液體活檢在NSCLC診療中應(yīng)用課件

液體活檢

在NSCLC診療中的應(yīng)用

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在NSCLC診療中的應(yīng)用1精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境什么是液體活檢如何檢測ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境什么是液體活檢如何檢測c2精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境3精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療面對的困境約1/3晚期NSCLC患者無法獲得足夠用于檢測的組織樣本精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療面對的困境約1/3晚期NSCLC4腫瘤的異質(zhì)性NEnglJMed.2012Mar8;366(10):883-92腫瘤的異質(zhì)性NEnglJMed.2012Mar85

不同患者的分子遺傳信息個體差異明顯；

同一患者的疾病不同部位分子遺傳信息存在差異；

同一患者的疾病不同階段分子遺傳信息存在差異；

實時腫瘤個體化治療依賴于由實時樣本提供實時分子遺傳信息；腫瘤實時個體化治療不同患者的分子遺傳信息個體差異明顯；腫瘤實時個體化治療6精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療的臨床問題約1/3晚期NSCLC患者無法獲得用于檢測的組織樣本組織異質(zhì)性，活檢樣本無法反映腫瘤突變的全貌時空異質(zhì)性，無法實時監(jiān)測患者的病情血液標(biāo)本是首選的實時樣本！精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療的臨床問題約1/3晚期NSCLC7什么是液體活檢什么是液體活檢8

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84游離DNActDNA和cfDNACTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞什么是液體活檢？Crowleyet.al,Nat.Rev.Cli9SchwarzenbachH,etal.Nat.Rev.Cancer.2011,11,426循環(huán)腫瘤DNA（CirculatingTumorDNA）循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA)攜帶有實體瘤細(xì)胞基因突變/變異、甲基化、微衛(wèi)星序列改變等信息游離DNA（cfDNA）CellfreeDNA，外周血中一種無細(xì)胞狀態(tài)的胞外DNASchwarzenbachH,etal.Nat.Re10Krebsetal.,NatRevClinOncol.2014;11(3):129-44.保留完整的細(xì)胞形態(tài)，可以提供數(shù)量、遺傳、細(xì)胞生物學(xué)特性等信息，指導(dǎo)預(yù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CirculatingTumorcells，CTC）Krebsetal.,NatRevClinOnc11ctDNA與CTC在臨床應(yīng)用中的比較類別臨床應(yīng)用優(yōu)勢臨床應(yīng)用劣勢CTCs有完整的細(xì)胞形態(tài)疾病轉(zhuǎn)移或進(jìn)展的預(yù)后判斷下游基因檢測或免疫研究可體外培養(yǎng)低豐度和易破碎CTC分離，步驟繁瑣假陽性和假陰性，表面抗原CTC的異質(zhì)性ctDNA數(shù)量多，容易檢測多可克服異質(zhì)性檢測到疾病進(jìn)展更加敏感基因檢測指導(dǎo)用藥可能影響治療方案假陽性和假陰性無法分離ctDNActDNA與CTC在臨床應(yīng)用中的比較類別臨床應(yīng)用優(yōu)勢臨床應(yīng)用12ctDNACTC異質(zhì)性無有技術(shù)難點靈敏度CTC分離，靈敏度檢測內(nèi)容基因突變，突變豐度，濃度數(shù)量，基因突變臨床應(yīng)用伴隨診斷指導(dǎo)用藥預(yù)后預(yù)后動態(tài)監(jiān)測ctDNA檢測的臨床應(yīng)用更加簡單、成熟ctDNA與CTC技術(shù)指標(biāo)比較ctDNACTC異質(zhì)性無有技術(shù)難點靈敏度CTC分離，靈敏度檢13ctDNA的特點—片段化

Heitzeret.al.,ClinicalChemistry2015,61(1)：112–123提示其來源為壞死和凋亡細(xì)胞ctDNA的特點—片段化Heitzeret.al.,14ctDNA的特點—個體差異大腫瘤患者體內(nèi)ctDNA濃度0.01-90%不等，與臨床分期、分化程度密切相關(guān)Guoetal.,OncoTargetsTher.2015Nov6;8:3289-3296.Bettegowdaetal.,SciTranslMed.2014February19;6(224):224ra24ctDNA的特點—個體差異大腫瘤患者體內(nèi)ctDNA濃度0.015如何檢測如何檢測16ctDNA的特點—代謝快半衰期約2h，可以實時反映腫瘤的變化情況

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84abctDNA的特點—代謝快半衰期約2h，可以實時反映腫瘤的變化17現(xiàn)有檢測技術(shù)比較技術(shù)檢出限檢測區(qū)域技術(shù)特點Sanger>10%全基因序列雙脫氧鏈終止法qPCR1%已知位點熒光素標(biāo)記ARMSPCR0.1%已知位點擴增阻滯突變NGS0.1-1%全基因序列SBS/半導(dǎo)體測序數(shù)字PCR0.01%或更低已知位點微滴反應(yīng)現(xiàn)有檢測技術(shù)比較技術(shù)檢出限檢測區(qū)域技術(shù)特點Sanger>118數(shù)字PCR：超靈敏的精確定量方法“Divide

and

Conquer”

Digital

PCR是一種基于單分子模板PCR擴增，進(jìn)行核算拷貝數(shù)精確定量的分析方法數(shù)字PCR：超靈敏的精確定量方法“DivideandCo19數(shù)字PCR平臺結(jié)果判讀可檢測低至0.04%的EGFR790M突變數(shù)字PCR平臺結(jié)果判讀可檢測低至0.04%的EGFR79020更高靈敏度更適合ctDNA的檢測精確定量更適合做動態(tài)監(jiān)測操作簡便，周期短適合臨床應(yīng)用數(shù)字PCR與其他方法的比較Thress

etal.,LungCancer,2015,90(3):509-515更高靈敏度數(shù)字PCR與其他方法的比較Thressetal21驅(qū)動基因并行檢測與NSCLC治療Shamesetal.,JPathol.2014Jan;232(2):121-33驅(qū)動基因并行檢測與NSCLC治療Shamesetal.,22一代EGFRTKI和克唑替尼獲得性耐藥機制Camidgeetal.,NatRevClinOncol.2014Aug;11(8):473-81.EGFRTKI耐藥機制：信號通路KRAS等繼發(fā)突變EGFRT790M突變其他耐藥機制ALKTKI耐藥機制ALK基因突變EGFR等基因突變KIT擴增其他耐藥機制一代EGFRTKI和克唑替尼獲得性耐藥機制Camidge23二代測序已成為NCCN推薦技術(shù)二代測序已成為NCCN推薦技術(shù)24ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用25ctDNA的應(yīng)用--伴隨診斷EGFR突變型和野生型患者用藥后的PFS，EGFR突變型患者的PFS顯著高于EGFR野生型，療效更好，P<0.05。EGFR突變型患者用藥前和用藥后第56天的FDG-PET和CT結(jié)果，1位EGFR突變型患者在服用靶向藥物后，影像學(xué)結(jié)果顯示瘤體有明顯減少。Punnooseetal.,ClinCancerRes.2012Apr15;18(8):2391-401ctDNA的應(yīng)用--伴隨診斷EGFR突變型和野生型患者用藥后26臨床用藥重大進(jìn)展易瑞沙（Iressa）血液ctDNA伴隨診斷獲歐盟批準(zhǔn)2014年9月，歐洲藥品管理局（EMA）批準(zhǔn)易瑞沙（Iressa）標(biāo)簽II型變化更新，使ctDNA檢測方法成為醫(yī)生評估EGFR突變狀態(tài)的重要方法之一2015年2月，CFDA也批準(zhǔn)了其中文說明書的變動：當(dāng)考慮本品用于晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC患者的一線治療時，推薦對所有患者的腫瘤組織進(jìn)行EGFR突變檢測。如果腫瘤標(biāo)本不可評估，則可使用從血液（血漿）標(biāo)本中獲得的循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)。ctDNA作為一種新型的腫瘤標(biāo)志物，通過檢測其與腫瘤發(fā)生和用藥相關(guān)的基因突變信息，實現(xiàn)指導(dǎo)用藥。ctDNA用于伴隨診斷指導(dǎo)臨床用藥臨床用藥重大進(jìn)展ctDNA作為一種新型的腫瘤標(biāo)志物，通過檢測27NSCLC患者腫瘤組織和ctDNAEGFR突變一致性癌種分期例數(shù)技術(shù)檢測基因檢出限靈敏度特異性一致性非小細(xì)胞肺癌I-IV3110多種EGFR-62%96%81%

CirculatingtumorDNAiseffectiveforthedetectionofEGFRmutationinnon-smallcelllungcancer:ameta-analysisCancerEpidemiolBiomarkersPrev.2015Jan;24(1):206-12.NSCLC患者腫瘤組織和ctDNAEGFR突變一致性癌種分28諾禾致源NSCLC一致性研究結(jié)果IIIB-IV肺腺癌患者組織與血液檢測一致性研究階段性結(jié)果（40基因panel）陽性陰性陽性一致性陰性一致性總體一致性組織血漿組織血漿總體23179974%100%81%EGFRL858R97232378%100%94%19del54272780%100%97%EML4-ALK43282875%100%97%基因融合53272760%100%94%諾禾致源NSCLC一致性研究結(jié)果IIIB-IV肺腺癌患者組織29血液檢測逐漸得到中國專家的認(rèn)可2015年12月8日發(fā)布非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變檢測中國專家共識中華醫(yī)學(xué)雜志，2015，95卷，46期：3721-3726血液檢測逐漸得到中國專家的認(rèn)可2015年12月8日發(fā)布中華醫(yī)30ctDNA的應(yīng)用—動態(tài)監(jiān)測Oxnardet.al.,ClinCancerRes,2014,20(6):1698-1705ctDNA的應(yīng)用—動態(tài)監(jiān)測Oxnardet.al.,C3165歲有吸煙史的男性NSCLC患者,追蹤其在接受靶向藥物治療過程中,血液ctDNA中突變基因型含量的變化。在取樣的四個時間階段中,第四個階段病情有進(jìn)展,出現(xiàn)了耐藥的情況。同時ctDNA中TP53(splicing)和EGFR(T790M)突變頻率發(fā)生了明顯的變化ctDNA用于動態(tài)監(jiān)測—諾禾項目結(jié)果65歲有吸煙史的男性NSCLC患者,追蹤其在接受靶向藥物治32ctDNA的臨床應(yīng)用前景Bettegowdaetal.,SciTranslMed.2014February19;6(224):224ra24ctDNA的臨床應(yīng)用前景Bettegowdaetal.,33精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境什么是液體活檢如何檢測ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境什么是液體活檢如何檢測c34Thanksforyourattention!Thanksforyourattention!35液體活檢

在NSCLC診療中的應(yīng)用

液體活檢

在NSCLC診療中的應(yīng)用36精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境什么是液體活檢如何檢測ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境什么是液體活檢如何檢測c37精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境精準(zhǔn)醫(yī)療時代NSCLC診療面對的困境38精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療面對的困境約1/3晚期NSCLC患者無法獲得足夠用于檢測的組織樣本精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療面對的困境約1/3晚期NSCLC39腫瘤的異質(zhì)性NEnglJMed.2012Mar8;366(10):883-92腫瘤的異質(zhì)性NEnglJMed.2012Mar840

不同患者的分子遺傳信息個體差異明顯；

同一患者的疾病不同部位分子遺傳信息存在差異；

同一患者的疾病不同階段分子遺傳信息存在差異；

實時腫瘤個體化治療依賴于由實時樣本提供實時分子遺傳信息；腫瘤實時個體化治療不同患者的分子遺傳信息個體差異明顯；腫瘤實時個體化治療41精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療的臨床問題約1/3晚期NSCLC患者無法獲得用于檢測的組織樣本組織異質(zhì)性，活檢樣本無法反映腫瘤突變的全貌時空異質(zhì)性，無法實時監(jiān)測患者的病情血液標(biāo)本是首選的實時樣本！精準(zhǔn)醫(yī)療時代下NSCLC診療的臨床問題約1/3晚期NSCLC42什么是液體活檢什么是液體活檢43

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84游離DNActDNA和cfDNACTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞什么是液體活檢？Crowleyet.al,Nat.Rev.Cli44SchwarzenbachH,etal.Nat.Rev.Cancer.2011,11,426循環(huán)腫瘤DNA（CirculatingTumorDNA）循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA)攜帶有實體瘤細(xì)胞基因突變/變異、甲基化、微衛(wèi)星序列改變等信息游離DNA（cfDNA）CellfreeDNA，外周血中一種無細(xì)胞狀態(tài)的胞外DNASchwarzenbachH,etal.Nat.Re45Krebsetal.,NatRevClinOncol.2014;11(3):129-44.保留完整的細(xì)胞形態(tài)，可以提供數(shù)量、遺傳、細(xì)胞生物學(xué)特性等信息，指導(dǎo)預(yù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CirculatingTumorcells，CTC）Krebsetal.,NatRevClinOnc46ctDNA與CTC在臨床應(yīng)用中的比較類別臨床應(yīng)用優(yōu)勢臨床應(yīng)用劣勢CTCs有完整的細(xì)胞形態(tài)疾病轉(zhuǎn)移或進(jìn)展的預(yù)后判斷下游基因檢測或免疫研究可體外培養(yǎng)低豐度和易破碎CTC分離，步驟繁瑣假陽性和假陰性，表面抗原CTC的異質(zhì)性ctDNA數(shù)量多，容易檢測多可克服異質(zhì)性檢測到疾病進(jìn)展更加敏感基因檢測指導(dǎo)用藥可能影響治療方案假陽性和假陰性無法分離ctDNActDNA與CTC在臨床應(yīng)用中的比較類別臨床應(yīng)用優(yōu)勢臨床應(yīng)用47ctDNACTC異質(zhì)性無有技術(shù)難點靈敏度CTC分離，靈敏度檢測內(nèi)容基因突變，突變豐度，濃度數(shù)量，基因突變臨床應(yīng)用伴隨診斷指導(dǎo)用藥預(yù)后預(yù)后動態(tài)監(jiān)測ctDNA檢測的臨床應(yīng)用更加簡單、成熟ctDNA與CTC技術(shù)指標(biāo)比較ctDNACTC異質(zhì)性無有技術(shù)難點靈敏度CTC分離，靈敏度檢48ctDNA的特點—片段化

Heitzeret.al.,ClinicalChemistry2015,61(1)：112–123提示其來源為壞死和凋亡細(xì)胞ctDNA的特點—片段化Heitzeret.al.,49ctDNA的特點—個體差異大腫瘤患者體內(nèi)ctDNA濃度0.01-90%不等，與臨床分期、分化程度密切相關(guān)Guoetal.,OncoTargetsTher.2015Nov6;8:3289-3296.Bettegowdaetal.,SciTranslMed.2014February19;6(224):224ra24ctDNA的特點—個體差異大腫瘤患者體內(nèi)ctDNA濃度0.050如何檢測如何檢測51ctDNA的特點—代謝快半衰期約2h，可以實時反映腫瘤的變化情況

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84abctDNA的特點—代謝快半衰期約2h，可以實時反映腫瘤的變化52現(xiàn)有檢測技術(shù)比較技術(shù)檢出限檢測區(qū)域技術(shù)特點Sanger>10%全基因序列雙脫氧鏈終止法qPCR1%已知位點熒光素標(biāo)記ARMSPCR0.1%已知位點擴增阻滯突變NGS0.1-1%全基因序列SBS/半導(dǎo)體測序數(shù)字PCR0.01%或更低已知位點微滴反應(yīng)現(xiàn)有檢測技術(shù)比較技術(shù)檢出限檢測區(qū)域技術(shù)特點Sanger>153數(shù)字PCR：超靈敏的精確定量方法“Divide

and

Conquer”

Digital

PCR是一種基于單分子模板PCR擴增，進(jìn)行核算拷貝數(shù)精確定量的分析方法數(shù)字PCR：超靈敏的精確定量方法“DivideandCo54數(shù)字PCR平臺結(jié)果判讀可檢測低至0.04%的EGFR790M突變數(shù)字PCR平臺結(jié)果判讀可檢測低至0.04%的EGFR79055更高靈敏度更適合ctDNA的檢測精確定量更適合做動態(tài)監(jiān)測操作簡便，周期短適合臨床應(yīng)用數(shù)字PCR與其他方法的比較Thress

etal.,LungCancer,2015,90(3):509-515更高靈敏度數(shù)字PCR與其他方法的比較Thressetal56驅(qū)動基因并行檢測與NSCLC治療Shamesetal.,JPathol.2014Jan;232(2):121-33驅(qū)動基因并行檢測與NSCLC治療Shamesetal.,57一代EGFRTKI和克唑替尼獲得性耐藥機制Camidgeetal.,NatRevClinOncol.2014Aug;11(8):473-81.EGFRTKI耐藥機制：信號通路KRAS等繼發(fā)突變EGFRT790M突變其他耐藥機制ALKTKI耐藥機制ALK基因突變EGFR等基因突變KIT擴增其他耐藥機制一代EGFRTKI和克唑替尼獲得性耐藥機制Camidge58二代測序已成為NCCN推薦技術(shù)二代測序已成為NCCN推薦技術(shù)59ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用60ctDNA的應(yīng)用--伴隨診斷EGFR突變型和野生型患者用藥后的PFS，EGFR突變型患者的PFS顯著高于EGFR野生型，療效更好，P<0.05。EGFR突變型患者用藥前和用藥后第56天的FDG-PET和CT結(jié)果，1位EGFR突變型患者在服用靶向藥物后，影像學(xué)結(jié)果顯示瘤體有明顯減少。Punnooseetal.,ClinCancerRes.2012Apr15;18(8):2391-401ctDNA的應(yīng)用--伴隨診斷EGFR突變型和野生型患者用藥后61臨床用藥重大進(jìn)展易瑞沙（Iressa）血液ctDNA伴隨診斷獲歐盟批準(zhǔn)2014年9月，歐洲藥品管理局（EMA）批準(zhǔn)易瑞沙（Iressa）標(biāo)簽II型變化更新，使ctDNA檢測方法成為醫(yī)生評估EGFR突變狀態(tài)的重要方法之一2015年2月，CFDA也批準(zhǔn)了其中文說明書的變動：當(dāng)考慮本品用于晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC患者的一線治療時，推薦對所有患者的腫瘤組織進(jìn)行EGFR突變檢測。如果腫瘤標(biāo)本不可評估，則可使用從血液（血漿）標(biāo)本中獲得的循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)。ctDNA作為一種新型的腫瘤標(biāo)志物，通過檢測其與腫瘤發(fā)生和用藥相關(guān)的基因突變信息，實現(xiàn)指導(dǎo)用藥。ctDNA用于伴隨診斷指導(dǎo)臨床用藥臨床用藥重大進(jìn)展ctDNA作為一種新型的腫瘤標(biāo)志物，通過檢測62NSCLC患者腫瘤組織和ctDNAEGFR突變一致性癌種分期例數(shù)技術(shù)檢測基因檢出限靈敏度特異性一致性非小細(xì)胞肺癌I-IV3110多種EGFR-62%96%81%

CirculatingtumorDNAiseffectiveforthedetectionofEGFRmutationinnon-smallcelllungcancer:ameta-analysisCancerEpidemiolBiomarkersPrev.2015Jan;24(1):206-12.NSCLC患者腫瘤組織和ctDNAEGFR突變一致性癌種分63諾禾致源NSCLC