aktaavant應(yīng)用操作培訓(xùn)

???????JH ??4;:; ?????1 ????? в433?? ????63??? ???????? ?JH???????4;<9 ?JHKhdowkfduhOlihVflhqfhv ??? ??? ?????????????????????????????????????????????????????οΥ??????????????????? ? 303<4; ?й?? 前 UNICORN?6軟件的使用介 開 新建用 結(jié)果處 手動(dòng)命 方法編 實(shí)驗(yàn)?zāi)?實(shí)驗(yàn)材 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn) 方法編 運(yùn)行實(shí) DOE實(shí) 實(shí)驗(yàn)?zāi)?實(shí)驗(yàn)材 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn) 方法編 運(yùn)行實(shí) 結(jié)果處 與..............................................................................................................................................附 PH流路 本是為不熟悉UNICORN?6軟件和?KTAavant新裝機(jī)用戶培訓(xùn)而編寫，您可以在本中學(xué)到UNICORN6控制軟件的基礎(chǔ)知識(shí)以及如何通過UNICORN6來控制?KTAavant系統(tǒng)。掌握?KTAavantUNICORN?6DOEDOEUNICORN?6軟件的使用e腦桌面上的UNICORN6圖標(biāo)打開軟件。（ystem如果sControl窗口沒有自動(dòng)彈出，在dsrt窗口中可任意打開所需窗口中Toos>ystmControl打開，也點(diǎn)擊MethodEdtor和Elao進(jìn)入SystemControl窗口，點(diǎn)擊Connecttoystems，在彈出的框中選中已連接的系統(tǒng)名稱，點(diǎn)擊OK確認(rèn)連接。在Atato窗口中選UNICORNUser在跳出的框中選擇New，在右側(cè)UserProperties一欄中輸入用戶名、職位、E-mlAdmnistrationAccessGroupsandNetworkUsers，在彈出的窗在右側(cè)指定該用戶組能夠打開的操作窗口、能夠控制的硬件設(shè)備以及文件位置，點(diǎn)OK存設(shè)修改；如果需要對(duì)系統(tǒng)默認(rèn)參數(shù)進(jìn)行修改，可以進(jìn)入SystemControl窗口，在ett在彈出的框中設(shè)置各種開機(jī)默認(rèn)參數(shù)，譬如參數(shù)以及檢測(cè)器參數(shù)。如果更換了系統(tǒng)標(biāo)配的管線，需要重新測(cè)量檢測(cè)器之后的延遲體積，并把這積輸入到Dlayvoume輸入框中，點(diǎn)擊OK保存并退出如果需要對(duì)各種檢測(cè)器（pH、電導(dǎo)、壓力）SystemControltpH校pHootobrpH，點(diǎn)擊下邊的Prepareforlbt并在pHforbuffer1一欄中輸入標(biāo)準(zhǔn)1的pH使用注射器向pH閥中注入約10mlpH標(biāo)準(zhǔn)液1，待Currentu讀數(shù)穩(wěn)定后點(diǎn)擊ae，然后向pH閥中注入去離子水對(duì)其進(jìn)行。在pHforbuffer2一欄中輸入標(biāo)2pH值，使用注射pH閥中注入10mlpH標(biāo)準(zhǔn)2Currentvalue讀數(shù)穩(wěn)定后點(diǎn)擊lropymt反應(yīng)了電極的狀態(tài)，如果o80mr在±60mV范圍內(nèi)，則電極狀態(tài)良好，否則需要對(duì)電極進(jìn)行或更換。如果發(fā)現(xiàn)層析系統(tǒng)的壓力檢測(cè)確（譬如在沒有流速的情況下仍然顯示有一定的壓力），需要對(duì)壓力感受器進(jìn)行校正，在Mttoat下拉框中選擇y點(diǎn)擊Resetpressure對(duì)壓力進(jìn)Mnualn命令為了完整保存手動(dòng)命令運(yùn)行結(jié)果，在nasc界面中選擇Saversut后的Browse泵點(diǎn)擊pumpwash，選擇不同的即可進(jìn)行泵點(diǎn)擊swash，選擇的體積，并且選擇合適的出口如outletvave或njectionv點(diǎn)擊ouos根據(jù)需要選擇合適的柱位閥，可選擇從柱位1到柱位5根據(jù)需要inletAnt的進(jìn)液A1-A8B1-pH選點(diǎn)擊linlet根據(jù)需要可選擇從BufferS78種進(jìn)口ntvaue0%的輸入框中，將octvau100%Cond%Fowpath組中將出口Oav位置WFracFractioncoction命令組中的手動(dòng)收集命令Fractionation中設(shè)置每管收集的體積（或時(shí)間）Fractionsize，點(diǎn)擊Execute執(zhí)行當(dāng)收集的樣品還沒有達(dá)到設(shè)定的體積，而需要換到下一管時(shí)，可以執(zhí)行Feed當(dāng)需要停止收集時(shí)，執(zhí)行Stopfractionation命令，點(diǎn)擊Execute首先需要設(shè)定峰的判斷標(biāo)準(zhǔn)，在Peakfractionationme命令中選擇Snasource為UV1（或者其它），Mode選擇為L(zhǎng)（或者oe），在Startlevel輸入框中Peakfractionation命令中輸入Fractionsize，點(diǎn)擊Insert，后點(diǎn)需要停止峰收集的時(shí)候執(zhí)行StoppeakoFracste10大體積收集。在FractioncFractionationinoutletav命令中選擇Startn，并輸入收集的組分?jǐn)?shù)以及每個(gè)組分的收集體積，點(diǎn)擊Execute執(zhí)行A、B泵相互配合來實(shí)現(xiàn)。在Pumps命令組中的Gradint中輸入目標(biāo)洗脫緩沖液的比例，如Length0n的比例立即達(dá)到設(shè)定值；如果需要線性梯度洗脫，在LengthWatchre這一設(shè)置的前提是在方法編程中使用了ttlessthantabepHOtherSetmark如果希望系統(tǒng)過一段時(shí)間或者體積后能自動(dòng)暫停或停止，可以使用Other>Timer命令，選擇判斷標(biāo)準(zhǔn)為時(shí)間或者體積，在輸入框中輸入數(shù)值，選擇后續(xù)的操作為Pause或End，點(diǎn)擊Execute執(zhí)行SystemControl界面中中在層析實(shí)驗(yàn)過程中可以通過點(diǎn)擊中的Pause按鈕讓系統(tǒng)暫點(diǎn)擊Continueld，系統(tǒng)將維持現(xiàn)有狀態(tài)運(yùn)行，直至點(diǎn)擊Continue后繼續(xù)運(yùn)行后續(xù)程序點(diǎn)擊中的定制按在彈出的定制選項(xiàng)欄中選在運(yùn)行數(shù)據(jù)項(xiàng)，可以選擇在sco線在X軸選項(xiàng)卡中設(shè)置X軸是以體積還是時(shí)間為顯示單位以及固定X軸顯 還是可變X軸范圍在層析過程中，我們可以隨時(shí)通過框選圖譜的某一部分放大圖譜，以便，如果需要恢復(fù)到原來的狀態(tài)，可以點(diǎn)擊右鍵后在懸浮框中選擇UndoZoom或者Reset如果需要查看曲線上的某一點(diǎn)的坐標(biāo)值，可以后選擇VcMarkr，圖譜中將會(huì)出現(xiàn)一條垂直的，鼠標(biāo)按住Mark進(jìn)行拖動(dòng)，在顯示框中顯示的就是曲線上點(diǎn)的坐標(biāo)值，鼠標(biāo)點(diǎn)擊曲線窗口上部的圖例，就會(huì)顯示相應(yīng)曲線上的坐標(biāo)Copytooa可以將現(xiàn)有圖譜拷貝到剪切板上，進(jìn)而可以粘貼到word等文檔中MethoddoMethodtUNICORN6s選擇Methoddt打在中點(diǎn)擊Createanewmethod，啟動(dòng)方法編在fMethod下拉框中選擇層析實(shí)驗(yàn)的類型根據(jù)原理包括：親和層析、陰陽離子CationExchangeChromatographyCIEX)，PredefinedPhasesMethodttingscoumntype，選擇實(shí)驗(yàn)所用的層析柱HiTrapSPFF,1m您可以選擇Any；或者將層析柱的信息先輸入到系統(tǒng)中去，輸入層析柱信息需要在任意UNICORN6窗口中選擇ColumnHandlng在彈出的柱列表中，點(diǎn)擊New新建一個(gè)信息輸入信息后點(diǎn)擊Saveas，輸入名稱后點(diǎn)擊OK保存點(diǎn)擊ulbt進(jìn)入平衡階段設(shè)置，輸入平衡時(shí)緩沖液B所占的（0%，B點(diǎn)擊ampeAplto進(jìn)入上樣階段設(shè)置，選擇上樣的方式，如果是采用手動(dòng)上樣（樣品環(huán)或者Superp），若采用ia上樣請(qǐng)輸入清空樣品環(huán)的體積（該體積如果比樣品環(huán)的，則輸入的體積就是pro上樣，需要設(shè)置上樣的體收集或者用組分收集器收集。點(diǎn)擊uoutletve，選擇Fxdomotn，選擇出口閥起始位置，輸入每管收集的體積收集方式也可選擇PeakrtoaoFoutlet兩種方點(diǎn)擊ColumnWash前的“∨”去掉，選擇其它緩沖液的。iwaste（donot點(diǎn)擊u進(jìn)入洗脫設(shè)置，首先選擇洗脫的流速、緩沖液以及緩沖洗脫方式有兩種，Isocraticeuton洗脫方式只使用一種緩沖液洗脫，通常用于凝膠過濾層析。設(shè)置收集體積為1.5CV，使用0%B液，使用Fractioncollector進(jìn)行峰收集（也可以如前所述進(jìn)行自由設(shè)置），可以通過勾選Startfractionationafter0.3CV從洗脫開線性梯度的洗脫方式適用于各種吸附性層析的洗脫條件摸索。使用線性梯度方式洗脫，需要輸入開始及結(jié)束時(shí)緩沖液B的比例以及在多少個(gè)柱床體積內(nèi)B逐漸達(dá)到目標(biāo)AddmTypeStep，輸Target%B20Length5CV進(jìn)行第一步階段洗脫AddSegmentTyper，TargetB以及Length20CV，點(diǎn)擊ColumnWash進(jìn)入柱沖洗階段設(shè)置，此階段目的是對(duì)層析柱進(jìn)行點(diǎn)擊Equira進(jìn)入層析柱再平衡階段設(shè)置，此階段目的是將層析柱Scouting功能可以實(shí)現(xiàn)方便快速的條件摸索，點(diǎn)擊上Scouting按點(diǎn)擊InsertRun添加實(shí)驗(yàn)，輸入各變量的參數(shù)值，點(diǎn)擊OK確認(rèn)，系統(tǒng)將會(huì)按照設(shè)定的參選擇中的Start完成所有設(shè)置后點(diǎn)擊中的保存按選擇保存的路徑，輸入方法名稱后1.4.4運(yùn)行方如要運(yùn)行已創(chuàng)建的方法yControlMethodvgt中選擇方法，右鍵點(diǎn)Run在跳Startro中確認(rèn)設(shè)置的項(xiàng)目，點(diǎn)擊Start開始運(yùn)點(diǎn)擊任務(wù)欄中的atin，進(jìn)入結(jié)果處如果任務(wù)欄中沒有Eato窗口，可以在任意已打開的UNICORN6窗口中點(diǎn)擊os選擇Evauaion打開vuto窗口中點(diǎn)擊OpenRsutsvgator打開Rsuts文件EvaluationFileOpenChromatogramsChrom1，OK還可以通過單擊“最近的運(yùn)行(Rn )”選項(xiàng)，找到需要分析的層析結(jié)果雙擊打正常打開的結(jié)果如下在Curve窗格點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，點(diǎn)擊菜單中的tCurvetyandor，就可以對(duì)如需對(duì)Y軸顯示區(qū)間進(jìn)行更改，點(diǎn)擊Y-Axs選項(xiàng)卡。在左Slectcurvetomodfyascalefor框中選中需要更改的曲線，點(diǎn)擊Fxd，并在框中填入i和Max值；如需在色譜曲線右側(cè)也顯示另外一條色譜曲線的Y軸左邊，在Right下拉菜單中選中所定義的曲線。點(diǎn)擊Ok即完成曲線顯示區(qū)間自定義如果需要對(duì)X軸顯示類型和顯示范圍進(jìn)行自定義，點(diǎn)擊X-Axs選項(xiàng)卡。選擇X軸類型Te、VoumeColumnoe，如需固定X軸顯示區(qū)間，在Ascale復(fù)選框中選定Fxd并填寫Min和Max數(shù)值；如果需要在上樣后X軸自動(dòng)歸零，則需要在Adustretentionzerotoetb選框中打鉤擊右鍵后選擇UndoZoom或ResetZoomVtcmr在Curve窗格中點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，在懸浮菜單中左鍵點(diǎn)擊Vamk以顯示垂直游標(biāo)線，拖動(dòng)icak將顯示與曲線交點(diǎn)的坐標(biāo)如果需要計(jì)算曲線上兩點(diǎn)之間的距離，可以通過設(shè)置參考點(diǎn)來實(shí)現(xiàn)，在Curve窗格中標(biāo)記Vrticalrk后，點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，在懸浮菜單中選擇Setverticalmereferenceo拖動(dòng)鼠標(biāo)移動(dòng)rck到需要對(duì)比的位置，顯示框中將顯示這兩點(diǎn)之間的距離，這為了方便比較，可以點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，在懸浮菜單中選擇G功能，Curve窗格中出現(xiàn)橫豎參mCurve窗格中點(diǎn)擊右鍵C在中點(diǎn)擊峰積分按鈕，進(jìn)行積分處或者Integrate下拉菜單中點(diǎn)擊PeakIntegrate進(jìn)行積分選擇需要積分的曲線以及積分 位置，基線類型默認(rèn)為Cacuate在積分窗口中點(diǎn)擊PeakdRejectPeaks寬、峰面積、峰個(gè)數(shù)等，在這里最常用的是在Peakareaislessthan輸入需要顯示的最大峰的個(gè)數(shù)，點(diǎn)擊OK確定在Columnhg(bedh)一欄中輸入柱床高度，在柱效測(cè)定中此項(xiàng)點(diǎn)擊積分SaveanddPeakTble按鈕，可以對(duì)峰進(jìn)行及命名等操作，編輯后按OK確認(rèn)然后點(diǎn)擊積分窗口中的OK，查看積分結(jié)果如果默認(rèn)基線不理想，可以對(duì)基線進(jìn)行調(diào)節(jié)，點(diǎn)擊菜單欄中Integrate按鈕，選擇Editsene在適當(dāng)?shù)奈恢命c(diǎn)擊左鍵設(shè)置新的基線參考點(diǎn)并拖動(dòng)，直至基線到達(dá)合適的位置，點(diǎn)擊確em在epeaktblco框中找到需要顯示的數(shù)據(jù)，如percentoftotalpeakarea、pt（P）、Asymmtry等，如需對(duì)峰用陰影填充，選擇Fillpeaks選框，并選擇填充陰影類型和顏色（Color），點(diǎn)擊OK執(zhí)行如果想將層析結(jié)果以報(bào)告的形式打印或輸出出來，請(qǐng)?jiān)谥悬c(diǎn)擊報(bào)告按選擇合適的報(bào)告模板，單擊rviw也可以點(diǎn)擊i，在彈出的自定義窗口中通過中的功能按鈕，編輯文字、、圖譜將顯示的報(bào)告打印出來即可，點(diǎn)擊右邊的Exit退出報(bào)告FileOpentoCompare，點(diǎn)Curves在FileOpentoCompare點(diǎn)擊Browse點(diǎn)擊命令eTileAlloraCurveAddFileOpenChromatograms，將其中一個(gè)點(diǎn)擊菜單欄中FileOpentoCompareCurves點(diǎn)擊菜單pro>出現(xiàn)以下框后，在左邊和中間Sourcerandcurve框中分別選中兩條 位置，單擊OK圖中將出現(xiàn)疊加后的曲線，疊加曲線的后綴為先將兩條曲線打開，點(diǎn)擊Opration>Subtract出現(xiàn)以下框后，在Sourcechromatogramandcurve框中分別選中兩條需要相減的曲線，輸入相減后曲線的名稱選擇位置，單擊OK物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的吸光度比值往往可以作為鑒別物質(zhì)的法，UNICORN中可以通過兩條曲線相除來實(shí)現(xiàn)這能，先將兩條曲線打開，點(diǎn)擊prai>Dd出現(xiàn)以下框后，在Sourcechromatogramandcurve框中分別選中兩條需要相除的曲線，輸入相除后的曲線名稱，選擇位置序號(hào)，單擊OK音、緩沖液不干凈等等。如需對(duì)色譜圖進(jìn)行去除噪音處理，消除一些小雜峰，可點(diǎn)擊raio>Smooth出現(xiàn)以下框后在左邊的Sourcechromatogramandcurve框中選中需要處理的曲線，然后在Filtertype下選中平滑處理的方式，拖動(dòng)Lght與Hard之間的滑塊選擇一個(gè)合適的平滑度，單擊OK在曲線比較時(shí)經(jīng)常會(huì)遇到將某條曲線左右或上下移動(dòng)，選擇ptn>hftSourcechromatogramandcurvehiftretentionfpud況下，選擇eai>DifferentiateSourcechromatogramandcurve（Firstorder），點(diǎn)擊OK色譜圖中將出現(xiàn)一階求導(dǎo)的曲線，曲線后綴為dt，o如需將蛋白活性分析的結(jié)果數(shù)據(jù)（ELISA）UV曲線中峰進(jìn)行對(duì)照，點(diǎn)擊etn>vtHtr出現(xiàn)以下框，需要將每管的活性值輸入到相對(duì)應(yīng)的活性（y）框中，點(diǎn)rain>ooltpri>FractionPathngth欄中輸入紫外檢測(cè)池的光徑，并在Ext.coef.欄輸入組分的消光系數(shù)，此時(shí)Conc.欄將會(huì)顯示合并組分的蛋白濃度，m欄將顯示合并蛋白的總量prain>點(diǎn)擊OK如需將分析結(jié)果的從軟件中導(dǎo)出到Office中，在曲線窗口中點(diǎn)擊右鍵，選擇Copytoo在Offce文檔 編輯軟件中執(zhí)行粘貼命令就可以將曲 到相應(yīng)的文檔如需將分析結(jié)果以形式導(dǎo)出，可在曲線窗口中點(diǎn)擊右鍵，選擇Copytotafe選擇路徑以及格式進(jìn)行保FileExportToUNICORNEntireRsut選擇保存的位置，點(diǎn)擊Save如只需導(dǎo)出色譜結(jié)果中的部分曲線數(shù)據(jù)，可在File下拉菜單中選擇ExportToUNICORN>Curves在彈出的窗口中選擇需要導(dǎo)出的數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊ct再次勾選要導(dǎo)出的曲線，點(diǎn)擊選擇數(shù) 路徑、文件名，點(diǎn)擊Save導(dǎo)使用脫鹽柱對(duì)牛白蛋白進(jìn)行緩沖液置層析柱：5mlHitrapdainco1緩沖液:20mMTris-HCl其余溶液：去離子水；20%乙醇水溶液實(shí)驗(yàn)耗材：5ml，1ml15m待分離蛋白樣品：牛白蛋白?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時(shí)，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（C將緩沖液管A1插入到去離子水中，在ystmControl窗口選擇u>ExecutennantuioPumpsPumpAwashA1，點(diǎn)擊Execute，AarmsAlarmpreomprsue根據(jù)所使用柱子Highrm如選擇0.3MPaInsert。Fpath命令組中選擇ColumnpsPo拉框中選擇柱子FowDirectionDownflow或者是Upfow，點(diǎn)擊Insertsf0.51mmInsert頭，將下端接到柱位閥的2B口上。擰緊上接頭，將流速調(diào)整為2ml/mn，對(duì)層析柱進(jìn)行平衡至少1個(gè)柱體積。平衡完畢后，單擊Pause暫停到上樣閥的Syr口上，推入緩沖液以樣品環(huán)，可重復(fù)幾次泵沖洗：操作同.1..2tF流速2m/nInsert,然后Excute執(zhí)行。nanrto窗口中，選擇Fpath>ntoav，上樣閥選擇Inject態(tài)，點(diǎn)Insertnanrto窗口中，選擇Fopath>ule，選擇出口閥位Fracanstructon窗口中，選擇FractioncotFtntn，設(shè)置Fractionsize1，InsertMnntrtoPumpsSystemflow,Fow5m，點(diǎn)擊Insert在uasro窗口中，點(diǎn)Saveslas點(diǎn)擊Execute 中的End，停止實(shí)切換到vato窗口中，選擇保存的使用脫鹽柱對(duì)牛白蛋白進(jìn)行緩沖液置換scouting命令進(jìn)行層析柱：5mlHitrapdainco1緩沖液 20mMNaAcpH其余溶液：去離子水；20%乙醇水溶液實(shí)驗(yàn)耗材：5ml，1ml15m待分離蛋白樣品：牛白蛋白?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時(shí)，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（C將緩沖液管A1插入到去離子水中，在ytControl窗口選擇Mu>ExecutenInstructionsnantuioPumpsPumpAwashA1，點(diǎn)擊Execute，AmAarmpreompesue根據(jù)所使用柱子的耐受Highlarm，如選擇0.3MPaInsert。Fpath命令組中選擇ColumnpsPo拉框中選擇柱子FowDirectionDownflow或者是Upfow，點(diǎn)擊InsertPumpsSystemfForate0.51mmInsert頭，將下端接到柱位閥的2B口上。擰緊上接頭，將流速調(diào)整為2ml/mn，對(duì)層析柱進(jìn)行平衡至少1個(gè)柱體積。平衡完畢后，單擊Pause暫停連接superLoopF0ml打入proEdt在彈出的界面中點(diǎn)擊Methodett在Cmtype中選擇Htrapsatg，柱位選擇2號(hào)柱位，流速選擇m/mn.點(diǎn)擊Equillibration，設(shè)置平衡體積，如設(shè)置2個(gè)主體積lppiLooptypesuperloop50ml、sampevoumeml、asoutletvave6)點(diǎn)擊o進(jìn)入洗脫階段，洗脫體積設(shè)置1.50，收集方式設(shè)置固定體積收集，每管收.5ml。點(diǎn)擊methodto中的scouting功能健 在彈出的界面中選擇Emptyoopwth，點(diǎn)擊OK進(jìn)入設(shè)置界面。srunEmptyowth中選擇需要上的體積數(shù)如0.5、1.0、.5ml等，點(diǎn)擊OK點(diǎn)擊Filesavesave3.運(yùn)行方法start運(yùn)行方法。

在yeo界面中點(diǎn)擊methodvt找到所編的方法，點(diǎn).2.3.8切換到vato窗口中，選擇保存的2.系統(tǒng)與層析柱的與保程序運(yùn)行結(jié)束后需要手動(dòng)系統(tǒng)和層析柱并保存將二者保存在20%乙醇中將緩沖液A1的放入去離子水中，進(jìn)行泵（見2.2.3），待泵結(jié)束后，用去離子水柱子：在utcto窗口中，選擇Pump>Systemfo設(shè)置Fowrate5ml/minInsertanntrtoAaAarmprecoumnpressure，設(shè)置Highaarm為.3MPaInsert。nasrcioFowpathColumnonPosition2Downfow，點(diǎn)擊將緩沖液A1的放入經(jīng)脫氣的20%乙醇水溶液中，進(jìn)行泵（見5ml/mn20%在SystemControlEnd，在任一UNICORN6FileExitUNICORN?KTAavant學(xué)會(huì)使用MethoddtHiscreenCapto緩沖液A:20mMNaAc,pH緩沖液B:20mMNaAc,1MNaC,pH其余溶液：去離子水；20%乙醇水溶液實(shí)驗(yàn)耗材：5ml注射器，ml，15ml?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時(shí)，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（C將緩沖液管A1B1均插入到去離子水當(dāng)中，在UNICORN6軟件的eControl界面選擇nuExecuteaInstructionsaunri窗口中，選擇PumpsPumpAwashInletA為ntB1點(diǎn)擊Insert；選擇Execute進(jìn)行泵AarmsAarmpreoupesue根據(jù)所使用柱子的耐受壓設(shè)置Higham，如選擇.a，點(diǎn)擊Insert。點(diǎn)擊Execute后將執(zhí)行插Fpath命令組中選擇ColumnpsPo下拉框中選擇柱子FowDirectionDownflow或者是Upfow，點(diǎn)擊InsertPumpsSystemfow,orate0.51mmInsert端堵頭，將下端接到柱位閥的2B口上。m平衡完畢后，單擊Pause暫停到上樣閥的Syr口上，推入緩沖液以樣品環(huán)，可重復(fù)幾次UNICORN6MethoddtCreateanewmethod圖標(biāo)在跳出的NewMethod框中PredefinedMethod下選擇AnionExchangeChromatographyI)點(diǎn)擊OKMethodsettings選擇層析柱類型、柱前壓力、柱位、點(diǎn)擊ulto進(jìn)入平衡階段設(shè)置，平衡流速、緩沖液不變，平衡時(shí)緩沖液B所占的比例為0%，輸入平衡體積5CVSlpca進(jìn)入上樣階段設(shè)置，仍然使用方法設(shè)置流速1/naa，typeCapiaryop輸入清空樣品環(huán)的體積1.5m。ColumnashB0%，沖洗的溶液體積為3CV點(diǎn)擊t 進(jìn)入洗脫設(shè)置，保持洗脫流速、緩沖液以及緩沖液流向不15CVB100%，采用收集器進(jìn)行固定體積收集，每管收集3ml.點(diǎn)擊ColumnWash再生，沖洗體積為5CV點(diǎn)擊ulto進(jìn)入層析柱再平衡階段設(shè)置，此階段目的是將層析柱中的緩沖液置換為平衡緩沖液。設(shè)置平衡體積為5CV點(diǎn)擊上保存按 o方法IEXdemo在跳出的框中再次確認(rèn)結(jié)果保存的位置及結(jié)果名稱，點(diǎn)擊Start開始運(yùn)切換到vato 將緩沖液A1，B1的放入經(jīng)脫氣的去離子水中，分別進(jìn)行泵（待泵結(jié)束后，用去離子水柱子：在nanro窗口中，選PumpSystemfwFowrate3mm在ausrto窗口中，選擇AaAarmprecoumnpressure，Higha為.3MPaInsertExecutenasrcioFowpathColumnonPosition1Downfow，點(diǎn)擊將緩沖液A1 放入經(jīng)脫氣的20%乙醇水溶液中，進(jìn)行 （見3ml/mn20%在SystemControlEnd，在任一UNICORN6FileExitUNICORN?KTAavantDOE實(shí)對(duì)細(xì)胞色素C，溶菌酶，BSA進(jìn)行分離MethoddtDOE緩沖母液1.5M24.C，甲酸Q2:0.MQ3:水緩沖母液44M其余溶液：去離子水；0.1MNaOH；20%乙醇水溶液C、溶菌酶、BSA1mg/ml?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時(shí)，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（CQ1Q4Q1Q4UNICORN6SystemControlMuaExecutemanual在跳出的uti窗口中，選擇PumpsandpressuresPumpwash，選擇rroinlets為Al，Insert，選ExecuteanntrtoAaAarmprecoumnpressure，設(shè)置Highaarm為.5MPa*sert注*Highar0.3MPaFowhpvavRestrictor設(shè)置成Off-line裝態(tài)在aanstructons窗口中，選擇FpathColumnpostion,按連接Po1,Insert將A1進(jìn)液口管放入去離子水中在auntci窗口中，選擇Pumpsandrsur>msInletAA1InsertExecuteMnntrtoPumpsSystemflow,Fow2m，點(diǎn)擊InsertExecute1APEEK層析柱出口連接到柱位閥的1B口上擰緊上接頭，待用水沖洗一個(gè)柱體積后，單擊Pause暫停液，連接到上樣閥的Syr口上，推入緩沖液以樣品環(huán)。mUNICORN6MethoddtCreateanewmethod圖標(biāo)在跳出的NewMt框中PredefinedMethod下選擇CationExchangeChromatography(CIEX)，點(diǎn)擊OKtnRut選擇ColumntypeHiscreenCaptoS，oupostion1，激活紫外檢測(cè)UV2，設(shè)置為528nm。使用BufferproCIEX-mix0-MNaCl-(pH2-7,PD).點(diǎn)擊ulto進(jìn)入平衡階段設(shè)置，平衡流速、緩沖液不變，平衡時(shí)緩沖液B所占的比例為0%，輸入平衡體積10CV,將選項(xiàng)前的“∨”去掉。Slpca1/nu，typepro，5l輸入清空樣品環(huán)的體積2ml，出口選擇inwsteColumnashB0%，沖洗的溶液體積為3CV點(diǎn)擊u進(jìn)入洗脫設(shè)置，保持洗脫流速、緩沖液不變，選擇緩沖液流向Upfow，反向洗脫有利于得到高濃度的樣品點(diǎn)擊ColumnWsh進(jìn)入層析 階段設(shè)點(diǎn)擊ulao進(jìn)入層析柱再平衡階段設(shè)置，設(shè)置平衡體積為2個(gè)彈出如下界面，在Responses界面點(diǎn)擊Add點(diǎn) ，進(jìn)入?yún)?shù)及水平設(shè)置界面，再點(diǎn)擊add，開始設(shè)置選擇Flowvlocty，OKFoveocty然后再進(jìn)行高低值的設(shè)置，高值（Highvue）輸