結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的概要優(yōu)選課件

為了進(jìn)一步加強(qiáng)結(jié)核病控制工作，實(shí)現(xiàn)國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP)目標(biāo)，加強(qiáng)直接面視下短程化療(DOTS)策略和結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，提高肺結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)率，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)診斷傳染性肺結(jié)核是實(shí)施DOTS策略的一個(gè)關(guān)鍵，而且對(duì)結(jié)核病控制項(xiàng)目的成功起著重要的影響作用。為了進(jìn)一步加強(qiáng)結(jié)核病控制工作，實(shí)現(xiàn)國(guó)家1結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的目的和任務(wù)

在結(jié)核病控制工作中痰結(jié)核菌檢查對(duì)于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評(píng)價(jià)防治效果具有重要意義。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查是國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP)的重要組成部分，在現(xiàn)代結(jié)核病控制工作中起著不可缺少的重要作用。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的目的和任務(wù)在結(jié)核病控制工2

實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)及職能

在國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室的管理和監(jiān)督之下，以省級(jí)參比室為中心實(shí)驗(yàn)室，采用自上而下質(zhì)量保證體系與同級(jí)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)控相結(jié)合的方式，建立我國(guó)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)中的各級(jí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有效地發(fā)揮各自的職能。實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)及職能在國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室的管理和3我國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)

SNRL：跨國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室NRL：國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室PLL：地市級(jí)實(shí)驗(yàn)室CLL：縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室SNRLNRLPRLPLLCLL我國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)

SNRL：跨國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室SNRL4何為DOTS?

DOTS

為“directly0bservedtherapyshortcourse”的縮寫，中文譯為直接督導(dǎo)短程化療，統(tǒng)稱現(xiàn)代結(jié)核病控制策（DOTS）該策略１９９５年開(kāi)始在全球推廣，被認(rèn)為是當(dāng)今結(jié)核病診治和管理的最有效方法。世界銀行將DOTS列為“成本效益比最高”的治療方法之一。

何為DOTS?DOTS為“5現(xiàn)代結(jié)核病策略(DOTS)：1.政府承諾2.痰菌檢查,發(fā)現(xiàn)病人3.醫(yī)務(wù)人員直接觀察下的短程化療4.定期不間斷的藥品供應(yīng)5.信息監(jiān)測(cè)系統(tǒng)承諾痰檢督導(dǎo)藥品監(jiān)測(cè)現(xiàn)代結(jié)核病策略(DOTS)：承諾痰檢督導(dǎo)藥品監(jiān)測(cè)6

我國(guó)結(jié)核病疫情

目前有5.5億的人口感染了結(jié)核菌(44.5%)

估算全國(guó)現(xiàn)有活動(dòng)性肺結(jié)核病人450萬(wàn),其中傳染性肺結(jié)核病人（涂陽(yáng)肺結(jié)核）150萬(wàn)

據(jù)WHO估算,我國(guó)每年新發(fā)活動(dòng)性肺結(jié)核病人145萬(wàn),其中傳染性肺結(jié)核65萬(wàn)例

每年因結(jié)核病死亡13萬(wàn)

我國(guó)結(jié)核病疫情

目前有5.5億的人口7作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.抗酸桿菌陽(yáng)性（2＋）：1-9條抗酸桿菌/10視野。痰涂片檢查6個(gè)月方案8個(gè)月方案9700多萬(wàn)，結(jié)核病疫情較為嚴(yán)重,已首先使用40×物鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)卡尺移動(dòng)玻片至痰膜左端，將光線調(diào)節(jié)至適當(dāng)亮度，調(diào)節(jié)焦距至可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)；分枝桿菌屬裂殖菌綱,放線菌目,種類甚多,目前已命名的有56多種,一般可分為緩慢生長(zhǎng)和快速生長(zhǎng)兩大類。用于AFB檢查的玻片要求：PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室載玻片只允許一次性使用，嚴(yán)禁清洗后重復(fù)使用。脫色的特征,具有其染色特征的細(xì)菌習(xí)慣上稱這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：痰標(biāo)本性質(zhì):干酪痰、血痰、粘液痰和水樣痰分類登記.(涂片保存按照棄前留后的原則,保存近期三個(gè)月的全部痰涂片待檢,全年涂片不足500張的應(yīng)全部保存.作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.鏡檢讀片全部涂片按實(shí)驗(yàn)室登記本序號(hào)連續(xù)排列，存放于玻片盒內(nèi)。二）細(xì)菌、微生物、植物類等-2：使用雙目顯微鏡10×目鏡讀片。唾液或口水為不合格標(biāo)本，除照常進(jìn)行涂片檢查外，應(yīng)要求患者重新送檢。我省結(jié)核病疫情

河南是我國(guó)第一人口大省,人口達(dá)

9700多萬(wàn)，結(jié)核病疫情較為嚴(yán)重,已被國(guó)家確認(rèn)為結(jié)核病高負(fù)擔(dān)省,我省現(xiàn)有活動(dòng)性肺結(jié)核病人46萬(wàn)（患病率159/10萬(wàn)),其中傳染性病人15萬(wàn)（患病率497/10萬(wàn)),占全國(guó)肺結(jié)核病人數(shù)10%。作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.我省結(jié)核8

河南省結(jié)核病控制工作

1993年在全國(guó)率先開(kāi)展了“衛(wèi)生部加強(qiáng)與促進(jìn)結(jié)核病控制目”；

1998年自籌資金開(kāi)展“河南省結(jié)核病控制項(xiàng)目”；

2002年實(shí)施“世行貸款/英國(guó)政府贈(zèng)款/日本政府援助中國(guó)結(jié)核病控制項(xiàng)目”；

2003年開(kāi)展“全球基金項(xiàng)目”；

河南省結(jié)核病控制工作

1993年9

項(xiàng)目的實(shí)施使我省的結(jié)核病防治工作進(jìn)入了全新的發(fā)展階段。但是結(jié)核病防治工作并不盡如人意，疫情下降緩慢，結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)率低、耐藥率高、治療管理工作仍處于較低水平。

項(xiàng)目的實(shí)施使我省的結(jié)核病防治工作進(jìn)入了全新的發(fā)展階段。105、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲食和吸煙等；NRL：國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室萋-尼氏抗酸染色陽(yáng)性,鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。分離培養(yǎng)、藥物敏感性測(cè)定、菌種鑒定試驗(yàn)等操作應(yīng)設(shè)有生物安全操作柜或接種間和通風(fēng)櫥等；將染色后的玻片放置在報(bào)紙上，如果透過(guò)痰膜不能分辨報(bào)紙上的文字，則表明該玻片涂抹過(guò)厚。仔細(xì)觀察完300個(gè)視野，一般需要5分鐘以上；六）錯(cuò)誤結(jié)果的其它原因：分枝桿菌生物學(xué)基礎(chǔ)—簡(jiǎn)介PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室(注意：由于當(dāng)患者咳嗽、咳痰時(shí)易于產(chǎn)生含有結(jié)核菌的氣溶膠，感染周邊人群的機(jī)率較高，故采集痰標(biāo)本時(shí)應(yīng)在遠(yuǎn)離人群的開(kāi)放空間進(jìn)行，或在通風(fēng)良好的室內(nèi)進(jìn)行。網(wǎng)絡(luò)中的各級(jí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有效地發(fā)揮各自的職能?？顾崛旧⒁馐马?xiàng):

痰涂片保存-1:4、實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理；對(duì)當(dāng)日不能進(jìn)行涂片檢查的痰標(biāo)本，須置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。12002年實(shí)施“世行貸款/英國(guó)政府贈(zèng)款/日本政府援助中國(guó)結(jié)核病控制項(xiàng)目”；分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分的特殊12002年實(shí)施“世行貸款/英國(guó)政府贈(zèng)款/日本政府援助中國(guó)結(jié)核病控制項(xiàng)目”；4、閱讀上的錯(cuò)誤，由于視覺(jué)和心理上的原因造成的，也稱之為“人的因素”。治療方案在玻片正面一端的1/3處注明實(shí)驗(yàn)室序號(hào)及標(biāo)本序號(hào)(如使用的載玻片一端無(wú)磨砂面，必須使用玻璃刻刀注明編號(hào)；

痰檢質(zhì)控文件

1999年河南省結(jié)防所簽發(fā)豫結(jié)防字（1999年）第10號(hào)文件《河南省結(jié)核菌檢驗(yàn)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)》

2004年河南省衛(wèi)生廳簽發(fā)豫衛(wèi)疾控（2004年）第91號(hào)文件《河南省結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室痰涂片檢查質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)》

5、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲11

結(jié)核病細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室布局原則一、結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查要有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室，不得與其他實(shí)驗(yàn)室混用；二、培養(yǎng)基制備、洗刷等相對(duì)潔凈的操作與涂片鏡檢、培養(yǎng)前處理、藥敏試驗(yàn)等污染操作要有獨(dú)立分開(kāi)的場(chǎng)所，最好分別在專用的房間進(jìn)行；三、基層只從事涂片鏡檢的實(shí)驗(yàn)室只擁有一間獨(dú)立房舍的情況下，相對(duì)潔凈區(qū)（鏡檢區(qū)、登記區(qū)）與污染區(qū)（涂片、染色區(qū)）要有明顯區(qū)分。結(jié)核病細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室布局原則12基層痰檢室布局范例染色池收集標(biāo)本用的桌子工作臺(tái)采光用窗戶（固定）實(shí)驗(yàn)室門試劑柜顯微鏡記錄用的桌子可以開(kāi)關(guān)的窗戶基層痰檢室布局范例染色池收集標(biāo)本工作臺(tái)采實(shí)驗(yàn)室門試顯微鏡記錄13結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則

結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須具有與其服務(wù)級(jí)別相應(yīng)的裝備，其原則是能滿足該級(jí)別實(shí)驗(yàn)室的需要，使實(shí)驗(yàn)室人員得到充分的保護(hù)，并避免造成環(huán)境污染。結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須具14安全操作規(guī)則（1）1、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有合理布局及合適的單向（外排）通風(fēng)體系；

2、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備，以保護(hù)工作人員的安全和實(shí)驗(yàn)工作的順利進(jìn)行。分離培養(yǎng)、藥物敏感性測(cè)定、菌種鑒定試驗(yàn)等操作應(yīng)設(shè)有生物安全操作柜或接種間和通風(fēng)櫥等；安全操作規(guī)則（1）1、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有合理布局及合適的單向15安全操作規(guī)則（2）

3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方式進(jìn)行技術(shù)操作，穿戴隔離衣、口罩和帽子等；

4、實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理；

5、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲食和吸煙等；安全操作規(guī)則（2）3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方16安全操作規(guī)則（3）

6、進(jìn)行下列操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照技術(shù)規(guī)范，防止產(chǎn)生細(xì)菌氣溶膠：①涂片制作；②培養(yǎng)液的傾倒和轉(zhuǎn)移；③高速混合含菌液；④滴加、接種培養(yǎng)物；⑤吸管稀釋和混合菌懸液；⑥取樣器和震蕩器的使用；⑦細(xì)菌細(xì)胞超聲粉碎；⑧感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。安全操作規(guī)則（3）6、進(jìn)行下列操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照技術(shù)規(guī)范17分枝桿菌生物學(xué)基礎(chǔ)—簡(jiǎn)介結(jié)核分枝桿菌是1882年郭霍（Rober-tKoch）從肺結(jié)核病人痰標(biāo)本中發(fā)現(xiàn),是人類結(jié)核病的主要病原菌。分枝桿菌屬裂殖菌綱,放線菌目,種類甚多,目前已命名的有56多種,一般可分為緩慢生長(zhǎng)和快速生長(zhǎng)兩大類。分枝桿菌生物學(xué)基礎(chǔ)—簡(jiǎn)介結(jié)核分枝桿菌是1882年郭18結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性分枝桿菌的形態(tài):

結(jié)核分枝桿菌是專性需氧菌,無(wú)鞭毛、莢膜,無(wú)運(yùn)動(dòng)能力。形狀：1.5--3.5×0.3--0.6微米的細(xì)長(zhǎng)桿狀，直或稍彎，鏡下常堆積成團(tuán)、成束、排列雜亂無(wú)章，也有呈串珠樣、鏈狀、索狀者。萋-尼氏抗酸染色陽(yáng)性,鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性分枝桿菌的形態(tài):19結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性分枝桿菌的結(jié)構(gòu):

分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分的特殊性,具有經(jīng)堿性燃料染色后能夠忍受酸性介質(zhì)脫色的特征,具有其染色特征的細(xì)菌習(xí)慣上稱為抗酸菌(AFB).AFB菌體細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性與其抗酸染色特性有著密切聯(lián)系.用電子顯微鏡觀察分枝桿菌,完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)主要有以下部分組成:

細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核區(qū)、細(xì)胞器.結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性20抗酸性抗酸性是分枝桿菌的重要特征。其化學(xué)基礎(chǔ)是分枝菌屬的細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，并含有大量分枝菌酸。抗酸性與細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性關(guān)系密切，若菌體自溶（如標(biāo)本保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、溫度過(guò)高）、結(jié)核菌的變異型（如L-型菌）可能失去抗酸性。結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性抗酸性結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性21車氏(87年)65.這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：4、

涂片固定不好，一些東西被沖洗脫掉；用電子顯微鏡觀察分枝桿抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-3:⑤吸管稀釋和混合菌懸液；5(36/55)34.萋-尼氏抗酸染色陽(yáng)性,鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。油滴管接觸到涂片上，油鏡頭碰到涂片，用吸水紙連續(xù)壓干幾個(gè)涂片均可造成交叉污染。涂片染色鏡檢時(shí)，鏡下可見(jiàn)少量口腔上皮脫落細(xì)胞(形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比接近或大于1:2)和口腔內(nèi)寄生菌，有時(shí)可見(jiàn)食物殘?jiān)?。確認(rèn)每份標(biāo)本至少3ml;通常10mmx20mm的痰膜，使用100×油鏡，每行可觀察約100個(gè)視野。PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室一、痰菌檢查是確定傳染源的唯一方法分枝桿菌生物學(xué)基礎(chǔ)—簡(jiǎn)介報(bào)告結(jié)果時(shí)間短,能滿足臨床診斷的需求.3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方式進(jìn)行技術(shù)操作，穿戴隔離衣、口罩和帽子等；出的第2口、第3口痰液；涂片抗酸染色檢查方法-4痰標(biāo)本采集-2容器：PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—培養(yǎng)特性生長(zhǎng)適宜溫度370C，PH6.8-7.2。營(yíng)養(yǎng)要求較高。在常用的羅氏（Lowenstein-Jensen）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皺折，呈顆粒、結(jié)節(jié)或菜花樣，乳白色或米色，不透明。結(jié)核菌生長(zhǎng)緩慢，在一般培養(yǎng)基上分裂一代需要10多小時(shí)，根據(jù)接種菌量的多少，一般10-30天肉眼可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)。車氏(87年)65.結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—培養(yǎng)特性生長(zhǎng)22結(jié)核菌檢驗(yàn)方法一、涂片法：直接涂片法集菌法二、培養(yǎng)法:雞蛋固體培養(yǎng)基法（Lowenstein-Jensen）

快速培養(yǎng)法三、動(dòng)物試驗(yàn)四、分子生物學(xué)診斷（PCR）五、免疫學(xué)診斷結(jié)核菌檢驗(yàn)方法一、涂片法：直接涂片法23結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的概要優(yōu)選課件24

各種方法可檢出結(jié)核桿菌數(shù)量（個(gè)/ml

方法直接涂片集菌培養(yǎng)動(dòng)物試驗(yàn)PCR

菌數(shù)10.0001.000100101

25

一條結(jié)核桿菌在體內(nèi)的繁殖情況結(jié)核桿菌數(shù)

天數(shù)天數(shù)天數(shù)

1

2

9

512

17131072

2

4

10

1024

18262144

3

8

11

2048

19524288

4

16

12

4096

2010485765

32

13

8192212097152

6

64

14

16384

28268416×103

7

12815

327683534535×106

8

256

16

65536

424396800×106

結(jié)核桿菌數(shù)結(jié)核桿菌數(shù)一條結(jié)核桿菌在體內(nèi)的繁殖情況結(jié)核桿菌數(shù)天數(shù)天數(shù)天數(shù)26

排菌量

1ml痰液中含菌量為1000-10.000，其痰涂片陽(yáng)性率為40％-50％發(fā)現(xiàn)1個(gè)桿菌需查視野數(shù)

涂片上的桿菌數(shù)

每ml標(biāo)本中桿菌數(shù)

100

100

1000

10

1000

10000

1

10000

100000排菌量1ml痰液中含菌量為127

痰涂片檢查的意義

28一、痰菌檢查是確定傳染源的唯一方法

控制結(jié)核病流行以發(fā)現(xiàn)和控制傳染源為主，痰涂片抗酸桿菌（AFB）陽(yáng)性的肺結(jié)核患者是結(jié)核病的主要傳染源，因此痰涂片AFB鏡檢結(jié)果對(duì)診斷傳染性結(jié)核病是一項(xiàng)重要指標(biāo)。一、痰菌檢查是確定傳染源的唯一方法控制結(jié)核病流行以發(fā)29二、痰菌檢查是確定化療的依據(jù)

病人是否需要化療，首先應(yīng)以痰結(jié)果為準(zhǔn)，如不查痰或查痰不對(duì)，就只能憑X線判斷有無(wú)活動(dòng)性，這樣就可能將本來(lái)沒(méi)有活動(dòng)性、不需治療的病人進(jìn)行長(zhǎng)期治療。二、痰菌檢查是確定化療的依據(jù)

病人是否需要化療，首先30

三、痰菌狀況是流行病學(xué)重要指標(biāo)由于傳染性結(jié)核病在流行病學(xué)中有著特殊的意義，因此在反映某一國(guó)家或地區(qū)結(jié)核病疫情嚴(yán)重程度的指標(biāo)中，年感染率、涂陽(yáng)患病率、涂陽(yáng)發(fā)病率被更多關(guān)注。

31四、化療方案的選擇需以查痰結(jié)果為根據(jù)

排菌病人：說(shuō)明在病變中藏有大量繁殖旺盛的結(jié)核菌，需要有強(qiáng)有力的化療方案，以達(dá)到迅速控制繁殖，短期內(nèi)殺滅大部分結(jié)核菌的目的。

不排菌病人：一般病變中結(jié)核菌數(shù)量不大，繁殖不旺盛，就不必要用特別強(qiáng)的化療方案。排菌與不排菌病人的治療，在用藥品種配伍、化療時(shí)間管理方式上都有明顯差別。四、化療方案的選擇需以查痰32

五、化療效果的考核

過(guò)去常以X線病變變化為考核治療效果的指標(biāo)，當(dāng)前認(rèn)為以痰菌陰轉(zhuǎn)考核化療效果更為合適。因?yàn)椋?/p>

1、化療作用在于直接殺滅病灶中的結(jié)核菌，痰菌的變化反映了病變的情況。

2、痰菌檢查較X線更客觀，誤差較小，在各地、各人前后之間比較容易標(biāo)準(zhǔn)一致，可比性大。

33抗酸性是分枝桿菌的重要特征。一、涂片法：直接涂片法5、石碳酸復(fù)紅染色時(shí)間過(guò)短，或因過(guò)熱而沸騰，造成染色太重；排菌量分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分的特殊用電子顯微鏡觀察分枝桿涂片抗酸染色檢查方法-6結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則+-車氏(87年)65.一般包括持續(xù)咳嗽、咳痰超過(guò)3周；嚴(yán)禁物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜.血痰：此類標(biāo)本是因粘液痰或干酪痰標(biāo)本中混有血液而形成，顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲。結(jié)果為根據(jù)每張?jiān)圆Ｆ荒苁褂靡淮?，不得清洗后再次用于AFB涂片檢查。4396800×106率159/10萬(wàn)),其中傳染性病人15萬(wàn)（患病率497/10萬(wàn)),占全國(guó)肺結(jié)核病(涂片保存按照棄前留后的原則,保存近期三個(gè)月的全部痰涂片待檢,全年涂片不足500張的應(yīng)全部保存.1000某些松樹(shù)的花粉是短小、球菌樣的桿狀，標(biāo)本里較罕見(jiàn)更好是囑病人在早飯前或空腹時(shí)留標(biāo)本。五、化療效果的考核

3、化療目的在于控制傳染源

4、化療情況下，痰菌變化比X線敏感。

5、有效化療下，完成療程，痰菌陰轉(zhuǎn)后，即使X線陰影尚未完全吸收、硬結(jié)、穩(wěn)定，也可以停藥?？顾嵝允欠种U菌的重要特征。五、化療效果的考核34

化療前后結(jié)核桿菌的定量分析

1976年Yeager報(bào)告對(duì)痰菌陽(yáng)性病人在化療前后做結(jié)核桿菌培養(yǎng)的定量分析:

化療前每ml細(xì)菌數(shù)106-107，化療2周后減少至5％，

4周減少至0.25％,化療后結(jié)核桿菌呈對(duì)數(shù)減少以至消失，降低了傳染性。

化療前后結(jié)核桿菌的定量分析

1976年Yeage35六、化療中查痰要求

治療方案痰涂片檢查6個(gè)月方案8個(gè)月方案強(qiáng)化期第2個(gè)月末第2個(gè)月末繼續(xù)期中第5個(gè)月末第5個(gè)月末治療末第6個(gè)月末第8個(gè)月末六、化療中查痰要求36痰涂片檢查的優(yōu)點(diǎn)

1.作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.2.作為實(shí)驗(yàn)方法,AFB鏡檢方法技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單.3.建立AFB檢查所需設(shè)備投入少.4.檢查成本低,易于接受.5.報(bào)告結(jié)果時(shí)間短,能滿足臨床診斷的需求.6.對(duì)陽(yáng)性患者的治療效果,能夠作出及時(shí)和準(zhǔn)確的評(píng)價(jià).

痰涂片檢查的優(yōu)點(diǎn)37檢查對(duì)象

確定診斷：

凡因結(jié)核病癥狀求診及轉(zhuǎn)診的可疑肺結(jié)核患者，均應(yīng)進(jìn)行直接涂片檢查。一般包括持續(xù)咳嗽、咳痰超過(guò)3周；咳血或伴有血痰；發(fā)熱或胸痛超過(guò)2周；胸部X線異常。確定診斷的涂片檢查應(yīng)采集3個(gè)合格的痰標(biāo)本。就診當(dāng)時(shí)在門診留一份“即時(shí)痰”標(biāo)本，同時(shí)給患者2個(gè)痰盒，囑患者留取“夜間痰”和“晨痰”，于次日交驗(yàn)。檢查對(duì)象確定診斷：38

療效評(píng)價(jià)：

凡已確診、登記、治療的肺結(jié)核患者，在化療期間按照規(guī)定應(yīng)定期查痰：

初治涂陽(yáng)患者在療程滿2、5、6個(gè)月時(shí)，復(fù)治涂陽(yáng)患者在療程滿2、5、8個(gè)月時(shí)，按期送檢兩份痰（當(dāng)日即時(shí)痰、當(dāng)或次日晨痰）。

療效評(píng)價(jià)：39

療效評(píng)價(jià)：

初、復(fù)治涂陽(yáng)患者在療程滿2個(gè)月時(shí)，痰菌仍為陽(yáng)性者，應(yīng)在延長(zhǎng)期滿1個(gè)月時(shí)增加檢查一次；若復(fù)治涂陽(yáng)患者治療滿3個(gè)月時(shí)痰菌仍陽(yáng)性，應(yīng)在治療滿5個(gè)月增加晨痰檢查一次，送檢兩份痰（當(dāng)日即時(shí)痰、當(dāng)或次日晨痰）。

確診、登記的涂陰肺結(jié)核患者，即使患者因故未接受治療，也應(yīng)在登記后滿2個(gè)月和6個(gè)月時(shí)進(jìn)行痰菌檢查。療效評(píng)價(jià)：40這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則報(bào)告抗酸桿菌菌數(shù)：1-8條抗酸桿菌/300視野。“標(biāo)本鏡檢結(jié)果”中的“日期”為實(shí)際鏡檢日期.作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.做一個(gè)好涂片，痰標(biāo)本的收集以及痰塊的選擇是基本要求，應(yīng)予以特別注意。涂片保存與實(shí)驗(yàn)室登記本記錄應(yīng)保持一致。涂片上的4車氏(87年)65.報(bào)告結(jié)果時(shí)間短,能滿足臨床診斷的需求.一）一些抗酸顆粒-2：5、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲食和吸煙等；唾液或口水為不合格標(biāo)本，除照常進(jìn)行涂片檢查外，應(yīng)要求患者重新送檢。保險(xiǎn)的方法是使用新鮮配制經(jīng)過(guò)濾的染液，而不用陳腐的染液。（Lowenstein-Jensen）因此痰涂片鏡檢的結(jié)果報(bào)告，不僅是對(duì)疾病的定性，也是對(duì)疾病嚴(yán)重程度的半定量。假如痰未經(jīng)離心和濃縮處理。假陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)防措施-2強(qiáng)化期第2個(gè)月末第2個(gè)月末用于AFB檢查的玻片要求：2、痰菌檢查較X線更客觀，誤差較小，在各地、各人前后之間比較容易標(biāo)準(zhǔn)一致，可比性大。痰標(biāo)本的采集-1

容器：

采用WHO推薦的國(guó)際通用螺旋蓋痰瓶，或可密封塑料盒、蠟紙盒收集痰標(biāo)本（參考規(guī)格：直徑4厘米，高度2厘米）。痰容器應(yīng)標(biāo)明病人姓名、編號(hào)（初診病人門診序號(hào)或隨訪病人登記號(hào)）、檢查項(xiàng)目和容器序號(hào)1、2、3（1＝當(dāng)日即時(shí)痰，2＝夜間痰，3＝次日晨痰）。這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：痰標(biāo)本的采集-141

痰標(biāo)本采集-2

按采集的時(shí)間，可將標(biāo)本分為三類：

即時(shí)痰：就診時(shí)深呼吸后咳出的痰液；

晨痰：患者晨起立即用清水漱口后，咳出的第2口、第3口痰液；

夜間痰：送痰前一日，患者晚間咳出的痰液；

痰標(biāo)本采集-242痰標(biāo)本的采集-3

對(duì)疑似肺結(jié)核病者，臨床醫(yī)護(hù)人員應(yīng)通過(guò)解釋，使其充分了解標(biāo)本質(zhì)量對(duì)相應(yīng)檢查項(xiàng)目的重要性，示范并指導(dǎo)其掌握從肺部深處咳痰的方法；如患者識(shí)字，可提供宣教材料。(注意：由于當(dāng)患者咳嗽、咳痰時(shí)易于產(chǎn)生含有結(jié)核菌的氣溶膠，感染周邊人群的機(jī)率較高，故采集痰標(biāo)本時(shí)應(yīng)在遠(yuǎn)離人群的開(kāi)放空間進(jìn)行，或在通風(fēng)良好的室內(nèi)進(jìn)行。)痰標(biāo)本的采集-3對(duì)疑似肺結(jié)核病者，臨床醫(yī)護(hù)43痰標(biāo)本的采集-4

患者留取的痰標(biāo)本，應(yīng)由檢驗(yàn)人員或經(jīng)培訓(xùn)的專人目視檢查標(biāo)本質(zhì)量(特別是用于初次診斷的痰標(biāo)本)：標(biāo)本量一般在3-5ml，標(biāo)本性狀屬于干酪痰、褐色血痰或含少量新鮮血液的血痰、粘液痰者為合格的標(biāo)本；痰標(biāo)本不合格者，應(yīng)予以進(jìn)一步指導(dǎo)并要求其重新送檢。進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查時(shí)應(yīng)在登記本和檢驗(yàn)報(bào)告單上注明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時(shí)參考。痰標(biāo)本的采集-4患者留取的痰標(biāo)本，應(yīng)44

標(biāo)本的性狀-1

合格的痰標(biāo)本應(yīng)是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物。

干酪痰：標(biāo)本外觀以黃色(或奶酪色)、膿樣、團(tuán)塊狀的肺部分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時(shí)較易涂抹；涂片染色后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)大量膿性炎癥細(xì)胞、肺上皮脫落細(xì)胞。

血痰：此類標(biāo)本是因粘液痰或干酪痰標(biāo)本中混有血液而形成，顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲。標(biāo)本的45標(biāo)本的性狀-2

粘液痰：標(biāo)本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支氣管分泌物為主，制片時(shí)需仔細(xì)涂抹；涂片染色后鏡檢時(shí)，鏡下可見(jiàn)支氣管內(nèi)膜纖毛柱狀上皮細(xì)胞，伴有少量肺上皮脫落細(xì)胞、膿性炎癥細(xì)胞、口腔脫落細(xì)胞及口腔寄生菌。此類標(biāo)本的AFB檢出率較唾液高。標(biāo)本的性狀-2

粘液痰：標(biāo)本外觀以白色、粘稠度46標(biāo)本的性狀-3

唾液：目視觀察標(biāo)本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘度較低的口腔分泌物為主，標(biāo)本中有時(shí)伴有氣泡；涂片染色鏡檢時(shí)，鏡下可見(jiàn)少量口腔上皮脫落細(xì)胞(形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核著色較細(xì)胞質(zhì)深，核質(zhì)比接近或大于1:2)和口腔內(nèi)寄生菌，有時(shí)可見(jiàn)食物殘?jiān)Ｓ捎诖祟悩?biāo)本進(jìn)行AFB檢查時(shí)的檢出率很低，用于對(duì)患者確定診斷時(shí)是不合格的標(biāo)本。標(biāo)本的性狀-3

唾液：目視觀察標(biāo)本整體外觀，以47涂片抗酸染色檢查方法-1用于AFB檢查的玻片要求：一張?jiān)圆Ｆ现荒芡磕ㄒ环萏禈?biāo)本；每張?jiān)圆Ｆ荒苁褂靡淮?，不得清洗后再次用于AFB涂片檢查。涂片抗酸染色檢查方法-1用于AFB檢查的玻片要求：48涂片抗酸染色檢查方法-2用于AFB檢查的玻片要求：在玻片正面一端的1/3處注明實(shí)驗(yàn)室序號(hào)及標(biāo)本序號(hào)(如使用的載玻片一端無(wú)磨砂面，必須使用玻璃刻刀注明編號(hào)；如使用的載玻片一端有磨砂面，可使用2B鉛筆在磨砂面上直接書寫)。涂片抗酸染色檢查方法-2用于AFB檢查的玻片要求：49涂片抗酸染色檢查方法-3

制備涂片：

小心打開(kāi)承載痰標(biāo)本的容器，防止產(chǎn)生氣溶膠或使標(biāo)本外溢。仔細(xì)觀察標(biāo)本，使用折斷的竹簽茬端，挑取痰標(biāo)本中干酪樣、膿樣或可疑部分約0.05-0.1ml，于玻片正面右側(cè)2/3處，均勻涂抹成10mm×20mm的卵圓形痰膜。痰膜朝上靜置自然干燥后(一般約需要30分鐘)進(jìn)行染色。

涂片抗酸染色檢查方法-350涂片抗酸染色檢查方法-4

制備涂片：

涂抹完畢后的痰標(biāo)本，在結(jié)果報(bào)告前應(yīng)暫時(shí)保留。為了保證檢驗(yàn)人員的安全，嚴(yán)禁在涂抹痰標(biāo)本的同時(shí)，對(duì)載玻片進(jìn)行加熱。涂片抗酸染色檢查方法-4制備涂片：51涂片抗酸染色檢查方法-5

Z－N染色步驟

操作流程涂痰膜自然干燥復(fù)紅加熱初染5分鐘自然干燥鏡檢流水沖洗美蘭復(fù)染30秒5%鹽酸酒精脫色1-3分鐘流水沖洗流水沖洗涂片抗酸染色檢查方法-552痰涂片檢查6個(gè)月方案8個(gè)月方案結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性制備涂片：痰（-）6（2.二）細(xì)菌、微生物、植物類等-2：一）一些抗酸顆粒-2：用于AFB檢查的玻片要求：用蒸餾水或煮沸過(guò)的水就可以避免。完整、準(zhǔn)確地標(biāo)注痰盒、標(biāo)本和實(shí)驗(yàn)室登記本.⑤吸管稀釋和混合菌懸液；2、痰菌檢查較X線更客觀，誤差較小，在各地、各人前后之間比較容易標(biāo)準(zhǔn)一致，可比性大。集菌法脫色的特征,具有其染色特征的細(xì)菌習(xí)慣上稱治療末第6個(gè)月末第8個(gè)月末萋-尼氏抗酸染色陽(yáng)性,鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。涂片抗酸染色檢查方法-44、實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理；將染色后的玻片放置在報(bào)紙上，如果透過(guò)痰膜不能分辨報(bào)紙上的文字，則表明該玻片涂抹過(guò)厚。一）一些抗酸顆粒-2：染色時(shí)勿使玻片上的染液干燥.PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室

涂片抗酸染色檢查方法-6

一張染色合格的玻片，被亞甲蘭染色而呈亮藍(lán)色。將染色后的玻片放置在報(bào)紙上，如果透過(guò)痰膜不能分辨報(bào)紙上的文字，則表明該玻片涂抹過(guò)厚。痰涂片檢查6個(gè)月方案8個(gè)月方案

涂片抗酸染色53

萋尼氏染色玻片鏡檢：使用雙目顯微鏡10×目鏡讀片。取染色完畢且已干燥的玻片，痰膜向上放置在玻片臺(tái)上并以卡尺固定。首先使用40×物鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)卡尺移動(dòng)玻片至痰膜左端，將光線調(diào)節(jié)至適當(dāng)亮度，調(diào)節(jié)焦距至可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)；移開(kāi)40×物鏡，在玻片上滴1-2滴鏡油，使用100×油鏡進(jìn)行細(xì)致觀察。

54

鏡檢讀片-1

讀片時(shí)，首先應(yīng)從左向右觀察相鄰的視野；當(dāng)玻片移動(dòng)至痰膜一端時(shí)，縱向向下轉(zhuǎn)換一個(gè)視野，然后從右向左觀察，依此類推。通常10mmx20mm的痰膜，使用100×油鏡，每行可觀察約100個(gè)視野。

鏡檢讀片-1

55

鏡檢讀片

鏡檢讀片56

鏡檢讀片-2

推薦使用專門用于100×油鏡、不干燥、不變硬的鏡油。仔細(xì)觀察完300個(gè)視野，一般需要5分鐘以上；每個(gè)工作日，連續(xù)閱讀10-12張玻片后，應(yīng)休息20分鐘左右。鏡檢讀片-257結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的概要優(yōu)選課件58

萋尼氏染色鏡檢結(jié)果報(bào)告：

由于與疾病傳染的程度及其相應(yīng)嚴(yán)重程度密切相關(guān)，故鏡檢時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)菌的數(shù)量是非常重要的參考依據(jù)。因此痰涂片鏡檢的結(jié)果報(bào)告，不僅是對(duì)疾病的定性，也是對(duì)疾病嚴(yán)重程度的半定量。

萋尼氏染色鏡檢結(jié)果報(bào)告：59

結(jié)果分級(jí)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)：抗酸桿菌陰性(－)：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。報(bào)告抗酸桿菌菌數(shù)：1-8條抗酸桿菌/300視野?？顾釛U菌陽(yáng)性（1＋）:3-9條抗酸桿菌/100視野?？顾釛U菌陽(yáng)性（2＋）：1-9條抗酸桿菌/10視野?？顾釛U菌陽(yáng)性（3＋）：1-9條抗酸桿菌/每視野?？顾釛U菌陽(yáng)性（4＋）：≥10條抗酸桿菌/每視野。

結(jié)果分級(jí)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)：60結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本實(shí)驗(yàn)序號(hào)日期姓名性別年齡初診病人住址痰標(biāo)本來(lái)源標(biāo)本鏡檢結(jié)果簽名備注初診病人(門診序號(hào))隨訪病人(登記號(hào))標(biāo)本性質(zhì)結(jié)果日期123123結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本實(shí)驗(yàn)序號(hào)日姓性年初診病人住址痰標(biāo)本來(lái)61DOTS為“directly0bservedtherapyshortcourse”的縮寫，中文譯為直接督導(dǎo)短程化療，統(tǒng)稱現(xiàn)代結(jié)核病控制策（DOTS）該策略１９９５年開(kāi)始在全球推廣，被認(rèn)為是當(dāng)今結(jié)核病診治和管理的最有效方法。10000用于AFB檢查的玻片要求：這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：4、閱讀上的錯(cuò)誤，由于視覺(jué)和心理上的原因造成的，也稱之為“人的因素”。1.我國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)由于與疾病傳染的程度及其相應(yīng)嚴(yán)重程度密切相關(guān)，故鏡檢時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)菌的數(shù)量是非常重要的參考依據(jù)。(涂片保存按照棄前留后的原則,保存近期三個(gè)月的全部痰涂片待檢,全年涂片不足500張的應(yīng)全部保存.4、閱讀上的錯(cuò)誤，由于視覺(jué)和心理上的原因造成的，也稱之為“人的因素”。用于AFB檢查的玻片要求：10二）細(xì)菌、微生物、植物類等-1：對(duì)當(dāng)日不能進(jìn)行涂片檢查的痰標(biāo)本，須置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。強(qiáng)化期第2個(gè)月末第2個(gè)月末即時(shí)痰與晨痰陽(yáng)性檢出率比較嚴(yán)格按照操作程序完成染色過(guò)程;每張?jiān)圆Ｆ荒苁褂靡淮?，不得清洗后再次用于AFB涂片檢查。DOTS為“directly0bservedtherapyshortcourse”的縮寫，中文譯為直接督導(dǎo)短程化療，統(tǒng)稱現(xiàn)代結(jié)核病控制策（DOTS）該策略１９９５年開(kāi)始在全球推廣，被認(rèn)為是當(dāng)今結(jié)核病診治和管理的最有效方法。一條結(jié)核桿菌在體內(nèi)的繁殖情況使用高質(zhì)量染料,嚴(yán)格按照配方配制染液;對(duì)當(dāng)日不能進(jìn)行涂片檢查的痰標(biāo)本，須置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。填寫說(shuō)明

實(shí)驗(yàn)序號(hào)和編號(hào):初診病人的3個(gè)標(biāo)本,隨訪病人的2個(gè)痰標(biāo)本,

要在玻片上注明每個(gè)痰標(biāo)本的序號(hào)和編號(hào),例如:實(shí)驗(yàn)序號(hào)為18,3個(gè)痰標(biāo)本的編號(hào)分別為18-1、18-2、18-3,

痰標(biāo)本來(lái)源:初診病人門診序號(hào)以門診登記本為據(jù);隨訪病人登記號(hào)以病人登記本為據(jù).

痰標(biāo)本性質(zhì):干酪痰、血痰、粘液痰和水樣痰分類登記.

“標(biāo)本鏡檢結(jié)果”中的“日期”為實(shí)際鏡檢日期.DOTS為“directly0bservedther62

即時(shí)痰與晨痰陽(yáng)性檢出率比較

即時(shí)痰總計(jì)

+-

晨（+）217（84.4%）29(11.3%)246

痰（-）6（2.3%）5(2.0%)11

合計(jì)22334257即時(shí)痰與晨痰陽(yáng)性檢出率比較63不同性狀痰樣本涂片檢查分枝桿菌陽(yáng)性檢出百分率

作者干酪樣痰血性痰膿性痰粘液性痰水樣痰郭氏(78年)63.6(77/121)31(4/13)26.4(37/140)8.7(74/847)2.8(2/71)車氏(87年)65.5(36/55)34.8(16/46)32.1(42./131)10.6(56/52.9)4.3(4/92)宋氏(97年)72(36/50)30(8/60)26.8(52/194)20(38/190)2.7(4/148)閆氏(99年)76.5(39/51)41.2(21/51)33.3(33/99)20.6(49/238)2.3(7/304)不同性狀痰樣本涂片檢查分枝桿菌陽(yáng)性檢出百分率作者64假陽(yáng)性產(chǎn)生的原因

偶爾痰標(biāo)本或涂片上有抗酸顆粒，用萋-尼法染色后，這些顆粒仍保持紅色（石碳酸復(fù)紅）用酸酒精不脫色。這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：假陽(yáng)性產(chǎn)生的原因65一)一些抗酸顆粒-1：1、食物顆粒（如蠟、油）要去掉這些，囑病人在留標(biāo)本以前清水漱口、刷牙（不用牙膏或消毒劑）。更好是囑病人在早飯前或空腹時(shí)留標(biāo)本。一)一些抗酸顆粒-1：1、食物顆粒（如蠟、油）66一）一些抗酸顆粒-2：

2、染液沉渣雖然這些沉渣與抗酸桿菌容易辨別，但可影響鏡檢或偶爾使經(jīng)驗(yàn)不足的鏡檢者看錯(cuò)。沉渣可以通過(guò)過(guò)濾從染液除去。保險(xiǎn)的方法是使用新鮮配制經(jīng)過(guò)濾的染液，而不用陳腐的染液。一）一些抗酸顆粒-2：

2、染液沉渣67二）細(xì)菌、微生物、植物類等-1：

1、腐生抗酸桿菌這些菌出現(xiàn)在土壤和水里，在工作時(shí)有時(shí)會(huì)混入痰標(biāo)本里或涂片上。用蒸餾水或煮沸過(guò)的水就可以避免。

2、非結(jié)核分枝桿菌如：堪薩斯分枝桿菌、枯草桿菌的芽孢枯草桿菌的芽孢等，這些抗酸桿菌偶爾出現(xiàn)在標(biāo)本里，當(dāng)這些菌引起肺部疾患時(shí)，出現(xiàn)的菌數(shù)較多。二）細(xì)菌、微生物、植物類等-1：

1、腐生抗酸桿菌68二）細(xì)菌、微生物、植物類等-2：3、纖維和花粉纖維，包括毛、棉、濾紙和竹等，一般單個(gè)地出現(xiàn)，而且只在一個(gè)視野里。某些松樹(shù)的花粉是短小、球菌樣的桿狀，標(biāo)本里較罕見(jiàn)

4、玻片反復(fù)使用、不潔凈、有劃痕，常常會(huì)滯留痰液，使初學(xué)者弄混。劃痕多呈并排狀波紋形，一般比抗酸菌長(zhǎng)。二）細(xì)菌、微生物、植物類等-2：3、纖維和花粉69三）操作過(guò)程中造成的污染-1：1、染色當(dāng)幾個(gè)玻片同時(shí)放在一個(gè)染色缸或脫色缸里處理時(shí)，有時(shí)抗酸桿菌會(huì)從一個(gè)陽(yáng)性玻片上污染到另一個(gè)陰性玻片上，因此抗酸染色不允許缸染,必須把每一張玻片放在染色架上分開(kāi)處理就可以防止這種情況。三）操作過(guò)程中造成的污染-1：1、染色70三）操作過(guò)程中造成的污染-2：2、鏡檢油滴管接觸到涂片上，油鏡頭碰到涂片，用吸水紙連續(xù)壓干幾個(gè)涂片均可造成交叉污染。三）操作過(guò)程中造成的污染-2：2、鏡檢715、石碳酸復(fù)紅染色時(shí)間過(guò)短，或因過(guò)熱而沸騰，造成染色太重；由于傳染性結(jié)核病在流行病學(xué)中有著特殊的意義，因此在反映某一國(guó)家或地區(qū)結(jié)核病疫情嚴(yán)重程度的指標(biāo)中，年感染率、涂陽(yáng)患病率、涂陽(yáng)發(fā)病率被更多關(guān)注。4、實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理；結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性對(duì)當(dāng)日不能進(jìn)行涂片檢查的痰標(biāo)本，須置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。這些菌出現(xiàn)在土壤和水里，在工作時(shí)有時(shí)會(huì)混入痰標(biāo)本里或涂片上。②培養(yǎng)液的傾倒和轉(zhuǎn)移；4396800×106將染色后的玻片放置在報(bào)紙上，如果透過(guò)痰膜不能分辨報(bào)紙上的文字，則表明該玻片涂抹過(guò)厚。報(bào)告結(jié)果時(shí)間短,能滿足臨床診斷的需求.3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方式進(jìn)行技術(shù)操作，穿戴隔離衣、口罩和帽子等；車氏(87年)65.作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.完整、準(zhǔn)確地標(biāo)注痰盒、標(biāo)本和實(shí)驗(yàn)室登記本.掃描閱讀的不規(guī)范或時(shí)間過(guò)短，則檢查的視野太少。萋尼氏染色鏡檢結(jié)果報(bào)告：三）操作過(guò)程中造成的污染-2：載玻片只允許一次性使用，嚴(yán)禁清洗后重復(fù)使用。一）一些抗酸顆粒-2：結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—培養(yǎng)特性4、閱讀上的錯(cuò)誤，由于視覺(jué)和心理上的原因造成的，也稱之為“人的因素”。1假陰性產(chǎn)生的原因

假陰性結(jié)果常常是由于涂片、染色以及鏡檢中的缺點(diǎn)。做一個(gè)好涂片，痰標(biāo)本的收集以及痰塊的選擇是基本要求，應(yīng)予以特別注意。

5、石碳酸復(fù)紅染色時(shí)間過(guò)短，或因過(guò)熱而沸騰，造成染色太重；72一）痰收集不好：

有時(shí)病人沒(méi)有被告訴清楚什么是一個(gè)合格的痰標(biāo)本，怎么咳出來(lái)。必須清楚的告訴病人唾液和鼻咽部的分泌物不是痰，不適合于檢查。應(yīng)該鼓勵(lì)病人并且給他時(shí)間要從肺內(nèi)“深處”把支氣管里的痰咳出來(lái)，如果咳不出來(lái)，可用咽試子或向氣管內(nèi)滴入5-10毫升冷鹽水（或蒸餾水），有條件的地方可以用超聲霧化的方法取痰，其它刺激方法如洗胃以及支氣管鏡等。一）痰收集不好：有時(shí)病人沒(méi)有被告訴清楚什么是一個(gè)合格73二）痰標(biāo)本和痰涂片的保存不善：1、抗酸桿菌可因標(biāo)本受到日光照射、紫外線輻射、過(guò)熱，在干、熱的條件下儲(chǔ)存而失掉抗酸性。

2、在保存涂片時(shí)，應(yīng)將玻片上的香柏油用二甲苯去掉，因?yàn)橛蜁?huì)撤掉抗酸桿菌的顏色。二）痰標(biāo)本和痰涂片的保存不善：1、抗酸桿菌可因標(biāo)本受到日74三）未能選好合適的痰顆粒作涂片；

結(jié)核菌最容易在痰里灰綠色或黃色濃稠奶油樣的小粘塊里找到，（這些小粘團(tuán)常常含有從肺內(nèi)空洞里排出的干酪樣壞死組織）。假如痰未經(jīng)離心和濃縮處理。則應(yīng)從痰里仔細(xì)地把這些小粘塊挑出來(lái)。三）未能選好合適的痰顆粒作涂片；結(jié)核菌最容易在痰里灰75四）涂片做的不當(dāng)或染色不當(dāng)：1、涂片上涂抹的痰液太少，一致涂片太?。?、

涂片過(guò)后，透光性差；3、

涂片固定時(shí)過(guò)熱；4、

涂片固定不好，一些東西被沖洗脫掉；5、石碳酸復(fù)紅染色時(shí)間過(guò)短，或因過(guò)熱而沸騰，造成染色太重；6、復(fù)染太濃，以致抗酸桿菌模糊不清。四）涂片做的不當(dāng)或染色不當(dāng)：1、涂片上涂抹的痰液太少，一致涂76五）涂片閱讀不夠：

掃描閱讀的不規(guī)范或時(shí)間過(guò)短，則檢查的視野太少。五）涂片閱讀不夠：掃描閱讀的不規(guī)范或時(shí)間過(guò)短，則檢查77六）錯(cuò)誤結(jié)果的其它原因：1、弄錯(cuò)了病人，寫錯(cuò)了名字，把名字或標(biāo)本號(hào)、涂片號(hào)弄亂；2、痰容器的標(biāo)簽弄錯(cuò)；3、記錄或結(jié)果報(bào)告寫錯(cuò)；4、閱讀上的錯(cuò)誤，由于視覺(jué)和心理上的原因造成的，也稱之為“人的因素”。5、涂片鏡檢的個(gè)人之間的閱讀差異。據(jù)報(bào)道，對(duì)于這樣一個(gè)問(wèn)題，“這個(gè)涂片的抗酸桿菌是陰性還是陽(yáng)性”一致率是93%。6、診斷偏見(jiàn)，傾向于有病。六）錯(cuò)誤結(jié)果的其它原因：1、弄錯(cuò)了病人，寫錯(cuò)了名字，把名字或78

假陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)防措施-1一、假陽(yáng)性結(jié)果的后果

1.造成不必要的治療及藥品的浪費(fèi)；

2.對(duì)國(guó)家結(jié)核病措施的執(zhí)行產(chǎn)生影響。

79

假陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)防措施-2二、預(yù)防措施1.必須使用新的載玻片進(jìn)行相應(yīng)檢查.2.每個(gè)標(biāo)本均使用一個(gè)新竹簽完成涂片涂抹.3.所有染液均經(jīng)過(guò)濾.4.染色時(shí)玻片彼此保持一定距離,相互徹底隔開(kāi).5.嚴(yán)禁使用染色缸染色.假陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)防措施-280

假陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)防措施-3

二、預(yù)防措施

6.染色時(shí)勿使玻片上的染液干燥.7.滴加鏡油時(shí),嚴(yán)禁容器滴口直接接觸玻片痰膜.8.嚴(yán)禁物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜.9.完整、準(zhǔn)確地標(biāo)注痰盒、標(biāo)本和實(shí)驗(yàn)室登記本.10.登記前、后對(duì)檢驗(yàn)單和標(biāo)本盒上的標(biāo)注進(jìn)行仔細(xì)核對(duì).11.準(zhǔn)確紀(jì)錄和報(bào)告結(jié)果.假陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)防措施-381假陰性結(jié)果與預(yù)防措施-1一、假陰性結(jié)果

1.患者未給予治療，造成身體進(jìn)一步損害、結(jié)核病傳播，甚至死亡;2.未能得到合理的強(qiáng)化期治療，導(dǎo)致不合理的用藥;3.對(duì)國(guó)家結(jié)核病措施的執(zhí)行產(chǎn)生影響。假陰性結(jié)果與預(yù)防措施-1一、假陰性結(jié)果82假陰性結(jié)果與預(yù)防措施-2

二、預(yù)防措施

1.確認(rèn)標(biāo)本是痰而非唾液;2.確認(rèn)每份標(biāo)本至少3ml;3.選擇濃樣、干酪樣、黏液分泌物涂抹制備玻片；

4.制備玻片時(shí)標(biāo)本涂抹均勻,不要太薄或太厚;5.使用高質(zhì)量染料,嚴(yán)格按照配方配制染液;6.嚴(yán)格按照操作程序完成染色過(guò)程;假陰性結(jié)果與預(yù)防措施-2二、預(yù)防措施83方法直接涂片集菌培養(yǎng)動(dòng)物試驗(yàn)PCR結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查是國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP)的重要組成部分，在現(xiàn)代結(jié)核病控制工作中起著不可缺少的重要作用。此類標(biāo)本的AFB檢出率較唾液高。建立AFB檢查所需設(shè)備投入少.抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-1:小心打開(kāi)承載痰標(biāo)本的容器，防止產(chǎn)生氣溶膠或使標(biāo)本外溢。作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.涂片保存與實(shí)驗(yàn)室登記本記錄應(yīng)保持一致。痰標(biāo)本不合格者，應(yīng)予以進(jìn)一步指導(dǎo)并要求其重新送檢。用電子顯微鏡觀察分枝桿分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分的特殊6、復(fù)染太濃，以致抗酸桿菌模糊不清。痰涂片檢查6個(gè)月方案8個(gè)月方案嚴(yán)禁物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜.車氏(87年)65.分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分的特殊3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方式進(jìn)行技術(shù)操作，穿戴隔離衣、口罩和帽子等；通常10mmx20mm的痰膜，使用100×油鏡，每行可觀察約100個(gè)視野?！皹?biāo)本鏡檢結(jié)果”中的“日期”為實(shí)際鏡檢日期.這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本嚴(yán)格按照操作程序完成染色過(guò)程;假陰性結(jié)果與預(yù)防措施-3

二、預(yù)防措施

7.判斷結(jié)果為“陰性”前，須閱讀規(guī)定要求的視野數(shù)。

8.可采用已知結(jié)果為陽(yáng)性的玻片作為對(duì)照，完成染色鏡檢過(guò)程。

9.完整、準(zhǔn)確地標(biāo)注痰盒、玻片和實(shí)驗(yàn)室登記本。

10.登記前仔細(xì)核對(duì)檢驗(yàn)單和標(biāo)本盒上的標(biāo)注。

11.準(zhǔn)確紀(jì)錄和報(bào)告結(jié)果。方法直接涂片集菌培養(yǎng)動(dòng)物試驗(yàn)PCR84抗酸染色注意事項(xiàng):

1.干酪痰、血痰、粘液痰為合格痰標(biāo)本；唾液或口水為不合格標(biāo)本，除照常進(jìn)行涂片檢查外，應(yīng)要求患者重新送檢。2.對(duì)當(dāng)日不能進(jìn)行涂片檢查的痰標(biāo)本，須置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。3.一張載玻片只能涂抹1份痰標(biāo)本。4.載玻片只允許一次性使用，嚴(yán)禁清洗后重復(fù)使用?？顾崛旧⒁馐马?xiàng):

1.干酪痰、血痰、粘液痰為合格痰標(biāo)本；唾85抗酸染色注意事項(xiàng):

鏡檢要求:1.為防止抗酸桿菌的交叉污染，嚴(yán)禁油鏡頭直接接觸涂片上的痰膜。

2.仔細(xì)觀察300視野。

3.每個(gè)工作日，連續(xù)閱讀10-12張涂片后應(yīng)休息20分鐘左右。

4.采用自查和互查方式，至少抽查復(fù)檢當(dāng)日10%涂片，并填寫室內(nèi)質(zhì)控登記表。抗酸染色注意事項(xiàng):

鏡檢要求:1.為防止抗酸桿菌的交叉86抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-1:

1.鏡檢后的涂片應(yīng)及時(shí)用浸滿二甲苯的擦鏡紙揭取數(shù)次，徹底祛除涂片上的鏡油。

2.涂片脫去鏡油后，必須再次核對(duì)實(shí)驗(yàn)室登記本與每張涂片實(shí)驗(yàn)序號(hào)。

3.涂片上嚴(yán)禁標(biāo)記鏡檢的陰、陽(yáng)性結(jié)果。

4.全部涂片按實(shí)驗(yàn)室登記本序號(hào)連續(xù)排列，存放于玻片盒內(nèi)?？顾崛旧⒁馐马?xiàng):

痰涂片保存-1:1.鏡檢后的涂片87抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-2:5.涂片保存與實(shí)驗(yàn)室登記本記錄應(yīng)保持一致。初診病人第一張涂片存入涂片盒后需預(yù)留出兩個(gè)空位置，以備第二張、第三張涂片檢查后放入；隨訪病人第一張涂片存入涂片盒后需預(yù)留出1個(gè)空位置，以備第二張涂片檢查后放入。

(涂片保存按照棄前留后的原則,保存近期三個(gè)月的全部痰涂片待檢,全年涂片不足500張的應(yīng)全部保存.)抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-2:5.涂片保存與實(shí)88抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-3:

6.按規(guī)定數(shù)量保存的用于室間質(zhì)量評(píng)估的涂片，未經(jīng)上級(jí)質(zhì)控單位準(zhǔn)許不能自行銷毀。

7.裝滿涂片的玻片盒，需用標(biāo)簽注明涂片實(shí)驗(yàn)序號(hào)區(qū)間和日期區(qū)間，以便日后盲法復(fù)檢或現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)時(shí)抽樣。抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-3:6.按規(guī)定數(shù)量保89安全操作規(guī)則（2）

3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方式進(jìn)行技術(shù)操作，穿戴隔離衣、口罩和帽子等；

4、實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理；

5、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲食和吸煙等；安全操作規(guī)則（2）3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方90

排菌量

1ml痰液中含菌量為1000-10.000，其痰涂片陽(yáng)性率為40％-50％發(fā)現(xiàn)1個(gè)桿菌需查視野數(shù)

涂片上的桿菌數(shù)

每ml標(biāo)本中桿菌數(shù)

100

100

1000

10

1000

10000

1

10000

100000排菌量1ml痰液中含菌量為191痰涂片檢查的優(yōu)點(diǎn)

1.作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.2.作為實(shí)驗(yàn)方法,AFB鏡檢方法技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單.3.建立AFB檢查所需設(shè)備投入少.4.檢查成本低,易于接受.5.報(bào)告結(jié)果時(shí)間短,能滿足臨床診斷的需求.6.對(duì)陽(yáng)性患者的治療效果,能夠作出及時(shí)和準(zhǔn)確的評(píng)價(jià).

痰涂片檢查的優(yōu)點(diǎn)92

鏡檢讀片

鏡檢讀片93三）操作過(guò)程中造成的污染-2：2、鏡檢油滴管接觸到涂片上，油鏡頭碰到涂片，用吸水紙連續(xù)壓干幾個(gè)涂片均可造成交叉污染。三）操作過(guò)程中造成的污染-2：2、鏡檢94五）涂片閱讀不夠：

掃描閱讀的不規(guī)范或時(shí)間過(guò)短，則檢查的視野太少。五）涂片閱讀不夠：掃描閱讀的不規(guī)范或時(shí)間過(guò)短，則檢查95抗酸染色注意事項(xiàng):

1.干酪痰、血痰、粘液痰為合格痰標(biāo)本；唾液或口水為不合格標(biāo)本，除照常進(jìn)行涂片檢查外，應(yīng)要求患者重新送檢。2.對(duì)當(dāng)日不能進(jìn)行涂片檢查的痰標(biāo)本，須置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。3.一張載玻片只能涂抹1份痰標(biāo)本。4.載玻片只允許一次性使用，嚴(yán)禁清洗后重復(fù)使用?？顾崛旧⒁馐马?xiàng):

1.干酪痰、血痰、粘液痰為合格痰標(biāo)本；唾96抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-1:

1.鏡檢后的涂片應(yīng)及時(shí)用浸滿二甲苯的擦鏡紙揭取數(shù)次，徹底祛除涂片上的鏡油。

2.涂片脫去鏡油后，必須再次核對(duì)實(shí)驗(yàn)室登記本與每張涂片實(shí)驗(yàn)序號(hào)。

3.涂片上嚴(yán)禁標(biāo)記鏡檢的陰、陽(yáng)性結(jié)果。

4.全部涂片按實(shí)驗(yàn)室登記本序號(hào)連續(xù)排列，存放于玻片盒內(nèi)?？顾崛旧⒁馐马?xiàng):

痰涂片保存-1:1.鏡檢后的涂片97

為了進(jìn)一步加強(qiáng)結(jié)核病控制工作，實(shí)現(xiàn)國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP)目標(biāo)，加強(qiáng)直接面視下短程化療(DOTS)策略和結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，提高肺結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)率，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌學(xué)診斷傳染性肺結(jié)核是實(shí)施DOTS策略的一個(gè)關(guān)鍵，而且對(duì)結(jié)核病控制項(xiàng)目的成功起著重要的影響作用。為了進(jìn)一步加強(qiáng)結(jié)核病控制工作，實(shí)現(xiàn)國(guó)家98結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的目的和任務(wù)

在結(jié)核病控制工作中痰結(jié)核菌檢查對(duì)于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評(píng)價(jià)防治效果具有重要意義。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查是國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP)的重要組成部分，在現(xiàn)代結(jié)核病控制工作中起著不可缺少的重要作用。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查的目的和任務(wù)在結(jié)核病控制工99

實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)及職能

在國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室的管理和監(jiān)督之下，以省級(jí)參比室為中心實(shí)驗(yàn)室，采用自上而下質(zhì)量保證體系與同級(jí)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)控相結(jié)合的方式，建立我國(guó)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)中的各級(jí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有效地發(fā)揮各自的職能。實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)及職能在國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室的管理和100我國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)

SNRL：跨國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室NRL：國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室PLL：地市級(jí)實(shí)驗(yàn)室CLL：縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室SNRLNRLPRLPLLCLL我國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)

SNRL：跨國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室SNRL101何為DOTS?

DOTS

為“directly0bservedtherapyshortcourse”的縮寫，中文譯為直接督導(dǎo)短程化療，統(tǒng)稱現(xiàn)代結(jié)核病控制策（DOTS）該策略１９９５年開(kāi)始在全球推廣，被認(rèn)為是當(dāng)今結(jié)核病診治和管理的最有效方法。世界銀行將DOTS列為“成本效益比最高”的治療方法之一。

何為DOTS?DOTS為“102現(xiàn)代結(jié)核病策略(DOTS)：1.政府承諾2.痰菌檢查,發(fā)現(xiàn)病人3.醫(yī)務(wù)人員直接觀察下的短程化療4.定期不間斷的藥品供應(yīng)5.信息監(jiān)測(cè)系統(tǒng)承諾痰檢督導(dǎo)藥品監(jiān)測(cè)現(xiàn)代結(jié)核病策略(DOTS)：承諾痰檢督導(dǎo)藥品監(jiān)測(cè)103

我國(guó)結(jié)核病疫情

目前有5.5億的人口感染了結(jié)核菌(44.5%)

估算全國(guó)現(xiàn)有活動(dòng)性肺結(jié)核病人450萬(wàn),其中傳染性肺結(jié)核病人（涂陽(yáng)肺結(jié)核）150萬(wàn)

據(jù)WHO估算,我國(guó)每年新發(fā)活動(dòng)性肺結(jié)核病人145萬(wàn),其中傳染性肺結(jié)核65萬(wàn)例

每年因結(jié)核病死亡13萬(wàn)

我國(guó)結(jié)核病疫情

目前有5.5億的人口104作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.抗酸桿菌陽(yáng)性（2＋）：1-9條抗酸桿菌/10視野。痰涂片檢查6個(gè)月方案8個(gè)月方案9700多萬(wàn)，結(jié)核病疫情較為嚴(yán)重,已首先使用40×物鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)卡尺移動(dòng)玻片至痰膜左端，將光線調(diào)節(jié)至適當(dāng)亮度，調(diào)節(jié)焦距至可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)；分枝桿菌屬裂殖菌綱,放線菌目,種類甚多,目前已命名的有56多種,一般可分為緩慢生長(zhǎng)和快速生長(zhǎng)兩大類。用于AFB檢查的玻片要求：PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室載玻片只允許一次性使用，嚴(yán)禁清洗后重復(fù)使用。脫色的特征,具有其染色特征的細(xì)菌習(xí)慣上稱這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：痰標(biāo)本性質(zhì):干酪痰、血痰、粘液痰和水樣痰分類登記.(涂片保存按照棄前留后的原則,保存近期三個(gè)月的全部痰涂片待檢,全年涂片不足500張的應(yīng)全部保存.作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.鏡檢讀片全部涂片按實(shí)驗(yàn)室登記本序號(hào)連續(xù)排列，存放于玻片盒內(nèi)。二）細(xì)菌、微生物、植物類等-2：使用雙目顯微鏡10×目鏡讀片。唾液或口水為不合格標(biāo)本，除照常進(jìn)行涂片檢查外，應(yīng)要求患者重新送檢。我省結(jié)核病疫情

河南是我國(guó)第一人口大省,人口達(dá)

9700多萬(wàn)，結(jié)核病疫情較為嚴(yán)重,已被國(guó)家確認(rèn)為結(jié)核病高負(fù)擔(dān)省,我省現(xiàn)有活動(dòng)性肺結(jié)核病人46萬(wàn)（患病率159/10萬(wàn)),其中傳染性病人15萬(wàn)（患病率497/10萬(wàn)),占全國(guó)肺結(jié)核病人數(shù)10%。作為診斷手段,對(duì)傳染性肺結(jié)核的診斷比x線準(zhǔn)確性高.我省結(jié)核105

河南省結(jié)核病控制工作

1993年在全國(guó)率先開(kāi)展了“衛(wèi)生部加強(qiáng)與促進(jìn)結(jié)核病控制目”；

1998年自籌資金開(kāi)展“河南省結(jié)核病控制項(xiàng)目”；

2002年實(shí)施“世行貸款/英國(guó)政府贈(zèng)款/日本政府援助中國(guó)結(jié)核病控制項(xiàng)目”；

2003年開(kāi)展“全球基金項(xiàng)目”；

河南省結(jié)核病控制工作

1993年106

項(xiàng)目的實(shí)施使我省的結(jié)核病防治工作進(jìn)入了全新的發(fā)展階段。但是結(jié)核病防治工作并不盡如人意，疫情下降緩慢，結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)率低、耐藥率高、治療管理工作仍處于較低水平。

項(xiàng)目的實(shí)施使我省的結(jié)核病防治工作進(jìn)入了全新的發(fā)展階段。1075、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲食和吸煙等；NRL：國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室萋-尼氏抗酸染色陽(yáng)性,鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。分離培養(yǎng)、藥物敏感性測(cè)定、菌種鑒定試驗(yàn)等操作應(yīng)設(shè)有生物安全操作柜或接種間和通風(fēng)櫥等；將染色后的玻片放置在報(bào)紙上，如果透過(guò)痰膜不能分辨報(bào)紙上的文字，則表明該玻片涂抹過(guò)厚。仔細(xì)觀察完300個(gè)視野，一般需要5分鐘以上；六）錯(cuò)誤結(jié)果的其它原因：分枝桿菌生物學(xué)基礎(chǔ)—簡(jiǎn)介PRL：省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室(注意：由于當(dāng)患者咳嗽、咳痰時(shí)易于產(chǎn)生含有結(jié)核菌的氣溶膠，感染周邊人群的機(jī)率較高，故采集痰標(biāo)本時(shí)應(yīng)在遠(yuǎn)離人群的開(kāi)放空間進(jìn)行，或在通風(fēng)良好的室內(nèi)進(jìn)行。網(wǎng)絡(luò)中的各級(jí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有效地發(fā)揮各自的職能?？顾崛旧⒁馐马?xiàng):

痰涂片保存-1:4、實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理；對(duì)當(dāng)日不能進(jìn)行涂片檢查的痰標(biāo)本，須置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。12002年實(shí)施“世行貸款/英國(guó)政府贈(zèng)款/日本政府援助中國(guó)結(jié)核病控制項(xiàng)目”；分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分的特殊12002年實(shí)施“世行貸款/英國(guó)政府贈(zèng)款/日本政府援助中國(guó)結(jié)核病控制項(xiàng)目”；4、閱讀上的錯(cuò)誤，由于視覺(jué)和心理上的原因造成的，也稱之為“人的因素”。治療方案在玻片正面一端的1/3處注明實(shí)驗(yàn)室序號(hào)及標(biāo)本序號(hào)(如使用的載玻片一端無(wú)磨砂面，必須使用玻璃刻刀注明編號(hào)；

痰檢質(zhì)控文件

1999年河南省結(jié)防所簽發(fā)豫結(jié)防字（1999年）第10號(hào)文件《河南省結(jié)核菌檢驗(yàn)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)》

2004年河南省衛(wèi)生廳簽發(fā)豫衛(wèi)疾控（2004年）第91號(hào)文件《河南省結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室痰涂片檢查質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)》

5、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲108

結(jié)核病細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室布局原則一、結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查要有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室，不得與其他實(shí)驗(yàn)室混用；二、培養(yǎng)基制備、洗刷等相對(duì)潔凈的操作與涂片鏡檢、培養(yǎng)前處理、藥敏試驗(yàn)等污染操作要有獨(dú)立分開(kāi)的場(chǎng)所，最好分別在專用的房間進(jìn)行；三、基層只從事涂片鏡檢的實(shí)驗(yàn)室只擁有一間獨(dú)立房舍的情況下，相對(duì)潔凈區(qū)（鏡檢區(qū)、登記區(qū)）與污染區(qū)（涂片、染色區(qū)）要有明顯區(qū)分。結(jié)核病細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室布局原則109基層痰檢室布局范例染色池收集標(biāo)本用的桌子工作臺(tái)采光用窗戶（固定）實(shí)驗(yàn)室門試劑柜顯微鏡記錄用的桌子可以開(kāi)關(guān)的窗戶基層痰檢室布局范例染色池收集標(biāo)本工作臺(tái)采實(shí)驗(yàn)室門試顯微鏡記錄110結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則

結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須具有與其服務(wù)級(jí)別相應(yīng)的裝備，其原則是能滿足該級(jí)別實(shí)驗(yàn)室的需要，使實(shí)驗(yàn)室人員得到充分的保護(hù)，并避免造成環(huán)境污染。結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)則結(jié)核菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須具111安全操作規(guī)則（1）1、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有合理布局及合適的單向（外排）通風(fēng)體系；

2、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備，以保護(hù)工作人員的安全和實(shí)驗(yàn)工作的順利進(jìn)行。分離培養(yǎng)、藥物敏感性測(cè)定、菌種鑒定試驗(yàn)等操作應(yīng)設(shè)有生物安全操作柜或接種間和通風(fēng)櫥等；安全操作規(guī)則（1）1、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有合理布局及合適的單向112安全操作規(guī)則（2）

3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方式進(jìn)行技術(shù)操作，穿戴隔離衣、口罩和帽子等；

4、實(shí)驗(yàn)室所有帶毒廢棄物應(yīng)滅菌及無(wú)害化處理；

5、建立清潔消毒制度，限制非工作人員進(jìn)入室內(nèi)，禁止在實(shí)驗(yàn)室飲食和吸煙等；安全操作規(guī)則（2）3、實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)用正確方113安全操作規(guī)則（3）

6、進(jìn)行下列操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照技術(shù)規(guī)范，防止產(chǎn)生細(xì)菌氣溶膠：①涂片制作；②培養(yǎng)液的傾倒和轉(zhuǎn)移；③高速混合含菌液；④滴加、接種培養(yǎng)物；⑤吸管稀釋和混合菌懸液；⑥取樣器和震蕩器的使用；⑦細(xì)菌細(xì)胞超聲粉碎；⑧感染動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。安全操作規(guī)則（3）6、進(jìn)行下列操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照技術(shù)規(guī)范114分枝桿菌生物學(xué)基礎(chǔ)—簡(jiǎn)介結(jié)核分枝桿菌是1882年郭霍（Rober-tKoch）從肺結(jié)核病人痰標(biāo)本中發(fā)現(xiàn),是人類結(jié)核病的主要病原菌。分枝桿菌屬裂殖菌綱,放線菌目,種類甚多,目前已命名的有56多種,一般可分為緩慢生長(zhǎng)和快速生長(zhǎng)兩大類。分枝桿菌生物學(xué)基礎(chǔ)—簡(jiǎn)介結(jié)核分枝桿菌是1882年郭115結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性分枝桿菌的形態(tài):

結(jié)核分枝桿菌是專性需氧菌,無(wú)鞭毛、莢膜,無(wú)運(yùn)動(dòng)能力。形狀：1.5--3.5×0.3--0.6微米的細(xì)長(zhǎng)桿狀，直或稍彎，鏡下常堆積成團(tuán)、成束、排列雜亂無(wú)章，也有呈串珠樣、鏈狀、索狀者。萋-尼氏抗酸染色陽(yáng)性,鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性分枝桿菌的形態(tài):116結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性分枝桿菌的結(jié)構(gòu):

分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分的特殊性,具有經(jīng)堿性燃料染色后能夠忍受酸性介質(zhì)脫色的特征,具有其染色特征的細(xì)菌習(xí)慣上稱為抗酸菌(AFB).AFB菌體細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性與其抗酸染色特性有著密切聯(lián)系.用電子顯微鏡觀察分枝桿菌,完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)主要有以下部分組成:

細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核區(qū)、細(xì)胞器.結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性117抗酸性抗酸性是分枝桿菌的重要特征。其化學(xué)基礎(chǔ)是分枝菌屬的細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，并含有大量分枝菌酸?？顾嵝耘c細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性關(guān)系密切，若菌體自溶（如標(biāo)本保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、溫度過(guò)高）、結(jié)核菌的變異型（如L-型菌）可能失去抗酸性。結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性抗酸性結(jié)核菌生物學(xué)基礎(chǔ)—生物特性118車氏(87年)65.這些紅色顆粒有時(shí)與結(jié)核菌相象，這些顆粒包括：4、

涂片固定不好，一些東西被沖洗脫掉；用電子顯微鏡觀察分枝桿抗酸染色注意事項(xiàng):

痰涂片保存-3:⑤吸管稀釋和混合菌懸液；5(36/55)34.萋-尼氏抗酸染色陽(yáng)性,鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。油滴管接