP34JP15含量限度按62雜質(zhì)研究技術(shù)柱串聯(lián)技術(shù)適用于溶解度無(wú)明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，通過(guò)將一根SCX（陽(yáng)離子交換）短柱與一根MGⅡC18長(zhǎng)柱串聯(lián)就可以簡(jiǎn)單達(dá)到將其分離的目的。原理：有電荷差異的被分離物質(zhì)進(jìn)入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會(huì)由于SCX短柱的離子交換作用而被保留在短柱中，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)（通常為酸性物質(zhì)）與中性物質(zhì)則會(huì)毫無(wú)阻礙的通過(guò)短柱進(jìn)入C18長(zhǎng)柱中，從而成功分離；然后由于MGⅡC18長(zhǎng)柱中疏水性基團(tuán)間的相互作用而對(duì)中性物質(zhì)有強(qiáng)保留作用，但對(duì)帶負(fù)電荷物質(zhì)無(wú)強(qiáng)保留作用，這樣帶負(fù)電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡(jiǎn)單被分開(kāi)了如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開(kāi)，還可在陽(yáng)離子交換短柱與C18長(zhǎng)柱前接一根NH2短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作用），進(jìn)行三根串聯(lián)，也可以使帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)與中性物質(zhì)達(dá)到更好的分離效果。

雜質(zhì)研究技術(shù)柱串聯(lián)技術(shù)63毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái)斑馬魚(yú)毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái)，對(duì)雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進(jìn)行評(píng)價(jià)。優(yōu)點(diǎn)：雜質(zhì)用量少無(wú)需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)周期短（3－4天一個(gè)周期）毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái)斑馬魚(yú)毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái)，對(duì)雜質(zhì)的胚胎毒性、神64有關(guān)物質(zhì)檢查常見(jiàn)問(wèn)題的探討65藥物耳毒性檢測(cè)利用一種特殊染料對(duì)斑馬魚(yú)幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測(cè)毛細(xì)胞的存活狀態(tài)，來(lái)判斷檢測(cè)物的耳毒性。下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色圈示給藥后1神經(jīng)丘消失。給藥后系統(tǒng)對(duì)照組（正常幼體）藥物耳毒性檢測(cè)給藥后系統(tǒng)對(duì)照組（正常幼體）66藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例

由于某些藥物組成的復(fù)雜性，特別是一些生物大分子藥物，使用傳統(tǒng)的分析方法已經(jīng)不能滿足當(dāng)前的質(zhì)控需要，2010年版藥典逐漸改用現(xiàn)代分析技術(shù)。

首次運(yùn)用毛細(xì)管電泳法注射用抑肽酶：檢查兩個(gè)特定雜質(zhì)

注射用鹽酸頭孢吡肟：方法1-毛細(xì)管電泳法

N-甲基吡咯烷方法2-HPLC法（羧基柱，電導(dǎo)檢測(cè)）藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例由于某些藥物組成的復(fù)雜性67毛細(xì)管電泳法檢查特定雜質(zhì)抑肽酶由上海藥檢所起草，參考USP增訂去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶檢查項(xiàng)色譜條件：石英毛細(xì)管分離柱，毛細(xì)管溫度：30℃，電極液：磷酸二氫鉀溶液；分離壓：12KV；波長(zhǎng)：214nm結(jié)果：去丙氨酸抑肽酶RT為0.99，去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶RT為0.98，兩相關(guān)物間分離度1.40，去丙氨酸-抑肽酶與抑肽酶間分離度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8毛細(xì)管電泳法檢查特定雜質(zhì)抑肽酶由上海藥檢所起草，參考USP增68抑肽酶SDS凝膠電泳圖

本品系自牛胰或肺中提取、純化制得的肽酶抑制劑。采用SDS凝膠電泳的方法抑肽酶的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果如圖所示，都只有一個(gè)條帶?？赡苁且蛛拿负陀嘘P(guān)物質(zhì)的分子量相差不大，使用凝膠電泳不能將其分離抑肽酶SDS凝膠電泳圖

本品系自牛胰或肺中提取、69藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例首次運(yùn)用肽圖分析技術(shù)：根據(jù)蛋白質(zhì)、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點(diǎn)，使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶，一般為肽鏈內(nèi)切酶，作用于特殊的肽鏈位點(diǎn)將多肽裂解成小片斷，再通過(guò)一定的分離檢測(cè)手段形成特征性指紋圖譜，用此法進(jìn)行鑒別，專屬性強(qiáng)，可鑒別僅相差一個(gè)氨基酸殘基的不同種屬來(lái)源的樣品。如胰島素-采用V8酶解+HPLC法；

重組人生長(zhǎng)激素-采用胰蛋白酶酶解+HPLC法獲得肽圖進(jìn)行鑒別等。藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例首次運(yùn)用肽圖分析技術(shù)：70胰島素肽圖人胰島素酶解-HPLC肽圖豬胰島素酶解-HPLC肽圖胰島素肽圖人胰島素酶解-HPLC肽圖豬胰島素酶解-HPLC肽71如何借鑒進(jìn)口藥注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)讀懂取長(zhǎng)補(bǔ)短更上一層樓學(xué)到位如何借鑒進(jìn)口藥注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)讀懂取長(zhǎng)補(bǔ)短更上一層樓學(xué)到位72

+先進(jìn)性完成時(shí)應(yīng)該是當(dāng)時(shí)最為嚴(yán)格的同品種標(biāo)準(zhǔn)專屬性僅屬于某個(gè)企業(yè)專有個(gè)性化某些項(xiàng)目的適用性及推廣性較差保密性非公開(kāi)的，僅在CDE，中檢所和口岸所等部門(mén)存檔進(jìn)口藥注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn)+先進(jìn)性完成時(shí)應(yīng)該是當(dāng)時(shí)最為嚴(yán)格的同品種標(biāo)準(zhǔn)專屬性僅屬于某73ThankYou!謝謝大家！ThankYou!謝謝大家！74藥品質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

-有關(guān)物質(zhì)檢查常見(jiàn)問(wèn)題討論

余立yuliyy8716@藥品質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

-有關(guān)物質(zhì)檢查常見(jiàn)問(wèn)題討論余立75第一次飛躍第二次飛躍純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜控制雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷第一次飛躍第二次飛躍純度控制雜質(zhì)控制雜質(zhì)譜雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷76雜質(zhì)（Impurity）的定義與分類任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。-《中國(guó)藥典》2010年版附錄對(duì)藥品雜質(zhì)的定義原料藥中：化學(xué)結(jié)構(gòu)和該藥品不一樣的任何物質(zhì)制劑中：除原料藥和輔料外的任何其他成分-

ICH對(duì)雜質(zhì)的定義雜質(zhì)（Impurity）的定義與分類任何影響藥品純度的物質(zhì)均77雜質(zhì)按活性分類雜質(zhì)活性雜質(zhì)無(wú)活性雜質(zhì)（無(wú)毒無(wú)效）毒性雜質(zhì)（有毒無(wú)效）（毒大效低）有效雜質(zhì)（有效無(wú)毒）（高效低毒）雜質(zhì)按活性分類雜質(zhì)活性雜質(zhì)毒性雜質(zhì)有效雜質(zhì)78雜質(zhì)按來(lái)源分類雜質(zhì)有關(guān)物質(zhì)

（relatedsubstances）無(wú)關(guān)雜質(zhì)

外源物質(zhì)

雜質(zhì)按來(lái)源分類雜質(zhì)有關(guān)物質(zhì)無(wú)關(guān)雜質(zhì)外源物質(zhì)79雜質(zhì)來(lái)源1

有關(guān)物質(zhì)－起始原料－中間體、副產(chǎn)物異構(gòu)體和聚合物多晶型－降解產(chǎn)物異構(gòu)體和聚合物多晶型－微生物－污染異物－非法添加物3

外源物質(zhì)2無(wú)關(guān)雜質(zhì)－試劑配位體、無(wú)機(jī)鹽、溶劑－重金屬催化劑－過(guò)濾介質(zhì)、活性炭雜質(zhì)來(lái)源1有關(guān)物質(zhì)3外源物質(zhì)2無(wú)關(guān)雜質(zhì)80已鑒定雜質(zhì)IdentifiedImpurity特定雜質(zhì)SpecifiedImpurity潛在雜質(zhì)PotentialImpurity雜質(zhì)譜ImpurityProfile已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查并有自己限度標(biāo)準(zhǔn)的雜質(zhì)。已鑒定或未鑒定理論推測(cè)在生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)實(shí)際產(chǎn)品中不一定存在存在于藥品中的所有雜質(zhì)組成或模式已鑒定雜質(zhì)特定雜質(zhì)潛在雜質(zhì)雜質(zhì)譜已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì)在質(zhì)量81新雜質(zhì)的研究－藥物雜質(zhì)的可能來(lái)源新雜質(zhì)的研究821.原料：紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、紅霉素D、紅霉素E、紅霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺3.副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺?；⑵婷顾亍⑵婷顾豊-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氫阿奇霉素、O-甲苯磺?；t霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8，

9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種1.原料：紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、紅霉素D、紅霉83附錄ⅩⅨF藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則附錄ⅩⅨA藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則2010年版

藥典中的雜質(zhì)分析2010年版

藥典中的雜質(zhì)分析84Q3A－新原料藥中的雜質(zhì)Q3B－新制劑中的雜質(zhì)ICH中的雜質(zhì)分析Q3A－新原料藥中的雜質(zhì)ICH中的雜質(zhì)分析85其他參考資料《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則

》其他參考資料86有關(guān)物質(zhì)檢查的常用方法適用多種雜質(zhì)（定性＋定量）主要用于沒(méi)有紫外吸收的雜質(zhì)（定性＋半定量）適用不同的特定雜質(zhì)（定性＋定量）TLCHPLC其他方法適用多種主要用于沒(méi)有紫外吸收的雜質(zhì)適用不同的TLCHPLC其87有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法容量滴定原子吸收重量法比色比濁物理常數(shù)紫外其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法容量滴定原子吸收重量法比色比濁物理常數(shù)88物理常數(shù)測(cè)定法

旋光度-檢查具有光學(xué)活性的雜質(zhì)紫外分光光度法

雜質(zhì)吸光度-在特定波長(zhǎng)具有紫外吸收的雜質(zhì)容量滴定法

游離脂肪酸、過(guò)氧化物、還原糖重量法

酸中不溶物、水中可溶物比色比濁法

游離淀粉、碘化物、鐵鹽等；氯化物、硫酸鹽

有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法物理常數(shù)測(cè)定法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法89原子吸收分光光度法：檢查金屬雜質(zhì)毛細(xì)管電泳法：抑肽酶中檢查去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶兩個(gè)特定雜質(zhì)氣相色譜法：檢查揮發(fā)性雜質(zhì)熱分析法：檢查不同晶型的雜質(zhì)拉曼光譜法、紅外光譜法、X-射線粉末衍射生物檢定法、酶聯(lián)免疫試劑盒（抗生素殘留量）有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法原子吸收分光光度法：檢查金屬雜質(zhì)有關(guān)物質(zhì)檢查的其他方法有關(guān)90HPLC方法的建立與驗(yàn)證高效液相色譜法系用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離并依次進(jìn)入檢測(cè)器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。HPLC方法的建立與驗(yàn)證高效液相色譜法系用高壓輸液泵將規(guī)定的91二極管陣列蒸發(fā)光散射示差折光電化學(xué)質(zhì)譜熒光紫外檢測(cè)器的種類二極管蒸發(fā)光示差折光電化學(xué)質(zhì)譜熒光紫外檢測(cè)器的種類92HPLC方法的建立溶液濃度

流動(dòng)相

檢測(cè)波長(zhǎng)

色譜柱

系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)方法進(jìn)樣體積

柱溫

溶劑

HPLC方法的建立溶液濃度流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)色譜柱系統(tǒng)適應(yīng)93新方法分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）原方法中國(guó)抗生素雜志，2009，34：734在對(duì)已有方法比較的基礎(chǔ)上確定最佳分析方法新方法分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）原方法中國(guó)抗生94典型的HPLC方法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（pH6.3）［取磷酸二氫鉀9.07g，加水1000ml使溶解，用無(wú)水磷酸氫二鈉溶液（9.46g→1000ml）調(diào)節(jié)pH值至6.3，臨用前稀釋10倍］-乙腈-甲醇（36：11：3）為流動(dòng)相，流速每分鐘1.5ml；檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm；柱溫40℃。分別取前列地爾對(duì)照品溶液、前列腺素A1和前列腺素B1雜質(zhì)對(duì)照品溶液各適量，按（1：1：1）比例混合，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液。取該溶液25μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)色譜系統(tǒng)，使前列地爾峰的保留時(shí)間約為11～13分鐘，前列腺素A1峰與前列腺素B1峰的分離度應(yīng)符合要求；同時(shí)調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使前列腺素B1峰的高度約為滿量程的10%。

典型的HPLC方法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)照高效液相95

測(cè)定法

精密稱取本品適量，用乙腈-水（9：1）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液作為供試品溶液；精密量取含量測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液適量，用乙腈-水（9：1）稀釋制成每1ml中約含10μg的溶液，作為前列地爾對(duì)照品溶液；另精密稱取前列腺素A1和前列腺素B1雜質(zhì)對(duì)照品各適量，用乙腈-水（9：1）分別溶解并定量稀釋制成每1ml中約含15μg和5μg的溶液作為前列腺素A1和前列腺素B1的雜質(zhì)對(duì)照品溶液。精密量取供試品溶液、前列腺素A1、前列腺素B1雜質(zhì)對(duì)照品溶液和前列地爾對(duì)照品溶液各25μl,分別注入液相色譜儀，記錄供試品溶液的色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍。前列腺素A1和前列腺素B1均按外標(biāo)法計(jì)算，分別不得過(guò)1.5%和0.5%；其他雜質(zhì)按主成分自身對(duì)照法計(jì)算，單個(gè)最大雜質(zhì)的峰面積不得過(guò)前列地爾對(duì)照品溶液的主峰面積（1.0%）；雜質(zhì)總量不得過(guò)2.0%（小于0.01%的色譜峰不計(jì)）。

96HPLC方法的建立與驗(yàn)證溶劑的選擇：溶液穩(wěn)定性考察-溶解度高且穩(wěn)定＞8小時(shí)不需提示＜4小時(shí)提示臨用現(xiàn)配或立即進(jìn)樣＜2小時(shí)改換溶劑-無(wú)背景干擾或小

溶劑峰、倒峰

-低毒價(jià)廉HPLC方法的建立與驗(yàn)證溶劑的選擇：溶液穩(wěn)定性考察97

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇98檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

主波長(zhǎng)、低波長(zhǎng)、雜質(zhì)波長(zhǎng)、權(quán)衡波長(zhǎng)

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇主波99檢出雜質(zhì)的數(shù)與量干擾因素操作的便捷性

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇100色譜柱的選擇反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑C18、C8；氰基柱、氨基柱正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑硅膠柱離子交換填充劑；凝膠或高分子多孔微球；

手性鍵合填充劑色譜柱的選擇反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑101色譜柱的選擇-常見(jiàn)問(wèn)題色譜柱與流動(dòng)相性質(zhì)不匹配100%的水或Buffer最好選水相柱（AQ柱）普通C18柱流動(dòng)相中用到離子對(duì)試劑，用后應(yīng)好好沖最好專用！因色譜柱填料性質(zhì)已與原來(lái)有所不同在該柱上所摸索的色譜條件，可能在其它同類柱子上得不到重現(xiàn)！

色譜柱的選擇-常見(jiàn)問(wèn)題色譜柱與流動(dòng)相性質(zhì)不匹配102流動(dòng)相的選擇-分離能力強(qiáng)

（各種有關(guān)物質(zhì)基本分離）-溫和穩(wěn)定（pH、比例適中對(duì)柱傷害小，性質(zhì)穩(wěn)定）-配制簡(jiǎn)單、易得價(jià)廉-無(wú)毒環(huán)保流動(dòng)相的選擇-分離能力強(qiáng)103頭孢曲松鈉的流動(dòng)相原來(lái)0.8%四庚基溴化銨乙腈溶液-水-磷酸鹽緩沖液-枸櫞酸緩沖液（500：440：55：5），由4種成分組成，需配制3種緩沖液；后改為0.02mol/L正辛胺溶液-乙腈（73：27），用磷酸調(diào)節(jié)pH值為6.5，僅由2種成分組成

流動(dòng)相的選擇頭孢曲松鈉的流動(dòng)相原來(lái)0.8%四庚基溴化銨乙腈溶液-水-磷酸104分離能力的考察-粗產(chǎn)品溶液或配制各種雜質(zhì)混合物

（起始原料，中間體，副產(chǎn)物）

-強(qiáng)制降解（酸、堿、光、熱、氧化）分離能力的考察-粗產(chǎn)品溶液或配制各種雜質(zhì)混合物105二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證強(qiáng)制降解的考察方法誤區(qū)：（酸、堿、光、熱、氧化）

-破壞條件過(guò)于強(qiáng)烈（控制在主成分降低10%~20%為宜）-中和方法-目的不明確，結(jié)論不正確分離能力的考察二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證強(qiáng)制降解的考察方法誤區(qū)：分離能力106二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-不規(guī)定柱溫（不需加溫且對(duì)溫度不敏感）-25℃或30℃

（不需加溫但對(duì)溫度敏感，需保持恒溫）-35℃～70℃（需加溫且對(duì)溫度敏感，需保持恒溫）作為耐用性試驗(yàn)之一且可與溶液穩(wěn)定性同時(shí)進(jìn)行柱溫的確定二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-不規(guī)定柱溫柱溫的確定107溶液的配制需要注意的幾點(diǎn)：-需否避光？-可否超聲、加熱、多久？過(guò)濾？濾材？

-濃度與線性范圍和檢測(cè)限是否匹配？棄20ml初濾液？用xx膜過(guò)濾？用聚四氟酰胺小瓶？機(jī)械振搖xx分鐘等等？溶液的配制需要注意的幾點(diǎn)：108二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-常用10μl～100μl-過(guò)低誤差大，影響重現(xiàn)性-太多過(guò)載，影響峰形與分離

-配合溶液濃度保證檢測(cè)靈敏度進(jìn)樣體積的確定二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證進(jìn)樣體積的確定109色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)-指標(biāo)的應(yīng)用-分離度的保證-靈敏度的測(cè)試

-精密度的要求色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)110CompanyLogo系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求重復(fù)性理論板數(shù)分離度保留時(shí)間拖尾因子常用指標(biāo)CompanyLogo系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求重復(fù)性理論板數(shù)分離111

分離度指標(biāo)性物質(zhì)的選擇

-難分離物質(zhì)對(duì)-最常出現(xiàn)的雜質(zhì)-單獨(dú)規(guī)定限度的特定雜質(zhì)

-結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近且不干擾測(cè)定的物質(zhì)

分離度指標(biāo)性物質(zhì)的選擇

-難分離物質(zhì)對(duì)112二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-準(zhǔn)確定量分析時(shí)通常兩峰間R≥1.5-峰高峰谷比

分離度的要求

二、HPLC方法的建立與驗(yàn)證-準(zhǔn)確定量分析時(shí)通常兩峰間R≥1113拖尾因子（T）的要求與應(yīng)用為保證分離效果和測(cè)量精度用于評(píng)價(jià)色譜峰對(duì)稱性的指標(biāo)T=W0.05h/2d1式中W0.05h

為5％峰高處的峰寬；d1為5％峰高出峰頂點(diǎn)至峰前沿之間的距離除另有規(guī)定外，峰高法定量時(shí)T應(yīng)在0.95～1.05

之間。峰面積法測(cè)定時(shí)，若拖尾嚴(yán)重，將影響峰面積的準(zhǔn)確測(cè)量。峰前峰后有緊鄰雜質(zhì)峰時(shí)，對(duì)拖尾因子作出規(guī)定。拖尾因子（T）的要求與應(yīng)用為保證分離效果和測(cè)量精度用于評(píng)價(jià)色114

重復(fù)性（RSD）的要求

用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣后，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標(biāo)法時(shí)，通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%；采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，通常配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3

種不同濃度的溶液，分別至少進(jìn)樣2次，計(jì)算平均校正因子。其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中如果沒(méi)有明確規(guī)定，就是≤2.0%

重復(fù)性（RSD）的要求

用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣后，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值115CompanyLogo特定雜質(zhì)峰定位的方法

雜質(zhì)對(duì)照品混合對(duì)照品臨時(shí)降解相對(duì)保留時(shí)間+參考圖峰定位CompanyLogo特定雜質(zhì)峰定位的方法雜質(zhì)對(duì)照品混116方法的驗(yàn)證驗(yàn)證定量限度-準(zhǔn)確度+--精密度+-

重復(fù)性+-中間精密度（+）

--專屬性++-檢測(cè)限（+）

+-定量限+

-

-線性范圍+-

-耐用性++方法的驗(yàn)證驗(yàn)證定量117CompanyLogo

雜質(zhì)含量的計(jì)算對(duì)照品外標(biāo)法主成分自身對(duì)照法加校正因子的自身對(duì)照法面積歸一化法CompanyLogo雜質(zhì)含量的計(jì)算對(duì)照品主成分自加校正118對(duì)照品外標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位方便定量準(zhǔn)確要求嚴(yán)費(fèi)用高70%有條件時(shí)首選的方法對(duì)照品外標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位定量準(zhǔn)確要求嚴(yán)費(fèi)用70%有條件119主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需定位費(fèi)用低定量粗70%沒(méi)條件時(shí)首選的方法主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需費(fèi)用低定量70%沒(méi)條件時(shí)首120加校正因子的主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位方便定量較準(zhǔn)確需測(cè)定因子定位難70%雜質(zhì)與主成分響應(yīng)因子差異大（超過(guò)0.9~1.1）且對(duì)照品昂貴時(shí)選用的方法加校正因子的主成分自身對(duì)照法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%定位定量較需測(cè)定因121面積歸一化法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需定位費(fèi)用低定量粗70%不提倡使用的方法影響多重復(fù)性差面積歸一化法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)50%不需費(fèi)用低定量粗70%不提倡使用的122CompanyLogo特定雜質(zhì)

非特定雜質(zhì)有效雜質(zhì)寬管毒性雜質(zhì)嚴(yán)控雜質(zhì)限度的規(guī)定單個(gè)不得過(guò)0.10%根據(jù)生產(chǎn)現(xiàn)狀CompanyLogo特定雜質(zhì)123雜質(zhì)限度的規(guī)定毒性雜質(zhì)嚴(yán)控：-遵守公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)-不超越前期標(biāo)準(zhǔn)

-以相關(guān)安全實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為科學(xué)依據(jù)

-以保證臨床安全為根本目的雜質(zhì)限度的規(guī)定毒性雜質(zhì)嚴(yán)控：124雜質(zhì)限度的規(guī)定有效雜質(zhì)寬管：-不能不管（三磷酸腺苷二鈉、頭孢拉定）-不超越前期標(biāo)準(zhǔn)

-以投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科學(xué)依據(jù)雜質(zhì)限度的規(guī)定有效雜質(zhì)寬管：125雜質(zhì)限度的規(guī)定非特定雜質(zhì)：-不超越前期標(biāo)準(zhǔn)-一般不得過(guò)0.10%（2010年版）

-以安全實(shí)驗(yàn)和投入產(chǎn)出比等利弊平衡為科學(xué)依據(jù)雜質(zhì)限度的規(guī)定非特定雜質(zhì)：126輔料影響的排除-有關(guān)物質(zhì)檢查前沿色譜峰，易排除少峰，可定位，能排除多峰，難定位，不能排除

輔料對(duì)測(cè)定的干擾輔料影響的排除-有關(guān)物質(zhì)檢查前沿色譜峰，易排除輔料對(duì)測(cè)定的干127輔料對(duì)測(cè)定的干擾1、避免使用（輔料或方法）2、不排除可以（默認(rèn)或校正）3、排除輔料干擾方法要明確、易重現(xiàn)、具可操作性、配混合液4、保證特定雜質(zhì)（最具代表性降解產(chǎn)物）檢出效果-不得已的最后一招

輔料對(duì)測(cè)定的干擾1、避免使用（輔料或方法）128

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-購(gòu)買(mǎi)的對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

權(quán)威性

真實(shí)性

準(zhǔn)確性-發(fā)票、標(biāo)簽、批號(hào)、分析報(bào)告單、鹽基/堿基、水分

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-購(gòu)買(mǎi)的對(duì)照品129詳細(xì)精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告標(biāo)定方法與結(jié)果

詳細(xì)提取精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告、標(biāo)定方法與結(jié)果詳細(xì)合成精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告、標(biāo)定方法與結(jié)果

純化精制提取精制

合成精制

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-非購(gòu)買(mǎi)的對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品詳細(xì)精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告詳細(xì)提取精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)130建立標(biāo)準(zhǔn)時(shí)要考慮的問(wèn)題Growth200820072006200520042003200220012000數(shù)據(jù)標(biāo)定：用正確的方法由至少3位實(shí)驗(yàn)者，不同儀器進(jìn)行不少于10個(gè)數(shù)據(jù)的測(cè)定

待標(biāo)品質(zhì)量考察：證明不僅是對(duì)的而且還是好的

對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計(jì)處理

比較研究的標(biāo)尺問(wèn)題

-對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)定建立標(biāo)準(zhǔn)時(shí)要考慮的問(wèn)題Growth200820052002數(shù)131標(biāo)定者測(cè)定結(jié)果（%）n均值（%）RSD（%）

1.98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17%599.11%

0.17%2.98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98%599.04%

0.12%3.99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18%599.06%

0.09%經(jīng)Corchan檢驗(yàn)，三位標(biāo)定者的方差沒(méi)有差異，均來(lái)自同一正態(tài)分布。用Dixon法檢驗(yàn)15組數(shù)據(jù)中的最大值99.25%，最小值98.82%均非離群值。

T1-0.05×S置信區(qū)間μ=X±=99.08±0.068n1/2標(biāo)定結(jié)果的置信區(qū)間為99.15~99.01%，因此，本批對(duì)照品的色譜純度總均值為99.08%。標(biāo)定者測(cè)定結(jié)果（%）132對(duì)比研究≠對(duì)比檢驗(yàn)研究項(xiàng)目≠原執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)考察方法≠原法定標(biāo)準(zhǔn)

比較研究的范圍與方法

-考察項(xiàng)目與方法的選擇原則對(duì)比研究≠對(duì)比檢驗(yàn)

比較研究的范圍與方法

133

物料不同－原料、輔料分析對(duì)象｛工藝不同－路線、中間體設(shè)備不同－質(zhì)材、參數(shù)精度不全面－沒(méi)的學(xué)（復(fù)方無(wú)有關(guān)物質(zhì)）已有標(biāo)準(zhǔn)｛不完善－不應(yīng)學(xué)（地標(biāo)升國(guó)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)）不適用－不能學(xué)（廠送設(shè)備）

為什么呢？物料不同－原料、輔料

134產(chǎn)品生產(chǎn)個(gè)性應(yīng)關(guān)注標(biāo)準(zhǔn)隱性變化同類最新動(dòng)態(tài)

如何在已有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上變化拓展產(chǎn)品生產(chǎn)個(gè)性

如何在已有135項(xiàng)目原研廠標(biāo)準(zhǔn)擬定標(biāo)準(zhǔn)EP7.0USP34JP15含量限度按干燥品計(jì)算，每1mg