分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件

分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累優(yōu)秀精品課件文檔資料毒理學(xué)教研室徐德祥分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)一、問(wèn)題的提出和國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀信息技術(shù)教育是一項(xiàng)面向未來(lái)的現(xiàn)代化教育，它對(duì)于提高學(xué)生適應(yīng)信息社會(huì)的能力，全面推進(jìn)素質(zhì)教育具有十分重要的意義。信息技術(shù)課具有發(fā)展性、趣味性、綜合性、可操作性等特點(diǎn)，在網(wǎng)絡(luò)化的教學(xué)環(huán)境中，信息技術(shù)教學(xué)能夠滿(mǎn)足學(xué)生發(fā)展的需求。但是，我國(guó)的信息技術(shù)課程深受基礎(chǔ)學(xué)科中傳統(tǒng)班級(jí)授課制的影響，重視基礎(chǔ)知識(shí)和基本技術(shù)技能的學(xué)習(xí)和掌握，但使用傳統(tǒng)教學(xué)方式進(jìn)行信息技術(shù)教學(xué)卻難以適應(yīng)不同層次的學(xué)生的發(fā)展。校本課程是以學(xué)校為主體，自主開(kāi)發(fā)和發(fā)展的一門(mén)課程，是建立在學(xué)校和學(xué)生的差異性基礎(chǔ)上的，它以適應(yīng)不同學(xué)校的實(shí)際情況，滿(mǎn)足不同學(xué)生的個(gè)性發(fā)展需要為目的，照顧了學(xué)生的個(gè)別差異，滿(mǎn)足學(xué)生多樣化的需要。目前，國(guó)外非常重視信息技術(shù)教育，其信息技術(shù)的教學(xué)理念跟我們有較大的差異。如美國(guó)教師的信息技術(shù)課堂不是單純地強(qiáng)調(diào)學(xué)生獲取知識(shí)，而是注重培養(yǎng)學(xué)生獲取與整理信息的能力及自主學(xué)習(xí)的能力，突出學(xué)生在教學(xué)過(guò)程中的主體地位，尤其注重培養(yǎng)學(xué)生的信息素養(yǎng)而非技術(shù)素養(yǎng)。因此，我們提出了進(jìn)行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施研究的課題。二、研究的意義和研究?jī)r(jià)值進(jìn)行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施研究，其研究的意義主要表現(xiàn)在：1.體現(xiàn)“以人為本”的現(xiàn)代教育理念，凸顯學(xué)校教育“促進(jìn)學(xué)生發(fā)展”的特征。2.體現(xiàn)學(xué)生的主體性特征，凸顯信息技術(shù)教育對(duì)學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。開(kāi)展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施的研究，有利于信息技術(shù)課程三維目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)；有利于培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)、探究學(xué)習(xí)、合作學(xué)習(xí)的方法；有利于學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)；有利于促進(jìn)學(xué)生的全面發(fā)展。對(duì)于初中信息技術(shù)教學(xué)具有廣泛的實(shí)踐價(jià)值和推廣價(jià)值。三、研究的主要觀點(diǎn)和創(chuàng)新之處開(kāi)展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施的研究，把信息技術(shù)教學(xué)與學(xué)校的校園文化、班級(jí)文化，學(xué)生心理教育問(wèn)題、德育問(wèn)題、科技創(chuàng)新問(wèn)題，以及受社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題等進(jìn)行整合，把信息技術(shù)作為學(xué)生學(xué)習(xí)的工具，形成網(wǎng)絡(luò)化的信息技術(shù)校本課程，實(shí)現(xiàn)教材多媒體化、資源網(wǎng)絡(luò)化、教學(xué)個(gè)性化、學(xué)習(xí)自主化的創(chuàng)新，在信息技術(shù)教學(xué)中堅(jiān)持以人為本的教學(xué)策略，注重學(xué)生的發(fā)展，注重學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。四、研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和研究思路1.研究目標(biāo)。在信息技術(shù)教學(xué)中，以促進(jìn)學(xué)生發(fā)展為中心構(gòu)建初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程，將學(xué)生的發(fā)展和信息素養(yǎng)的培養(yǎng)作為信息技術(shù)教學(xué)的核心目標(biāo)。2.研究?jī)?nèi)容。以學(xué)生的全面發(fā)展為主線(xiàn)構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)化信息技術(shù)校本課程。（1）注重學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)，把校園文化、班級(jí)文化、社會(huì)實(shí)際生活與信息技術(shù)整合，構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)化信息技術(shù)校本課程。（2）以學(xué)生發(fā)展為主線(xiàn)，以培養(yǎng)學(xué)生的信息素養(yǎng)為核心，構(gòu)建能夠體現(xiàn)“自主、合作、探究”這一新課程理念的特色資源專(zhuān)題網(wǎng)站，以構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)化信息技術(shù)校本課程。3.研究思路。根據(jù)學(xué)生的發(fā)展特點(diǎn)，確定初中信息技術(shù)校本課程的三維目標(biāo)，根據(jù)學(xué)生的發(fā)展特點(diǎn)的進(jìn)行教學(xué)，使學(xué)生在信息技術(shù)教育教學(xué)中的情感得到提升，態(tài)度得到轉(zhuǎn)變，從而影響價(jià)值觀的形成。培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)的方法和獲取信息、整理信息的能力，促進(jìn)學(xué)生的全面發(fā)展。4.研究方法：行動(dòng)研究法五、初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與應(yīng)用的實(shí)踐近年來(lái)，我們組織信息技術(shù)教師根據(jù)初中信息技術(shù)教材特點(diǎn)，開(kāi)放了適合初中學(xué)生心理發(fā)展特點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)化課程資源。利用這些課程，一些年輕教師在省市的信息技術(shù)優(yōu)質(zhì)課評(píng)比中，獲得一、二等獎(jiǎng)。比較有影響力的研究成果有：對(duì)這些課程資源分析比較，發(fā)現(xiàn)有以下幾個(gè)特點(diǎn)：1.網(wǎng)絡(luò)化。各個(gè)課程資源均是以主題學(xué)習(xí)網(wǎng)站或網(wǎng)頁(yè)的形式出現(xiàn)，學(xué)生通過(guò)瀏覽網(wǎng)頁(yè)就可實(shí)現(xiàn)訪(fǎng)問(wèn)課程資源。2.興趣化。各個(gè)課程資源中集成了各種能夠激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣的內(nèi)容，如游戲、歌曲、視頻、動(dòng)畫(huà)等，比較容易幫助教師創(chuàng)設(shè)教學(xué)情境，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣。3.課程化。各個(gè)課程資源有較強(qiáng)的針對(duì)性，針對(duì)信息技術(shù)教材中的某一課或者某一個(gè)單元知識(shí)點(diǎn)開(kāi)發(fā)課程資源。通過(guò)學(xué)習(xí)網(wǎng)絡(luò)資源，學(xué)生能夠掌握課程標(biāo)準(zhǔn)所要求的知識(shí)點(diǎn)。4.易操作。根據(jù)主題學(xué)習(xí)網(wǎng)站的視頻教程或自主學(xué)習(xí)課程，學(xué)生比較容易實(shí)現(xiàn)自主學(xué)習(xí)、網(wǎng)絡(luò)學(xué)習(xí)、共享學(xué)習(xí)。5.交互性。利用課程資源網(wǎng)站中的聊天室、留言板，實(shí)現(xiàn)了人機(jī)、師生、生生的交互性。六、反思與展望在使用信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本資源的過(guò)程中，我們也發(fā)現(xiàn)了一些不足，比較集中的是開(kāi)發(fā)比較成熟的網(wǎng)絡(luò)化校本資源需要比較長(zhǎng)的時(shí)間，開(kāi)發(fā)出成熟的作品需要比較長(zhǎng)的周期，因此，需要多位信息技術(shù)教師通力合作，及早準(zhǔn)備，實(shí)現(xiàn)信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本資源的模塊化，縮短開(kāi)發(fā)時(shí)間。希望在不久的將來(lái)能夠開(kāi)發(fā)出整個(gè)初中信息技術(shù)全部課程的網(wǎng)絡(luò)化校本資源，實(shí)現(xiàn)初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)教學(xué)，能夠讓學(xué)生實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下的自主學(xué)習(xí)，發(fā)展個(gè)性，張揚(yáng)個(gè)性。注：本文是河北省教育科學(xué)研究“十二五”規(guī)劃2012年度專(zhuān)項(xiàng)課題《初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施研究》的研究成果【責(zé)編張景賢】音樂(lè)欣賞是音樂(lè)教學(xué)的重要組成部分，學(xué)生對(duì)音樂(lè)欣賞課的學(xué)習(xí)效果如何，取決于其對(duì)音樂(lè)作品思想內(nèi)容、音樂(lè)形象的感悟和理解。由于農(nóng)村學(xué)校的學(xué)生對(duì)音樂(lè)的感受能力比較差，因此，每次上欣賞課學(xué)生的注意力總是不集中。我深知初中學(xué)生正處于心理發(fā)展轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵時(shí)期，對(duì)外界的感受非常敏感，不能一味地批評(píng)和指責(zé)，相反，要利用好音樂(lè)欣賞課讓音樂(lè)的美感來(lái)感染學(xué)生、陶冶學(xué)生，從而使學(xué)生逐步形成健康的音樂(lè)審美能力。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，在教學(xué)中，我主要在以下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試，也取得了一些效果，愿與大家一起分享。一重視直觀教學(xué)，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)音樂(lè)的興趣記得一位著名的音樂(lè)教育家曾經(jīng)說(shuō)過(guò)這樣的話(huà)：“（教師要）激發(fā)學(xué)生對(duì)音樂(lè)的興趣，是把音樂(lè)的魅力傳遞給他們的必要條件。”這句話(huà)已經(jīng)被許多音樂(lè)教育者奉為至理名言。還有著名的科學(xué)家愛(ài)因斯坦曾說(shuō)過(guò)：“興趣是最好的老師?！睆倪@些名家的觀點(diǎn)中我們不難總結(jié)出如下結(jié)論：教師要努力激發(fā)學(xué)生對(duì)音樂(lè)的學(xué)習(xí)興趣，并培養(yǎng)學(xué)生的音樂(lè)修養(yǎng)，這對(duì)于健全學(xué)生的審美能力、提高學(xué)生的整體素質(zhì)都有著特殊的意義。因此，在上音樂(lè)課時(shí)，我先播放一些學(xué)生們感興趣的流行歌曲，然后再讓他們談一談這些歌曲好在哪里，學(xué)生們爭(zhēng)先恐后地說(shuō)出了自己的觀點(diǎn)，談的都非常好，這時(shí)我會(huì)告訴學(xué)生：“你們對(duì)音樂(lè)很有欣賞能力”，學(xué)生們很開(kāi)心，他們不知不覺(jué)地喜歡上欣賞課了。在我們的音樂(lè)欣賞課中，學(xué)生對(duì)音樂(lè)的認(rèn)識(shí)主要靠靈敏的聽(tīng)覺(jué)以及適當(dāng)?shù)南胂?。其?shí)，我們還要知道，視覺(jué)對(duì)音樂(lè)來(lái)說(shuō)也是一種很好的欣賞形式。在教學(xué)過(guò)程中，我們教師不妨可以考慮采取一些比較直觀的教學(xué)方法，或許能發(fā)揮學(xué)生多種感官的通覺(jué)作用呢！比如在教授一首民族樂(lè)曲《趕圩歸來(lái)阿哩哩》時(shí)，考慮到這個(gè)曲子強(qiáng)烈和獨(dú)特的民族特色，我結(jié)合該曲的作者情況，向大家進(jìn)行講解來(lái)輔助音樂(lè)欣賞教學(xué)：曲作者黃有異，是廣西歌舞團(tuán)的，為了編創(chuàng)這首曲子，黃有異曾經(jīng)親自到彝族村寨生活了數(shù)年，在體驗(yàn)生活中，他根據(jù)彝族曲調(diào)的特色，創(chuàng)作出了這首節(jié)奏優(yōu)美歡快的、民族色彩濃烈的曲子。我的講述，讓學(xué)生認(rèn)識(shí)到這是一首表達(dá)彝族人民幸福生活的曲子，其中趕圩這一特定的場(chǎng)景，又體現(xiàn)了美麗的彝族姑娘在趕圩過(guò)程中的快樂(lè)以及生活的富足。學(xué)生通過(guò)了解激發(fā)了興趣，所以在欣賞音樂(lè)時(shí)就更加用心了。我教學(xué)生們演唱經(jīng)典歌曲《保衛(wèi)黃河》時(shí)，為了引導(dǎo)同學(xué)們展開(kāi)豐富的想象，我找到了關(guān)于黃河保衛(wèi)戰(zhàn)的彩色掛圖，在課上展示給大家，引起了大家的興趣。多媒體教學(xué)的興起，使課堂更加生動(dòng)精彩、形象逼真。學(xué)生通過(guò)多種感官的感受和體驗(yàn)，對(duì)于理解、評(píng)價(jià)音樂(lè)有了比較深刻的認(rèn)識(shí)。二師生互動(dòng)，視、聽(tīng)并舉在音樂(lè)欣賞教學(xué)中，教師與學(xué)生都要同時(shí)進(jìn)入“傾聽(tīng)”音樂(lè)的狀態(tài)，這樣做便于把學(xué)生的注意力都吸引到課堂上來(lái)，從而從聽(tīng)覺(jué)上培養(yǎng)學(xué)生對(duì)音樂(lè)的感知能力，同時(shí)也能提高學(xué)生的記憶力。教師等學(xué)生“傾聽(tīng)”完音樂(lè)后，再介紹作品的體裁、時(shí)代背景以及作者的生平，應(yīng)用多媒體、圖片，從視覺(jué)到聽(tīng)覺(jué)，讓學(xué)生熟知。在這個(gè)過(guò)程中，教師在初聽(tīng)實(shí)施之前，應(yīng)該先提出幾個(gè)需要注意的問(wèn)題來(lái)提示學(xué)生：在這個(gè)過(guò)程中你聽(tīng)到了什么？在你眼前仿佛出現(xiàn)了什么？它是什么風(fēng)格的歌曲，所表達(dá)的是一種什么樣的情緒？帶著問(wèn)題進(jìn)行欣賞，學(xué)生的欣賞能力會(huì)得到提升。在欣賞馬頭琴獨(dú)奏曲《萬(wàn)馬奔騰》的教學(xué)活動(dòng)中，利用多媒體播放馬頭琴演奏方式，感受馬頭琴的音色，幫助學(xué)生理解作品，感受萬(wàn)馬奔騰的賽馬情景，更加深了學(xué)生對(duì)音樂(lè)作品的深度理解。三在師生的情感互動(dòng)中，讓學(xué)生體驗(yàn)音樂(lè)師生在情感互動(dòng)中進(jìn)行合作教學(xué)，這是新課程改革以來(lái)教師較為常見(jiàn)的一種教學(xué)手段。相比傳統(tǒng)的教學(xué)方式，它更強(qiáng)調(diào)集體學(xué)習(xí)能力的提升。這個(gè)合作的過(guò)程，是教師與學(xué)生以及學(xué)生與學(xué)生之間的互相作用，共同體驗(yàn)美、表現(xiàn)美、創(chuàng)造美的完整過(guò)程，也是提高學(xué)生對(duì)音樂(lè)的審美能力的過(guò)程。在音樂(lè)教學(xué)中，教師如何做才能讓學(xué)生獲得真正的審美體驗(yàn)?zāi)?？筆者通過(guò)實(shí)踐，認(rèn)為教師應(yīng)該在課堂上留出一定的自由活動(dòng)空間給學(xué)生，并在這個(gè)基礎(chǔ)上為他們提供活動(dòng)的條件。教師與學(xué)生融洽的交流與豐富的互動(dòng)，能夠調(diào)動(dòng)學(xué)生主動(dòng)參與到音樂(lè)教學(xué)過(guò)程中的熱情，使學(xué)生通過(guò)自己的親身體驗(yàn)來(lái)學(xué)習(xí)音樂(lè)文化，并在這個(gè)過(guò)程中嘗試進(jìn)行創(chuàng)造。為了讓學(xué)生充分發(fā)揮自己主觀能動(dòng)性，自覺(jué)地進(jìn)行思考，把自己對(duì)生活的理解和認(rèn)識(shí)融進(jìn)作品中，教師一定要注意鼓勵(lì)學(xué)生進(jìn)行模糊思維、自由想象，引導(dǎo)他們打開(kāi)想象的空間，提高他們的欣賞能力，使他們獲得審美享受。四在欣賞體驗(yàn)中成為學(xué)生中的一員，成為他們的“合作伙伴”如在《紅色娘子軍》一課的教學(xué)中有一個(gè)環(huán)節(jié)，我經(jīng)過(guò)考慮之后，決定讓學(xué)生自由組合成小隊(duì)，并列隊(duì)行進(jìn)創(chuàng)編與展示。在這個(gè)過(guò)程中，我則走到學(xué)生中間去，參與其中編排有困難的一個(gè)小隊(duì)，與大家共同交流，完成創(chuàng)作。在這里，讓學(xué)生自由組合成小隊(duì)進(jìn)行創(chuàng)編、展示，旨在張揚(yáng)學(xué)生的個(gè)性，發(fā)展學(xué)生的想象力，增強(qiáng)學(xué)生音樂(lè)表演的自信心，培養(yǎng)學(xué)生良好的合作意識(shí)，讓每個(gè)學(xué)生享受表現(xiàn)音樂(lè)和創(chuàng)編音樂(lè)所帶來(lái)的成功感和愉悅感?？傊?，新課程理念下的音樂(lè)課堂，是師生互動(dòng)的課堂，師生共營(yíng)的課堂。讓學(xué)生在音樂(lè)課堂中得到快樂(lè)，產(chǎn)生學(xué)習(xí)音樂(lè)的興趣，培養(yǎng)能力、陶冶性情，從而促進(jìn)學(xué)生審美能力的提高。分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)分子腫1優(yōu)秀精品課件文檔資料優(yōu)秀精品課件文檔資料2分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件3分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件4分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件5分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件6腫瘤的多因素多階段多基因參與的過(guò)程多因素多階段：二階段學(xué)說(shuō)多階段學(xué)說(shuō)多基因參與：癌基因、抑癌基因細(xì)胞凋亡相關(guān)基因、腫瘤易感基因腫瘤的多因素多階段多基因參與的過(guò)程多因素7腫瘤的發(fā)病與體細(xì)胞突變有關(guān)癌基因：維持細(xì)胞正常生理功能所必須的基因細(xì)胞增殖、分化、信號(hào)轉(zhuǎn)到體細(xì)胞突變學(xué)說(shuō)：腫瘤的發(fā)生與癌基因突變有關(guān)點(diǎn)突變、DNA擴(kuò)增染色體重排、甲基化腫瘤的發(fā)病與體細(xì)胞突變有關(guān)癌基因：維持細(xì)胞正常生理功能所必須8抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因二次突變學(xué)說(shuō)（Rb基因，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤）

遺傳性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者（Rb等位基因突變或缺失）：一次突變引起發(fā)病非遺傳性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤：二次突變突變引起發(fā)病抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因9腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳腫瘤易感基因：癌基因和抑癌基因的突變

DNA修復(fù)缺陷代謝酶基因：化學(xué)致癌腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳10三、腫瘤的分子診斷及其研究進(jìn)展1、分子診斷在腫瘤研究中的意義和應(yīng)用

腫瘤的分子診斷涉及到各種惡性腫瘤及癌前病變，主要集中在各種癌基因、抑癌基因及相關(guān)基因的檢測(cè)，分別在蛋白質(zhì)、RNA、DNA水平進(jìn)行判斷，為腫瘤的基礎(chǔ)研究、腫瘤防治和個(gè)體化或預(yù)見(jiàn)性治療提供更詳盡的證據(jù)。（1）腫瘤易感基因的檢測(cè)（2）腫瘤的分類(lèi)

對(duì)Bcr區(qū)基因重排檢測(cè)：可診斷慢粒并與急粒鑒別。神經(jīng)母細(xì)胞瘤——N-Myc明顯擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)；神經(jīng)上皮瘤——c-Myc擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)。三、腫瘤的分子診斷及其研究進(jìn)展1、分子診斷在腫瘤研究中的意11

（3）腫瘤的早期診斷

（4）腫瘤的預(yù)后判斷：從分子水平上判斷腫瘤的良、惡性及預(yù)后，有較高的準(zhǔn)確性。腫瘤相關(guān)基因的突變、擴(kuò)增及過(guò)表達(dá)等常與預(yù)后密切相關(guān)。

（5）腫瘤的個(gè)體化和預(yù)見(jiàn)性治療:腫瘤的發(fā)生是多基因、多步驟、多階段的過(guò)程，在發(fā)生、發(fā)展的不同時(shí)期，可能涉及不同的基因和不同的變化形式，而基因的變化和基因間的信號(hào)傳遞與腫瘤臨床治療的敏感性密切相關(guān)。提供腫瘤基因變化，對(duì)治療有指導(dǎo)意義。

（6）腫瘤的預(yù)后監(jiān)測(cè)（3）腫瘤的早期診斷122、腫瘤基因過(guò)表達(dá)及其檢測(cè)

（1）基因過(guò)表達(dá)的形式

癌基因激活和抑癌基因失活，是腫瘤發(fā)生過(guò)程中的關(guān)鍵因素。癌基因產(chǎn)物過(guò)表達(dá)是癌基因激活的重要表現(xiàn)形式之一。癌基因一般為單拷貝基因，在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的一些癌基因在DNA復(fù)制過(guò)程中擴(kuò)增，常導(dǎo)致基因產(chǎn)物過(guò)表達(dá)，表現(xiàn)為mRNA和蛋白質(zhì)量增加。有些抑癌基因突變后可起到癌基因的作用（如p53基因），產(chǎn)生突變型蛋白。2、腫瘤基因過(guò)表達(dá)及其檢測(cè)（1）基因過(guò)表達(dá)的形式13

（2）基因過(guò)表達(dá)的檢測(cè)

①表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)：幾乎所有被克隆的癌基因、抑癌基因都有相應(yīng)抗體，其中大多數(shù)已商品化。

免疫組化（immunohistochemistry）

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）免疫沉淀法：檢測(cè)并定量分析蛋白質(zhì)混合物中的靶抗原敏感（可檢出100pg的放射性標(biāo)記蛋白）。與SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳并用，可用于分析外源基因在原核和真核宿主細(xì)胞中的表達(dá)。（2）基因過(guò)表達(dá)的檢測(cè)14蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初，在蛋白質(zhì)凝膠電泳（分辨率高）和固相免疫測(cè)定（特異敏感）的基礎(chǔ)上發(fā)展的，結(jié)合了二者優(yōu)點(diǎn)，無(wú)需同位素標(biāo)記，具有從混雜抗原中檢出特定抗原，或從多克隆抗體中檢出單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)，還可對(duì)轉(zhuǎn)移到固相膜上的蛋白進(jìn)行連續(xù)分析，有蛋白質(zhì)反應(yīng)均一性、固相膜保存時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。敏感性為1～5ng。細(xì)胞裂解—→SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳→蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移→封閉→加一抗→加二抗→顯色照像。流式細(xì)胞儀（flowcytometry）測(cè)試法：用熒光標(biāo)記抗體與含有特異抗原的細(xì)胞結(jié)合，用流式細(xì)胞儀對(duì)含不同熒光信號(hào)的細(xì)胞分類(lèi)測(cè)試，可檢測(cè)細(xì)胞表面受體、標(biāo)志物或特異性蛋白及細(xì)胞的分類(lèi)分析。蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初15②基因擴(kuò)增的檢測(cè)：腫瘤基因擴(kuò)增可產(chǎn)生過(guò)量的表達(dá)蛋白，也可表現(xiàn)為基因拷貝數(shù)增加和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA增加。經(jīng)典檢測(cè)方法為核酸分子雜交，包括原位雜交（insituhydridization，ISH）、熒光原位雜交（FISH）、DNA雜交（Southernblot）、RNA雜交（Northernblot）、原位PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）。FISH

將熒光素標(biāo)記克隆的DNA片段與染色體或細(xì)胞間期染色質(zhì)雜交，以測(cè)定特定的DNA片段是否有缺失或擴(kuò)增。

原位PCR：結(jié)合了PCR與ISH技術(shù)優(yōu)點(diǎn)，在組織切片或細(xì)胞涂片上原位對(duì)特定DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增，再用特異性探針作原位雜交檢測(cè)，以達(dá)到對(duì)靶核苷酸進(jìn)行定性、定位、定量分析。

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）

用來(lái)擴(kuò)增從RNA分子中得到的一段特異序列。RNA首先被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。用位于一段特異序列或一個(gè)基因兩側(cè)的引物生成以cDNA為模板的PCR產(chǎn)物，得到陽(yáng)性產(chǎn)物說(shuō)明存在特異性的RNA序列。為擴(kuò)增從mRNA逆轉(zhuǎn)錄的cDNA，引物中應(yīng)含一段目的基因的內(nèi)含子區(qū)，以使從帶有基因組DNA的PCR產(chǎn)物中區(qū)分出cDNA的PCR產(chǎn)物。經(jīng)典方法包括RT和PCR兩步。

②基因擴(kuò)增的檢測(cè)：腫瘤基因擴(kuò)增可產(chǎn)生過(guò)量的表達(dá)蛋白，也可表現(xiàn)16（3）腫瘤基因差異表達(dá)的檢測(cè)

控制生物性狀的基本結(jié)構(gòu)和功能單位是基因，不同細(xì)胞或同一細(xì)胞的不同時(shí)間與空間基因表達(dá)的差異決定著生命活動(dòng)的多樣性，如發(fā)育、分化、繁殖、細(xì)胞周期調(diào)控、衰老、死亡等。實(shí)際上，細(xì)胞的各種生理過(guò)程或病理改變本質(zhì)上都是由基因表達(dá)的改變所決定的。因此獲取差異表達(dá)的基因?qū)⒂兄诹私庹Ｉ碜兓筒±砀淖兊姆肿訖C(jī)制，為基因診斷、基因治療和發(fā)現(xiàn)新的藥物靶分子提供新的視野。

（3）腫瘤基因差異表達(dá)的檢測(cè)17①DD-PCR（differentialdisplayPCR）又稱(chēng)差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR（DDRT-PCR）

簡(jiǎn)要流程

對(duì)照組處理組↓……反轉(zhuǎn)錄……↓mRNA或總RNAmRNA或總RNA↓……PCR……….↓cDNAcDNA↓↓

擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)增產(chǎn)物

↘電泳分離↙

↓比較回收差異顯示帶↓PCR

克隆、雜交、測(cè)序↓與Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)中的已知序列進(jìn)行同源性匹配確定相關(guān)基因①DD-PCR（differentialdisplay18②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocalsubtractiondifferentialRNAdisplay）：DD-PCR中采用差減過(guò)的RNA或cDNA樣品。1998年Kang等，分析了腺病毒轉(zhuǎn)化的大鼠胚胎細(xì)胞株E11和獲得侵襲性致癌表型的E11-NMT細(xì)胞株間的差異表達(dá)基因。

E11cDNA文庫(kù)E11-NMTcDNA文庫(kù)↓↓交互式差減E11減E11-NMT差減cDNA文庫(kù)E11-NMT減E11差減cDNA文庫(kù)↓體內(nèi)切割↓以錨定引物和5’隨機(jī)引物PCR擴(kuò)增↓顯示

5%測(cè)序膠顯示并分離差異條帶↓再擴(kuò)增，反向Northern分析↓

Northernblot分析表達(dá)分析↓克隆并測(cè)序，Northernblot確證②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocal19（4）基因突變的檢測(cè)

①PCR-SSCP法（PCR-singlestrandconformationalpolymorphism，聚合酶鏈反應(yīng)－單鏈構(gòu)象多態(tài)分析）：?jiǎn)捂淒NA在中性條件下會(huì)形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，即使有一個(gè)堿基不同，也會(huì)形成不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)而出現(xiàn)不同的遷移率。靶DNA或RNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物變性處理，單鏈產(chǎn)物經(jīng)中性聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE），靶DNA或RNA中含有單個(gè)堿基置換、數(shù)個(gè)堿基插入或缺失等改變時(shí)，因遷移率變化就出現(xiàn)泳動(dòng)變位，從而檢測(cè)出含有基因突變的DNA或RNA片段。

②雜合雙鏈分析法（Heteroduplexanalysis，HA）：由突變型和野生型DNA形成的異源雜合雙鏈在其錯(cuò)配處會(huì)形成突起，在非變性膠中電泳時(shí)，會(huì)產(chǎn)生與相應(yīng)的同源雙鏈DNA不同的遷移率。

③突變體富集PCR法（mutant-enrichedPCR）：利用癌基因或抑癌基因某個(gè)編碼子部位存在的已知限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)，用連續(xù)2次巢式PCR對(duì)包括酶切位點(diǎn)的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增，在2次PCR之間用相應(yīng)的內(nèi)切酶消化擴(kuò)增產(chǎn)物，野生型因酶切不能進(jìn)入第2次PCR，而突變型則能完整進(jìn)入第2次PCR并得到產(chǎn)物的富集。（4）基因突變的檢測(cè)20④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）：雙鏈DNA在沿變性劑（甲醛或尿素）電場(chǎng)方向遞增的凝膠中進(jìn)行到與DNA變性溫度（Tm）一致的位置時(shí)，DNA發(fā)生部分解鏈，遷移率下降。正常DNA分子與突變DNA分子間即使只有一個(gè)堿基對(duì)的差異，也會(huì)在不同位置解鏈，導(dǎo)致遷移率不同而被分離。兩個(gè)同源雙鏈DNA分子間有一個(gè)堿基對(duì)不同時(shí)，Tm值就相差1℃或更高，有一個(gè)堿基錯(cuò)配的異源雙鏈DNA分子與同源雙鏈DNA分子比較，其Tm值可相差6℃以上。⑤DNA芯片技術(shù)（DNAchip）：建立在雜交測(cè)序基本理論上的DNA分析技術(shù)。利用固定在芯片上的幾萬(wàn)至幾十萬(wàn)條探針與樣品雜交，在一步實(shí)驗(yàn)中獲取大量信息?？捎糜诨蚨ㄎ?、DNA測(cè)序、突變分析、表達(dá)分析、基因多態(tài)性分析、物理圖譜和遺傳圖譜的構(gòu)建等。使用了光控固相化學(xué)合成、集成電路計(jì)算機(jī)、激光共聚焦掃描、熒光標(biāo)記探針等多項(xiàng)先進(jìn)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)全部自動(dòng)化，操作極簡(jiǎn)便，可節(jié)約大量時(shí)間和實(shí)驗(yàn)成本。將許多已知序列的寡核苷酸DNA排列在一塊集成電路板上，彼此間重疊1個(gè)堿基，并覆蓋全部檢測(cè)基因。將熒光標(biāo)記的正常和突變DNA分別與兩塊DNA芯片雜交，因至少存在1個(gè)堿基差異，將得到不同的雜交圖譜，用共聚焦顯微鏡分別檢測(cè)其熒光信號(hào)，即可確定是否存在突變。蛋白質(zhì)芯片、組織和細(xì)胞芯片④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradient21⑥

連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction，LCR）：雙鏈DNA經(jīng)加熱變性后，用2對(duì)互補(bǔ)寡核苷酸引物與模板復(fù)性。若引物序列與目標(biāo)序列完全配對(duì)，那么2對(duì)引物將與各自的目標(biāo)片段雜交，并在連接酶作用下發(fā)生連接。連接產(chǎn)物作為下一次循環(huán)的模板。若點(diǎn)突變出現(xiàn)在目標(biāo)片段上，將不能進(jìn)行連接反應(yīng)，不會(huì)出現(xiàn)連接產(chǎn)物。⑦

等位基因特異性擴(kuò)增法（allele-specificamplification，ASA）：設(shè)計(jì)2個(gè)等位基因特異的5’端引物（一個(gè)對(duì)野生型特異，一個(gè)對(duì)突變型特異特異）。對(duì)于純合型突變，分別加入兩種引物及3’端引物進(jìn)行兩個(gè)平行PCR，只有與突變DNA完全互補(bǔ)的引物才能延伸得到PCR產(chǎn)物；對(duì)于雜合性突變需定量分析。若錯(cuò)配位于引物3’端，則PCR不能延伸，稱(chēng)為ARMS（amplificationrefractorymutationsystem）；若錯(cuò)配位于引物之間而影響引物退火，稱(chēng)COP或CCA（competiiveoligonucleotidepriming，colorcomplementationassay）。⑥連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction22⑧染色體分析：腫瘤細(xì)胞的染色體畸變是一非常普遍的現(xiàn)象，可分為原發(fā)和繼發(fā)2類(lèi)：原發(fā)性染色體畸變與引起腫瘤的直接原因有關(guān)。腫瘤細(xì)胞中可發(fā)現(xiàn)各種形式的染色體畸變，如缺失、重復(fù)、易位、重排、斷裂、核內(nèi)再?gòu)?fù)制等。繼發(fā)性染色體畸變主要是腫瘤細(xì)胞核型的改變。

FISH：利用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，可同時(shí)檢測(cè)間期與中期細(xì)胞的若干個(gè)特異性核酸序列。從而能檢測(cè)多個(gè)基因，分辨復(fù)雜的染色體易位和微小缺失，區(qū)分間期細(xì)胞多倍體與超二倍體等。

主要原理：基本反應(yīng)包括在溶液中經(jīng)化學(xué)修飾的單鏈探針DNA序列與固定于載玻片上經(jīng)變性的單鏈互補(bǔ)DNA序列間形成異質(zhì)雙鏈，再用與熒光素（FITC）結(jié)合的閱讀分子定位化學(xué)修飾的探針。在總的DNA背景上出現(xiàn)有清晰界限的熒光斑點(diǎn)或成簇的熒光斑點(diǎn)。

PRINS技術(shù)（寡核苷酸引物原位DNA合成，oligonucleotideprimedinsituDNAsynthesis）：用非標(biāo)記的寡核苷酸引物與染色體上靶序列特異性地雜交，在DNA聚合酶作用下引物延伸時(shí)，摻入標(biāo)記的核苷酸，可直接或間接檢查標(biāo)記位點(diǎn)。⑧染色體分析：腫瘤細(xì)胞的染色體畸變是一非常普遍的現(xiàn)象，23

比較基因組雜交（comparativegenomichydridization，CGH）：直接檢測(cè)兩個(gè)全基因遺傳物質(zhì)不平衡（缺失或擴(kuò)增）的新方法。

原理：用不同的非同位素標(biāo)記物，分別標(biāo)記被檢基因組DNA（常為腫瘤DNA）和正常人基因組DNA，兩者以1∶1混合后制備探針，共同與正常人中期染色體標(biāo)本進(jìn)行染色體原位抑制（CISS）雜交，對(duì)不同的熒光物質(zhì)分別進(jìn)行檢測(cè)，以每條染色體長(zhǎng)軸個(gè)位點(diǎn)的被測(cè)DNA與正常DNA熒光強(qiáng)度比，反映兩組DNA不同序列的相對(duì)拷貝數(shù)，并能同時(shí)在染色體上定位。（通常腫瘤DNA用FITC標(biāo)記為綠色，正?；蚪MDNA用TRITC標(biāo)記為紅色）。⑨DNA序列分析

比較基因組雜交（comparativeg24（5）限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析

RFLP：（restrictionfragmentlengthpolymorphism）當(dāng)個(gè)體的DNA用限制性?xún)?nèi)切酶切割時(shí)，所得到的與正常相比，長(zhǎng)度有改變的基因片段。多態(tài)性：在不同個(gè)體DNA結(jié)構(gòu)上有許多地方有差異，尤其是不編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域和無(wú)重要調(diào)整功能的區(qū)域表現(xiàn)得尤為突出。在一個(gè)基因座上，存在兩個(gè)或以上等位基因，由這些等位基因所決定的兩種或以上的表達(dá)或基因型，其中任一種在人群中的頻率不低于1%，稱(chēng)為多態(tài)性。

直接法：通過(guò)限定的內(nèi)切酶酶切基因組DNA后，與特異性探針雜交后分析；間接法：選用原基因外兩翼核酸序列上的多態(tài)性探針，用間接連鎖法分析。

（5）限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析25（6）端粒酶與腫瘤的關(guān)系及檢測(cè)

端粒（telomere）：位于細(xì)胞染色體末端的由2～20kb串聯(lián)的短片段重復(fù)序列（TTAGGG）n及一些結(jié)合蛋白組成的特殊結(jié)構(gòu)。在染色體定位、復(fù)制、保護(hù)和控制細(xì)胞生長(zhǎng)壽命等方面具有重要作用，并與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞轉(zhuǎn)化和永生化密切相關(guān)。人的端粒長(zhǎng)達(dá)15kb，隨著細(xì)胞分裂逐漸縮短，每次丟失約50～200個(gè)核苷酸?？s短到一定程度，即不能維持染色體穩(wěn)定時(shí)，細(xì)胞進(jìn)入凋亡。與正常細(xì)胞相反，腫瘤細(xì)胞的端粒長(zhǎng)度不隨細(xì)胞分裂而變化，提示端粒的穩(wěn)定性對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行無(wú)限增殖是必須的。

端粒酶（telomerase）：由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白復(fù)合物（RNP），含有端粒重復(fù)序列的模板，可以自身RNA組分為模板復(fù)制合成端粒序列。端粒酶的表達(dá)能使細(xì)胞永生化。

體內(nèi)表達(dá)端粒酶的細(xì)胞群：絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞、生殖細(xì)胞、快速增殖的淋巴造血系統(tǒng)細(xì)胞、皮膚基底層細(xì)胞、增生期子宮內(nèi)膜細(xì)胞、某些肝細(xì)胞、增生的肝組織與氣管上皮。

（6）端粒酶與腫瘤的關(guān)系及檢測(cè)26

端粒酶與腫瘤的研究現(xiàn)狀：Counter等于1994年首先發(fā)現(xiàn)人卵巢癌細(xì)胞中有端粒酶表達(dá)。近幾年的研究表明，人類(lèi)腫瘤中85%左右的腫瘤細(xì)胞存在端粒酶活性的表達(dá)。目前有關(guān)端粒酶活性表達(dá)的研究已覆蓋了人類(lèi)大部分的實(shí)體瘤。端粒酶給病理學(xué)鑒別病變的良惡性提供了一個(gè)很好的標(biāo)志物：如乳腺癌與乳腺良性病變，大腸癌與癌旁組織，前列腺癌與良性前列腺增生等。在肝細(xì)胞肝癌等腫瘤中，端粒酶活性與腫瘤轉(zhuǎn)移、預(yù)后及病人存活期密切相關(guān)。這些研究結(jié)果提示：端粒酶檢測(cè)可作為極有價(jià)值的臨床診斷、藥效評(píng)價(jià)、預(yù)后判斷參數(shù)。但直接將端粒酶用于臨床診斷還有大量工作。設(shè)想用抑制端粒酶活性的方法來(lái)達(dá)到抑制惡性腫瘤生長(zhǎng)，從而未腫瘤的基因治療開(kāi)辟新途徑，也因細(xì)胞可能通過(guò)其它維持端粒長(zhǎng)度的機(jī)制而受到嚴(yán)重挑戰(zhàn)。

TRAP法(telomericrepeatamplificationprotocol端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法)

TRAP法的改良

接近閃爍分析法

端粒酶與腫瘤的研究現(xiàn)狀：Counter等于1994年首先2736、自己的鞋子，自己知道緊在哪里。——西班牙

37、我們唯一不會(huì)改正的缺點(diǎn)是軟弱?！_什?？?/p>

38、我這個(gè)人走得很慢，但是我從不后退?！獊啿薄ち挚?/p>

39、勿問(wèn)成功的秘訣為何，且盡全力做你應(yīng)該做的事吧。——美華納

40、學(xué)而不思則罔，思而不學(xué)則殆?！鬃觴iexie!謝謝！36、自己的鞋子，自己知道緊在哪里?！靼嘌纗iexie!28分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累優(yōu)秀精品課件文檔資料毒理學(xué)教研室徐德祥分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)一、問(wèn)題的提出和國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀信息技術(shù)教育是一項(xiàng)面向未來(lái)的現(xiàn)代化教育，它對(duì)于提高學(xué)生適應(yīng)信息社會(huì)的能力，全面推進(jìn)素質(zhì)教育具有十分重要的意義。信息技術(shù)課具有發(fā)展性、趣味性、綜合性、可操作性等特點(diǎn)，在網(wǎng)絡(luò)化的教學(xué)環(huán)境中，信息技術(shù)教學(xué)能夠滿(mǎn)足學(xué)生發(fā)展的需求。但是，我國(guó)的信息技術(shù)課程深受基礎(chǔ)學(xué)科中傳統(tǒng)班級(jí)授課制的影響，重視基礎(chǔ)知識(shí)和基本技術(shù)技能的學(xué)習(xí)和掌握，但使用傳統(tǒng)教學(xué)方式進(jìn)行信息技術(shù)教學(xué)卻難以適應(yīng)不同層次的學(xué)生的發(fā)展。校本課程是以學(xué)校為主體，自主開(kāi)發(fā)和發(fā)展的一門(mén)課程，是建立在學(xué)校和學(xué)生的差異性基礎(chǔ)上的，它以適應(yīng)不同學(xué)校的實(shí)際情況，滿(mǎn)足不同學(xué)生的個(gè)性發(fā)展需要為目的，照顧了學(xué)生的個(gè)別差異，滿(mǎn)足學(xué)生多樣化的需要。目前，國(guó)外非常重視信息技術(shù)教育，其信息技術(shù)的教學(xué)理念跟我們有較大的差異。如美國(guó)教師的信息技術(shù)課堂不是單純地強(qiáng)調(diào)學(xué)生獲取知識(shí)，而是注重培養(yǎng)學(xué)生獲取與整理信息的能力及自主學(xué)習(xí)的能力，突出學(xué)生在教學(xué)過(guò)程中的主體地位，尤其注重培養(yǎng)學(xué)生的信息素養(yǎng)而非技術(shù)素養(yǎng)。因此，我們提出了進(jìn)行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施研究的課題。二、研究的意義和研究?jī)r(jià)值進(jìn)行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施研究，其研究的意義主要表現(xiàn)在：1.體現(xiàn)“以人為本”的現(xiàn)代教育理念，凸顯學(xué)校教育“促進(jìn)學(xué)生發(fā)展”的特征。2.體現(xiàn)學(xué)生的主體性特征，凸顯信息技術(shù)教育對(duì)學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。開(kāi)展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施的研究，有利于信息技術(shù)課程三維目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)；有利于培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)、探究學(xué)習(xí)、合作學(xué)習(xí)的方法；有利于學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)；有利于促進(jìn)學(xué)生的全面發(fā)展。對(duì)于初中信息技術(shù)教學(xué)具有廣泛的實(shí)踐價(jià)值和推廣價(jià)值。三、研究的主要觀點(diǎn)和創(chuàng)新之處開(kāi)展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施的研究，把信息技術(shù)教學(xué)與學(xué)校的校園文化、班級(jí)文化，學(xué)生心理教育問(wèn)題、德育問(wèn)題、科技創(chuàng)新問(wèn)題，以及受社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題等進(jìn)行整合，把信息技術(shù)作為學(xué)生學(xué)習(xí)的工具，形成網(wǎng)絡(luò)化的信息技術(shù)校本課程，實(shí)現(xiàn)教材多媒體化、資源網(wǎng)絡(luò)化、教學(xué)個(gè)性化、學(xué)習(xí)自主化的創(chuàng)新，在信息技術(shù)教學(xué)中堅(jiān)持以人為本的教學(xué)策略，注重學(xué)生的發(fā)展，注重學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。四、研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和研究思路1.研究目標(biāo)。在信息技術(shù)教學(xué)中，以促進(jìn)學(xué)生發(fā)展為中心構(gòu)建初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程，將學(xué)生的發(fā)展和信息素養(yǎng)的培養(yǎng)作為信息技術(shù)教學(xué)的核心目標(biāo)。2.研究?jī)?nèi)容。以學(xué)生的全面發(fā)展為主線(xiàn)構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)化信息技術(shù)校本課程。（1）注重學(xué)生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)，把校園文化、班級(jí)文化、社會(huì)實(shí)際生活與信息技術(shù)整合，構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)化信息技術(shù)校本課程。（2）以學(xué)生發(fā)展為主線(xiàn)，以培養(yǎng)學(xué)生的信息素養(yǎng)為核心，構(gòu)建能夠體現(xiàn)“自主、合作、探究”這一新課程理念的特色資源專(zhuān)題網(wǎng)站，以構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)化信息技術(shù)校本課程。3.研究思路。根據(jù)學(xué)生的發(fā)展特點(diǎn)，確定初中信息技術(shù)校本課程的三維目標(biāo)，根據(jù)學(xué)生的發(fā)展特點(diǎn)的進(jìn)行教學(xué)，使學(xué)生在信息技術(shù)教育教學(xué)中的情感得到提升，態(tài)度得到轉(zhuǎn)變，從而影響價(jià)值觀的形成。培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)的方法和獲取信息、整理信息的能力，促進(jìn)學(xué)生的全面發(fā)展。4.研究方法：行動(dòng)研究法五、初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與應(yīng)用的實(shí)踐近年來(lái)，我們組織信息技術(shù)教師根據(jù)初中信息技術(shù)教材特點(diǎn)，開(kāi)放了適合初中學(xué)生心理發(fā)展特點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)化課程資源。利用這些課程，一些年輕教師在省市的信息技術(shù)優(yōu)質(zhì)課評(píng)比中，獲得一、二等獎(jiǎng)。比較有影響力的研究成果有：對(duì)這些課程資源分析比較，發(fā)現(xiàn)有以下幾個(gè)特點(diǎn)：1.網(wǎng)絡(luò)化。各個(gè)課程資源均是以主題學(xué)習(xí)網(wǎng)站或網(wǎng)頁(yè)的形式出現(xiàn)，學(xué)生通過(guò)瀏覽網(wǎng)頁(yè)就可實(shí)現(xiàn)訪(fǎng)問(wèn)課程資源。2.興趣化。各個(gè)課程資源中集成了各種能夠激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣的內(nèi)容，如游戲、歌曲、視頻、動(dòng)畫(huà)等，比較容易幫助教師創(chuàng)設(shè)教學(xué)情境，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣。3.課程化。各個(gè)課程資源有較強(qiáng)的針對(duì)性，針對(duì)信息技術(shù)教材中的某一課或者某一個(gè)單元知識(shí)點(diǎn)開(kāi)發(fā)課程資源。通過(guò)學(xué)習(xí)網(wǎng)絡(luò)資源，學(xué)生能夠掌握課程標(biāo)準(zhǔn)所要求的知識(shí)點(diǎn)。4.易操作。根據(jù)主題學(xué)習(xí)網(wǎng)站的視頻教程或自主學(xué)習(xí)課程，學(xué)生比較容易實(shí)現(xiàn)自主學(xué)習(xí)、網(wǎng)絡(luò)學(xué)習(xí)、共享學(xué)習(xí)。5.交互性。利用課程資源網(wǎng)站中的聊天室、留言板，實(shí)現(xiàn)了人機(jī)、師生、生生的交互性。六、反思與展望在使用信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本資源的過(guò)程中，我們也發(fā)現(xiàn)了一些不足，比較集中的是開(kāi)發(fā)比較成熟的網(wǎng)絡(luò)化校本資源需要比較長(zhǎng)的時(shí)間，開(kāi)發(fā)出成熟的作品需要比較長(zhǎng)的周期，因此，需要多位信息技術(shù)教師通力合作，及早準(zhǔn)備，實(shí)現(xiàn)信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本資源的模塊化，縮短開(kāi)發(fā)時(shí)間。希望在不久的將來(lái)能夠開(kāi)發(fā)出整個(gè)初中信息技術(shù)全部課程的網(wǎng)絡(luò)化校本資源，實(shí)現(xiàn)初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)教學(xué)，能夠讓學(xué)生實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下的自主學(xué)習(xí)，發(fā)展個(gè)性，張揚(yáng)個(gè)性。注：本文是河北省教育科學(xué)研究“十二五”規(guī)劃2012年度專(zhuān)項(xiàng)課題《初中信息技術(shù)網(wǎng)絡(luò)化校本課程開(kāi)發(fā)與實(shí)施研究》的研究成果【責(zé)編張景賢】音樂(lè)欣賞是音樂(lè)教學(xué)的重要組成部分，學(xué)生對(duì)音樂(lè)欣賞課的學(xué)習(xí)效果如何，取決于其對(duì)音樂(lè)作品思想內(nèi)容、音樂(lè)形象的感悟和理解。由于農(nóng)村學(xué)校的學(xué)生對(duì)音樂(lè)的感受能力比較差，因此，每次上欣賞課學(xué)生的注意力總是不集中。我深知初中學(xué)生正處于心理發(fā)展轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵時(shí)期，對(duì)外界的感受非常敏感，不能一味地批評(píng)和指責(zé)，相反，要利用好音樂(lè)欣賞課讓音樂(lè)的美感來(lái)感染學(xué)生、陶冶學(xué)生，從而使學(xué)生逐步形成健康的音樂(lè)審美能力。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，在教學(xué)中，我主要在以下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試，也取得了一些效果，愿與大家一起分享。一重視直觀教學(xué)，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)音樂(lè)的興趣記得一位著名的音樂(lè)教育家曾經(jīng)說(shuō)過(guò)這樣的話(huà)：“（教師要）激發(fā)學(xué)生對(duì)音樂(lè)的興趣，是把音樂(lè)的魅力傳遞給他們的必要條件?！边@句話(huà)已經(jīng)被許多音樂(lè)教育者奉為至理名言。還有著名的科學(xué)家愛(ài)因斯坦曾說(shuō)過(guò)：“興趣是最好的老師。”從這些名家的觀點(diǎn)中我們不難總結(jié)出如下結(jié)論：教師要努力激發(fā)學(xué)生對(duì)音樂(lè)的學(xué)習(xí)興趣，并培養(yǎng)學(xué)生的音樂(lè)修養(yǎng)，這對(duì)于健全學(xué)生的審美能力、提高學(xué)生的整體素質(zhì)都有著特殊的意義。因此，在上音樂(lè)課時(shí)，我先播放一些學(xué)生們感興趣的流行歌曲，然后再讓他們談一談這些歌曲好在哪里，學(xué)生們爭(zhēng)先恐后地說(shuō)出了自己的觀點(diǎn)，談的都非常好，這時(shí)我會(huì)告訴學(xué)生：“你們對(duì)音樂(lè)很有欣賞能力”，學(xué)生們很開(kāi)心，他們不知不覺(jué)地喜歡上欣賞課了。在我們的音樂(lè)欣賞課中，學(xué)生對(duì)音樂(lè)的認(rèn)識(shí)主要靠靈敏的聽(tīng)覺(jué)以及適當(dāng)?shù)南胂?。其?shí)，我們還要知道，視覺(jué)對(duì)音樂(lè)來(lái)說(shuō)也是一種很好的欣賞形式。在教學(xué)過(guò)程中，我們教師不妨可以考慮采取一些比較直觀的教學(xué)方法，或許能發(fā)揮學(xué)生多種感官的通覺(jué)作用呢！比如在教授一首民族樂(lè)曲《趕圩歸來(lái)阿哩哩》時(shí)，考慮到這個(gè)曲子強(qiáng)烈和獨(dú)特的民族特色，我結(jié)合該曲的作者情況，向大家進(jìn)行講解來(lái)輔助音樂(lè)欣賞教學(xué)：曲作者黃有異，是廣西歌舞團(tuán)的，為了編創(chuàng)這首曲子，黃有異曾經(jīng)親自到彝族村寨生活了數(shù)年，在體驗(yàn)生活中，他根據(jù)彝族曲調(diào)的特色，創(chuàng)作出了這首節(jié)奏優(yōu)美歡快的、民族色彩濃烈的曲子。我的講述，讓學(xué)生認(rèn)識(shí)到這是一首表達(dá)彝族人民幸福生活的曲子，其中趕圩這一特定的場(chǎng)景，又體現(xiàn)了美麗的彝族姑娘在趕圩過(guò)程中的快樂(lè)以及生活的富足。學(xué)生通過(guò)了解激發(fā)了興趣，所以在欣賞音樂(lè)時(shí)就更加用心了。我教學(xué)生們演唱經(jīng)典歌曲《保衛(wèi)黃河》時(shí)，為了引導(dǎo)同學(xué)們展開(kāi)豐富的想象，我找到了關(guān)于黃河保衛(wèi)戰(zhàn)的彩色掛圖，在課上展示給大家，引起了大家的興趣。多媒體教學(xué)的興起，使課堂更加生動(dòng)精彩、形象逼真。學(xué)生通過(guò)多種感官的感受和體驗(yàn)，對(duì)于理解、評(píng)價(jià)音樂(lè)有了比較深刻的認(rèn)識(shí)。二師生互動(dòng)，視、聽(tīng)并舉在音樂(lè)欣賞教學(xué)中，教師與學(xué)生都要同時(shí)進(jìn)入“傾聽(tīng)”音樂(lè)的狀態(tài)，這樣做便于把學(xué)生的注意力都吸引到課堂上來(lái)，從而從聽(tīng)覺(jué)上培養(yǎng)學(xué)生對(duì)音樂(lè)的感知能力，同時(shí)也能提高學(xué)生的記憶力。教師等學(xué)生“傾聽(tīng)”完音樂(lè)后，再介紹作品的體裁、時(shí)代背景以及作者的生平，應(yīng)用多媒體、圖片，從視覺(jué)到聽(tīng)覺(jué)，讓學(xué)生熟知。在這個(gè)過(guò)程中，教師在初聽(tīng)實(shí)施之前，應(yīng)該先提出幾個(gè)需要注意的問(wèn)題來(lái)提示學(xué)生：在這個(gè)過(guò)程中你聽(tīng)到了什么？在你眼前仿佛出現(xiàn)了什么？它是什么風(fēng)格的歌曲，所表達(dá)的是一種什么樣的情緒？帶著問(wèn)題進(jìn)行欣賞，學(xué)生的欣賞能力會(huì)得到提升。在欣賞馬頭琴獨(dú)奏曲《萬(wàn)馬奔騰》的教學(xué)活動(dòng)中，利用多媒體播放馬頭琴演奏方式，感受馬頭琴的音色，幫助學(xué)生理解作品，感受萬(wàn)馬奔騰的賽馬情景，更加深了學(xué)生對(duì)音樂(lè)作品的深度理解。三在師生的情感互動(dòng)中，讓學(xué)生體驗(yàn)音樂(lè)師生在情感互動(dòng)中進(jìn)行合作教學(xué)，這是新課程改革以來(lái)教師較為常見(jiàn)的一種教學(xué)手段。相比傳統(tǒng)的教學(xué)方式，它更強(qiáng)調(diào)集體學(xué)習(xí)能力的提升。這個(gè)合作的過(guò)程，是教師與學(xué)生以及學(xué)生與學(xué)生之間的互相作用，共同體驗(yàn)美、表現(xiàn)美、創(chuàng)造美的完整過(guò)程，也是提高學(xué)生對(duì)音樂(lè)的審美能力的過(guò)程。在音樂(lè)教學(xué)中，教師如何做才能讓學(xué)生獲得真正的審美體驗(yàn)?zāi)?？筆者通過(guò)實(shí)踐，認(rèn)為教師應(yīng)該在課堂上留出一定的自由活動(dòng)空間給學(xué)生，并在這個(gè)基礎(chǔ)上為他們提供活動(dòng)的條件。教師與學(xué)生融洽的交流與豐富的互動(dòng)，能夠調(diào)動(dòng)學(xué)生主動(dòng)參與到音樂(lè)教學(xué)過(guò)程中的熱情，使學(xué)生通過(guò)自己的親身體驗(yàn)來(lái)學(xué)習(xí)音樂(lè)文化，并在這個(gè)過(guò)程中嘗試進(jìn)行創(chuàng)造。為了讓學(xué)生充分發(fā)揮自己主觀能動(dòng)性，自覺(jué)地進(jìn)行思考，把自己對(duì)生活的理解和認(rèn)識(shí)融進(jìn)作品中，教師一定要注意鼓勵(lì)學(xué)生進(jìn)行模糊思維、自由想象，引導(dǎo)他們打開(kāi)想象的空間，提高他們的欣賞能力，使他們獲得審美享受。四在欣賞體驗(yàn)中成為學(xué)生中的一員，成為他們的“合作伙伴”如在《紅色娘子軍》一課的教學(xué)中有一個(gè)環(huán)節(jié)，我經(jīng)過(guò)考慮之后，決定讓學(xué)生自由組合成小隊(duì)，并列隊(duì)行進(jìn)創(chuàng)編與展示。在這個(gè)過(guò)程中，我則走到學(xué)生中間去，參與其中編排有困難的一個(gè)小隊(duì)，與大家共同交流，完成創(chuàng)作。在這里，讓學(xué)生自由組合成小隊(duì)進(jìn)行創(chuàng)編、展示，旨在張揚(yáng)學(xué)生的個(gè)性，發(fā)展學(xué)生的想象力，增強(qiáng)學(xué)生音樂(lè)表演的自信心，培養(yǎng)學(xué)生良好的合作意識(shí)，讓每個(gè)學(xué)生享受表現(xiàn)音樂(lè)和創(chuàng)編音樂(lè)所帶來(lái)的成功感和愉悅感?？傊?，新課程理念下的音樂(lè)課堂，是師生互動(dòng)的課堂，師生共營(yíng)的課堂。讓學(xué)生在音樂(lè)課堂中得到快樂(lè)，產(chǎn)生學(xué)習(xí)音樂(lè)的興趣，培養(yǎng)能力、陶冶性情，從而促進(jìn)學(xué)生審美能力的提高。分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)分子腫29優(yōu)秀精品課件文檔資料優(yōu)秀精品課件文檔資料30分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件31分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件32分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件33分子腫瘤學(xué)基礎(chǔ)課件34腫瘤的多因素多階段多基因參與的過(guò)程多因素多階段：二階段學(xué)說(shuō)多階段學(xué)說(shuō)多基因參與：癌基因、抑癌基因細(xì)胞凋亡相關(guān)基因、腫瘤易感基因腫瘤的多因素多階段多基因參與的過(guò)程多因素35腫瘤的發(fā)病與體細(xì)胞突變有關(guān)癌基因：維持細(xì)胞正常生理功能所必須的基因細(xì)胞增殖、分化、信號(hào)轉(zhuǎn)到體細(xì)胞突變學(xué)說(shuō)：腫瘤的發(fā)生與癌基因突變有關(guān)點(diǎn)突變、DNA擴(kuò)增染色體重排、甲基化腫瘤的發(fā)病與體細(xì)胞突變有關(guān)癌基因：維持細(xì)胞正常生理功能所必須36抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因二次突變學(xué)說(shuō)（Rb基因，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤）

遺傳性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者（Rb等位基因突變或缺失）：一次突變引起發(fā)病非遺傳性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤：二次突變突變引起發(fā)病抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因37腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳腫瘤易感基因：癌基因和抑癌基因的突變

DNA修復(fù)缺陷代謝酶基因：化學(xué)致癌腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳38三、腫瘤的分子診斷及其研究進(jìn)展1、分子診斷在腫瘤研究中的意義和應(yīng)用

腫瘤的分子診斷涉及到各種惡性腫瘤及癌前病變，主要集中在各種癌基因、抑癌基因及相關(guān)基因的檢測(cè)，分別在蛋白質(zhì)、RNA、DNA水平進(jìn)行判斷，為腫瘤的基礎(chǔ)研究、腫瘤防治和個(gè)體化或預(yù)見(jiàn)性治療提供更詳盡的證據(jù)。（1）腫瘤易感基因的檢測(cè)（2）腫瘤的分類(lèi)

對(duì)Bcr區(qū)基因重排檢測(cè)：可診斷慢粒并與急粒鑒別。神經(jīng)母細(xì)胞瘤——N-Myc明顯擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)；神經(jīng)上皮瘤——c-Myc擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)。三、腫瘤的分子診斷及其研究進(jìn)展1、分子診斷在腫瘤研究中的意39

（3）腫瘤的早期診斷

（4）腫瘤的預(yù)后判斷：從分子水平上判斷腫瘤的良、惡性及預(yù)后，有較高的準(zhǔn)確性。腫瘤相關(guān)基因的突變、擴(kuò)增及過(guò)表達(dá)等常與預(yù)后密切相關(guān)。

（5）腫瘤的個(gè)體化和預(yù)見(jiàn)性治療:腫瘤的發(fā)生是多基因、多步驟、多階段的過(guò)程，在發(fā)生、發(fā)展的不同時(shí)期，可能涉及不同的基因和不同的變化形式，而基因的變化和基因間的信號(hào)傳遞與腫瘤臨床治療的敏感性密切相關(guān)。提供腫瘤基因變化，對(duì)治療有指導(dǎo)意義。

（6）腫瘤的預(yù)后監(jiān)測(cè)（3）腫瘤的早期診斷402、腫瘤基因過(guò)表達(dá)及其檢測(cè)

（1）基因過(guò)表達(dá)的形式

癌基因激活和抑癌基因失活，是腫瘤發(fā)生過(guò)程中的關(guān)鍵因素。癌基因產(chǎn)物過(guò)表達(dá)是癌基因激活的重要表現(xiàn)形式之一。癌基因一般為單拷貝基因，在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的一些癌基因在DNA復(fù)制過(guò)程中擴(kuò)增，常導(dǎo)致基因產(chǎn)物過(guò)表達(dá)，表現(xiàn)為mRNA和蛋白質(zhì)量增加。有些抑癌基因突變后可起到癌基因的作用（如p53基因），產(chǎn)生突變型蛋白。2、腫瘤基因過(guò)表達(dá)及其檢測(cè)（1）基因過(guò)表達(dá)的形式41

（2）基因過(guò)表達(dá)的檢測(cè)

①表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)：幾乎所有被克隆的癌基因、抑癌基因都有相應(yīng)抗體，其中大多數(shù)已商品化。

免疫組化（immunohistochemistry）

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）免疫沉淀法：檢測(cè)并定量分析蛋白質(zhì)混合物中的靶抗原敏感（可檢出100pg的放射性標(biāo)記蛋白）。與SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳并用，可用于分析外源基因在原核和真核宿主細(xì)胞中的表達(dá)。（2）基因過(guò)表達(dá)的檢測(cè)42蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初，在蛋白質(zhì)凝膠電泳（分辨率高）和固相免疫測(cè)定（特異敏感）的基礎(chǔ)上發(fā)展的，結(jié)合了二者優(yōu)點(diǎn)，無(wú)需同位素標(biāo)記，具有從混雜抗原中檢出特定抗原，或從多克隆抗體中檢出單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)，還可對(duì)轉(zhuǎn)移到固相膜上的蛋白進(jìn)行連續(xù)分析，有蛋白質(zhì)反應(yīng)均一性、固相膜保存時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。敏感性為1～5ng。細(xì)胞裂解—→SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳→蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移→封閉→加一抗→加二抗→顯色照像。流式細(xì)胞儀（flowcytometry）測(cè)試法：用熒光標(biāo)記抗體與含有特異抗原的細(xì)胞結(jié)合，用流式細(xì)胞儀對(duì)含不同熒光信號(hào)的細(xì)胞分類(lèi)測(cè)試，可檢測(cè)細(xì)胞表面受體、標(biāo)志物或特異性蛋白及細(xì)胞的分類(lèi)分析。蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初43②基因擴(kuò)增的檢測(cè)：腫瘤基因擴(kuò)增可產(chǎn)生過(guò)量的表達(dá)蛋白，也可表現(xiàn)為基因拷貝數(shù)增加和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA增加。經(jīng)典檢測(cè)方法為核酸分子雜交，包括原位雜交（insituhydridization，ISH）、熒光原位雜交（FISH）、DNA雜交（Southernblot）、RNA雜交（Northernblot）、原位PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）。FISH

將熒光素標(biāo)記克隆的DNA片段與染色體或細(xì)胞間期染色質(zhì)雜交，以測(cè)定特定的DNA片段是否有缺失或擴(kuò)增。

原位PCR：結(jié)合了PCR與ISH技術(shù)優(yōu)點(diǎn)，在組織切片或細(xì)胞涂片上原位對(duì)特定DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增，再用特異性探針作原位雜交檢測(cè)，以達(dá)到對(duì)靶核苷酸進(jìn)行定性、定位、定量分析。

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）

用來(lái)擴(kuò)增從RNA分子中得到的一段特異序列。RNA首先被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。用位于一段特異序列或一個(gè)基因兩側(cè)的引物生成以cDNA為模板的PCR產(chǎn)物，得到陽(yáng)性產(chǎn)物說(shuō)明存在特異性的RNA序列。為擴(kuò)增從mRNA逆轉(zhuǎn)錄的cDNA，引物中應(yīng)含一段目的基因的內(nèi)含子區(qū)，以使從帶有基因組DNA的PCR產(chǎn)物中區(qū)分出cDNA的PCR產(chǎn)物。經(jīng)典方法包括RT和PCR兩步。

②基因擴(kuò)增的檢測(cè)：腫瘤基因擴(kuò)增可產(chǎn)生過(guò)量的表達(dá)蛋白，也可表現(xiàn)44（3）腫瘤基因差異表達(dá)的檢測(cè)

控制生物性狀的基本結(jié)構(gòu)和功能單位是基因，不同細(xì)胞或同一細(xì)胞的不同時(shí)間與空間基因表達(dá)的差異決定著生命活動(dòng)的多樣性，如發(fā)育、分化、繁殖、細(xì)胞周期調(diào)控、衰老、死亡等。實(shí)際上，細(xì)胞的各種生理過(guò)程或病理改變本質(zhì)上都是由基因表達(dá)的改變所決定的。因此獲取差異表達(dá)的基因?qū)⒂兄诹私庹Ｉ碜兓筒±砀淖兊姆肿訖C(jī)制，為基因診斷、基因治療和發(fā)現(xiàn)新的藥物靶分子提供新的視野。

（3）腫瘤基因差異表達(dá)的檢測(cè)45①DD-PCR（differentialdisplayPCR）又稱(chēng)差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR（DDRT-PCR）

簡(jiǎn)要流程

對(duì)照組處理組↓……反轉(zhuǎn)錄……↓mRNA或總RNAmRNA或總RNA↓……PCR……….↓cDNAcDNA↓↓

擴(kuò)增產(chǎn)物擴(kuò)增產(chǎn)物

↘電泳分離↙

↓比較回收差異顯示帶↓PCR

克隆、雜交、測(cè)序↓與Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)中的已知序列進(jìn)行同源性匹配確定相關(guān)基因①DD-PCR（differentialdisplay46②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocalsubtractiondifferentialRNAdisplay）：DD-PCR中采用差減過(guò)的RNA或cDNA樣品。1998年Kang等，分析了腺病毒轉(zhuǎn)化的大鼠胚胎細(xì)胞株E11和獲得侵襲性致癌表型的E11-NMT細(xì)胞株間的差異表達(dá)基因。

E11cDNA文庫(kù)E11-NMTcDNA文庫(kù)↓↓交互式差減E11減E11-NMT差減cDNA文庫(kù)E11-NMT減E11差減cDNA文庫(kù)↓體內(nèi)切割↓以錨定引物和5’隨機(jī)引物PCR擴(kuò)增↓顯示

5%測(cè)序膠顯示并分離差異條帶↓再擴(kuò)增，反向Northern分析↓

Northernblot分析表達(dá)分析↓克隆并測(cè)序，Northernblot確證②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocal47（4）基因突變的檢測(cè)

①PCR-SSCP法（PCR-singlestrandconformationalpolymorphism，聚合酶鏈反應(yīng)－單鏈構(gòu)象多態(tài)分析）：?jiǎn)捂淒NA在中性條件下會(huì)形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，即使有一個(gè)堿基不同，也會(huì)形成不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)而出現(xiàn)不同的遷移率。靶DNA或RNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物變性處理，單鏈產(chǎn)物經(jīng)中性聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE），靶DNA或RNA中含有單個(gè)堿基置換、數(shù)個(gè)堿基插入或缺失等改變時(shí)，因遷移率變化就出現(xiàn)泳動(dòng)變位，從而檢測(cè)出含有基因突變的DNA或RNA片段。

②雜合雙鏈分析法（Heteroduplexanalysis，HA）：由突變型和野生型DNA形成的異源雜合雙鏈在其錯(cuò)配處會(huì)形成突起，在非變性膠中電泳時(shí)，會(huì)產(chǎn)生與相應(yīng)的同源雙鏈DNA不同的遷移率。

③突變體富集PCR法（mutant-enrichedPCR）：利用癌基因或抑癌基因某個(gè)編碼子部位存在的已知限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)，用連續(xù)2次巢式PCR對(duì)包括酶切位點(diǎn)的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增，在2次PCR之間用相應(yīng)的內(nèi)切酶消化擴(kuò)增產(chǎn)物，野生型因酶切不能進(jìn)入第2次PCR，而突變型則能完整進(jìn)入第2次PCR并得到產(chǎn)物的富集。（4）基因突變的檢測(cè)48④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）：雙鏈DNA在沿變性劑（甲醛或尿素）電場(chǎng)方向遞增的凝膠中進(jìn)行到與DNA變性溫度（Tm）一致的位置時(shí)，DNA發(fā)生部分解鏈，遷移率下降。正常DNA分子與突變DNA分子間即使只有一個(gè)堿基對(duì)的差異，也會(huì)在不同位置解鏈，導(dǎo)致遷移率不同而被分離。兩個(gè)同源雙鏈DNA分子間有一個(gè)堿基對(duì)不同時(shí)，Tm值就相差1℃或更高，有一個(gè)堿基錯(cuò)配的異源雙鏈DNA分子與同源雙鏈DNA分子比較，其Tm值可相差6℃以上。⑤DNA芯片技術(shù)（DNAchip）：建立在雜交測(cè)序基本理論上的DNA分析技術(shù)。利用固定在芯片上的幾萬(wàn)至幾十萬(wàn)條探針與樣品雜交，在一步實(shí)驗(yàn)中獲取大量信息。可用于基因定位、DNA測(cè)序、突變分析、表達(dá)分析、基因多態(tài)性分析、物理圖譜和遺傳圖譜的構(gòu)建等。使用了光控固相化學(xué)合成、集成電路計(jì)算機(jī)、激光共聚焦掃描、熒光標(biāo)記探針等多項(xiàng)先進(jìn)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)全部自動(dòng)化，操作極簡(jiǎn)便，可節(jié)約大量時(shí)間和實(shí)驗(yàn)成本。將許多已知序列的寡核苷酸DNA排列在一塊集成電路板上，彼此間重疊1個(gè)堿基，并覆蓋全部檢測(cè)基因。將熒光標(biāo)記的正常和突變DNA分別與兩塊DNA芯片雜交，因至少存在1個(gè)堿基差異，將得到不同的雜交圖譜，用共聚焦顯微鏡分別檢測(cè)其熒光信號(hào)，即可確定是否存在突變。蛋白質(zhì)芯片、組織和細(xì)胞芯片④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradient49⑥

連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction，LCR）：雙鏈DNA經(jīng)加熱變性后，用2對(duì)互補(bǔ)寡核苷酸引物與模板復(fù)性。若引物序列與目標(biāo)序列完全配對(duì)，那么2對(duì)引物將與各自的目標(biāo)片段雜交，并在連接酶作用下發(fā)生連接。連接產(chǎn)物作為下一次循環(huán)的模板。若點(diǎn)突變出現(xiàn)在目標(biāo)片段上，將不能進(jìn)行連接反應(yīng)，不會(huì)出現(xiàn)連接產(chǎn)物。⑦

等位基因特異性擴(kuò)增法（allele-specificamplification，ASA）：設(shè)計(jì)2個(gè)等位基因特異的5’端引物（一個(gè)對(duì)野生型特異，一個(gè)對(duì)突變型特異特異）。對(duì)于純合型突變，分別加入兩種引物及3’端引物進(jìn)行兩個(gè)平行PCR，只有與突變DNA完全互補(bǔ)