aktaavant應用操作培訓

???????JH ??4;:; ?????1 ????? в433?? ????63??? ???????? ?JH???????4;<9 ?JHKhdowkfduhOlihVflhqfhv ??? ??? ?????????????????????????????????????????????????????οΥ??????????????????? ? 303<4; ?й?? 前 UNICORN?6軟件的使用介 開 新建用 結果處 手動命 方法編 實驗目 實驗材 實驗準 方法編 運行實 DOE實 實驗目 實驗材 實驗準 方法編 運行實 結果處 與..............................................................................................................................................附 PH流路 本是為不熟悉UNICORN?6軟件和?KTAavant新裝機用戶培訓而編寫，您可以在本中學到UNICORN6控制軟件的基礎知識以及如何通過UNICORN6來控制?KTAavant系統(tǒng)。掌握?KTAavantUNICORN?6DOEDOEUNICORN?6軟件的使用e腦桌面上的UNICORN6圖標打開軟件。（ystem如果sControl窗口沒有自動彈出，在dsrt窗口中可任意打開所需窗口中Toos>ystmControl打開，也點擊MethodEdtor和Elao進入SystemControl窗口，點擊Connecttoystems，在彈出的框中選中已連接的系統(tǒng)名稱，點擊OK確認連接。在Atato窗口中選UNICORNUser在跳出的框中選擇New，在右側UserProperties一欄中輸入用戶名、職位、E-mlAdmnistrationAccessGroupsandNetworkUsers，在彈出的窗在右側指定該用戶組能夠打開的操作窗口、能夠控制的硬件設備以及文件位置，點OK存設修改；如果需要對系統(tǒng)默認參數(shù)進行修改，可以進入SystemControl窗口，在ett在彈出的框中設置各種開機默認參數(shù)，譬如參數(shù)以及檢測器參數(shù)。如果更換了系統(tǒng)標配的管線，需要重新測量檢測器之后的延遲體積，并把這積輸入到Dlayvoume輸入框中，點擊OK保存并退出如果需要對各種檢測器（pH、電導、壓力）SystemControltpH校pHootobrpH，點擊下邊的Prepareforlbt并在pHforbuffer1一欄中輸入標準1的pH使用注射器向pH閥中注入約10mlpH標準液1，待Currentu讀數(shù)穩(wěn)定后點擊ae，然后向pH閥中注入去離子水對其進行。在pHforbuffer2一欄中輸入標2pH值，使用注射pH閥中注入10mlpH標準2Currentvalue讀數(shù)穩(wěn)定后點擊lropymt反應了電極的狀態(tài)，如果o80mr在±60mV范圍內，則電極狀態(tài)良好，否則需要對電極進行或更換。如果發(fā)現(xiàn)層析系統(tǒng)的壓力檢測確（譬如在沒有流速的情況下仍然顯示有一定的壓力），需要對壓力感受器進行校正，在Mttoat下拉框中選擇y點擊Resetpressure對壓力進Mnualn命令為了完整保存手動命令運行結果，在nasc界面中選擇Saversut后的Browse泵點擊pumpwash，選擇不同的即可進行泵點擊swash，選擇的體積，并且選擇合適的出口如outletvave或njectionv點擊ouos根據(jù)需要選擇合適的柱位閥，可選擇從柱位1到柱位5根據(jù)需要inletAnt的進液A1-A8B1-pH選點擊linlet根據(jù)需要可選擇從BufferS78種進口ntvaue0%的輸入框中，將octvau100%Cond%Fowpath組中將出口Oav位置WFracFractioncoction命令組中的手動收集命令Fractionation中設置每管收集的體積（或時間）Fractionsize，點擊Execute執(zhí)行當收集的樣品還沒有達到設定的體積，而需要換到下一管時，可以執(zhí)行Feed當需要停止收集時，執(zhí)行Stopfractionation命令，點擊Execute首先需要設定峰的判斷標準，在Peakfractionationme命令中選擇Snasource為UV1（或者其它），Mode選擇為L（或者oe），在Startlevel輸入框中Peakfractionation命令中輸入Fractionsize，點擊Insert，后點需要停止峰收集的時候執(zhí)行StoppeakoFracste10大體積收集。在FractioncFractionationinoutletav命令中選擇Startn，并輸入收集的組分數(shù)以及每個組分的收集體積，點擊Execute執(zhí)行A、B泵相互配合來實現(xiàn)。在Pumps命令組中的Gradint中輸入目標洗脫緩沖液的比例，如Length0n的比例立即達到設定值；如果需要線性梯度洗脫，在LengthWatchre這一設置的前提是在方法編程中使用了ttlessthantabepHOtherSetmark如果希望系統(tǒng)過一段時間或者體積后能自動暫?；蛲Ｖ梗梢允褂肙ther>Timer命令，選擇判斷標準為時間或者體積，在輸入框中輸入數(shù)值，選擇后續(xù)的操作為Pause或End，點擊Execute執(zhí)行SystemControl界面中中在層析實驗過程中可以通過點擊中的Pause按鈕讓系統(tǒng)暫點擊Continueld，系統(tǒng)將維持現(xiàn)有狀態(tài)運行，直至點擊Continue后繼續(xù)運行后續(xù)程序點擊中的定制按在彈出的定制選項欄中選在運行數(shù)據(jù)項，可以選擇在sco線在X軸選項卡中設置X軸是以體積還是時間為顯示單位以及固定X軸顯 還是可變X軸范圍在層析過程中，我們可以隨時通過框選圖譜的某一部分放大圖譜，以便，如果需要恢復到原來的狀態(tài)，可以點擊右鍵后在懸浮框中選擇UndoZoom或者Reset如果需要查看曲線上的某一點的坐標值，可以后選擇VcMarkr，圖譜中將會出現(xiàn)一條垂直的，鼠標按住Mark進行拖動，在顯示框中顯示的就是曲線上點的坐標值，鼠標點擊曲線窗口上部的圖例，就會顯示相應曲線上的坐標Copytooa可以將現(xiàn)有圖譜拷貝到剪切板上，進而可以粘貼到word等文檔中MethoddoMethodtUNICORN6s選擇Methoddt打在中點擊Createanewmethod，啟動方法編在fMethod下拉框中選擇層析實驗的類型根據(jù)原理包括：親和層析、陰陽離子CationExchangeChromatographyCIEX)，PredefinedPhasesMethodttingscoumntype，選擇實驗所用的層析柱HiTrapSPFF,1m您可以選擇Any；或者將層析柱的信息先輸入到系統(tǒng)中去，輸入層析柱信息需要在任意UNICORN6窗口中選擇ColumnHandlng在彈出的柱列表中，點擊New新建一個信息輸入信息后點擊Saveas，輸入名稱后點擊OK保存點擊ulbt進入平衡階段設置，輸入平衡時緩沖液B所占的（0%，B點擊ampeAplto進入上樣階段設置，選擇上樣的方式，如果是采用手動上樣（樣品環(huán)或者Superp），若采用ia上樣請輸入清空樣品環(huán)的體積（該體積如果比樣品環(huán)的，則輸入的體積就是pro上樣，需要設置上樣的體收集或者用組分收集器收集。點擊uoutletve，選擇Fxdomotn，選擇出口閥起始位置，輸入每管收集的體積收集方式也可選擇PeakrtoaoFoutlet兩種方點擊ColumnWash前的“∨”去掉，選擇其它緩沖液的。iwaste（donot點擊u進入洗脫設置，首先選擇洗脫的流速、緩沖液以及緩沖洗脫方式有兩種，Isocraticeuton洗脫方式只使用一種緩沖液洗脫，通常用于凝膠過濾層析。設置收集體積為1.5CV，使用0%B液，使用Fractioncollector進行峰收集（也可以如前所述進行自由設置），可以通過勾選Startfractionationafter0.3CV從洗脫開線性梯度的洗脫方式適用于各種吸附性層析的洗脫條件摸索。使用線性梯度方式洗脫，需要輸入開始及結束時緩沖液B的比例以及在多少個柱床體積內B逐漸達到目標AddmTypeStep，輸Target%B20Length5CV進行第一步階段洗脫AddSegmentTyper，TargetB以及Length20CV，點擊ColumnWash進入柱沖洗階段設置，此階段目的是對層析柱進行點擊Equira進入層析柱再平衡階段設置，此階段目的是將層析柱Scouting功能可以實現(xiàn)方便快速的條件摸索，點擊上Scouting按點擊InsertRun添加實驗，輸入各變量的參數(shù)值，點擊OK確認，系統(tǒng)將會按照設定的參選擇中的Start完成所有設置后點擊中的保存按選擇保存的路徑，輸入方法名稱后1.4.4運行方如要運行已創(chuàng)建的方法yControlMethodvgt中選擇方法，右鍵點Run在跳Startro中確認設置的項目，點擊Start開始運點擊任務欄中的atin，進入結果處如果任務欄中沒有Eato窗口，可以在任意已打開的UNICORN6窗口中點擊os選擇Evauaion打開vuto窗口中點擊OpenRsutsvgator打開Rsuts文件EvaluationFileOpenChromatogramsChrom1，OK還可以通過單擊“最近的運行(Rn )”選項，找到需要分析的層析結果雙擊打正常打開的結果如下在Curve窗格點擊鼠標右鍵，點擊菜單中的tCurvetyandor，就可以對如需對Y軸顯示區(qū)間進行更改，點擊Y-Axs選項卡。在左Slectcurvetomodfyascalefor框中選中需要更改的曲線，點擊Fxd，并在框中填入i和Max值；如需在色譜曲線右側也顯示另外一條色譜曲線的Y軸左邊，在Right下拉菜單中選中所定義的曲線。點擊Ok即完成曲線顯示區(qū)間自定義如果需要對X軸顯示類型和顯示范圍進行自定義，點擊X-Axs選項卡。選擇X軸類型Te、VoumeColumnoe，如需固定X軸顯示區(qū)間，在Ascale復選框中選定Fxd并填寫Min和Max數(shù)值；如果需要在上樣后X軸自動歸零，則需要在Adustretentionzerotoetb選框中打鉤擊右鍵后選擇UndoZoom或ResetZoomVtcmr在Curve窗格中點擊鼠標右鍵，在懸浮菜單中左鍵點擊Vamk以顯示垂直游標線，拖動icak將顯示與曲線交點的坐標如果需要計算曲線上兩點之間的距離，可以通過設置參考點來實現(xiàn)，在Curve窗格中標記Vrticalrk后，點擊鼠標右鍵，在懸浮菜單中選擇Setverticalmereferenceo拖動鼠標移動rck到需要對比的位置，顯示框中將顯示這兩點之間的距離，這為了方便比較，可以點擊鼠標右鍵，在懸浮菜單中選擇G功能，Curve窗格中出現(xiàn)橫豎參mCurve窗格中點擊右鍵C在中點擊峰積分按鈕，進行積分處或者Integrate下拉菜單中點擊PeakIntegrate進行積分選擇需要積分的曲線以及積分 位置，基線類型默認為Cacuate在積分窗口中點擊PeakdRejectPeaks寬、峰面積、峰個數(shù)等，在這里最常用的是在Peakareaislessthan輸入需要顯示的最大峰的個數(shù)，點擊OK確定在Columnhg(bedh)一欄中輸入柱床高度，在柱效測定中此項點擊積分SaveanddPeakTble按鈕，可以對峰進行及命名等操作，編輯后按OK確認然后點擊積分窗口中的OK，查看積分結果如果默認基線不理想，可以對基線進行調節(jié)，點擊菜單欄中Integrate按鈕，選擇Editsene在適當?shù)奈恢命c擊左鍵設置新的基線參考點并拖動，直至基線到達合適的位置，點擊確em在epeaktblco框中找到需要顯示的數(shù)據(jù)，如percentoftotalpeakarea、pt（P）、Asymmtry等，如需對峰用陰影填充，選擇Fillpeaks選框，并選擇填充陰影類型和顏色（Color），點擊OK執(zhí)行如果想將層析結果以報告的形式打印或輸出出來，請在中點擊報告按選擇合適的報告模板，單擊rviw也可以點擊i，在彈出的自定義窗口中通過中的功能按鈕，編輯文字、、圖譜將顯示的報告打印出來即可，點擊右邊的Exit退出報告FileOpentoCompare，點Curves在FileOpentoCompare點擊Browse點擊命令eTileAlloraCurveAddFileOpenChromatograms，將其中一個點擊菜單欄中FileOpentoCompareCurves點擊菜單pro>出現(xiàn)以下框后，在左邊和中間Sourcerandcurve框中分別選中兩條 位置，單擊OK圖中將出現(xiàn)疊加后的曲線，疊加曲線的后綴為先將兩條曲線打開，點擊Opration>Subtract出現(xiàn)以下框后，在Sourcechromatogramandcurve框中分別選中兩條需要相減的曲線，輸入相減后曲線的名稱選擇位置，單擊OK物質在不同波長下的吸光度比值往往可以作為鑒別物質的法，UNICORN中可以通過兩條曲線相除來實現(xiàn)這能，先將兩條曲線打開，點擊prai>Dd出現(xiàn)以下框后，在Sourcechromatogramandcurve框中分別選中兩條需要相除的曲線，輸入相除后的曲線名稱，選擇位置序號，單擊OK音、緩沖液不干凈等等。如需對色譜圖進行去除噪音處理，消除一些小雜峰，可點擊raio>Smooth出現(xiàn)以下框后在左邊的Sourcechromatogramandcurve框中選中需要處理的曲線，然后在Filtertype下選中平滑處理的方式，拖動Lght與Hard之間的滑塊選擇一個合適的平滑度，單擊OK在曲線比較時經(jīng)常會遇到將某條曲線左右或上下移動，選擇ptn>hftSourcechromatogramandcurvehiftretentionfpud況下，選擇eai>DifferentiateSourcechromatogramandcurve（Firstorder），點擊OK色譜圖中將出現(xiàn)一階求導的曲線，曲線后綴為dt，o如需將蛋白活性分析的結果數(shù)據(jù)（ELISA）UV曲線中峰進行對照，點擊etn>vtHtr出現(xiàn)以下框，需要將每管的活性值輸入到相對應的活性（y）框中，點rain>ooltpri>FractionPathngth欄中輸入紫外檢測池的光徑，并在Ext.coef.欄輸入組分的消光系數(shù)，此時Conc.欄將會顯示合并組分的蛋白濃度，m欄將顯示合并蛋白的總量prain>點擊OK如需將分析結果的從軟件中導出到Office中，在曲線窗口中點擊右鍵，選擇Copytoo在Offce文檔 編輯軟件中執(zhí)行粘貼命令就可以將曲 到相應的文檔如需將分析結果以形式導出，可在曲線窗口中點擊右鍵，選擇Copytotafe選擇路徑以及格式進行保FileExportToUNICORNEntireRsut選擇保存的位置，點擊Save如只需導出色譜結果中的部分曲線數(shù)據(jù)，可在File下拉菜單中選擇ExportToUNICORN>Curves在彈出的窗口中選擇需要導出的數(shù)據(jù)，點擊ct再次勾選要導出的曲線，點擊選擇數(shù) 路徑、文件名，點擊Save導使用脫鹽柱對牛白蛋白進行緩沖液置層析柱：5mlHitrapdainco1緩沖液:20mMTris-HCl其余溶液：去離子水；20%乙醇水溶液實驗耗材：5ml，1ml15m待分離蛋白樣品：牛白蛋白?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（C將緩沖液管A1插入到去離子水中，在ystmControl窗口選擇u>ExecutennantuioPumpsPumpAwashA1，點擊Execute，AarmsAlarmpreomprsue根據(jù)所使用柱子Highrm如選擇0.3MPaInsert。Fpath命令組中選擇ColumnpsPo拉框中選擇柱子FowDirectionDownflow或者是Upfow，點擊Insertsf0.51mmInsert頭，將下端接到柱位閥的2B口上。擰緊上接頭，將流速調整為2ml/mn，對層析柱進行平衡至少1個柱體積。平衡完畢后，單擊Pause暫停到上樣閥的Syr口上，推入緩沖液以樣品環(huán)，可重復幾次泵沖洗：操作同.1..2tF流速2m/nInsert,然后Excute執(zhí)行。nanrto窗口中，選擇Fpath>ntoav，上樣閥選擇Inject態(tài)，點Insertnanrto窗口中，選擇Fopath>ule，選擇出口閥位Fracanstructon窗口中，選擇FractioncotFtntn，設置Fractionsize1，InsertMnntrtoPumpsSystemflow,Fow5m，點擊Insert在uasro窗口中，點Saveslas點擊Execute 中的End，停止實切換到vato窗口中，選擇保存的使用脫鹽柱對牛白蛋白進行緩沖液置換scouting命令進行層析柱：5mlHitrapdainco1緩沖液 20mMNaAcpH其余溶液：去離子水；20%乙醇水溶液實驗耗材：5ml，1ml15m待分離蛋白樣品：牛白蛋白?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（C將緩沖液管A1插入到去離子水中，在ytControl窗口選擇Mu>ExecutenInstructionsnantuioPumpsPumpAwashA1，點擊Execute，AmAarmpreompesue根據(jù)所使用柱子的耐受Highlarm，如選擇0.3MPaInsert。Fpath命令組中選擇ColumnpsPo拉框中選擇柱子FowDirectionDownflow或者是Upfow，點擊InsertPumpsSystemfForate0.51mmInsert頭，將下端接到柱位閥的2B口上。擰緊上接頭，將流速調整為2ml/mn，對層析柱進行平衡至少1個柱體積。平衡完畢后，單擊Pause暫停連接superLoopF0ml打入proEdt在彈出的界面中點擊Methodett在Cmtype中選擇Htrapsatg，柱位選擇2號柱位，流速選擇m/mn.點擊Equillibration，設置平衡體積，如設置2個主體積lppiLooptypesuperloop50ml、sampevoumeml、asoutletvave6)點擊o進入洗脫階段，洗脫體積設置1.50，收集方式設置固定體積收集，每管收.5ml。點擊methodto中的scouting功能健 在彈出的界面中選擇Emptyoopwth，點擊OK進入設置界面。srunEmptyowth中選擇需要上的體積數(shù)如0.5、1.0、.5ml等，點擊OK點擊Filesavesave3.運行方法start運行方法。

在yeo界面中點擊methodvt找到所編的方法，點.2.3.8切換到vato窗口中，選擇保存的2.系統(tǒng)與層析柱的與保程序運行結束后需要手動系統(tǒng)和層析柱并保存將二者保存在20%乙醇中將緩沖液A1的放入去離子水中，進行泵（見2.2.3），待泵結束后，用去離子水柱子：在utcto窗口中，選擇Pump>Systemfo設置Fowrate5ml/minInsertanntrtoAaAarmprecoumnpressure，設置Highaarm為.3MPaInsert。nasrcioFowpathColumnonPosition2Downfow，點擊將緩沖液A1的放入經(jīng)脫氣的20%乙醇水溶液中，進行泵（見5ml/mn20%在SystemControlEnd，在任一UNICORN6FileExitUNICORN?KTAavant學會使用MethoddtHiscreenCapto緩沖液A:20mMNaAc,pH緩沖液B:20mMNaAc,1MNaC,pH其余溶液：去離子水；20%乙醇水溶液實驗耗材：5ml注射器，ml，15ml?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（C將緩沖液管A1B1均插入到去離子水當中，在UNICORN6軟件的eControl界面選擇nuExecuteaInstructionsaunri窗口中，選擇PumpsPumpAwashInletA為ntB1點擊Insert；選擇Execute進行泵AarmsAarmpreoupesue根據(jù)所使用柱子的耐受壓設置Higham，如選擇.a，點擊Insert。點擊Execute后將執(zhí)行插Fpath命令組中選擇ColumnpsPo下拉框中選擇柱子FowDirectionDownflow或者是Upfow，點擊InsertPumpsSystemfow,orate0.51mmInsert端堵頭，將下端接到柱位閥的2B口上。m平衡完畢后，單擊Pause暫停到上樣閥的Syr口上，推入緩沖液以樣品環(huán)，可重復幾次UNICORN6MethoddtCreateanewmethod圖標在跳出的NewMethod框中PredefinedMethod下選擇AnionExchangeChromatographyI)點擊OKMethodsettings選擇層析柱類型、柱前壓力、柱位、點擊ulto進入平衡階段設置，平衡流速、緩沖液不變，平衡時緩沖液B所占的比例為0%，輸入平衡體積5CVSlpca進入上樣階段設置，仍然使用方法設置流速1/naa，typeCapiaryop輸入清空樣品環(huán)的體積1.5m。ColumnashB0%，沖洗的溶液體積為3CV點擊t 進入洗脫設置，保持洗脫流速、緩沖液以及緩沖液流向不15CVB100%，采用收集器進行固定體積收集，每管收集3ml.點擊ColumnWash再生，沖洗體積為5CV點擊ulto進入層析柱再平衡階段設置，此階段目的是將層析柱中的緩沖液置換為平衡緩沖液。設置平衡體積為5CV點擊上保存按 o方法IEXdemo在跳出的框中再次確認結果保存的位置及結果名稱，點擊Start開始運切換到vato 將緩沖液A1，B1的放入經(jīng)脫氣的去離子水中，分別進行泵（待泵結束后，用去離子水柱子：在nanro窗口中，選PumpSystemfwFowrate3mm在ausrto窗口中，選擇AaAarmprecoumnpressure，Higha為.3MPaInsertExecutenasrcioFowpathColumnonPosition1Downfow，點擊將緩沖液A1 放入經(jīng)脫氣的20%乙醇水溶液中，進行 （見3ml/mn20%在SystemControlEnd，在任一UNICORN6FileExitUNICORN?KTAavantDOE實對細胞色素C，溶菌酶，BSA進行分離MethoddtDOE緩沖母液1.5M24.C，甲酸Q2:0.MQ3:水緩沖母液44M其余溶液：去離子水；0.1MNaOH；20%乙醇水溶液C、溶菌酶、BSA1mg/ml?KTAavantpower燈穩(wěn)定不再閃爍時，打開電腦，雙擊打開UNICORN6軟件（CQ1Q4Q1Q4UNICORN6SystemControlMuaExecutemanual在跳出的uti窗口中，選擇PumpsandpressuresPumpwash，選擇rroinlets為Al，Insert，選ExecuteanntrtoAaAarmprecoumnpressure，設置Highaarm為.5MPa*sert注*Highar0.3MPaFowhpvavRestrictor設置成Off-line裝態(tài)在aanstructons窗口中，選擇FpathColumnpostion,按連接Po1,Insert將A1進液口管放入去離子水中在auntci窗口中，選擇Pumpsandrsur>msInletAA1InsertExecuteMnntrtoPumpsSystemflow,Fow2m，點擊InsertExecute1APEEK層析柱出口連接到柱位閥的1B口上擰緊上接頭，待用水沖洗一個柱體積后，單擊Pause暫停液，連接到上樣閥的Syr口上，推入緩沖液以樣品環(huán)。mUNICORN6MethoddtCreateanewmethod圖標在跳出的NewMt框中PredefinedMethod下選擇CationExchangeChromatography(CIEX)，點擊OKtnRut選擇ColumntypeHiscreenCaptoS，oupostion1，激活紫外檢測UV2，設置為528nm。使用BufferproCIEX-mix0-MNaCl-(pH2-7,PD).點擊ulto進入平衡階段設置，平衡流速、緩沖液不變，平衡時緩沖液B所占的比例為0%，輸入平衡體積10CV,將選項前的“∨”去掉。Slpca1/nu，typepro，5l輸入清空樣品環(huán)的體積2ml，出口選擇inwsteColumnashB0%，沖洗的溶液體積為3CV點擊u進入洗脫設置，保持洗脫流速、緩沖液不變，選擇緩沖液流向Upfow，反向洗脫有利于得到高濃度的樣品點擊ColumnWsh進入層析 階段設點擊ulao進入層析柱再平衡階段設置，設置平衡體積為2個彈出如下界面，在Responses界面點擊Add點 ，進入?yún)?shù)及水平設置界面，再點擊add，開始設置選擇Flowvlocty，OKFoveocty然后再進行高低值的設置，高值（Highvue）輸