微生物知識(shí)及無菌操作知識(shí)培訓(xùn)課件

微生物基礎(chǔ)知識(shí)與無菌操作

知識(shí)培訓(xùn)2012年11月-吳啟恩微生物基礎(chǔ)知識(shí)與無菌操作

知識(shí)培訓(xùn)提綱微生物基礎(chǔ)知識(shí)一、微生物概述二、微生物特點(diǎn)三、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)四、微生物的營養(yǎng)五、消毒與滅菌提綱微生物基礎(chǔ)知識(shí)

無菌操作知識(shí)六、無菌藥品概述七、無菌藥品生產(chǎn)過程的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理無菌操作知識(shí)一、微生物概述什么是微生物微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見的微小生物的總稱。包括屬于原核類的細(xì)菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體和藍(lán)細(xì)菌（過去稱藍(lán)藻或藍(lán)綠藻），屬于真核類的真菌（酵母菌和霉菌）、原生動(dòng)物和顯微藻類，以及屬于非細(xì)胞類的病毒、類病毒等。一、微生物概述微生物的作用和危害1.微生物的作用絕大多數(shù)微生物對(duì)人和動(dòng)物是有益的，已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、釀造、化工、制革、石油等行業(yè)，發(fā)揮了越來越重要的作用。例如與我們?nèi)粘Ｉ蠲芮邢嚓P(guān)的如酸奶、酒類、抗生素、疫苗等。2.微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及動(dòng)、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。如人類的許多傳染病（感冒、傷寒、痢疾、結(jié)核、脊髄灰質(zhì)炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學(xué)而言，微生物對(duì)藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格的重要因素。微生物的作用和危害1.微生物的作用二、微生物特點(diǎn)種類多、分布廣微生物在地球上幾乎無處不有，無孔不入，人的皮膚上，口腔，腸道里都有許多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各種微生物生長(zhǎng)繁殖的大本營，約占微生物總量的70-90%，任意取一把土或一粒土，就是一個(gè)微生物世界，不論數(shù)量或種類均最多。迄今為止，我們知道的微生物約有10萬種，目前已知的種類只占地球上實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%，人類生產(chǎn)和生活中僅開發(fā)利用了已發(fā)現(xiàn)微生物種數(shù)的1%。

二、微生物特點(diǎn)種類多、分布廣個(gè)體小、面積大生物的個(gè)體極其微小，必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍，乃至數(shù)萬倍才能看清。桿菌的寬度是0.5微米，因此80個(gè)桿菌“肩并肩”地排列成橫隊(duì)，也只有一根頭發(fā)絲的寬度。桿菌的長(zhǎng)度約2微米，故1500個(gè)桿菌頭尾銜接起來僅有一顆芝麻長(zhǎng)。

物體的表面積和體積之比稱為比表面積。大腸桿菌的比表面積是人的30萬倍。

個(gè)體小、面積大吸收多、轉(zhuǎn)化快微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代，如細(xì)菌一般每20~30分鐘既可分裂一次；微生物的食譜非常廣泛，凡是動(dòng)植物能利用的營養(yǎng)，微生物都能利用，大量的動(dòng)植物不能利用的物質(zhì)，甚至劇毒的物質(zhì)，微生物照樣可以視為美味佳肴。如大腸桿菌在合適條件下，每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的糖，而人體則需要40年之久。

吸收多、轉(zhuǎn)化快適應(yīng)強(qiáng)、異變多數(shù)細(xì)菌能耐0～－196℃的低溫；在海洋深處的某些硫細(xì)菌可在250～300℃的高溫條件下正常生長(zhǎng)；一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活；產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年。由于微生物繁殖快，也可在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量變異的后代。正是由于這個(gè)特性，人們才能夠按照自己的要求不斷改良在生產(chǎn)上應(yīng)用的微生物，如青霉素生產(chǎn)菌的發(fā)酵水平由每毫升20單位上升到近10萬單位，利用變異和育種得到如此大幅度的產(chǎn)量提高。

適應(yīng)強(qiáng)、異變?nèi)?、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類：原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等真核細(xì)胞型：真菌非細(xì)胞型：病毒噬菌體三、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)

芽孢桿菌（細(xì)菌）芽孢桿菌淡水中的螺旋菌spirochetes.

淡水中的螺旋菌spiroch蠟樣芽孢桿菌

蠟樣芽孢桿菌

蠟樣芽孢桿菌

蠟樣芽孢桿菌（細(xì)菌）蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌（細(xì)菌

支原體掃描電鏡圖片支原體（mycoplasma）以前被認(rèn)為是最小的能獨(dú)立存活的原核生物，以前也被認(rèn)為是地球上迄今為止被發(fā)現(xiàn)的最小的細(xì)胞生物。全世界90%的豬體內(nèi)寄生著支原體。

支原立克次氏體（rickettsiae），一種微小的寄生的細(xì)菌。上圖是動(dòng)物的淋巴細(xì)胞，紅色的是寄生的立克次氏體。立克次氏體（rickettsiae），一種微小的寄生的細(xì)菌。青霉是種真菌，屬于子囊菌。有的能產(chǎn)生青霉素，救了無數(shù)人的命。產(chǎn)生無性孢子。青霉是種真菌，屬于子囊菌。根霉（Rhizopus)是種真菌，屬于接合菌。能產(chǎn)生無性孢子菌絲體的直徑約12um黑的是孢子囊微生物知識(shí)及無菌操作知識(shí)培訓(xùn)課件

噬菌體SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒禽流感病毒愛滋病毒噬菌體SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒禽流感病

1、細(xì)菌

細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌，以二分裂法進(jìn)行無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。

1、細(xì)菌

細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌細(xì)菌的繁殖

二分裂法繁殖是細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式。當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)到一定時(shí)期，在細(xì)胞中間形成橫隔，由一個(gè)母細(xì)胞分裂成兩個(gè)相等的子細(xì)胞。

在適應(yīng)的條件下，細(xì)菌的繁殖速度很快，一般20~30min就分裂一次，即為一代。細(xì)菌的繁殖二分裂法繁殖是細(xì)菌最普遍、最主<==細(xì)菌細(xì)胞分裂的電鏡超薄切片圖

桿菌二分裂過程模式圖<==細(xì)菌細(xì)胞分裂的電鏡超薄切片圖

細(xì)菌的菌落

單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖后，會(huì)形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)，這就是菌落。細(xì)菌的菌落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖后，會(huì)形成以粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

沙門氏菌的菌落特征

銅綠假單孢菌的菌落特征

弗氏志賀氏菌的菌落特征

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征沙門氏菌的菌落特征銅綠假單

2、放線菌

放線菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)放線菌的形態(tài)比細(xì)菌復(fù)雜些，但仍屬于單細(xì)胞。在顯微鏡下，放線菌呈分枝絲狀，我們把這些細(xì)絲一樣的結(jié)構(gòu)叫做菌絲，菌絲直徑與細(xì)菌相似，小于1微米。菌絲細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌基本相同。根據(jù)菌絲形態(tài)和功能的不同，放線菌菌絲可分為基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲三種。鏈霉菌屬是放線菌中種類最多、分布最廣、形態(tài)特征最典型的類群，其形態(tài)如下圖所示。

2、放線菌

放線菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)鏈霉菌的一般形態(tài)和構(gòu)造（模式圖）

鏈霉菌的一般形態(tài)和構(gòu)造放線菌的繁殖放線菌主要通過形成無性孢子方式進(jìn)行無性繁殖。放線菌的繁殖放線菌的菌落特征A：諾爾斯氏鏈霉菌；B：皮疽諾卡氏菌；C：酒紅指孢囊菌；D：游動(dòng)放線菌；E：小單胞菌；F：皺雙孢馬杜拉放線菌產(chǎn)抗菌素的放線菌的菌落特征

A：卡特利鏈霉菌；B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈霉菌；E：除蟲鏈霉菌；F：生磺酸鏈霉菌放線菌的菌落特征產(chǎn)抗菌素的放線菌的菌落特征

A：卡特利鏈霉3、霉菌霉菌是絲狀真菌的俗稱，意即"發(fā)霉的真菌"，霉菌的菌體由許多分支或不分支的菌絲構(gòu)成。在潮濕溫暖的地方，很多物品上長(zhǎng)出一些肉眼可見的絨毛狀、絮狀或蛛網(wǎng)狀的菌落，那就是霉菌。3、霉菌霉菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)霉菌的菌絲是構(gòu)成霉菌營養(yǎng)體的基本單位。菌絲是一種管狀的細(xì)絲，把它放在顯微鏡下觀察，很像一根透明膠管，它的直徑一般為3-10微米，比細(xì)菌和放線菌的細(xì)胞約粗幾倍到幾十倍。菌絲可伸長(zhǎng)并產(chǎn)生分枝，許多分枝的菌絲相互交織在一起，就叫菌絲體。霉菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)微生物知識(shí)及無菌操作知識(shí)培訓(xùn)課件微生物知識(shí)及無菌操作知識(shí)培訓(xùn)課件霉菌的繁殖

有性繁殖和無性繁殖兩種以無性繁殖為主主要靠孢子繁殖后代霉菌的繁殖

有性繁殖和無性繁殖兩種霉菌的菌落霉菌菌落由菌絲體和孢子組成；由于菌絲較粗而長(zhǎng)，因而菌落較大，有的霉菌菌絲蔓延，沒有局限性，其菌落可擴(kuò)展到整個(gè)培養(yǎng)皿，有的種類則有一定的局限性，直徑1-2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑?。痪湔疵娴念伾瓦吘壟c中心的顏色常不一致。霉菌的菌落各種曲霉的菌落各種曲霉的菌落各種病原真菌的菌落青霉的菌落青霉的菌落

各種病原真菌的菌落青霉的菌落青霉的菌落4、酵母菌

提起酵母菌這個(gè)名稱，也許有人不太熟悉，但實(shí)際上人們幾乎天天都在享受著酵母菌的好處。因?yàn)槲覀兠刻斐缘拿姘宛z頭就是有酵母菌的參與制成的；我們喝的啤酒，也離不開酵母菌的貢獻(xiàn)，酵母菌是人類實(shí)踐中應(yīng)用比較早的一類微生物，我國古代勞動(dòng)人民就利用酵母菌釀酒；酵母菌的細(xì)胞里含有豐富的蛋白質(zhì)和維生素，所以也可以做成高級(jí)營養(yǎng)品添加到食品中，或用作飼養(yǎng)動(dòng)物的高級(jí)飼料。酵母菌在自然界中分布很廣，尤其喜歡在偏酸性且含糖較多的環(huán)境中生長(zhǎng)，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果園土壤中最為常見。

4、酵母菌

提起酵母菌這個(gè)名稱，也許有人不太熟悉，但實(shí)際上人酵母菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)酵母菌是單細(xì)胞真核微生物。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球形、卵圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細(xì)菌的單細(xì)胞個(gè)體要大得多，一般為1-5微米×5-30微米。酵母菌無鞭毛，不能游動(dòng)。酵母菌具有典型的真核細(xì)胞結(jié)構(gòu),有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、液泡、線粒體等，有的還具有微體。酵母菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)

酵母菌的繁殖

1、芽殖2、裂殖3、孢子生殖酵母菌的繁殖1、芽殖

酵母菌的無性繁殖

芽殖：酵母菌最常見的無性繁殖方式是芽殖。芽殖發(fā)生在細(xì)胞壁的預(yù)定點(diǎn)上，此點(diǎn)被稱為芽痕，每個(gè)酵母細(xì)胞有一至多個(gè)芽痕。成熟的酵母細(xì)胞長(zhǎng)出芽體，母細(xì)胞的細(xì)胞核分裂成兩個(gè)子核，一個(gè)隨母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入芽體內(nèi)，當(dāng)芽體接近母細(xì)胞大小時(shí)，自母細(xì)胞脫落成為新個(gè)體，如此繼續(xù)出芽。如果酵母菌生長(zhǎng)旺盛，在芽體尚未自母細(xì)胞脫落前，即可在芽體上又長(zhǎng)出新的芽體，最后形成假菌絲狀。

酵母菌的芽殖過程1．泡；2．小管；3．核；4．液泡酵母菌假菌絲的形成圖中1、2、3、4·······是出芽的順序酵母菌的無性繁殖酵酵母菌的有性繁殖酵母菌是以形成子囊和子囊孢子的方式進(jìn)行無性繁殖的。兩個(gè)臨近的酵母細(xì)胞各自伸出一根管狀的原生質(zhì)突起，隨即相互接觸、融合，并形成一個(gè)通道，兩個(gè)細(xì)胞核在此通道內(nèi)結(jié)合，形成雙倍體細(xì)胞核，然后進(jìn)行減數(shù)分裂，形成4個(gè)或8個(gè)細(xì)胞核。每一子核與其周圍的原生質(zhì)形成孢子，即為子囊孢子，形成子囊孢子的細(xì)胞稱為子囊。酵母菌子囊孢子的形成過程1、2、3、4：兩個(gè)細(xì)胞結(jié)合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子

酵母菌的有性繁殖酵母菌子裂殖：是少數(shù)酵母菌進(jìn)行的無性繁殖方式，類似于細(xì)菌的裂殖。其過程是細(xì)胞延長(zhǎng)，核分裂為二，細(xì)胞中央出現(xiàn)隔膜，將細(xì)胞橫分為兩個(gè)具有單核的子細(xì)胞。裂殖：是少數(shù)酵母菌進(jìn)行的無性繁殖方式，類似于細(xì)菌的裂殖。其過酵母菌的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別為黑色。酵母菌的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌各種酵母菌的菌落

啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落各種酵母菌的菌落啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落5、病毒

形態(tài)結(jié)構(gòu)

病毒的形態(tài)基本可歸納為三種：桿狀、球狀和這兩種形態(tài)結(jié)合的復(fù)合型。沒有細(xì)胞構(gòu)造，病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白質(zhì)，在宿主細(xì)胞協(xié)助下，通過核酸的復(fù)制和核酸蛋白裝配的形式進(jìn)行增殖。病毒粒子通常形成螺旋對(duì)稱、二十面體對(duì)稱和復(fù)合對(duì)稱。病毒粒子是無法用光學(xué)顯微鏡觀察的亞顯微顆粒，但當(dāng)他們大量聚集在一起并使宿主細(xì)胞發(fā)生病變時(shí)，就可以用光學(xué)顯微鏡加以觀察。例如動(dòng)、植物細(xì)胞中的病毒包涵體；有的還可用肉眼看到，如噬菌體的噬菌斑等。5、病毒

形態(tài)結(jié)構(gòu)繁殖方式

病毒只有在宿主細(xì)胞里才能進(jìn)行繁殖，而且是通過復(fù)制的方式進(jìn)行的。概括起來可分為吸附、侵入、脫殼生物合成、裝配與釋放五個(gè)步驟。繁殖方式

病毒只有在宿主細(xì)胞里才能進(jìn)行繁殖，而且是通過復(fù)制的6、熱原與內(nèi)毒素許多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱原。熱原是微量即可引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)的總稱。主要物質(zhì)為細(xì)菌內(nèi)毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗體復(fù)合物、半抗體原物質(zhì)和某些藥物（類固醇）等。1、細(xì)菌內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分，主要是脂多糖。2、細(xì)菌內(nèi)毒素生物學(xué)活性可分為兩類：一是致病作用，一是保護(hù)性反應(yīng)。3、其他理化特性①耐熱性：120℃加熱4h，可破壞98%。180℃加熱2h或250℃加熱30min，才可徹底破壞。②濾過性：其體積小，約在1~5nm之間，故能通過濾器進(jìn)入濾液中。③具有水溶性及不揮發(fā)性。④能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和氧化劑破壞6、熱原與內(nèi)毒素許多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱原熱原與內(nèi)毒素4、熱源引入的途徑從溶劑中帶進(jìn)從原料中帶進(jìn)從容器、用具、管道和裝置等帶進(jìn)制備過程中的污染從輸液器帶入熱原與內(nèi)毒素4、熱源引入的途徑熱原與內(nèi)毒素5、消除細(xì)菌內(nèi)毒素的方法高溫破壞法：可用180℃干烤3~4h或250℃干烤30min。吸附法：一般選用活性炭。蒸餾法：此法僅限于制備蒸餾水?；瘜W(xué)酸堿和氧化法。離子交換法。反滲透法。凝膠過濾法。超濾法熱原與內(nèi)毒素5、消除細(xì)菌內(nèi)毒素的方法7、藥品的微生物污染藥品微生物污染：微生物的產(chǎn)生、附著而給藥品及生產(chǎn)環(huán)境帶來不良影響。藥品的微生物污染也稱染菌。污染藥品的細(xì)菌：常見污染藥物制劑的細(xì)菌是一些生命力較強(qiáng)的細(xì)菌，如：葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、枯草桿菌及一些霉菌，抵抗力弱的細(xì)菌一般不易造成污染。藥品的微生物污染源：空氣、水、廠房與設(shè)備、藥品生產(chǎn)用原輔料、包裝材料、昆蟲和其它嚙齒動(dòng)物、生產(chǎn)操作人員7、藥品的微生物污染藥品微生物污染：微生物的產(chǎn)生、附著而給藥四、微生物的營養(yǎng)水分：水占細(xì)胞漿的70%～90%，是細(xì)胞的重要組成成分。較普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為，只有在含水的環(huán)境中微生物才能存活。但也有人發(fā)現(xiàn)在無水碳?xì)浠衔镏形⑸锟砷L(zhǎng)期存活。碳源：碳源是構(gòu)成細(xì)胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來自有機(jī)碳化合物如糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機(jī)酸等（同時(shí)利用其化學(xué)能），屬異養(yǎng)型；有些微生物不需有機(jī)碳化合物，以CO2為碳源，屬自養(yǎng)型（分為光能自養(yǎng)型和化能自養(yǎng)型）。四、微生物的營養(yǎng)氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。無機(jī)鹽類：細(xì)菌所需無機(jī)鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵需要量較多，其他只需微量。生長(zhǎng)因子：生長(zhǎng)因子是某些微生物生長(zhǎng)發(fā)育所必需，而其自身又不能合成的一類營養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶。氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。五、消毒與滅菌消毒與滅菌是微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最基本的操作，從事藥品生產(chǎn)和檢驗(yàn)的人員都應(yīng)當(dāng)了解消毒與滅菌的方法及其意義，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量，危害患者安全。五、消毒與滅菌消毒與滅菌是微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最基本的操作，從事消毒與滅菌下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對(duì)微生物的殺滅程度消毒：殺死物體上病源微生物的方法,并不一定能殺死細(xì)菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細(xì)菌的繁殖。防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)常為防腐劑。無菌：不存在活的細(xì)菌。防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)，為無菌操作。消毒與滅菌下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對(duì)微生物的殺滅程度★芽孢芽孢是細(xì)菌的休眠體，在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營養(yǎng)態(tài)細(xì)胞；一般的芽孢在普通的條件下可保存幾年至幾十年的生活力；世界上最古老的芽孢：2.5億年；其對(duì)熱力、干燥、輻射、化學(xué)消毒等理化因素有強(qiáng)大的抵抗力；殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸汽滅菌?！镅挎哐挎呤羌?xì)菌的休眠體，在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營養(yǎng)消毒與滅菌一、物理滅菌方法熱力滅菌法輻射殺菌法濾過除菌法消毒與滅菌一、物理滅菌方法消毒與滅菌熱力滅菌法：使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細(xì)胞膜溶解，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。1、干熱滅菌法—采用灼燒或干熱空氣滅菌，使用方便，適用于玻璃器皿和瓷器等耐高溫的固體物的滅菌。2、濕熱滅菌法—利用熱蒸汽殺死微生物。

高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法，蒸汽的穿透力較熱空氣強(qiáng)可以殺死一切微生物，包括細(xì)菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐高溫的個(gè)體。最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。消毒與滅菌熱力滅菌法：使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細(xì)胞膜溶消毒與滅菌3、巴氏消毒法：利用熱力殺死液體中的病原菌或一般的雜菌，同時(shí)不致嚴(yán)重?fù)p害其質(zhì)量的消耗方法。我公司用60±0.5℃連續(xù)10h。消毒與滅菌3、巴氏消毒法：利用熱力殺死液體中的病原菌或一般的消毒與滅菌輻射滅菌法1、紫外線：波長(zhǎng)200-300nm的紫外線具有殺菌作用。穿透物質(zhì)的能力很差，一般要求紫外燈距離照射物不超過1.0米為宜2、電離輻射高速電子、X射線、γ射線3、微波波長(zhǎng)1mm~1m消毒與滅菌輻射滅菌法消毒與滅菌濾過除菌法用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去,以達(dá)到除菌目的。濾菌器含有微細(xì)小孔≤0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過。適用范圍：血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。消毒與滅菌濾過除菌法消毒與滅菌二、化學(xué)滅菌方法許多化學(xué)藥物能影響微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活性，從而發(fā)揮防腐、消毒及滅菌的作用。潔凈室(區(qū))應(yīng)定期消毒，使用的消毒劑不得對(duì)設(shè)備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應(yīng)定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。消毒與滅菌二、化學(xué)滅菌方法消毒與滅菌

★常用消毒劑種類和用途類別作用機(jī)制常用種類用途酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒醇類蛋白變性75％酒精皮膚、體溫計(jì)消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀二氧化氯地面、器具表面、皮膚消毒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮膚消毒表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷0.1％新潔而滅地面、器具表面、皮膚消毒消毒與滅菌

★常用消毒劑種類和用常用消毒劑

①70~75%乙醇水溶液②2000~5000mg/l84消毒液③甲醛37%~40%甲醛液4ml，再加入4g高錳酸鉀，每m3熏蒸量，密閉12~24h，刺激性強(qiáng)；1000~2000mg/l新潔爾滅（苯扎溴銨）水溶液，碘伏常用消毒劑①70~75%乙醇水溶液六、無菌藥品概述無菌定義：沒有活體微生物的存在。

無菌藥品定義：－指沒有活體微生物存在的藥品。－無菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無菌檢查項(xiàng)目的制劑和原料藥，包括無菌制劑和無菌原料藥。（2010版GMP無菌藥品附錄）六、無菌藥品概述無菌定義：沒有活體微生物的存在。1、無菌操作相關(guān)概念

無菌操作：防止細(xì)菌進(jìn)入產(chǎn)品或其他物品的操作技術(shù)。無菌物品：經(jīng)過物理或化學(xué)方法滅菌后，未被污染的物品稱無菌物品。無菌區(qū)域：經(jīng)過滅菌處理而未被污染的區(qū)域稱無菌區(qū)域。無菌操作管理：防止一切微生物侵入和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法。1、無菌操作相關(guān)概念無菌操作：防止細(xì)菌進(jìn)入產(chǎn)品或其他2、無菌藥品的特性–無菌–無熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素–無不溶性微粒–高純度2、無菌藥品的特性–無菌3、常用的無菌藥品

小容量注射劑大容量注射劑粉針凍干粉針無菌眼藥水無菌混懸劑無菌原料等3、常用的無菌藥品小容量注射劑4、無菌藥品的生產(chǎn)工藝－采用最終滅菌工藝的為最終滅菌產(chǎn)品；－部分或全部工序采用無菌生產(chǎn)工藝的為非最終滅菌產(chǎn)品。4、無菌藥品的生產(chǎn)工藝－采用最終滅菌工藝的為最終滅菌產(chǎn)品；5、無菌生產(chǎn)工藝的基本特點(diǎn)無菌產(chǎn)品的質(zhì)量不能完全依賴于對(duì)成品的無菌度測(cè)試，而非最終滅菌的產(chǎn)品，由于產(chǎn)品裝入最終容器后不在做進(jìn)一步的滅菌處理，因此嚴(yán)格的工藝過程及環(huán)境條件的控制是必須的，以保證整個(gè)生產(chǎn)過程不被微粒和微生物污染。5、無菌生產(chǎn)工藝的基本特點(diǎn)無菌產(chǎn)品的質(zhì)量不能完全依賴于對(duì)成品現(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性

無菌檢查結(jié)果合格X整批產(chǎn)品無菌整批產(chǎn)品無菌=無菌檢查結(jié)果合格取樣檢查不能保證支支的合格無菌的定義理論上：無菌＝?jīng)]有任何活的微生物實(shí)際上：我們無法證明產(chǎn)品中沒有活微生物存在現(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性無菌檢查結(jié)果合格X整批產(chǎn)品無菌現(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性無法對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)無菌檢驗(yàn)的結(jié)果只是一個(gè)基于“可能性”的判斷操作者對(duì)機(jī)器運(yùn)行的干擾和房間內(nèi)的狀況(各種活動(dòng))，都會(huì)無菌檢驗(yàn)的結(jié)果產(chǎn)生影響?，F(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性無法對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)

2010版GMP無菌藥品附錄基本要求第三條無菌藥品的生產(chǎn)須滿足其質(zhì)量和預(yù)定用途的要求，應(yīng)當(dāng)最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染。生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度是達(dá)到上述目標(biāo)的關(guān)鍵因素，無菌藥品的生產(chǎn)必須嚴(yán)格按照精心設(shè)計(jì)并經(jīng)驗(yàn)證的方法及規(guī)程進(jìn)行，產(chǎn)品的無菌或其它質(zhì)量特性絕不能只依賴于任何形式的最終處理或成品檢驗(yàn)（包括無菌檢查）。2010版GMP無菌藥品附錄基本要求第三條無菌藥品的6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求操作人員：潔凈工作服＋滅菌；原料及內(nèi)包裝材料：除菌、滅菌、去熱原；工藝用水、氮?dú)?、壓縮空氣：除菌過濾；6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求操作人員：6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求

生產(chǎn)設(shè)備：在線或離線清洗和滅菌；清潔工具：清潔滅菌或消毒；消毒劑：除菌過濾；6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求生產(chǎn)設(shè)備：注射劑生產(chǎn)無菌保證的控制點(diǎn)

人員的污染：人員：進(jìn)入無菌分裝區(qū)域的人員數(shù)量;操作習(xí)慣應(yīng)以減少對(duì)潔凈區(qū)氣流的影響；

嚴(yán)格的更衣程序；無菌服和人手的微生物監(jiān)測(cè)。

物料的轉(zhuǎn)移:儲(chǔ)存于密封容器中傳遞;單向流保持下傳遞。

環(huán)境的潔凈要求:一定的換氣次數(shù)和風(fēng)速；動(dòng)態(tài)的粒子數(shù)和微生物監(jiān)測(cè)。注射劑生產(chǎn)無菌保證的控制點(diǎn)

人員的污染：人員：進(jìn)入無菌分裝區(qū)七、無菌藥品生產(chǎn)過程的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理

無菌制劑的最大風(fēng)險(xiǎn)是微粒、微生物和內(nèi)毒素，會(huì)對(duì)患者帶來重大的風(fēng)險(xiǎn)。1、現(xiàn)有的無菌檢查法對(duì)于工藝失敗的檢出能力很底，我們所做的工作是將其降到最低。2、無菌工藝和最終滅菌工藝有本質(zhì)的區(qū)別，無菌操作較終端滅菌操作有更多的變量，可預(yù)見性更差。3、降低無菌工藝的風(fēng)險(xiǎn)，減少或消除潛在的污源，提高無菌保證水平，保障患者安全是質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的最終目標(biāo)。七、無菌藥品生產(chǎn)過程的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理無菌制劑的最大風(fēng)險(xiǎn)是微粒風(fēng)險(xiǎn)的構(gòu)成－可能性：危害的可能性/頻率－嚴(yán)重性：危害的后果的嚴(yán)重程度風(fēng)險(xiǎn)是危害發(fā)生的可能性及危害的嚴(yán)重性的組合，有效地管理風(fēng)險(xiǎn)就是對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的這兩個(gè)因素的控制。風(fēng)險(xiǎn)的構(gòu)成－可能性：危害的可能性/頻率藥品風(fēng)險(xiǎn)的來源－生物性：病毒、細(xì)菌的污染等－化學(xué)性：物料生產(chǎn)、儲(chǔ)存、轉(zhuǎn)運(yùn)過程中一些致敏物質(zhì)、有害金屬方面的污染，交叉污染等－物理性：主要包含雜質(zhì)、性狀等方面不合格－質(zhì)量屬性：主要指在含量、PH、釋放度、裝量、產(chǎn)品包裝等方面因生產(chǎn)過程中的差錯(cuò)引起的不合格藥品風(fēng)險(xiǎn)的來源－生物性：病毒、細(xì)菌的污染等生產(chǎn)過程質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的目標(biāo)防止微生物污染防止熱源和細(xì)菌內(nèi)毒素的污染防止產(chǎn)品中有異物高純度最終滅菌產(chǎn)品：無菌保證水平（SAL）≤10-6非最終滅菌制劑:－非最終滅菌產(chǎn)品：以培養(yǎng)基灌裝零污染為目標(biāo)，實(shí)際污染率低于1/5000－A級(jí)區(qū)的微生物限度<1CFU/米3與滅菌制劑10-6無菌保證水平處于同一水平生產(chǎn)過程質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的目標(biāo)防止微生物污染無菌生產(chǎn)帶來污染風(fēng)險(xiǎn)的十二方面1、進(jìn)入潔凈區(qū)人員的污染；2、潔凈環(huán)境不達(dá)標(biāo)的污染；3、物料和物料轉(zhuǎn)移的污染；4、工藝用氣（氮?dú)?、壓縮空氣等）的污染；5、消毒劑的污染；6、清潔、消毒工藝無效帶來的污染；7、除菌過濾工藝的污染；8、干、濕熱滅菌工藝的污染；9、制藥用水不合格的污染；10、設(shè)備的污染；11、工器具的污染；12、廠房與設(shè)施的污染。無菌生產(chǎn)帶來污染風(fēng)險(xiǎn)的十二方面1、進(jìn)入潔凈區(qū)人員的污染；易造成污染的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)1、灌裝部位2、無菌西林瓶/蓋子進(jìn)入無菌加工區(qū)的方式和地方3、無菌加工區(qū)內(nèi)打開產(chǎn)品容器的方式和地方4、與產(chǎn)品容器相聯(lián)的地方5、無菌生產(chǎn)區(qū)內(nèi)滅菌容器/密封裝置和機(jī)器接觸面6、無菌生產(chǎn)區(qū)內(nèi)滅菌容器/密封裝置和機(jī)器接觸面在熱滅菌后冷卻的時(shí)候任何滅菌過濾器連接，打開或組裝容器/密封裝置和機(jī)器接觸面已清洗完畢等待滅菌后進(jìn)入無菌生產(chǎn)區(qū)（應(yīng)設(shè)定該步驟的間隔時(shí)間限制）7、組裝已滅菌設(shè)備時(shí)的地方8、A/B級(jí)區(qū)的分水嶺易造成污染的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)1、灌裝部位微生物微粒特性－微粒粒徑極小，d=0.02～30μm。－種類極多，約50多萬種，主要包括：病毒、細(xì)菌、真菌、藻類。－微生物不能單獨(dú)生存，粘附在塵埃上形成生物性粒子。－繁殖速度快。－適當(dāng)環(huán)境下會(huì)形成大的生物群體產(chǎn)生污染。微生物微粒特性－微粒粒徑極小，d=0.02～30μm。微生物的污染途徑－自身污染：操作人員自身帶菌污染。－接觸方式污染：和非無菌用具，器械和人的接觸污染。－空氣傳播污染：空氣中細(xì)菌沉降、附著或被吸入污染。－其他因素污染：昆蟲等其他因素而污染。?對(duì)于潔凈室來說，大約有70％-80％的微生物是由人員產(chǎn)生的，15%--20%是由設(shè)備產(chǎn)生的，5%-10%是由周圍環(huán)境產(chǎn)生的。微生物的污染途徑－自身污染：操作人員自身帶菌污染。無菌區(qū)人員的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)

人員是無菌核心區(qū)最大的污染源人員身上會(huì)散發(fā)大量的微粒；這種微粒含有一定量的微生物；服裝的選擇是一種折衷的方案；消毒劑的選擇也是一種折衷的方案；無菌工藝的操作過程要求苛刻；人員的行為不可靠，且不可預(yù)測(cè)；環(huán)境監(jiān)測(cè)過程慢，不準(zhǔn)確，且不連續(xù)，所以控制人的行為是最重要的。無菌區(qū)人員的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)人員是無菌核心區(qū)最大的污染源人體攜帶的細(xì)菌和顆粒數(shù)舉例：

一個(gè)字母“D”的發(fā)音可產(chǎn)生30個(gè)顆（>=5μm）一個(gè)字母“P”的發(fā)音可產(chǎn)生100個(gè)顆（>=5μm）說話1分鐘可產(chǎn)生15,000-20,000個(gè)（>=5μm）咳嗽可產(chǎn)生700,000-20,000個(gè)顆粒（>=5μm）打噴嚏可產(chǎn)生1,400,000-20,000個(gè)（>=5μm）人體攜帶的細(xì)菌和顆粒數(shù)舉例：一個(gè)字母“D”的發(fā)音可產(chǎn)生30無菌藥品生產(chǎn)對(duì)人員的基本要求和原則建立并保持良好的質(zhì)量保證系統(tǒng)；應(yīng)配備足夠數(shù)量并具有適當(dāng)資質(zhì)的人員完成各項(xiàng)操作；所有人員應(yīng)明確理解自己的職責(zé)；掌握與之相關(guān)的GMP原則；接受良好的培訓(xùn)并通過考核。無菌藥品生產(chǎn)對(duì)人員的基本要求和原則建立并保持良好的質(zhì)量保證系1、GMP對(duì)人員培訓(xùn)要求2010版GMP基本要求：第二十七條與藥品生產(chǎn)、質(zhì)量有關(guān)的所有人員都應(yīng)當(dāng)經(jīng)過培訓(xùn)，培訓(xùn)的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與崗位的要求相適應(yīng)。除進(jìn)行本規(guī)范理論和實(shí)踐的培訓(xùn)外，還應(yīng)當(dāng)有相關(guān)法規(guī)、相應(yīng)崗位的職責(zé)、技能的培訓(xùn)，并定期評(píng)估培訓(xùn)的實(shí)際效果。第二十九條所有人員都應(yīng)當(dāng)接受衛(wèi)生要求的培訓(xùn)，企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立人員衛(wèi)生操作規(guī)程，最大限度地降低人員對(duì)藥品生產(chǎn)造成污染的風(fēng)險(xiǎn)。1、GMP對(duì)人員培訓(xùn)要求2010版GMP基本要求：2、無菌操作人員的培訓(xùn)內(nèi)容－藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）－無菌操作技術(shù)－潔凈室行為－微生物學(xué)－衛(wèi)生學(xué)－更衣技術(shù)－接觸法取樣方法－污染控制－受微生物污染的藥物對(duì)病人安全的危害－關(guān)鍵工藝特性－無菌生產(chǎn)區(qū)域操作的特定書面規(guī)程，包括停機(jī)故障處理。在無菌工序中工作的人員應(yīng)該對(duì)無菌技術(shù)有特別的能力和技能。他們的無菌技術(shù)應(yīng)該通過執(zhí)行例如無菌工藝模擬試驗(yàn)等來定期地評(píng)估。2、無菌操作人員的培訓(xùn)內(nèi)容－藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）3、會(huì)穿無菌衣

涉及的人員：所有需進(jìn)入無菌生產(chǎn)潔凈區(qū)工作的人員，包括：操作工、機(jī)修工、QA、QC等；會(huì)穿無菌衣標(biāo)準(zhǔn)：用接觸法取樣，經(jīng)過3次更衣試驗(yàn)后，程序正確、微生物檢測(cè)結(jié)果合格，才能進(jìn)入無菌區(qū)；再驗(yàn)證：－更衣已合格的人員每年需再培訓(xùn)并重復(fù)一次更衣資格的再確認(rèn)－發(fā)現(xiàn)已合格的人員有違反更衣程序趨勢(shì)時(shí)，須重復(fù)1－3次更衣試驗(yàn)－有三個(gè)月沒有進(jìn)行無菌操作或日常監(jiān)控結(jié)果超標(biāo)，人員應(yīng)再培訓(xùn)、再考核QA部門可以攝下每個(gè)人的更衣程序，作為染菌的研究資料。3、會(huì)穿無菌衣涉及的人員：所有需進(jìn)入無菌生產(chǎn)潔凈區(qū)工作的人4、禁止進(jìn)入無菌區(qū)域人員

建議以下健康問題禁止進(jìn)入無菌區(qū)域–大面積開口的損傷或燒傷–（傷風(fēng)發(fā)熱時(shí)的）唇皰疹–嚴(yán)重的頭皮屑–皮炎,濕疹–曬傷(起皮)–痤瘡–真菌/細(xì)菌感染–咳嗽–流鼻涕或者打噴嚏–結(jié)膜炎4、禁止進(jìn)入無菌區(qū)域人員建議以下健康問題禁止進(jìn)入無5、人員在B級(jí)潔凈區(qū)的姿勢(shì)、動(dòng)作、講話、行為

姿勢(shì)--不能靠在表面上–不要擠壓工作服–不能將物料靠在人身上–使身體遠(yuǎn)離產(chǎn)品–身體站直以最小化破壞氣流–保持手臂在腰線或以上5、人員在B級(jí)潔凈區(qū)的姿勢(shì)、動(dòng)作、講話、行為姿勢(shì)

動(dòng)作–深思熟慮的,緩慢的，小心的移動(dòng)，不能快走–門不能快開、快關(guān)，也不能開著不關(guān)–不能將任何物品拖過產(chǎn)品得上方–人員之間保持一段距離，盡量不相互接觸–避免不必要的動(dòng)作，盡量避免下蹲動(dòng)作–當(dāng)不參與工藝操作時(shí)，操作者應(yīng)站或坐動(dòng)作–深思熟慮的,緩慢的，小心的移動(dòng)，不能快走講話–操作人員盡量不談話，確實(shí)需要退出關(guān)鍵區(qū)域再講話–不能大聲呼喊除非確實(shí)需要–不能通過洞口，進(jìn)出口或氣閘進(jìn)行交流–如果打噴嚏遠(yuǎn)離產(chǎn)品，之后更換口罩講話–操作人員盡量不談話，確實(shí)需要退出關(guān)鍵區(qū)域再講話行為人站得正確位置順序應(yīng)為：送風(fēng)先到裸露的產(chǎn)品，再到人員、最后到回風(fēng)或排風(fēng)–不能接觸、抓撓皮膚，如發(fā)生要求人員回更衣室更換新手套–不能觸摸地板，當(dāng)有物品跌落，如果不會(huì)產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)的話可以在日清潔結(jié)束時(shí)去除–關(guān)鍵區(qū)域設(shè)備在離開該區(qū)域后，在重新進(jìn)入生產(chǎn)狀態(tài)時(shí)需要再滅菌或再清潔–僅用無菌工具接觸無菌物料，不能離開A級(jí)區(qū)行為人站得正確位置順序應(yīng)為：送風(fēng)先到裸露的產(chǎn)品，再到6、操作人員要保護(hù)單向流流向－單向流流型要通過確認(rèn)－盡量保持整個(gè)身體在單向氣流通道之外操作－必要時(shí)可以通過工具協(xié)助操作－必須進(jìn)入氣流通道操作，應(yīng)適當(dāng)?shù)膫?cè)面操作－在垂直單向流條件下，不得在產(chǎn)品上游方向進(jìn)行無菌操作6、操作人員要保護(hù)單向流流向－單向流流型要通過確認(rèn)我們要思考的問題？？

在日常工作中－有哪些因素會(huì)對(duì)產(chǎn)品的無菌有影響？－有哪些因素會(huì)對(duì)產(chǎn)品的熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素有影響？－有哪些因素會(huì)對(duì)產(chǎn)品的可見異物或不溶性微粒有影響？我們要思考的問題？？在日謝謝謝謝微生物基礎(chǔ)知識(shí)與無菌操作

知識(shí)培訓(xùn)2012年11月-吳啟恩微生物基礎(chǔ)知識(shí)與無菌操作

知識(shí)培訓(xùn)提綱微生物基礎(chǔ)知識(shí)一、微生物概述二、微生物特點(diǎn)三、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)四、微生物的營養(yǎng)五、消毒與滅菌提綱微生物基礎(chǔ)知識(shí)

無菌操作知識(shí)六、無菌藥品概述七、無菌藥品生產(chǎn)過程的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理無菌操作知識(shí)一、微生物概述什么是微生物微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不見的微小生物的總稱。包括屬于原核類的細(xì)菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體和藍(lán)細(xì)菌（過去稱藍(lán)藻或藍(lán)綠藻），屬于真核類的真菌（酵母菌和霉菌）、原生動(dòng)物和顯微藻類，以及屬于非細(xì)胞類的病毒、類病毒等。一、微生物概述微生物的作用和危害1.微生物的作用絕大多數(shù)微生物對(duì)人和動(dòng)物是有益的，已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、釀造、化工、制革、石油等行業(yè)，發(fā)揮了越來越重要的作用。例如與我們?nèi)粘Ｉ蠲芮邢嚓P(guān)的如酸奶、酒類、抗生素、疫苗等。2.微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及動(dòng)、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。如人類的許多傳染?。ǜ忻?、傷寒、痢疾、結(jié)核、脊髄灰質(zhì)炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學(xué)而言，微生物對(duì)藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格的重要因素。微生物的作用和危害1.微生物的作用二、微生物特點(diǎn)種類多、分布廣微生物在地球上幾乎無處不有，無孔不入，人的皮膚上，口腔，腸道里都有許多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各種微生物生長(zhǎng)繁殖的大本營，約占微生物總量的70-90%，任意取一把土或一粒土，就是一個(gè)微生物世界，不論數(shù)量或種類均最多。迄今為止，我們知道的微生物約有10萬種，目前已知的種類只占地球上實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%，人類生產(chǎn)和生活中僅開發(fā)利用了已發(fā)現(xiàn)微生物種數(shù)的1%。

二、微生物特點(diǎn)種類多、分布廣個(gè)體小、面積大生物的個(gè)體極其微小，必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍，乃至數(shù)萬倍才能看清。桿菌的寬度是0.5微米，因此80個(gè)桿菌“肩并肩”地排列成橫隊(duì)，也只有一根頭發(fā)絲的寬度。桿菌的長(zhǎng)度約2微米，故1500個(gè)桿菌頭尾銜接起來僅有一顆芝麻長(zhǎng)。

物體的表面積和體積之比稱為比表面積。大腸桿菌的比表面積是人的30萬倍。

個(gè)體小、面積大吸收多、轉(zhuǎn)化快微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代，如細(xì)菌一般每20~30分鐘既可分裂一次；微生物的食譜非常廣泛，凡是動(dòng)植物能利用的營養(yǎng)，微生物都能利用，大量的動(dòng)植物不能利用的物質(zhì)，甚至劇毒的物質(zhì)，微生物照樣可以視為美味佳肴。如大腸桿菌在合適條件下，每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的糖，而人體則需要40年之久。

吸收多、轉(zhuǎn)化快適應(yīng)強(qiáng)、異變多數(shù)細(xì)菌能耐0～－196℃的低溫；在海洋深處的某些硫細(xì)菌可在250～300℃的高溫條件下正常生長(zhǎng)；一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活；產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年。由于微生物繁殖快，也可在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量變異的后代。正是由于這個(gè)特性，人們才能夠按照自己的要求不斷改良在生產(chǎn)上應(yīng)用的微生物，如青霉素生產(chǎn)菌的發(fā)酵水平由每毫升20單位上升到近10萬單位，利用變異和育種得到如此大幅度的產(chǎn)量提高。

適應(yīng)強(qiáng)、異變?nèi)⑽⑸锏念惾汉托螒B(tài)結(jié)構(gòu)微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類：原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等真核細(xì)胞型：真菌非細(xì)胞型：病毒噬菌體三、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)

芽孢桿菌（細(xì)菌）芽孢桿菌淡水中的螺旋菌spirochetes.

淡水中的螺旋菌spiroch蠟樣芽孢桿菌

蠟樣芽孢桿菌

蠟樣芽孢桿菌

蠟樣芽孢桿菌（細(xì)菌）蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌（細(xì)菌

支原體掃描電鏡圖片支原體（mycoplasma）以前被認(rèn)為是最小的能獨(dú)立存活的原核生物，以前也被認(rèn)為是地球上迄今為止被發(fā)現(xiàn)的最小的細(xì)胞生物。全世界90%的豬體內(nèi)寄生著支原體。

支原立克次氏體（rickettsiae），一種微小的寄生的細(xì)菌。上圖是動(dòng)物的淋巴細(xì)胞，紅色的是寄生的立克次氏體。立克次氏體（rickettsiae），一種微小的寄生的細(xì)菌。青霉是種真菌，屬于子囊菌。有的能產(chǎn)生青霉素，救了無數(shù)人的命。產(chǎn)生無性孢子。青霉是種真菌，屬于子囊菌。根霉（Rhizopus)是種真菌，屬于接合菌。能產(chǎn)生無性孢子菌絲體的直徑約12um黑的是孢子囊微生物知識(shí)及無菌操作知識(shí)培訓(xùn)課件

噬菌體SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒禽流感病毒愛滋病毒噬菌體SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒禽流感病

1、細(xì)菌

細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌，以二分裂法進(jìn)行無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。

1、細(xì)菌

細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌細(xì)菌的繁殖

二分裂法繁殖是細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式。當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)到一定時(shí)期，在細(xì)胞中間形成橫隔，由一個(gè)母細(xì)胞分裂成兩個(gè)相等的子細(xì)胞。

在適應(yīng)的條件下，細(xì)菌的繁殖速度很快，一般20~30min就分裂一次，即為一代。細(xì)菌的繁殖二分裂法繁殖是細(xì)菌最普遍、最主<==細(xì)菌細(xì)胞分裂的電鏡超薄切片圖

桿菌二分裂過程模式圖<==細(xì)菌細(xì)胞分裂的電鏡超薄切片圖

細(xì)菌的菌落

單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖后，會(huì)形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)，這就是菌落。細(xì)菌的菌落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖后，會(huì)形成以粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

沙門氏菌的菌落特征

銅綠假單孢菌的菌落特征

弗氏志賀氏菌的菌落特征

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征沙門氏菌的菌落特征銅綠假單

2、放線菌

放線菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)放線菌的形態(tài)比細(xì)菌復(fù)雜些，但仍屬于單細(xì)胞。在顯微鏡下，放線菌呈分枝絲狀，我們把這些細(xì)絲一樣的結(jié)構(gòu)叫做菌絲，菌絲直徑與細(xì)菌相似，小于1微米。菌絲細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌基本相同。根據(jù)菌絲形態(tài)和功能的不同，放線菌菌絲可分為基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲三種。鏈霉菌屬是放線菌中種類最多、分布最廣、形態(tài)特征最典型的類群，其形態(tài)如下圖所示。

2、放線菌

放線菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)鏈霉菌的一般形態(tài)和構(gòu)造（模式圖）

鏈霉菌的一般形態(tài)和構(gòu)造放線菌的繁殖放線菌主要通過形成無性孢子方式進(jìn)行無性繁殖。放線菌的繁殖放線菌的菌落特征A：諾爾斯氏鏈霉菌；B：皮疽諾卡氏菌；C：酒紅指孢囊菌；D：游動(dòng)放線菌；E：小單胞菌；F：皺雙孢馬杜拉放線菌產(chǎn)抗菌素的放線菌的菌落特征

A：卡特利鏈霉菌；B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈霉菌；E：除蟲鏈霉菌；F：生磺酸鏈霉菌放線菌的菌落特征產(chǎn)抗菌素的放線菌的菌落特征

A：卡特利鏈霉3、霉菌霉菌是絲狀真菌的俗稱，意即"發(fā)霉的真菌"，霉菌的菌體由許多分支或不分支的菌絲構(gòu)成。在潮濕溫暖的地方，很多物品上長(zhǎng)出一些肉眼可見的絨毛狀、絮狀或蛛網(wǎng)狀的菌落，那就是霉菌。3、霉菌霉菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)霉菌的菌絲是構(gòu)成霉菌營養(yǎng)體的基本單位。菌絲是一種管狀的細(xì)絲，把它放在顯微鏡下觀察，很像一根透明膠管，它的直徑一般為3-10微米，比細(xì)菌和放線菌的細(xì)胞約粗幾倍到幾十倍。菌絲可伸長(zhǎng)并產(chǎn)生分枝，許多分枝的菌絲相互交織在一起，就叫菌絲體。霉菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)微生物知識(shí)及無菌操作知識(shí)培訓(xùn)課件微生物知識(shí)及無菌操作知識(shí)培訓(xùn)課件霉菌的繁殖

有性繁殖和無性繁殖兩種以無性繁殖為主主要靠孢子繁殖后代霉菌的繁殖

有性繁殖和無性繁殖兩種霉菌的菌落霉菌菌落由菌絲體和孢子組成；由于菌絲較粗而長(zhǎng)，因而菌落較大，有的霉菌菌絲蔓延，沒有局限性，其菌落可擴(kuò)展到整個(gè)培養(yǎng)皿，有的種類則有一定的局限性，直徑1-2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑取；菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。霉菌的菌落各種曲霉的菌落各種曲霉的菌落各種病原真菌的菌落青霉的菌落青霉的菌落

各種病原真菌的菌落青霉的菌落青霉的菌落4、酵母菌

提起酵母菌這個(gè)名稱，也許有人不太熟悉，但實(shí)際上人們幾乎天天都在享受著酵母菌的好處。因?yàn)槲覀兠刻斐缘拿姘宛z頭就是有酵母菌的參與制成的；我們喝的啤酒，也離不開酵母菌的貢獻(xiàn)，酵母菌是人類實(shí)踐中應(yīng)用比較早的一類微生物，我國古代勞動(dòng)人民就利用酵母菌釀酒；酵母菌的細(xì)胞里含有豐富的蛋白質(zhì)和維生素，所以也可以做成高級(jí)營養(yǎng)品添加到食品中，或用作飼養(yǎng)動(dòng)物的高級(jí)飼料。酵母菌在自然界中分布很廣，尤其喜歡在偏酸性且含糖較多的環(huán)境中生長(zhǎng)，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果園土壤中最為常見。

4、酵母菌

提起酵母菌這個(gè)名稱，也許有人不太熟悉，但實(shí)際上人酵母菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)酵母菌是單細(xì)胞真核微生物。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球形、卵圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細(xì)菌的單細(xì)胞個(gè)體要大得多，一般為1-5微米×5-30微米。酵母菌無鞭毛，不能游動(dòng)。酵母菌具有典型的真核細(xì)胞結(jié)構(gòu),有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、液泡、線粒體等，有的還具有微體。酵母菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)

酵母菌的繁殖

1、芽殖2、裂殖3、孢子生殖酵母菌的繁殖1、芽殖

酵母菌的無性繁殖

芽殖：酵母菌最常見的無性繁殖方式是芽殖。芽殖發(fā)生在細(xì)胞壁的預(yù)定點(diǎn)上，此點(diǎn)被稱為芽痕，每個(gè)酵母細(xì)胞有一至多個(gè)芽痕。成熟的酵母細(xì)胞長(zhǎng)出芽體，母細(xì)胞的細(xì)胞核分裂成兩個(gè)子核，一個(gè)隨母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入芽體內(nèi)，當(dāng)芽體接近母細(xì)胞大小時(shí)，自母細(xì)胞脫落成為新個(gè)體，如此繼續(xù)出芽。如果酵母菌生長(zhǎng)旺盛，在芽體尚未自母細(xì)胞脫落前，即可在芽體上又長(zhǎng)出新的芽體，最后形成假菌絲狀。

酵母菌的芽殖過程1．泡；2．小管；3．核；4．液泡酵母菌假菌絲的形成圖中1、2、3、4·······是出芽的順序酵母菌的無性繁殖酵酵母菌的有性繁殖酵母菌是以形成子囊和子囊孢子的方式進(jìn)行無性繁殖的。兩個(gè)臨近的酵母細(xì)胞各自伸出一根管狀的原生質(zhì)突起，隨即相互接觸、融合，并形成一個(gè)通道，兩個(gè)細(xì)胞核在此通道內(nèi)結(jié)合，形成雙倍體細(xì)胞核，然后進(jìn)行減數(shù)分裂，形成4個(gè)或8個(gè)細(xì)胞核。每一子核與其周圍的原生質(zhì)形成孢子，即為子囊孢子，形成子囊孢子的細(xì)胞稱為子囊。酵母菌子囊孢子的形成過程1、2、3、4：兩個(gè)細(xì)胞結(jié)合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子

酵母菌的有性繁殖酵母菌子裂殖：是少數(shù)酵母菌進(jìn)行的無性繁殖方式，類似于細(xì)菌的裂殖。其過程是細(xì)胞延長(zhǎng)，核分裂為二，細(xì)胞中央出現(xiàn)隔膜，將細(xì)胞橫分為兩個(gè)具有單核的子細(xì)胞。裂殖：是少數(shù)酵母菌進(jìn)行的無性繁殖方式，類似于細(xì)菌的裂殖。其過酵母菌的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別為黑色。酵母菌的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌各種酵母菌的菌落

啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落各種酵母菌的菌落啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落5、病毒

形態(tài)結(jié)構(gòu)

病毒的形態(tài)基本可歸納為三種：桿狀、球狀和這兩種形態(tài)結(jié)合的復(fù)合型。沒有細(xì)胞構(gòu)造，病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白質(zhì)，在宿主細(xì)胞協(xié)助下，通過核酸的復(fù)制和核酸蛋白裝配的形式進(jìn)行增殖。病毒粒子通常形成螺旋對(duì)稱、二十面體對(duì)稱和復(fù)合對(duì)稱。病毒粒子是無法用光學(xué)顯微鏡觀察的亞顯微顆粒，但當(dāng)他們大量聚集在一起并使宿主細(xì)胞發(fā)生病變時(shí)，就可以用光學(xué)顯微鏡加以觀察。例如動(dòng)、植物細(xì)胞中的病毒包涵體；有的還可用肉眼看到，如噬菌體的噬菌斑等。5、病毒

形態(tài)結(jié)構(gòu)繁殖方式

病毒只有在宿主細(xì)胞里才能進(jìn)行繁殖，而且是通過復(fù)制的方式進(jìn)行的。概括起來可分為吸附、侵入、脫殼生物合成、裝配與釋放五個(gè)步驟。繁殖方式

病毒只有在宿主細(xì)胞里才能進(jìn)行繁殖，而且是通過復(fù)制的6、熱原與內(nèi)毒素許多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱原。熱原是微量即可引起恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)的總稱。主要物質(zhì)為細(xì)菌內(nèi)毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗體復(fù)合物、半抗體原物質(zhì)和某些藥物（類固醇）等。1、細(xì)菌內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分，主要是脂多糖。2、細(xì)菌內(nèi)毒素生物學(xué)活性可分為兩類：一是致病作用，一是保護(hù)性反應(yīng)。3、其他理化特性①耐熱性：120℃加熱4h，可破壞98%。180℃加熱2h或250℃加熱30min，才可徹底破壞。②濾過性：其體積小，約在1~5nm之間，故能通過濾器進(jìn)入濾液中。③具有水溶性及不揮發(fā)性。④能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和氧化劑破壞6、熱原與內(nèi)毒素許多細(xì)菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產(chǎn)生熱原熱原與內(nèi)毒素4、熱源引入的途徑從溶劑中帶進(jìn)從原料中帶進(jìn)從容器、用具、管道和裝置等帶進(jìn)制備過程中的污染從輸液器帶入熱原與內(nèi)毒素4、熱源引入的途徑熱原與內(nèi)毒素5、消除細(xì)菌內(nèi)毒素的方法高溫破壞法：可用180℃干烤3~4h或250℃干烤30min。吸附法：一般選用活性炭。蒸餾法：此法僅限于制備蒸餾水?；瘜W(xué)酸堿和氧化法。離子交換法。反滲透法。凝膠過濾法。超濾法熱原與內(nèi)毒素5、消除細(xì)菌內(nèi)毒素的方法7、藥品的微生物污染藥品微生物污染：微生物的產(chǎn)生、附著而給藥品及生產(chǎn)環(huán)境帶來不良影響。藥品的微生物污染也稱染菌。污染藥品的細(xì)菌：常見污染藥物制劑的細(xì)菌是一些生命力較強(qiáng)的細(xì)菌，如：葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、枯草桿菌及一些霉菌，抵抗力弱的細(xì)菌一般不易造成污染。藥品的微生物污染源：空氣、水、廠房與設(shè)備、藥品生產(chǎn)用原輔料、包裝材料、昆蟲和其它嚙齒動(dòng)物、生產(chǎn)操作人員7、藥品的微生物污染藥品微生物污染：微生物的產(chǎn)生、附著而給藥四、微生物的營養(yǎng)水分：水占細(xì)胞漿的70%～90%，是細(xì)胞的重要組成成分。較普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為，只有在含水的環(huán)境中微生物才能存活。但也有人發(fā)現(xiàn)在無水碳?xì)浠衔镏形⑸锟砷L(zhǎng)期存活。碳源：碳源是構(gòu)成細(xì)胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來自有機(jī)碳化合物如糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機(jī)酸等（同時(shí)利用其化學(xué)能），屬異養(yǎng)型；有些微生物不需有機(jī)碳化合物，以CO2為碳源，屬自養(yǎng)型（分為光能自養(yǎng)型和化能自養(yǎng)型）。四、微生物的營養(yǎng)氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。無機(jī)鹽類：細(xì)菌所需無機(jī)鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵需要量較多，其他只需微量。生長(zhǎng)因子：生長(zhǎng)因子是某些微生物生長(zhǎng)發(fā)育所必需，而其自身又不能合成的一類營養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶。氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。五、消毒與滅菌消毒與滅菌是微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最基本的操作，從事藥品生產(chǎn)和檢驗(yàn)的人員都應(yīng)當(dāng)了解消毒與滅菌的方法及其意義，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量，危害患者安全。五、消毒與滅菌消毒與滅菌是微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最基本的操作，從事消毒與滅菌下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對(duì)微生物的殺滅程度消毒：殺死物體上病源微生物的方法,并不一定能殺死細(xì)菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細(xì)菌的繁殖。防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)常為防腐劑。無菌：不存在活的細(xì)菌。防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)，為無菌操作。消毒與滅菌下列術(shù)語常用于表示物理或化學(xué)方法對(duì)微生物的殺滅程度★芽孢芽孢是細(xì)菌的休眠體，在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營養(yǎng)態(tài)細(xì)胞；一般的芽孢在普通的條件下可保存幾年至幾十年的生活力；世界上最古老的芽孢：2.5億年；其對(duì)熱力、干燥、輻射、化學(xué)消毒等理化因素有強(qiáng)大的抵抗力；殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸汽滅菌。★芽孢芽孢是細(xì)菌的休眠體，在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營養(yǎng)消毒與滅菌一、物理滅菌方法熱力滅菌法輻射殺菌法濾過除菌法消毒與滅菌一、物理滅菌方法消毒與滅菌熱力滅菌法：使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細(xì)胞膜溶解，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。1、干熱滅菌法—采用灼燒或干熱空氣滅菌，使用方便，適用于玻璃器皿和瓷器等耐高溫的固體物的滅菌。2、濕熱滅菌法—利用熱蒸汽殺死微生物。

高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法，蒸汽的穿透力較熱空氣強(qiáng)可以殺死一切微生物，包括細(xì)菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐高溫的個(gè)體。最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。消毒與滅菌熱力滅菌法：使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細(xì)胞膜溶消毒與滅菌3、巴氏消毒法：利用熱力殺死液體中的病原菌或一般的雜菌，同時(shí)不致嚴(yán)重?fù)p害其質(zhì)量的消耗方法。我公司用60±0.5℃連續(xù)10h。消毒與滅菌3、巴氏消毒法：利用熱力殺死液體中的病原菌或一般的消毒與滅菌輻射滅菌法1、紫外線：波長(zhǎng)200-300nm的紫外線具有殺菌作用。穿透物質(zhì)的能力很差，一般要求紫外燈距離照射物不超過1.0米為宜2、電離輻射高速電子、X射線、γ射線3、微波波長(zhǎng)1mm~1m消毒與滅菌輻射滅菌法消毒與滅菌濾過除菌法用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去,以達(dá)到除菌目的。濾菌器含有微細(xì)小孔≤0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過。適用范圍：血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。消毒與滅菌濾過除菌法消毒與滅菌二、化學(xué)滅菌方法許多化學(xué)藥物能影響微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活性，從而發(fā)揮防腐、消毒及滅菌的作用。潔凈室(區(qū))應(yīng)定期消毒，使用的消毒劑不得對(duì)設(shè)備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應(yīng)定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。消毒與滅菌二、化學(xué)滅菌方法消毒與滅菌

★常用消毒劑種類和用途類別作用機(jī)制常用種類用途酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒醇類蛋白變性75％酒精皮膚、體溫計(jì)消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀二氧化氯地面、器具表面、皮膚消毒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮膚消毒表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷0.1％新潔而滅地面、器具表面、皮膚消毒消毒與滅菌

★常用消毒劑種類和用常用消毒劑

①70~75%乙醇水溶液②2000~5000mg/l84消毒液③甲醛37%~40%甲醛液4ml，再加入4g高錳酸鉀，每m3熏蒸量，密閉12~24h，刺激性強(qiáng)；1000~2000mg/l新潔爾滅（苯扎溴銨）水溶液，碘伏常用消毒劑①70~75%乙醇水溶液六、無菌藥品概述無菌定義：沒有活體微生物的存在。

無菌藥品定義：－指沒有活體微生物存在的藥品。－無菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無菌檢查項(xiàng)目的制劑和原料藥，包括無菌制劑和無菌原料藥。（2010版GMP無菌藥品附錄）六、無菌藥品概述無菌定義：沒有活體微生物的存在。1、無菌操作相關(guān)概念

無菌操作：防止細(xì)菌進(jìn)入產(chǎn)品或其他物品的操作技術(shù)。無菌物品：經(jīng)過物理或化學(xué)方法滅菌后，未被污染的物品稱無菌物品。無菌區(qū)域：經(jīng)過滅菌處理而未被污染的區(qū)域稱無菌區(qū)域。無菌操作管理：防止一切微生物侵入和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法。1、無菌操作相關(guān)概念無菌操作：防止細(xì)菌進(jìn)入產(chǎn)品或其他2、無菌藥品的特性–無菌–無熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素–無不溶性微粒–高純度2、無菌藥品的特性–無菌3、常用的無菌藥品

小容量注射劑大容量注射劑粉針凍干粉針無菌眼藥水無菌混懸劑無菌原料等3、常用的無菌藥品小容量注射劑4、無菌藥品的生產(chǎn)工藝－采用最終滅菌工藝的為最終滅菌產(chǎn)品；－部分或全部工序采用無菌生產(chǎn)工藝的為非最終滅菌產(chǎn)品。4、無菌藥品的生產(chǎn)工藝－采用最終滅菌工藝的為最終滅菌產(chǎn)品；5、無菌生產(chǎn)工藝的基本特點(diǎn)無菌產(chǎn)品的質(zhì)量不能完全依賴于對(duì)成品的無菌度測(cè)試，而非最終滅菌的產(chǎn)品，由于產(chǎn)品裝入最終容器后不在做進(jìn)一步的滅菌處理，因此嚴(yán)格的工藝過程及環(huán)境條件的控制是必須的，以保證整個(gè)生產(chǎn)過程不被微粒和微生物污染。5、無菌生產(chǎn)工藝的基本特點(diǎn)無菌產(chǎn)品的質(zhì)量不能完全依賴于對(duì)成品現(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性

無菌檢查結(jié)果合格X整批產(chǎn)品無菌整批產(chǎn)品無菌=無菌檢查結(jié)果合格取樣檢查不能保證支支的合格無菌的定義理論上：無菌＝?jīng)]有任何活的微生物實(shí)際上：我們無法證明產(chǎn)品中沒有活微生物存在現(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性無菌檢查結(jié)果合格X整批產(chǎn)品無菌現(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性無法對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)無菌檢驗(yàn)的結(jié)果只是一個(gè)基于“可能性”的判斷操作者對(duì)機(jī)器運(yùn)行的干擾和房間內(nèi)的狀況(各種活動(dòng))，都會(huì)無菌檢驗(yàn)的結(jié)果產(chǎn)生影響?，F(xiàn)行的無菌檢測(cè)局限性無法對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)

2010版GMP無菌藥品附錄基本要求第三條無菌藥品的生產(chǎn)須滿足其質(zhì)量和預(yù)定用途的要求，應(yīng)當(dāng)最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染。生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度是達(dá)到上述目標(biāo)的關(guān)鍵因素，無菌藥品的生產(chǎn)必須嚴(yán)格按照精心設(shè)計(jì)并經(jīng)驗(yàn)證的方法及規(guī)程進(jìn)行，產(chǎn)品的無菌或其它質(zhì)量特性絕不能只依賴于任何形式的最終處理或成品檢驗(yàn)（包括無菌檢查）。2010版GMP無菌藥品附錄基本要求第三條無菌藥品的6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求操作人員：潔凈工作服＋滅菌；原料及內(nèi)包裝材料：除菌、滅菌、去熱原；工藝用水、氮?dú)?、壓縮空氣：除菌過濾；6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求操作人員：6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求

生產(chǎn)設(shè)備：在線或離線清洗和滅菌；清潔工具：清潔滅菌或消毒；消毒劑：除菌過濾；6、無菌藥品生產(chǎn)工藝的特殊要求生產(chǎn)設(shè)備：注射劑生產(chǎn)無菌保證的控制點(diǎn)

人員的污染：人員：進(jìn)入無菌分裝區(qū)域的人員數(shù)量;操作習(xí)慣應(yīng)以減少對(duì)潔凈區(qū)氣流的影響；

嚴(yán)格的更衣程序；無菌服和人手的微生物監(jiān)測(cè)。

物料的轉(zhuǎn)移:儲(chǔ)存于密封容器中傳遞;單向流保持下傳遞。

環(huán)境的潔凈要求:一定的換氣次數(shù)和風(fēng)速；動(dòng)態(tài)的粒子數(shù)和微生物監(jiān)測(cè)。注射劑生產(chǎn)無菌保證的控制點(diǎn)

人員的污染：人員：進(jìn)入無菌分裝區(qū)七、無菌藥品生產(chǎn)過程的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理

無菌制劑的最大風(fēng)險(xiǎn)是微粒、微生物和內(nèi)毒素，會(huì)對(duì)患者帶來重大的風(fēng)險(xiǎn)。1、現(xiàn)有的無菌檢查法對(duì)于工藝失敗的檢出能力很底，我們所做的工作是將其降到最低。2、無菌工藝和最終滅菌工藝有本質(zhì)的區(qū)別，無菌操作較終端滅菌操作有更多的變量，可預(yù)見性更差。3、降低無菌工藝的風(fēng)險(xiǎn)，減少或消除潛在的污源，提高無菌保證水平，保障患者安全是質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的最終目標(biāo)。七、無菌藥品生產(chǎn)過程的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理無菌制劑的最大風(fēng)險(xiǎn)是微粒風(fēng)險(xiǎn)的構(gòu)成－可能性：危害的可能性/頻率－嚴(yán)重性：危害的后果的嚴(yán)重程度風(fēng)險(xiǎn)是危害發(fā)生的可能性及危害的嚴(yán)重性的組合，有效地管理風(fēng)險(xiǎn)就是對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的這兩個(gè)因素的控制。風(fēng)險(xiǎn)的構(gòu)成－可能性：危害的可能性/頻率藥品風(fēng)險(xiǎn)的來源－生物性：病毒、細(xì)菌的污染等－化學(xué)性：物料生產(chǎn)、儲(chǔ)存、轉(zhuǎn)運(yùn)過程中一些致敏物質(zhì)、有害金屬方面的污染，交叉污染等－物理性：主要包含雜質(zhì)、性狀等方面不合格－質(zhì)量屬性：主要指在含量、PH、釋放度、裝量、產(chǎn)品包裝等方面因生產(chǎn)過程中的差錯(cuò)引起的不合格藥品風(fēng)險(xiǎn)的來源－生物性：病毒、細(xì)菌的污染等生產(chǎn)過程質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的目標(biāo)防止微生物污染防止熱源和細(xì)菌內(nèi)毒素的污染防止產(chǎn)品中有異物高純度最終滅菌產(chǎn)品：無菌保證水平（SAL）≤10-6非最終滅菌制劑:－非最終滅菌產(chǎn)品：以培養(yǎng)基灌裝零污染為目標(biāo)，實(shí)際污染率低于1/5000－A級(jí)區(qū)的微生物限度<1CFU/米3與滅菌制劑10-6無菌保證水平處于同一水平生產(chǎn)過程質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理的目標(biāo)防止微生物污染無菌生產(chǎn)帶來污染風(fēng)險(xiǎn)的十二方面1、進(jìn)入潔凈區(qū)人員的污染；2、潔凈環(huán)境不達(dá)標(biāo)的污染；3、物料和物料轉(zhuǎn)移的污染；4、工藝用氣（氮?dú)狻嚎s空氣等）的污染；5、消毒劑的污染；6、清潔、消毒工藝無效帶來的污染；7、除菌過濾工藝的污染；8、干、濕熱滅菌工藝的污染；9、制藥用水不合格的污染；10、設(shè)備的污染；11、工器具的污染；12、廠房與設(shè)施的污染。無菌生產(chǎn)帶來污染風(fēng)險(xiǎn)的十二方面1、進(jìn)入潔凈區(qū)人員的污染；易造成污染的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)1、灌裝部位2、無菌西林瓶/蓋子進(jìn)入無菌加工區(qū)的方式和地方3、無菌加工區(qū)內(nèi)打開產(chǎn)品容器的方式和地方4、與產(chǎn)品容器