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多元校正-分光光度法同時(shí)測(cè)定混合色素一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹坷梅止夤舛确y(cè)定胭脂紅、檸檬黃、日落黃三種有機(jī)色素混合液的吸光度。利用多元校正法(線性代數(shù)知識(shí))處理數(shù)據(jù),計(jì)算RSD和RSE、RSDt。了解矢量數(shù)據(jù)的獲取方法及其在多組分測(cè)定中的應(yīng)用。了解計(jì)算機(jī)技術(shù)及化學(xué)計(jì)量學(xué)基本方法在波譜解析中的應(yīng)用。 二、【實(shí)驗(yàn)原理】1.實(shí)驗(yàn)背景:食用合成色素是飲料等食品中的常用添加劑,但合成色素從合成工藝和結(jié)構(gòu)上可能具有一定的毒性。因此,色素的種類、含量分析對(duì)食品工業(yè)具有重要意義。而胭脂紅、檸檬黃、日落黃則是常見(jiàn)的食品著色劑。由于色素大多是有色有機(jī)物,對(duì)可見(jiàn)光有較強(qiáng)吸收,故采用分光光度法是測(cè)定色素。對(duì)于混合色素,需要將各組分分離后,才能進(jìn)行定量測(cè)定。而化學(xué)計(jì)量學(xué)方法(矩陣和線性關(guān)系)為混合色素不經(jīng)分離,利用分光光度法進(jìn)行準(zhǔn)確地同時(shí)測(cè)定提供了可能。2.實(shí)驗(yàn)原理:=1\*GB3①比爾定律:當(dāng)一束平行單色光垂直通過(guò)某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí),其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比.。公式:A=lg(1/T)=Kbc=2\*GB3②線性代數(shù)和矩陣:設(shè)有nc個(gè)組分同時(shí)存在,配制一組已知樣本共ns個(gè)溶液,其濃度矩陣為Cnc×ns,在nw個(gè)波長(zhǎng)下測(cè)得吸光度矩陣Anw×ns。根據(jù)朗伯—比耳定律有:(1)其中Knw×nc為吸光度矩陣,根據(jù)最小二乘法原理可求出各組分的純物種譜,即K矩陣:(2)式(2)中t和-1分別表示該矩陣的轉(zhuǎn)置和逆。對(duì)于一個(gè)或一組未知樣,同樣在nw個(gè)相同波長(zhǎng)下測(cè)定后,可用最小二乘法根據(jù)下式求出未知物的濃度。(3)此計(jì)算過(guò)程由計(jì)算軟件處理,最終可以獲得實(shí)際操作中所配制的混合色素的物質(zhì)組成、各色素的體積和偏差。三.【儀器與試劑】722分光光度儀(帶四個(gè)比色皿)、Agilent8453UV-VIS分光光度儀、50ml容量瓶6個(gè)、5ml移液管4支、移液槍4支胭脂紅溶液(120mg/L)、檸檬黃溶液(100mg/L)、日落黃溶液(100mg/L)、HCl溶液(0.1mol/L)、蒸餾水【實(shí)驗(yàn)步驟】按照各色素所加體積之和在14-16ml,最大體積和最小體積在3倍以上,每種色素加入體積有起伏,設(shè)計(jì)三種色素加入體積表格:第一次實(shí)驗(yàn):第二次實(shí)驗(yàn):No.123456胭脂紅/ml0611284日落黃/ml4208610檸檬黃/ml1086420No.123456胭脂紅/ml024679日落黃/ml6100257檸檬黃/ml9410620清洗容量瓶,開(kāi)啟儀器,洗潔精清洗比色皿。選取四組比色皿,以蒸餾水為參比,不斷清洗至比色皿兩兩吸光度相差正負(fù)0.02以內(nèi),并以偏離最大者作為水/參比比色皿。取6個(gè)50ml容量瓶,按照表格設(shè)計(jì)配制溶液,然后加入5mlHCl,稀釋至刻度,搖勻。任意選擇幾組采用移液槍,實(shí)驗(yàn)結(jié)果出來(lái)后比較移液管和移液槍的精準(zhǔn)度。做參比的比色皿裝HCl溶液或者蒸餾水,每次測(cè)定三組溶液,每三組一輪,從390nm測(cè)到540nm,記錄各組的吸光度。輸入數(shù)據(jù),軟件處理數(shù)據(jù)。分析自己的溶液體積實(shí)際值和理論值的誤差,分析RSD和RSE,利用多元校正,分析實(shí)驗(yàn)誤差原因。將溶液用Agilent8453UV-VIS分光光度儀測(cè)定,分析RSE和RSD?!緦?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖譜】理論實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià):RSD<0.5%優(yōu)秀;RSD<1.0%好;RSD<2.0%通過(guò);RSD:2.0%-5.0%較差,需要重做;RSD>5.0%找出錯(cuò)誤原因并重做。RSE一般2%以下為優(yōu)秀,3%為良好,3%-6%為可以接受,超過(guò)太多且不能找出明顯原因則需要重做.提高實(shí)驗(yàn)RSD:提高實(shí)驗(yàn)RSE:提高實(shí)驗(yàn)去除一組:第一次實(shí)驗(yàn)RSD:第一次實(shí)驗(yàn)RSE:安捷倫儀器測(cè)定數(shù)據(jù)圖:由于第一次實(shí)驗(yàn)未來(lái)得及測(cè)安捷倫儀器,bbs上得到一份數(shù)據(jù)(1153610),得到相應(yīng)的圖譜和RSD:0.00065,RSE:2.347、0.819、0.503。與手動(dòng)儀器比較,RSD:0.00068,RSE:1.232、1.114、1.439。從數(shù)據(jù)可以看出安捷倫儀器測(cè)量波長(zhǎng)間隔為1nm,比分光光度計(jì)更為精確,測(cè)量更為自動(dòng)化,也更為簡(jiǎn)便,時(shí)間更短。從圖譜也可以看出,安捷倫儀器從300nm測(cè)到600nm,比分光光度計(jì)測(cè)量波長(zhǎng)范圍更廣,但對(duì)于390nm一下的短波長(zhǎng)光,會(huì)有一個(gè)變化和拱起,所以在利用多元法時(shí)只需要從390nm開(kāi)始測(cè)定到540nm即可。如果只取390nm到540nm范圍數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)安捷倫儀器和分光光度計(jì)測(cè)得的圖像基本吻合。但從實(shí)驗(yàn)結(jié)果(即RSD和RSE)來(lái)看,兩者有明顯不同,RSD測(cè)量分別為0.00065和0.00068,由于讀數(shù)全自動(dòng),RSD相差不多,但對(duì)于RSE來(lái)說(shuō),則安捷倫儀器則更能精確的反映配制溶液的差異。也就是說(shuō)操作和讀數(shù)相差不大時(shí)兩者RSD往往差異不大,但對(duì)于RSE來(lái)說(shuō),體積的變化更為敏感,少量溶液配制失誤RSE迅速增大,其檢測(cè)意義的重要性不能忽視。所以不能只看RSD小就可以了,RSE小,且RSDt也是一個(gè)重要的參數(shù)。取390nm-540nm波長(zhǎng)范圍的圖像:【結(jié)果分析和討論】A平的計(jì)算:根據(jù)公式:把16×6個(gè)A取平均值后換算得到第一次實(shí)驗(yàn):A平=0.5387;第二次實(shí)驗(yàn):A平=0.5195,從而計(jì)算出RSDT:第一次實(shí)驗(yàn)RSDT=9.924×10-4;第二次實(shí)驗(yàn)RSDT=1.037×10-3最終數(shù)據(jù):RSDA胭脂紅RSE檸檬黃RSE日落黃RSERSDT第一次實(shí)驗(yàn)0.001492.025%4.569%6.751%9.924×10-4第二次實(shí)驗(yàn)0.000580.678%1.988%3.862%1.037×10-3RSD、RSE結(jié)果分析:第二次實(shí)驗(yàn)RSD=0.00058,相對(duì)于第一次實(shí)驗(yàn)RSD=0.00149有進(jìn)步。原因主要是比色皿的清潔度,第一次洗了將近一個(gè)小時(shí)還是差異很大,第二次直接用超聲波洗過(guò)的、別人用過(guò)的比色皿,四個(gè)比色皿基相差本都在0左右。而且這一次讀數(shù)和旋旋鈕時(shí)更為注意,推拉桿的時(shí)候,待位置卡準(zhǔn)后,前后有兩次讀數(shù),基本讀數(shù)波動(dòng)誤差排除。而第二次實(shí)驗(yàn)RSE分別為:胭脂紅0.678%、日落黃1.988%、檸檬黃3.862%,相對(duì)一第一次實(shí)驗(yàn):胭脂紅2.025%、日落黃6.751%、檸檬黃4.569%,有較大進(jìn)步,但還是檸檬黃配制溶液時(shí)偏大??赡艿脑蚴堑诙螌?shí)驗(yàn)基本都是用移液槍,更為便捷精確,但可能移液槍老化,容易按到底,同時(shí)移液槍外壁的溶液誤差都會(huì)導(dǎo)致還是有較為明顯的誤差?!緦?shí)驗(yàn)體會(huì)】經(jīng)過(guò)兩次實(shí)驗(yàn)的對(duì)比和查詢資料,尤其是登陸bbs查看往屆學(xué)長(zhǎng)學(xué)姐的體會(huì)和總結(jié),發(fā)現(xiàn)了很多值得注意和總結(jié)的地方。總的來(lái)說(shuō)就是每一個(gè)細(xì)節(jié)都要注意,最終都可能極大的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.比色皿的清洗:比色皿間的差異越小對(duì)RSD的測(cè)量越準(zhǔn)確,所以為了達(dá)到±0.002的相對(duì)值,需要長(zhǎng)時(shí)間清洗比色皿,不斷測(cè)試直到合格。往往為了達(dá)標(biāo),除了水洗,還會(huì)用少量洗潔劑清洗(軟毛刷),甚至更換比色皿。第一次實(shí)驗(yàn)清洗比色皿就花了1h左右,誤差仍然較大。第二次直接用前人用過(guò)的,由于已經(jīng)用超聲波清洗,四個(gè)比色皿差別基本沒(méi)有,RSD也大大降低。波長(zhǎng)的調(diào)節(jié)和吸光度的測(cè)量:首先是儀器調(diào)零:先調(diào)節(jié)T=100,然后打開(kāi)蓋子,調(diào)節(jié)左下第二個(gè)旋扭使T=0,最后換到A檔,消零。還有就是每次變換波長(zhǎng)后都要把右上角調(diào)回T檔檢查是否為100.0(或者A=0)。在改變波長(zhǎng)時(shí)需要注意不要旋轉(zhuǎn)幅度過(guò)大導(dǎo)致超過(guò),這會(huì)帶來(lái)誤差,波長(zhǎng)精確度高會(huì)大大降低RSD。移液管和移液槍等:RSE反映了體積的誤差,在后面會(huì)詳細(xì)分析可能的體積誤差原因。在這里主要說(shuō)明一下移液槍和移液管的對(duì)比和使用。就誤差來(lái)說(shuō),用移液器的比較小,也比較便捷快速。在bbs上面看到學(xué)長(zhǎng)等討論:“用移液器的比較小,用移液管的RES一般都在4%左右,大概是在使用移液管的時(shí)候視線沒(méi)有平視造成的誤差?!钡埔汗苡勺约嚎刂?,不準(zhǔn)確的原因和影響因素容易了解和修正,而使用移液槍則容易受到移液槍老化、腐蝕而導(dǎo)致體積出現(xiàn)誤差(就是沒(méi)有卡住的地方,很容易在吸取溶液的時(shí)候按到底),不可控因素大。還有可以只用一個(gè)移液槍來(lái)移取溶液:槍頭標(biāo)號(hào)后,每次使用都應(yīng)該把槍頭拿下來(lái),再套上另外一個(gè)槍頭移取溶液,但需要注意不能在沒(méi)有拔下槍頭前把移液槍倒置和平放,否則會(huì)造成移液槍被腐蝕,不再精確。拉桿的使用:拉桿不能馬虎,稍不卡準(zhǔn)數(shù)字就跳動(dòng)很大,所以萬(wàn)不能貪快而隨意。可以再測(cè)定過(guò)程中拉回參比溶液,重新測(cè)定,同時(shí)注意拉到合適位置時(shí)候的聲音,另外拉到一個(gè)位置時(shí)候其實(shí)前后稍微可以活動(dòng),最后如果實(shí)在調(diào)動(dòng)的話,就要看在哪個(gè)數(shù)字停留時(shí)間較長(zhǎng)。體積的設(shè)計(jì):體積設(shè)計(jì)要求:線性不相關(guān)(才能構(gòu)成線性方程求出特征值和秩);要求同一種物質(zhì)在不同組別里體積有變化,最好有4倍以上的變化幅度;每一組溶液總體積應(yīng)控制在12-16ml。天氣和時(shí)間、熟練度:天氣干燥、溫度較高往往結(jié)果更精確,可能是儀器會(huì)受濕度、溫度影響而產(chǎn)生波動(dòng);發(fā)現(xiàn)第二次實(shí)驗(yàn)比第一次實(shí)驗(yàn)普遍操作時(shí)間縮短,結(jié)果更為精確,說(shuō)明熟能生巧。防氣泡小竅門(mén):在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,不能有氣泡,會(huì)對(duì)吸光度有影響。但我總是有氣泡貼在比色皿內(nèi)壁,后來(lái)問(wèn)學(xué)姐學(xué)會(huì)了一招:洗氣瓶尖嘴貼住內(nèi)壁讓水順著內(nèi)壁流不會(huì)有氣泡。八、【介紹RSE和RSD、cosa和線性代數(shù)與矩陣】RSE和RSD:RSD是ResidualStandardDeviation,不是相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,而是剩余標(biāo)準(zhǔn)殘差。RSD反映大家的實(shí)驗(yàn)操作水平、準(zhǔn)確度、精確度,殘余標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD越小,吸光度測(cè)量的誤差越小。RSE即RelativeStandardError,是相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差。RSE反映了大家配制溶液的精確度、準(zhǔn)確度和操作水平。RSD到可以看作儀器及操作等因素的精密度(波動(dòng)范圍)的標(biāo)志,RSE恰恰與準(zhǔn)確度相對(duì)應(yīng)。公式:線性代數(shù)與矩陣:針對(duì)矩陣知識(shí),三種物質(zhì)相當(dāng)于三個(gè)未知量X,通過(guò)一系列線性無(wú)關(guān)的配比,測(cè)定其吸光度Y,得到不同的線性組成(類似線性方程組),從而可以求出三種物質(zhì)濃度的特征解。Cosα和相關(guān)程度:(查找資料,僅是自己的看法,未經(jīng)證實(shí))線性相關(guān)系數(shù)又稱皮氏積矩相關(guān)系數(shù),是衡量?jī)蓚€(gè)隨機(jī)變量之間線性相關(guān)程度的指標(biāo)。r取值范圍為[-1,1],r>0表示正相關(guān),r<0表示負(fù)相關(guān),|r|表示了變量之間相關(guān)程度的高低。針對(duì)兩組數(shù)據(jù)組,可以求出X、Y的線性相關(guān)度。公式:但本實(shí)驗(yàn)中要求各行不相關(guān)所利用的相關(guān)程度cosα不同于r。γ=k1α+k2β。就稱γ為α,β的線性組合。滿足k1α1+k2α2+…+kmαm=0時(shí),稱各向量線性相關(guān)。把6組溶液看做向量,要求平行組分線性不相關(guān),即向量間兩兩不相關(guān),即k1α≠k2β。從向量的角度,即兩個(gè)向量重疊度小,即cosα越接近0(向量間夾角接近90°),相關(guān)度越小。向量?jī)?nèi)積公式(A、B為向量,[A,B]為向量?jī)?nèi)積,||A||為向量的模(大?。篊osα可以看做向量間的夾角,也可以說(shuō)向量的平行程度(應(yīng)用到實(shí)際中即變量或者數(shù)據(jù)的相關(guān)程度)K矩陣:通過(guò)K矩陣模板得到的K矩陣和圖像,計(jì)算公式:第二次實(shí)驗(yàn):K矩陣10.0620.4654.7111.6322.5662.9112.8524.1668.9214.5725.3672.8416.6027.0374.2718.6830.8471.9822.6937.6666.0828.7944.7154.5036.4951.9341.8244.1956.9229.2851.3755.8514.9056.2153.065.8257.6347.782.4755.3333.841.0849.9316.980.4341.875.490.58第一次實(shí)驗(yàn):K矩陣10.8317.9056.0612.9919.8363.7814.0221.3070.4316.1522.2774.6618.5123.4576.0621.0327.3274.1424.8933.5267.3631.2240.0654.9639.5447.4841.7947.2652.0427.5453.4350.9713.6857.9748.514.6559.2843.371.2455.4230.780.4250.1914.52-0.2741.384.50-0.47【軟件探索】通過(guò)軟件分析:除了最簡(jiǎn)單直接的分析RSD和RSE之外,還可以通過(guò)其他方法和按鈕來(lái)告訴一些其他信息(以第一次實(shí)驗(yàn)為例),但由于對(duì)操作界面不熟悉,以及一段時(shí)間的遺忘,一部分界面操作和認(rèn)識(shí)不熟悉。SDvssample和SDvswavelength能做出兩個(gè)圖像,但具體應(yīng)用不太清楚,其他偶爾也操作出不同的圖,但代表什么含義和作用不太明白。自己的一些分析:1.λi/λi+1出現(xiàn)的突峰和RAS&MAX(R)平線對(duì)應(yīng)的位置來(lái)來(lái)找出噪聲最大點(diǎn)(偏離特征值最大的點(diǎn))是第幾組溶液。軟件可以直接告訴實(shí)驗(yàn)最大的誤差時(shí)第幾組及多少波長(zhǎng)位置;軟件可以給出三種純物質(zhì)的光譜圖,并和6組溶液對(duì)比;(可以得到檸檬黃吸收光譜最短,其次是日落黃,胭脂紅吸收光譜最長(zhǎng))3.給出RSE圖像時(shí)會(huì)給出一個(gè)配制溶液的設(shè)計(jì)值和計(jì)算值的差異來(lái)看出配制溶液過(guò)程中是否有誤差以及是何種誤差,同時(shí)從表格中可以找出配制溶液中的失誤和誤差,部分情況可以加以修正。常見(jiàn)失誤:少加某種溶液、重復(fù)加入溶液、所加溶液與組分不配套、溶液加混(加錯(cuò))、溶液順序加錯(cuò)或者記錯(cuò)、溶液加入儀器或者操作誤差等。以及在操作移液管和移液槍時(shí)的一些小的不規(guī)范引起的誤差:移液器的錯(cuò)誤使用方法,就是把液體壓出的時(shí)候拇指有所轉(zhuǎn)動(dòng),完畢以后會(huì)發(fā)現(xiàn)移液器的刻度發(fā)生了0.05的變化,如果沒(méi)有及時(shí)發(fā)現(xiàn)的話,下一次吸液便會(huì)有誤差(但不影響第一次)。往往有同學(xué)將溶液吸上來(lái)以后,尖嘴處會(huì)有一段空隙,這樣的空隙的存在是會(huì)影響結(jié)果的(其生成的原因可能是吸取好以后,移液器的傾角過(guò)大所致,所以盡量使移液器保持豎直)。由于臺(tái)面高度過(guò)低,移液管的時(shí)候視線沒(méi)有平視造成的誤差。----來(lái)自實(shí)驗(yàn)體會(huì)和bbs帖子4.從6組溶液的光譜圖中也可以大概看出,越平滑的曲線RSD越小,有尖峰的往往誤差大,同時(shí)可以大概看出在哪組、哪個(gè)波長(zhǎng)處出現(xiàn)誤差;5.對(duì)于“R&N”鍵,和“detectoutlier”可以用于交叉驗(yàn)證,即剔除一組看RSE或者光譜圖的變化,如果下降得厲害的說(shuō)明該組分配制有問(wèn)題,如果上升的厲害的說(shuō)明該組分配制沒(méi)有問(wèn)題;十、【思考題】從理論上講,任取三個(gè)波長(zhǎng)測(cè)定后解聯(lián)立方程,也能獲得結(jié)果。問(wèn):多波長(zhǎng)測(cè)定后并利用多元校正方法求解有什么優(yōu)點(diǎn)?答:根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理,對(duì)于三種不同物質(zhì)濃度作為三個(gè)變量,可以利用三組線性無(wú)關(guān)的混合組分來(lái)構(gòu)造一個(gè)線性方程組,從而求出三種物質(zhì)的濃度。但多元校正以多通道測(cè)量和多組分同時(shí)測(cè)定為主要特征,從多個(gè)已知組分的混合溶液得到校正測(cè)量數(shù)據(jù),用這些多變量數(shù)據(jù)建立分析體系的校正模型,并對(duì)模型中所含參量進(jìn)行估計(jì)以獲取有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)成分的定量信息,進(jìn)而預(yù)報(bào)未知混合樣品中各組分的濃度,消除各組分測(cè)定時(shí)干擾因素的影響,提高分析方法的選擇性,該方法能夠方便地對(duì)多組分重疊光譜進(jìn)行解析和分辨。簡(jiǎn)單的說(shuō)就是多幾組溶液能夠通過(guò)構(gòu)建校正模型來(lái)減少各種誤差,使得結(jié)果更為精確,并能找出誤差的原因。根據(jù)各組分的吸收光譜,找出最大吸收波長(zhǎng)及相應(yīng)的吸光系數(shù)。答:從K系列矩陣可以看出各組分(胭脂紅、日落黃、檸檬黃)的最大吸收波長(zhǎng)依次為:510nm、480nm、430nm;

吸光系數(shù)依次為57.63、56.92、74.27

。這與前人和查閱資料得到的數(shù)據(jù)很接近。如果要用本實(shí)驗(yàn)提供的方法,測(cè)定市售欲測(cè)定其中色素的含量,試分析在什么條件下能獲得較可靠的結(jié)果?答:根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)所加HCl,在PH為酸性條件,溶液各組分的含量較低,且不含影響吸光度的其它雜質(zhì),即所含物質(zhì)簡(jiǎn)單且較純的條件下,通過(guò)分光光度法才能獲得較可靠的結(jié)果

。查出有關(guān)合成色素測(cè)定的參考文獻(xiàn)并列于實(shí)驗(yàn)報(bào)告中。答:如下。十一、【參考文獻(xiàn)】《分光光度計(jì)波長(zhǎng)誤差及其校正》-李愛(ài)江劉湛軍韓建國(guó)《分析化學(xué)》-張?jiān)啤斗治龌瘜W(xué)原理》-吳性良孔繼烈《工程數(shù)學(xué)線性代數(shù)》-第五版-高等教育出版社《因子分析在分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用》-[期刊論文]《大學(xué)化學(xué)》-2000年6期朱仲良梅雨張軍延李通化《多元校正模型用于拼色食品中混合色素的同時(shí)測(cè)定》-[期刊論文]《理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)》ISTICPKU-2001年4期弓曉峰《多元校正分光光度法測(cè)定混合色素實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)分析》--張清華朱仲良叢培盛沈明月鄧享?xiàng)澫嚓P(guān)度_百度百科相關(guān)系數(shù)_百度百科剩余標(biāo)準(zhǔn)差_百度百科相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差_百度百科朗伯—比爾定律_百度百科/view/65945.htm/view/405935.htm/view/299378.htm/view/862686.htm/p-74250353.html/view/bc2ca803581b6bd97f19ead4.html【實(shí)驗(yàn)原始記錄】(第一次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)上傳至bbs,第二次實(shí)驗(yàn)學(xué)長(zhǎng)有事未能及時(shí)上傳)第一次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄:No.123456胭脂紅024679日落黃6100257檸檬黃9410620波長(zhǎng)/nm1234563900.6140.4240.5940.450.2810.2164000.6950.4790.6760.5190.3220.2464100.7640.5220.7470.5670.350.2664200.8080.5530.7960.610.3780.2914300.830.5730.8180.6350.4040.3214400.8380.6070.8090.6440.4380.3724500.

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