正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化血脈疏通口服液水提工藝-

正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化血脈疏通口服液水提工藝易生富1,陳兵2,孫亞楠1(1.湖北中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校,荊州434020;2.湖北省荊州市中醫(yī)院藥劑科,荊州434010摘要目的優(yōu)化血脈疏通口服液水提工藝三方法以加水量二煎煮時(shí)間二煎煮次數(shù)為考察因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),采用3因素3水平正交設(shè)計(jì),以黃芪甲苷二總多糖及80%醇浸出物量作為指標(biāo)值三結(jié)果煎煮次數(shù)和加水量對黃芪甲苷二總多糖及80%醇浸出物量具顯著影響,優(yōu)選煎煮提取工藝為煎煮3次,加12倍量水,煎煮0.5h三結(jié)論該實(shí)驗(yàn)確定了血脈疏通口服液的最佳提取工藝三關(guān)鍵詞血脈疏通口服液;正交實(shí)驗(yàn);水提工藝;黃芪甲苷中圖分類號(hào)R286;TQ460.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1004-0781(201403-0382-04血脈疏通口服液為湖北省荊州市中醫(yī)院自制中藥制劑(自制制劑批準(zhǔn)文號(hào):鄂藥制字Z20110885,由赤芍二黃芪二牛膝二防風(fēng)二桃仁二地龍二葛根二石菖蒲等組成,具益氣二活血二通脈的作用,用于治療因氣虛血瘀所致的冠心病二心絞痛及脂肪肝有很好療效,治療冠心病二心絞痛患者70例,總有效率93.33%;治療脂肪肝患者176例,總有效率89.16%[1?2]三方中牛膝二黃芪二赤芍二葛根二桃仁等藥含皂苷類二黃酮類和多糖類,考慮水煎煮法提取;石菖蒲二防風(fēng)含揮發(fā)油,在提取揮發(fā)油后,再與赤芍二黃芪二牛膝二葛根二桃仁等藥合煎三為了保證制劑質(zhì)量,筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法,優(yōu)化血脈疏通口服液煎煮提取工藝三1儀器與試藥1.1儀器Waterse?2695高效液相色譜儀,Empower工作站,Waters?2424蒸發(fā)光散射檢測器(美國沃特士公司;Ohaus?AR124CN型電子分析天平(奧豪斯儀器上海有限公司;UV?3000型可見紫外分光光度計(jì)(日本島津;高速離心機(jī)(美國MICRO12-24三1.2試藥黃芪甲苷對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào):110683?200916,血脈疏通口服液(自制,批號(hào):20120119,規(guī)格:每支10mL,乙腈為色譜純,葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào):110976?200903,其他試劑為分析純?nèi)?方法與結(jié)果2.1樣品的制備按處方比例,稱取石菖蒲6g二防風(fēng)8g,按提油工藝提油,濾過得藥液和藥渣備用三按處方比例,稱取黃芪30g二赤芍10g二牛膝10g二桃仁8g二葛根10g二地龍8g與石菖蒲二防風(fēng)提油后的藥渣混合,按規(guī)定的加水量二煎煮時(shí)間二煎煮次數(shù)提取二過濾二收稿日期2013-07-05修回日期2013-08-22作者簡介易生富(1966-,男,湖北荊州人,主任藥師,學(xué)士,主要研究方向:中藥制劑三電話:0716-*******,E?mail:yishenfu@126.com三濃縮并定容至100mL(每毫升含生藥0.9g三2.2單因素實(shí)驗(yàn)按2.1”項(xiàng)樣品的制備方法,分別調(diào)整加水量8,10,12,14倍,煎煮時(shí)間0.5,1.0,1.5,2.0h,煎煮次數(shù)1,2,3,4次,進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)三2.3正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選取煎煮時(shí)間二加水量二煎煮次數(shù)3個(gè)因素,各取3個(gè)水平進(jìn)行L9(34正交實(shí)驗(yàn)三黃芪是方中君藥,黃芪甲苷是其主要有效成分,以黃芪甲苷含量評(píng)價(jià)指標(biāo),權(quán)重系數(shù)定為0.5;黃芪中多糖為有效成分,方中牛膝二葛根二防風(fēng)也含有多糖,因此總多糖含量作為另一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo),權(quán)重系數(shù)定為0.3;80%醇浸出物為大類成分作為間接控制的指標(biāo),權(quán)重系數(shù)定為0.2,以此篩選最佳提取工藝[3]三綜合評(píng)分=0.5×黃芪甲苷含量+0.3×總多糖含量+0.2×80%醇浸出物量三正交實(shí)驗(yàn)表見表1,2三2.4黃芪甲苷的含量測定譜?蒸發(fā)光散射檢測法二半高效液相色譜?質(zhì)譜串聯(lián)法等[4?7]三本實(shí)驗(yàn)采用HPLC?ELSD檢測法[8]三表1正交實(shí)驗(yàn)因素水平表水平加水量(A/倍煎煮時(shí)間(B/h煎煮次數(shù)(C/次180.512101.023121.533.2μg四mL-1濃度范圍內(nèi),濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系三3.0,4.0mL分別轉(zhuǎn)移到50mL量瓶,加水稀釋至刻度,搖勻三精密量取上述各溶液2.0mL置10mL具塞試管,分別精密加入4%苯酚溶液1.0mL,搖勻,迅速精密加入濃硫酸7.0mL,搖勻,沸水保溫15min,取出后迅速用冷水冷卻至室溫,以第一份為空白對照液,在400~600nm波長范圍內(nèi)掃描,得最大吸收波長為487nm三在487nm波長處,測定各對照品吸光度,以濃度(Y為橫坐標(biāo)二吸光度(X為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為Y=0.0226X+0.0089,r=0.9996(n=5三表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表序號(hào)ABCD評(píng)價(jià)指標(biāo)/%黃芪甲苷/(mg四mL-1總多糖/(mg四mL-180%醇浸出物綜合評(píng)價(jià)A:加水量(倍;B:煎煮時(shí)間(h;C:煎煮次數(shù)(次;D:空白在室溫每隔30min測定一次,連續(xù)3h考察其穩(wěn)定性,計(jì)算測定結(jié)果的RSD為1.21%三2.680%醇浸出物量測定取各正交實(shí)驗(yàn)號(hào)濃縮液10mL,加無水乙醇40mL,使乙醇濃度達(dá)到80%,靜置過夜,取上清液于干燥蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,105℃烘箱干燥3~4h至恒重,取出,迅速移至干燥器中放冷,取出精密稱重即得三結(jié)果見表2三表3黃芪甲苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果mg,n=5樣品量加標(biāo)量測得量表4方差分析表方差來源離差平方和SS自由度V方差MSF0.05(2,2=19.00,F0.01(2,2=99.00由直觀分析可知,影響提取效果的因素順序?yàn)?煎煮次數(shù)﹥加水量﹥煎煮時(shí)間三經(jīng)方差分析,煎煮時(shí)間對提取效果無顯著影響,為節(jié)約工時(shí),定為B1,煎煮次數(shù)和加水量有顯著影響,以A3C3為宜三2.8驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證3批三結(jié)果見表5三RSD值<3%,表明所篩選的提取工藝條件基本穩(wěn)定三3討論方中黃芪為君藥,黃芪甲苷和多糖為黃芪的主要有效成分[14],現(xiàn)代藥理研究表明黃芪甲苷具有保護(hù)心臟和肝臟二抗細(xì)胞凋亡二免疫調(diào)節(jié)二改善血液流變學(xué)等作用[15],黃芪多糖具有增強(qiáng)免疫系統(tǒng)二保肝二降血糖二表5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果%,n=3成分12.2降血脂二抗氧化延緩衰老等藥理活性[16],故將黃芪甲苷含量作為評(píng)價(jià)工藝優(yōu)劣的重要指標(biāo)三方中臣藥牛膝,佐藥葛根二防風(fēng)也含有多糖,因此將總多糖含量作為提取工藝的另一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo),80%醇浸出物為大類成分,作為間接控制指標(biāo),以此篩選最佳提取工藝具有一定的科學(xué)性三按正交實(shí)驗(yàn)所篩選的最佳提取條件,本實(shí)驗(yàn)還比較了石菖蒲二防風(fēng)二藥提油后藥渣不再與黃芪二赤芍等藥合煎水提和二藥提油后藥渣與黃芪二赤芍等藥合煎水提兩種方法主要有效成分的影響三結(jié)果表明,分煎后出膏率降低近10%,黃芪甲苷含量無影響,總多糖含量近無影響,為降低出膏率,給后續(xù)除雜工藝降低難度,可以考慮將提取路線定為:石菖蒲二防風(fēng)二藥提油后藥渣棄去,藥液與黃芪二赤芍等藥水提液合并三參考文獻(xiàn)[1]黨安琪.血脈舒通口服液治療病態(tài)竇房結(jié)綜合征60例[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2001,8(7:54.[2]黨安琪,林慶,嚴(yán)光俊,等.血脈舒通口服液治療非酒精性高脂血癥性脂肪肝166例臨床觀察[J].中國中醫(yī)藥科技,2005,12(3:180-181.[3]解斌,高華宏,劉滿華,等.加味當(dāng)歸補(bǔ)血湯濃縮丸提取工藝研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,27(3:272-273.[4]陳巧霞,韓樂,劉訓(xùn)紅,等.HPCE同時(shí)測定黃芪飲片中3種指標(biāo)成分的含量[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(3:275-278.[5]李生有.雙波長薄層掃描法測定益心康泰膠囊中黃芪甲苷含量[J].中成藥,2006,28(12:1855-1856.[6]郭兆榮,李笑然,楊世林,等.高效液相色譜?蒸發(fā)光散射法測定雪膽胃腸丸中黃芪甲苷的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2010,30(1:88-90.[7]鄭重,宋鳳瑞,劉舒,等.Semi?LC/MS技術(shù)快速定量分析黃芪樣品中黃芪甲苷含量[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2012,4(1:36-38.[8]單玉,董曉茜,張振秋,等.HPLC?ELSD測定黃芪苦參藥對提取物中黃芪甲苷的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,12(1:187-188.[9]南換杰,李曉娜,秦雪梅,等.黃芪及其制劑中測定黃芪甲苷含量時(shí)供試液制備方法的改進(jìn)[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(19:1627-1630.[10]馬明英,張曉峰,付超美,等.高效液相色譜?蒸發(fā)光散射檢測法測定那保膠囊中黃芪甲苷含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2007,27(11:1530-1531.[11]魏曉明,符紅,萬幼平,等.硫酸?蒽酮法測定鹿龜酒中多糖含量[J].中成藥,2000,22(5:380-382.[12]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:78.[13]陳發(fā)奎.常用中藥有效成分含量測定[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997:620-622.[14]溫燕梅.黃芪的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中成藥,2006,28(6:879-883.[15]牛嵩山.黃芪甲苷的藥理研究進(jìn)展[J].國醫(yī)論壇,2012,27(4:53-54.[16]何文涓,衰志堅(jiān),何曉升.黃芪多糖的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國生化藥物雜志,2012,33(5:692-694.‘醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)“入選世界衛(wèi)生組織西太平洋地區(qū)醫(yī)學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