實驗診斷14第八章 免疫學(xué)檢測臨床醫(yī)學(xué)16年

第八章臨床常用免疫學(xué)檢測實驗診斷教研室主講教師：于庭教授2

臨床免疫學(xué)是免疫學(xué)中一個重要的分支學(xué)科，它應(yīng)用免疫學(xué)的理論與技術(shù)，研究疾病的病因、發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸并對疾病進行診斷和防治。臨床免疫學(xué)檢測常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、免疫缺陷病、腫瘤等疾病的診斷與療效監(jiān)測,以及移植后免疫監(jiān)測和治療。

3第一節(jié)

體液免疫檢測

一、免疫球蛋白免疫球蛋白(immunoglobulin，ig)是一組具有抗體活性的球蛋白，由漿細胞合成與分泌，存在于機體的血液、體液、外分泌液以及部分細胞的表面，應(yīng)用免疫電泳與超速離心分析可將ig分為五類：即igg、igm、iga、igd和ige。4

第一節(jié)體液免疫檢測

5(一)免疫球蛋白g

igg主要由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細胞合成與分泌，約占血清中總ig的70-80％，是血清中主要的抗體成分，屬再次免疫應(yīng)答抗體，在機體的免疫防御中起重要作用。另外igg是唯一能通過胎盤的免疫球蛋白，使新生兒獲得免疫性抗體。[參考值]7.0～16.6g/l[臨床意義]1、生理變化2、病理變化⑴igg增高：各種原因的慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、sle、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；單純igg增高，主要見于免疫增殖性疾病。⑵igg減低：第一節(jié)

體液免疫檢測6（二）免疫球蛋白aiga分為血清型（約占血清中總ig的10-15％）與分泌型兩種。[參考值]成人iga0.7～3.5g/l[臨床意義]1、生理變化2、病理變化⑴iga增高：iga型mm、sle、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝硬化、中毒性肝損傷。⑵iga減低：常見于反復(fù)呼吸道感染患者、重鏈病、輕鏈病、原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病。第一節(jié)

體液免疫檢測

7(三)免疫球蛋白migm為五聚體，是初次免疫應(yīng)答反應(yīng)中的ig,由5個igm單體連接而成，分子結(jié)構(gòu)呈環(huán)形，是ig中分子量最大者。在個體的發(fā)育過程中，igm是出現(xiàn)最早的ig，當(dāng)機體受到抗原刺激后，igm亦是最早出現(xiàn)的抗體。[參考值]0.5～2.6g/l[臨床意義]1、生理變化2、病理變化⑴igm增高：初期病毒性肝炎、sle、ra、肝硬化,單純igm增高提示原發(fā)性感染。⑵ig減低：igg型重鏈病、先天性免疫缺陷病、免疫抑制劑治療后、淋巴系腫瘤、腎病綜合癥。第一節(jié)

體液免疫檢測

8(四)免疫球蛋白e

免疫球蛋白e(immunoglobulin

e，ige)為血清中最少的一種ig，約占血清總ig的0.002％。它是一種親細胞性抗體，是介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的抗體,與變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲感染及皮膚過敏等有關(guān)。

[參考值]

成人血清o.1－0.9mg／l第一節(jié)

體液免疫檢測

9[臨床意義]1、生理變化2、病理變化⑴ige增高：ige型mm、重鏈病、肝臟病、ra、過敏性哮喘、過敏性鼻炎、間質(zhì)性肺炎、蕁麻疹、寄生蟲感染、嗜酸性粒細胞增多癥、皰疹樣皮炎。⑵ige減低：先天性或獲得性丙種蛋白缺乏癥、免疫抑制劑治療后、淋巴系腫瘤、腎病綜合癥。第一節(jié)

體液免疫檢測

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(五)m蛋白

m蛋白(mprotein)或稱單克隆免疫球蛋白[參考值]蛋白電泳法、免疫比濁法或免疫電泳法：正常人為陰性。[臨床意義]檢測到m蛋白，提示單克隆免疫球蛋白增殖病。見于：①多發(fā)性骨髓瘤：以igg型最常見；②巨球蛋白血癥(waldenstrom癥)：存在大量單克隆igm；③重鏈病：出現(xiàn)ig重鏈（、和重鏈)；④惡性淋巴瘤；⑤半分子?。合涤梢粭l重鏈和一條輕鏈組成的單克隆ig片段；⑥良性m蛋白血癥；⑦輕鏈病第一節(jié)

體液免疫檢測11二、補體系統(tǒng)補體(complement)是血清中具有酶活性的一種不耐熱球蛋白，由三組球蛋白分子組成。第一組：由九種補體成分組成(c1～c9)；第二組：包括b因子、d因子、p因子、h因子等；第三組：則為補體調(diào)節(jié)蛋白，如c1抑制物、c4結(jié)合蛋白、促衰變因子等。血清總補體活性或其單一補體成分的變化對某些疾病的診斷與療效觀察有極其重要的意義。第一節(jié)

體液免疫檢測

12（一）總補體溶血活性(ch50)測定totalcomplementhemolyticactivitych50主要反映經(jīng)典途徑補體的綜合水平[參考值]50000－100000u/l[臨床意義]1.ch50活性增高常見于急性炎癥、急性組織損傷、惡性腫瘤及妊娠。2.ch50活性降低見于各種免疫復(fù)合物疾病(腎小球腎炎)、自身免疫性疾病活動期、慢性肝炎、肝硬化、hiv。第一節(jié)

體液免疫檢測

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(二)血清補體(complement3，c3)

c3測定血清補體c3是血清中含量最高的補體成分。[參考值]免疫比濁法0.8—1.5g/l[臨床意義]1.生理性變化2.病理性變化1．血清c3含量增高見于一些急性時相反應(yīng)2．血清c3含量降低見于①補體合成能力降低，如慢性肝病、肝硬化、肝壞死；②補體合成原料不足，如營養(yǎng)不良(多見于兒童)；③補體消耗或丟失太多，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期、急性鏈球菌感染后腎小球腎炎、基底膜增殖性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎、慢性活動性肝炎、瘧疾等；④先天性補體缺乏，如遺傳性c3缺乏癥。第一節(jié)

體液免疫檢測

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(三)血清補體c4(complement4,c4)測定血清補體c4由肝臟、吞噬細胞合成,在mg++的參與下，c4裂解為c4a與c4b二個片段，參與補體的經(jīng)典激活途徑。[參考值]成人：0.2－0.6g/l[臨床意義]1.生理性變化2.病理性變化1．增高見于各種傳染病、急性炎癥、組織損傷。2．降低見于自身免疫性肝炎、狼瘡性腎炎、sle、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、iga腎病、遺傳性iga缺乏癥等。第一節(jié)

體液免疫檢測

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第二節(jié)細胞免疫檢測

淋巴細胞是構(gòu)成機體免疫系統(tǒng)的主要細胞群體，占外周血白細胞總數(shù)的20％-40％，根據(jù)表型和功能可分為不同的群體，如t細胞、b細胞、k細胞、nk細胞等，t細胞和b細胞還可進一步分為若干亞群。這些淋巴細胞群和亞群在免疫應(yīng)答過程中相互協(xié)作、相互制約，共同完成對抗原物質(zhì)的識別、應(yīng)答和清除，從而維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。臨床上常對淋巴細胞的數(shù)量，表面標(biāo)志及功能進行檢查，以了解機體的細胞免疫情況。

一、t細胞亞群的檢測t淋巴細胞是由一群功能不同的異質(zhì)性淋巴細胞組成，在形態(tài)學(xué)上難以區(qū)分，但是可借助于其細胞膜表面分子加以區(qū)別，這些細胞膜表面分子即為t淋巴細胞的表面標(biāo)志(tlymphocytesurfacemarker)。t淋巴細胞表面標(biāo)志檢測的方法眾多，如e玫瑰花形成試驗、免疫熒光法(ifa)、流式細胞術(shù)(facs)、免疫金銀法以及免疫酶染色法等。1718t細胞分化抗原測定通過密度梯度離心法獲取外周血單個核細胞，再加入熒光素標(biāo)記的抗某種t淋巴細胞的表面標(biāo)志的單克隆抗體，孵育20～30min后，用熒光顯微鏡進行計數(shù)，并計算出陽性細胞的百分率。也可用facs進行分析，此法較其它方法快速，準(zhǔn)確，可靠。[參考值]

指標(biāo)ifafacscd3+63.1％±10.8％61％～85％cd3+cd4+（th）42.8％±9.5％28％～58％cd3+cd8+（ts）19.6％±5.9％19％～48％cd4+/cd8+（th/ts）2.2±0.7/10.9～2.0/1一、t細胞亞群的檢測19

[臨床意義]1.cd3+降低常見于自身免疫病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；免疫缺陷病，如獲得性免疫缺陷綜合征(aids)。2.cd3+/cd4+降低常見惡性腫瘤,艾滋病,某些病毒感染,應(yīng)用免疫抑制劑等；3.cd3+/cd8+降低常見于自身免疫病,變態(tài)反應(yīng)病。4.cd4+/cd8+增高常見于自身免疫病,病毒性感染,變態(tài)反應(yīng)病,常預(yù)示可能發(fā)生移植排斥反應(yīng)。5.cd4+/cd8+降低常見于aids、惡性腫瘤進行期和復(fù)發(fā)時。一、t細胞亞群的檢測20二、b細胞分化抗原檢測b淋巴細胞簡稱b細胞，由骨髓中淋巴樣前體細胞分化而來，是體內(nèi)唯一能產(chǎn)生抗體的細胞。與t細胞類似，b細胞表面有表面抗原與表面受體兩大類。表面抗原包括cdl9、cd20、cd21、cd22和cd40等；表面受體包括b細胞抗原受體(bcr)、細胞因子受體(ckr）[參考值]facs：cdl9+細胞11.74％±3.73％[臨床意義]cdl9為全部b細胞共有的表面標(biāo)志，b細胞活化后不消失，因此是最重要的b細胞標(biāo)記分子。cdl9+升高見于b細胞系統(tǒng)的惡性腫瘤，急、慢性淋巴細胞白血病，burkitt淋巴瘤cdl9+降低見于體液免疫缺陷病，無丙種球蛋白血癥、使用化療或免疫抑制劑。21三、自然殺傷細胞免疫檢測自然殺傷細胞活性測定[參考值]流式細胞術(shù)13.8%±5.9%[臨床意義]nk細胞活性可作為判斷機體抗腫瘤和抗病毒感染的指標(biāo)nk細胞活性降低見于血液系統(tǒng)腫瘤、實體瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染。nk細胞活性升高見于宿主抗移植物反應(yīng)22四、細胞因子檢測

(一)白細胞介素2活性和白細胞介素2受體測定白介素－2(interleukin-2，il-2)是白細胞介素中的一種。主要由活化t細胞產(chǎn)生，是具有多向性作用的細胞因子。它對機體的免疫應(yīng)答和抗病毒感染等有重要作用。[臨床意義]①il-2：隨年齡的增長，有降低趨勢。增高：見于自身免疫性疾病(sle、ra等)、再生障礙性貧血、多發(fā)性骨髓瘤、排斥反應(yīng)等。降低：見于免疫缺陷病(艾滋病等)、惡性腫瘤、1型糖尿病、某些病毒感染等；②il-2r：對急性排斥反應(yīng)和免疫性疾病有診斷意義?？勺鳛椴∏橛^察和藥效監(jiān)測的一項指標(biāo)。

23(二)腫瘤壞死因子測定腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，tnf)分為tnf和tnf兩型。tnf單核細胞吞噬細胞→來源于tnf→來源于t淋巴細胞兩型的結(jié)構(gòu)不同，生物活性類似。兩型都有引起腫瘤組織出血、壞死和殺傷作用，都可引起抗感染的炎癥反應(yīng)，以及對免疫細胞進行調(diào)節(jié)、誘生。[參考值]elisa法4.3±2.8μg／l四、細胞因子檢測

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[臨床意義]①tnf有炎癥介質(zhì)作用，能阻止內(nèi)毒素休克、dic的發(fā)生；②有抗感染效應(yīng)，抑制病毒復(fù)制和殺傷病毒感染細胞；③有抗腫瘤作用，殺傷和破壞腫瘤細胞。④血中tnf水平增高特別對某些感染性疾病(如腦膜炎球菌感染)的病情觀察有價值。四、細胞因子檢測

25(三)干擾素測定干擾素(intrferon,inf)是宿主細胞受病毒感染后產(chǎn)生的一種非特異性防御因子,具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抑制細胞增殖的作用。[參考值]1-4ku/l[臨床意義]增高見于sle、非活動性ra、惡性腫瘤早期、急性病毒感染、再生障礙性貧血。減低見于乙型肝炎及攜帶者、哮喘、活動性ra。四、細胞因子檢測

26腫瘤標(biāo)志物(tumormarker，tm)

是由腫瘤細胞本身合成、釋放或者是由機體對腫瘤細胞反應(yīng)而產(chǎn)生的一類物質(zhì)，存在于血液、細胞、組織或體液中，反映腫瘤存在和生長。包括蛋白質(zhì)、激素、酶和多胺等，tm的檢測對腫瘤的診斷、鑒別診斷、療效觀察以及預(yù)后評價具有一定的價值。第三節(jié)腫瘤標(biāo)志物檢查27理想標(biāo)志物特點①靈敏度高；②特異性好；③有器官特異性；④與病情嚴(yán)重程度、腫瘤大小或分期有關(guān)；⑤監(jiān)測腫瘤治療效果；⑥監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)；⑦預(yù)測腫瘤預(yù)后第三節(jié)腫瘤標(biāo)志物檢查28

一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測

(一)甲胎蛋白測定

甲胎蛋白(alphafetoprotein，afp或afp)是在胎兒早期由肝臟和卵黃囊合成的一種糖蛋白。出生后，afp的合成很快受到抑制。當(dāng)肝細胞或生殖腺胚胎組織發(fā)生惡性病變時，有關(guān)基因重新被激活，使原來已喪失合成afp能力的細胞又重新開始合成，以致血中afp含量明顯升高。因此血中afp濃度檢測對診斷肝細胞癌及滋養(yǎng)細胞惡性腫瘤有重要的臨床價值。29[參考值]

ria、elisa、clia法＜25g／l。[臨床意義]1．原發(fā)性肝細胞癌患者血清afp增高，增高率約為67.8％～74.4％；約有50％超過300g／l

，約有18％的原發(fā)性肝癌患者其afp為陰性。2．生殖腺胚胎癌(睪丸癌、卵巢癌、畸胎瘤等)、胃癌或胰腺癌時，血中afp含量也可升高。3．病毒性肝炎、肝硬化時afp也有不同程度的升高，通常＜300g／l。4．妊娠3-4個月，孕婦afp開始升高；7-8個月達高峰，以后下降；但多低于400g／l。胎兒神經(jīng)管畸形、雙胎、先兆流產(chǎn)等可使孕婦血液和羊水中afp升高。

一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測

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(二)癌胚抗原測定癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，cea)是一種富含多糖的蛋白復(fù)合物。胎兒早期的消化管及某些組織均有合成cea的能力，但孕六個月以后含量逐漸減少，出生后含量極低。是一種廣譜性腫瘤標(biāo)志物，檢測它對腫瘤的診斷、預(yù)后、復(fù)發(fā)判斷、療效監(jiān)測有意義。

[參考值]elisa、ria、clia法＜5g／l

一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測

31[臨床意義]1．cea明顯增高見于90％的胰腺癌、74％的結(jié)腸癌、60％的乳腺癌患者，常超過60g／l。此外胃癌、肺癌也增高。2．動態(tài)觀察，一般病情好轉(zhuǎn)時，cea濃度下降，病情加重時可升高。3．結(jié)腸炎、胰腺炎、肝臟疾病、肺氣腫及支氣管哮喘等也常見cea輕度升高。4．少數(shù)大量吸煙者cea>5g／l

一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測

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(三)前列腺特異抗原測定

前列腺特異抗原(prostatespecificantigen，psa)是一種由前列腺分泌的單鏈糖蛋白，它存在于前列腺管道的上皮細胞中，在前列腺癌時可見psa血清水平明顯升高?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)血清總psa(t-psa)中有80％以結(jié)合形式存在(c-psa)；20％的以游離psa形式存在(f-psa)。其比值對診斷更有特異和準(zhǔn)確性。

[參考值]ria、clia、elisa法：t-psa<4.og／Ｌf-psa<0.8g／Ｌ

f-psa／t-psa比值>o.25。

一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測

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[臨床意義]1．前列腺癌時60％－90％患者血清psa水平明顯升高；當(dāng)行外科切除術(shù)后，90％患者血清psa水平明顯降低。2．術(shù)后若psa水平無明顯減低或升高，即有轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的可能。前列腺增生、前列腺炎等良性疾病，約有14％的患者血清psa水平升高，應(yīng)注意鑒別。3．當(dāng)t-psa為4.0-10.0g/Ｌ時，f-psa/t-psa比值對診斷意義更大，<0.1提示前列腺癌。4.肛門指診、前列腺按摩、膀胱鏡檢查、前列腺手術(shù)可引起psa增高。

一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測

34（四）鱗狀上皮細胞癌抗原測定（squamouscellcarcinomaantigenscca）[參考值]<1.5g/Ｌ[臨床意義]1.血清scca增高見于肺鱗狀細胞癌；Ⅰ、Ⅲ期食管癌；宮頸癌。2.nacb推薦scca用于宮頸癌的預(yù)后評估、監(jiān)測療效和腫瘤復(fù)發(fā)。臨床也常用于肺鱗狀細胞癌、食管癌的監(jiān)測3.部分良性疾病也可引起scca增高。

一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物的檢測

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二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測

(一)糖鏈抗原199測定

糖鏈抗原199(carbohydrateantigen19-9，cal99)是一種糖蛋白。胚胎期分布于胎兒的胰腺、肝膽和腸等組織；在成人的唾液腺、胰腺、乳腺、膽管、膽囊等部位也有少量存在。[參考值]血清cal99＜3.7萬u/l(elisa、clia、ria)36

[臨床意義]胰腺癌、肝膽和胃腸道疾病時血中cal99的水平可明顯升高。1．目前認為cal99是胰腺癌的首選腫瘤標(biāo)志物，胰腺癌早期，當(dāng)特異性為95％時，敏感性可達80％～90％。若結(jié)合cea檢測，敏感性可進一步提高2.5％～10％胰腺癌cal99不升高3.膽囊癌和膽管癌為85％左右，胃癌、結(jié)腸癌為40％，直腸癌為30％～50％；對早期病人的敏感度僅為30％。4．連續(xù)檢測對病情進展、手術(shù)療效、預(yù)后估計及復(fù)發(fā)診斷有重要價值。5．急性胰腺炎、膽汁淤積型膽管炎、膽石癥、急性肝炎、肝硬化等，血清cal99也可出現(xiàn)不同程度的升高。6．若結(jié)合cea檢測，對胃癌診斷符合率可達85％。

二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測

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(二)癌抗原125測定癌抗原125(cancerantigen125，cal25)為一種糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于卵巢腫瘤的上皮細胞內(nèi)。當(dāng)患有上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌時，病人血清cal25水平可明顯升高。［參考值］<3.5萬u／l

二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測

38[臨床意義]

1．ca125存在于卵巢癌組織細胞和漿液型腺癌組織中,不存在于黏液性卵巢癌中.早期診斷和復(fù)發(fā)診斷的敏感性可達50％～90％，故對診斷卵巢癌有較大臨床價值，尤其對觀察治療效果和判斷復(fù)發(fā)較為靈敏。2．宮頸癌、乳腺癌、胰腺癌、膽道癌、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、肺癌等也有一定的陽性反應(yīng)。3．3％-6％的良性卵巢瘤、子宮肌瘤病人血清cal25有時也會明顯升高，但多數(shù)不超過10萬u／l。4．肝硬化失代償期血清cal25明顯升高。5.可用于鑒別卵巢包塊。6.早孕期(3個月)cal25也可升高。

二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測

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（三)癌抗原153測定癌抗原153(cancerantigen153，cal53)是由抗原決定簇、糖和多肽組成的糖蛋白。在乳腺癌患者的血清中可見cal53的水平明顯升高，所以對乳腺癌有重要的輔助診斷作用，但其特異性有限。[參考值]＜2.5萬u／l。

二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測

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[臨床意義]

1．乳腺癌時，30％-50％的患者可見cal53明顯升高，但在早期乳腺癌時，它的陽性率僅為20％-30％左右。不能用于篩查和早期診斷,用于觀察乳腺治療后有無復(fù)發(fā)及檢測乳腺癌的轉(zhuǎn)移。2．在轉(zhuǎn)移性卵巢癌、結(jié)腸癌、肝癌、肺癌、子宮腫瘤時可增高。3．乳腺、肝臟、肺的良性疾病，cal53也可升高。

二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測

41(四)癌抗原50測定(ca50)主要由唾液酸糖脂和唾液酸糖蛋白組成,,對腫瘤的診斷無器官特異性。(五)癌抗原724測定(ca724)是胃腸道和卵巢腫瘤的標(biāo)志物(六)癌抗原242測定(ca242)增高見于胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌；卵巢癌、子宮癌、肺癌也可見增高。

二、糖脂腫瘤標(biāo)志物檢測

42三、酶類腫瘤標(biāo)志物檢測

(一)神經(jīng)元特異性烯醇化酶測定(neuronspecificenolase，nse)

在糖酵解途徑中，烯醇化酶催化甘油分解。它由三個亞基(、、)組成的二聚體，并形成5種同工酶(、、、、)。亞基的同工酶存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌組織，稱為神經(jīng)元特異性烯醇化酶，它與神經(jīng)內(nèi)分泌起源的腫瘤有關(guān)。[參考值]ria或elisa法為<15g／l。43[臨床意義]1．小細胞肺癌時，nes水平高出其他類型肺癌的5～10倍，靈敏度達80％，特異性達80％-90％；其他組織型肺癌僅10％-20％的病人nes升高。因此它可作為小細胞肺癌的高特異性和高靈敏度的標(biāo)志物。2．nes是神經(jīng)母細胞瘤的標(biāo)志物，其靈敏度可達90％以上。發(fā)病時，nes水平明顯升高。有效治療后降低，復(fù)發(fā)后又升高。3．正常紅細胞中存在nes，標(biāo)本溶血影響結(jié)果。

三、酶類腫瘤標(biāo)志物檢測

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(二)-l-巖藻糖苷酶測定

-l-巖藻糖苷酶(-l-fucosidase，afu)是一種溶酶體酸性水解酶，廣泛存在于人體組織細胞，參與糖蛋白、糖脂和寡糖的代謝。在原發(fā)性肝癌患者血清中增高，是原發(fā)性肝癌的標(biāo)志物之一。

[參考值]elisa法和分光光度連續(xù)監(jiān)測法為：234－414mol／l。

三、酶類腫瘤標(biāo)志物檢測

45[臨床意義]1．81.2％的原發(fā)性肝癌患者血清afu水平增高，與afp聯(lián)合檢測可提高原發(fā)性肝癌診斷陽性率達93.1％。2．動態(tài)觀察對判斷肝癌療效、預(yù)后、復(fù)發(fā)有重要意義。3．血清afu在轉(zhuǎn)移性肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宮癌也可增高；在肝硬化、慢性肝炎、消化道出血等也有輕度增高。三、酶類腫瘤標(biāo)志物檢測

46(三)前列腺酸性磷酸酶測定pap(prostaticacidphosphatase)是前列腺外分泌物中能水解磷酸酯的糖蛋白。[參考值]≤2.0g／l[臨床意義]前列腺癌時血清pap明顯增高,其程度與癌瘤發(fā)展基本呈平行關(guān)系,可用于監(jiān)測轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后。

三、酶類腫瘤標(biāo)志物檢測

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四、腫瘤標(biāo)志物的選用

同一種腫瘤可含多種標(biāo)志物，而一種標(biāo)志物可出現(xiàn)在多種腫瘤當(dāng)中。選擇特異標(biāo)志物或最佳組合有利于提高腫瘤診斷的陽性率。動態(tài)檢測有利于良性和惡性腫瘤的鑒別，以及腫瘤疾病復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷。

48afpceapsapapnsehcgca199ca50ca125ca153ca724ca242tpasccaafu原發(fā)性肝癌11干細胞癌11結(jié)腸癌123前列腺癌11小細胞肺癌1非小細胞肺癌23絨毛膜上皮細胞癌1胰腺癌3122膽道癌12卵巢癌12乳腺癌21胃癌231膀胱癌2宮頸癌32耳鼻喉腫瘤32食管癌33

四、腫瘤標(biāo)志物的選用

49第四節(jié)

自身抗體檢測

自身免疫性疾病(autoimmunedisease，aid)是指由于某些原因造成免疫系統(tǒng)對自身成分的免疫耐受性減低或破壞，致使自身抗體或致敏淋巴細胞損傷含有相應(yīng)自身抗原的器官組織而引起的疾病，表現(xiàn)為相應(yīng)的組織器官的功能障礙。自身免疫性疾病按自身抗原分布的范圍可分為器官特異性(organspecific)和非器官特異性(non-organspecific)兩類。前者指自身抗原為某一器官的特定成分，病變也嚴(yán)格局限于該器官。后者是指自身抗原為細胞核或細胞漿成分，病變可遍及全身各組織器官。50全球發(fā)病率:約為3%國內(nèi):多發(fā)性硬化病800-1000萬系統(tǒng)性紅斑狼瘡70-90萬類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎300-400萬5d痛苦discomfort殘疾disability死亡death藥物中毒drugreactions經(jīng)濟損失dollarlose第四節(jié)

自身抗體檢測

51

自身免疫性疾病通?？捎幸韵屡R床特征：①患者以女性多見，并有遺傳傾向；②患者血中可以檢測到高滴度的自身抗體；③患者組織器官的病理特征為免疫炎癥；④用相同的抗原在實驗動物中可復(fù)制出相似的模型；⑤自身免疫性疾病有重疊現(xiàn)象；⑥多數(shù)病因不明，常呈自發(fā)性或特發(fā)性；⑦病程較長，病情遷延反復(fù)，易伴發(fā)免疫缺陷性疾病或惡性腫瘤；⑧用免疫抑制藥物治療有一定療效。

第四節(jié)

自身抗體檢測

52一、類風(fēng)濕因子測定

類風(fēng)濕因子是變性igg刺激機體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)。它有igm型，也有igg、iga、igd和ige型。用乳膠凝集法測出的主要是igm型；速率法敏感但不能分類型。［參考值］乳膠凝集法血清稀釋度低于l:10速率比濁法＜30ku／l。

53[臨床意義]

類風(fēng)濕性疾病，rf陽性70%-90%；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的陽性率為70％。igg型與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)外癥狀有關(guān)；igm和iga型的效價與病情有關(guān)。其他自身免疫性疾病，如多發(fā)性肌炎、硬皮病、干燥綜合征、sle也見rf陽性。某些感染性疾病，也多呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。故本試驗的特異性不高，應(yīng)予鑒別。一、類風(fēng)濕因子測定54（一）抗核抗體測定抗核抗體(anti-nuclearantibody，ana)是以細胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱，無器官和種屬特異性。用間接免疫熒光法檢查ana時，有幾種熒光圖譜：①均質(zhì)型：此型與抗dsdna和抗組蛋白抗體有關(guān)。②核膜型：此型對應(yīng)的抗核孔復(fù)合物和抗板層素抗體。③顆粒型：與抗u1-rnp、抗sm、抗scl-70、抗ss-a／ro、抗ss-b／la等有關(guān)。④核點型⑤著絲點型⑥核仁型：此型與針對核糖體、u3-rnp、rna聚合酶的抗體有關(guān)。

二、抗核抗體檢測5556（二）可提取性抗原抗體譜測定可提取性抗原（extractablenuclearantigenena）有多種相對分子量不同的多肽構(gòu)成?？购丝贵w熒光模型臨床意義dsdna核均質(zhì)型活動期sle抗sm抗體粗顆粒型sle抗nrnp抗體粗顆粒型mctd抗ssa抗體細顆粒型ss抗ssb抗體細顆粒型ss抗jo-1抗體細顆粒型pm/dm抗scl-70抗體核仁型pss二、抗核抗體檢測5758(三)抗dna抗體測定

抗dna抗體分為抗雙鏈dna抗體(doublestrandeddnaantibody，dsdna)、抗單鏈dna抗體(singlestrandeddnaantibody，ssdna)和抗z-dna抗體?？筪sdna抗體的靶抗原是細胞核中dna的雙螺旋結(jié)構(gòu)。[結(jié)果判斷]間接免疫熒光法陽性時，dsdna與馬疫錐蟲動基體結(jié)合發(fā)出致密熒光亮點。[臨床意義]

抗dsdna抗體陽性見于活動期系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，陽性率70%-90%。本試驗特異性較高，但敏感性較低。抗dsdna抗體的檢測對于sle的診斷和治療監(jiān)控極為重要，是sle診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。也是迄今為止參與sle發(fā)病機制唯一的一種自身抗體。

抗ssdna抗體陽性見于sle，尤其合并有狼瘡性腎炎。二、抗核抗體檢測59（四）抗胞質(zhì)抗體檢測抗線粒體抗體檢測(anti-mitochondrialantibody,ama)ama是一組以線粒體內(nèi)膜和外膜蛋白為靶抗原、無器官和種屬特異性的一種自身抗體；主要是igg。［臨床意義］許多肝臟疾病可檢出ama。原發(fā)性膽汁性肝硬化（pbc）時ama陽性率可達90％以上，m2是其重要血清學(xué)標(biāo)志。藥物性自身免疫性肝病患者的ama通常為m3和m6。ama可作為原發(fā)性膽汁性肝硬化和肝外膽道阻塞性肝硬化的鑒別診斷指標(biāo)之一二、抗核抗體檢測60三、抗組織細胞抗體檢測㈠.抗腎小球基底膜抗體檢測（gbm）［臨床意義］抗gbm抗體是抗基底膜抗體型腎小球腎炎特異性抗體。㈡.抗胃壁細胞抗體(pca)［臨床意義］慢性萎縮性胃炎pca100%陽性，惡性貧血pca90%陽性。㈢.抗甲狀腺抗體(tg&tm)［臨床意義］tg、tm見于橋本甲狀腺炎；tg陽性見于甲亢；tm見于甲減61㈣.抗平滑肌抗體檢測（sma）［臨床意義］抗平滑肌抗體主要見于自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、急性病毒性肝炎。㈤.抗心肌抗體檢測［臨床意義］心肌炎、心肌衰竭、風(fēng)濕熱、重癥肌無力。㈥.肝臟相關(guān)自身抗體檢測(lkm&sla)［臨床意義］見于自身免疫性肝炎三、抗組織細胞抗體檢測62四、其他抗體檢測㈠.抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體檢測（anca）血管炎是指以血管壁炎癥壞死為基礎(chǔ)病理所引起的一組疾病，anca是血管炎的自身抗體，是診斷血管炎的一種特異性指標(biāo)。分為canca、panca。（1）canca

抗蛋白酶3抗體抗pr3抗體

陽性見于韋格納肉芽腫（wg）（2）panca

抗髓過氧化物酶抗體抗mpo抗體

陽性見于血管性腎炎、多動脈炎、自身免疫性肝炎、風(fēng)濕性和膠原性血管炎、潰瘍性結(jié)腸炎、pbc63㈡.抗心磷脂抗體測定

各種帶負電荷的磷脂是細胞膜的主要構(gòu)成成分，其中心磷脂最為重要?？沽字贵w是一組針對各種帶負電荷磷脂的自身抗體，包括抗心磷脂抗體(anticardiolipin

antibody，aca)、抗磷脂酰絲氨酸等。aca是以心磷脂為靶抗原的一種自身抗體。[結(jié)果判斷]

elisap／n≥2.1則為陽性。

四、其他抗體檢測64

[臨床意義]①aca見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等風(fēng)濕病患者，反復(fù)自然流產(chǎn)患者、以及腫瘤、感染(aids、麻風(fēng)、瘧疾等)、血小板減少癥、腦卒中、心肌梗死患者。②高水平的aca是急性腦血管病愈后不良的信號。③約70％未經(jīng)治療的aca陽性患者可發(fā)生自發(fā)性流產(chǎn)和宮內(nèi)死胎，尤其是igm型aca可作為自發(fā)性流產(chǎn)的前瞻性指標(biāo)。四、其他抗體檢測(三).抗環(huán)瓜氨酸肽(ccp)抗體針對的主要抗原位點是絲集蛋白中的瓜氨酸。[參考值]elisa法:陰性[臨床意義]

對ra診斷的敏感性是50-78%，特異性為96%。2010年被列為ra的分類診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，有助于ra的早期診斷，并于ra的活動性相關(guān)。四、其他抗體檢測66第五節(jié)感染免疫檢測

病原體(細菌、病毒、立克次體、支原體、衣原體、寄生蟲等)及其代謝產(chǎn)物刺激人體免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，可利用凝集試驗、補體結(jié)合試驗、沉淀試驗、免疫熒光試驗(ifa)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(elisa)和放射免疫試驗(ria)等手段進行檢測；近年來，也利用pcr或dna探針雜交技術(shù)對病原體核酸進行檢測。67一、細菌感染免疫檢測

(一)抗鏈球菌溶血素“o”測定

鏈球菌溶血素“o”(streptolysin“o”)是a族溶血性鏈球菌的重要代謝產(chǎn)物之一，它是一種具有溶血活性的蛋白質(zhì)，能溶解人及一些動物的紅細胞。同時鏈球菌溶血素“o”具有抗原性，能刺激機體產(chǎn)生對應(yīng)的抗體，稱為抗鏈球菌溶血素“o”(anti-streptolysin“o”，aso)。[參考值]陰性[臨床意義]陽性表示近期有a群溶血性鏈球菌感染常見于活動性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染。68(二)肥達(widal)反應(yīng)

傷寒、副傷寒沙門菌含有菌體“o”抗原和鞭毛“h”抗原(副傷寒沙門菌甲、乙、丙的“h”抗原分別為a、b、c)。機體感染一周后，能逐漸產(chǎn)生相應(yīng)抗體。[參考值]傷寒h<1:160，o<1:80；副傷寒a(chǎn)、b、c<1:80［臨床意義](1)o升高，h正常：傷寒發(fā)病早期或其他沙門菌感染的交叉反應(yīng)。(2)o正常，h升高：不久前曾患過傷寒或傷寒疫苗接種后，或非特異性回憶反應(yīng).(3)o升高，h升高：傷寒可能性大.(4)o升高，a、b、c任何一項升高：可能分別為副傷寒甲、乙、丙。一、細菌感染免疫檢測69（三）結(jié)核分枝桿菌抗體和dna測定［結(jié)果判定］elisa：結(jié)核抗體陰性pcr：結(jié)核分枝桿菌dna陰性［臨床意義］用血清學(xué)方法檢測抗體，敏感性和特異性可達90％，簡便、快速、靈敏，但有一定假陽性。pcr方法靈敏度高、特異性強、速度快，應(yīng)防止標(biāo)本污染一、細菌感染免疫檢測70（一）、torch試驗torch是指一組病原微生物的英文名稱縮寫。t即剛地弓形蟲或弓形蟲(toxoplasma

gondii)，o即其它病原微生物(others)，r即風(fēng)疹病毒(rubellavirus)，c即巨細胞病毒(cytomegalo

virus)，h即單純皰疹病毒(herpessimplexvirus)。這組病原體?？赏ㄟ^胎盤傳給胎兒，引起圍生期感染，導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形和智力障礙等各種異常結(jié)果，因此受到廣泛關(guān)注。torch感染的抗體檢查在許多地區(qū)已作為孕期檢查的常規(guī)項目二、病毒感染免疫檢測71

1、弓形蟲(toxoplasma

gondii)抗體測定

弓形蟲感染是一種人畜共患疾病，廣泛分布于世界各地。貓和其他寵物是主要傳染源。人體感染后，輕型者常無癥狀，但血清中可查到抗體；重型者可引起各種癥狀，如高熱，肌肉、關(guān)節(jié)疼痛，淋巴結(jié)腫大等。孕婦急性弓形蟲感染后，直接威脅胎兒健康。臨床上檢測弓形蟲特異性igm抗體來進行早期診斷。[參考值]ift，elisa：陰性[臨床意義]孕早期感染者可引起流產(chǎn)、死胎、胚胎發(fā)育障礙；妊娠中、晚期感染者，可引起宮內(nèi)胎兒生長遲緩和一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害，眼損害以及內(nèi)臟的先天損害等，嚴(yán)重威脅胎兒健康。

二、病毒感染免疫檢測722、風(fēng)疹病毒(rubellavirus)抗體測定

風(fēng)疹病毒直徑為60nm，具單股rna，屬披膜病毒科。風(fēng)疹是由風(fēng)疹病毒引起的，對兒童來說，是一種癥狀較輕的出疹性疾病。但孕婦若在妊娠早期感染風(fēng)疹病毒，新生兒致畸致殘率80%，因此，對早孕婦女進行風(fēng)疹病毒特異性igm、igg抗體監(jiān)測有重要意義。[參考值]elisa：陰性[臨床意義]風(fēng)疹病毒igm抗體陽性，提示有近期感染，必要時應(yīng)終止妊娠。風(fēng)疹病毒igg抗體陽性，表示機體已受過風(fēng)疹病毒感染，具有免疫力。

二、病毒感染免疫檢測733、巨細胞病毒(cmv)抗體測定

巨細胞病毒屬于人類皰疹病毒，多數(shù)人在兒童或少年期受cmv感染而獲免疫。cmv圍產(chǎn)期感染是引起胎兒畸形的主要原因之一，還可引起早產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩等。由于臨床表現(xiàn)缺乏特異性，故cmv感染的實驗室檢查對于該病的早期診斷與治療至關(guān)重要。特異性抗-cmvigm陽性為cmv近期感染的指標(biāo)。[參考值]elisa：陰性[臨床意義]1．cmv可通過胎盤感染胎兒，引起早產(chǎn)、胎兒發(fā)育遲緩、新生兒畸形、黃疸脾腫大、溶血性貧血、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎等，新生兒死亡率高。2．免疫功能受損者，如艾滋病、癌癥、器官移植等病人感染cmv后，可合并多臟器疾病。二、病毒感染免疫檢測744、單純皰疹病毒抗體測定

單純皰疹病毒．(herpessimplexvirus，hsv)屬皰疹病毒科。hsv原發(fā)感染后，機體最先出現(xiàn)igm，隨后出現(xiàn)iga及igg，抗體能防止病毒播散，但不能阻止復(fù)發(fā)。臨床上檢出特異性igm陽性或雙份血清特異性igg抗體效價上升4倍或4倍以上，可提示hsv近期感染。[參考值]間接血凝試驗，elisa：陰性[臨床意義]hsvⅠ型和Ⅱ型均有致畸作用，常影響新生兒神經(jīng)發(fā)育。igm抗體陽性提示近期有hsv感染。孕早期感染hsv者可導(dǎo)致流產(chǎn)，妊娠中、晚期感染者，可引起胎兒和新生兒發(fā)病。二、病毒感染免疫檢測75（二）漢坦病毒抗體測定漢坦病毒（hantavirushtv）屬布尼亞病毒科，平均直徑120nm，為單股負鏈rna病毒，鼠是主要的攜帶者和傳染源，人感染后可引起腎綜合征出血熱，臨床以發(fā)熱、出血、急性腎衰為主要特征，檢測特異性抗體有助于早期診斷。［結(jié)果判斷］ifa、elisa:陰性［臨床意義］感染后2－4天可檢出特異性igm，7－10天達高峰，igg在病后2周出現(xiàn)，可持續(xù)多年。二、病毒感染免疫檢測76

(三)柯薩奇病毒抗體測定

柯薩奇病毒(coxsae以evirus)屬微小核糖核酸病毒科腸道病毒屬，直徑為20—30nm，核心內(nèi)含單鏈rna。檢測特異性igm，對本病有早期診斷價值。[參考值]間接血凝試驗，ifa，elisa法：陰性[臨床意義]柯薩奇病毒特異性igm抗體陽性提示現(xiàn)癥感染；特異性igg為中和抗體，陽性提示既往感染。該方法測定的靈敏度為85％，特異度可達95％。二、病毒感染免疫檢測77二、病毒感染免疫檢測(四)輪狀病毒抗體和rna測定

輪狀病毒(rotavirus，rv)屬胃腸病毒科，直徑70—75nm，核心為雙股rna。分為a、b、c、d、e、f和g7個組，其中a組主要引起嬰幼兒腹瀉；b組主要引起成人腹瀉。人感染輪狀病毒后，體內(nèi)可產(chǎn)生特異性igm和igg抗體。[參考值]陰性[臨床意義]人類輪狀病毒主要在寒冷季節(jié)流行，一般通過糞-口途徑傳播。嬰幼兒腹瀉約50%由人類輪狀病毒引起，常igm陽性；也能引起較大兒童及成人腹瀉。78三、寄生蟲感染免疫檢測囊蟲(cysticercosis)抗體測定

囊蟲病是豬絳蟲的蚴蟲(囊尾蚴)寄生于人體所致。人因食入豬絳蟲卵而感染。囊蟲主要寄生在皮下組織、肌肉和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，以寄生在腦組織者最為嚴(yán)重。elisa試驗或間接血凝試驗，可檢出病人體內(nèi)的特異性igg抗體，有較高的特異性和敏感性，對臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查均有實用價值。[參考值]elisa法：血清<1:64為陰性；腦脊液<1:8為陰性。[臨床意義]囊蟲特異性igg陽性，見于囊蟲病，陽性率高達96％。此病以東北、華北、河南、內(nèi)蒙古自治區(qū)較多見。79

四、性傳播疾病的免疫檢測（一）、梅毒螺旋體抗體測定梅毒是由蒼白密螺旋體引起的性傳播疾病，臨床分為三期，病程可持續(xù)多年。蒼白密螺旋體感染后，經(jīng)過一段時間血清中可產(chǎn)生兩種抗體，一種是抗類脂質(zhì)抗原的非特異性抗體，也稱為反應(yīng)素，另一種是抗蒼白密螺旋體的特異性抗體。80目前臨床常用的篩查試驗是快速血漿反應(yīng)素試驗（rapidplasmareaginrpr)。該試驗是重要的輔助診斷標(biāo)志物，陽性率在Ⅱ期患者可達76％，Ⅲ期達95-100％，隱性感染者可達70-80％。熒光螺旋體抗體吸收試驗（fta-abs)和梅毒螺旋體血球凝集試驗(tpha)是確證試驗

四、性傳播疾病的免疫檢測8182（二）、人類免疫缺陷病毒抗體測定

獲得性免疫缺陷綜合征是由人類免疫缺陷病毒（hiv)引起的綜合征。它源于非洲，早期在歐美流行，現(xiàn)在已波及到世界各地，有全球蔓延趨勢。主要免疫學(xué)變化為cd4細胞耗竭，引起免疫缺陷和崩潰，導(dǎo)致腫瘤和多種病原體引起的感染發(fā)生，最終導(dǎo)致死亡。

四、性傳播疾病的免疫檢測83[參考值]篩選試驗elisa法和快速蛋白印跡法:陰性確診試驗蛋白印跡試驗和rt-pcr法rna:陰性[臨床意義]抗hiv陽性代表hiv感染，對機體無保護性，患者發(fā)病潛伏期即可檢測到。也是重要的健康查體及獻血員篩查項目。

四、性傳播疾病的免疫檢測84第六節(jié)移植免疫檢測一、移植類型二、排斥反應(yīng)三、移植免疫檢測1.abo血型配型2.hla配型3.淋巴細胞毒交叉配合試驗85

第七節(jié)其他免疫檢測

一、循環(huán)免疫復(fù)合物檢測

體內(nèi)游離抗原與相應(yīng)的抗體形成抗原抗體復(fù)合物，即免疫復(fù)合物(immunocomplex，ic)。ic可分為三種：①血循環(huán)中的ic(circulating

immunocomplex，cic)為相對分子質(zhì)量小的復(fù)合物(＜19s)；②沉淀于組織中的ic為相對分子質(zhì)量中等的復(fù)合物(19s)；③被單核一吞噬細胞清除的ic為相對分子質(zhì)量大的復(fù)合物(＞19s)。通常檢測的ic為循環(huán)免疫復(fù)合物。86[參考值]聚乙二醇(peg)沉淀法低于正常對照值+2sd或a值≤o.12?？寡a體試驗陰性c1q結(jié)合試驗陰性[臨床意義]1．增高見于自身免疫病、感染、腫瘤、移植、變態(tài)反應(yīng)等。2．診斷免疫復(fù)合物?。喝缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、血管炎、慢性活動性肝炎、部分腎小球腎炎等。

第七節(jié)其他免疫檢測

87

二、c－反應(yīng)性蛋白檢測

c-反應(yīng)性蛋白(c-reactiveprotein，crp)是一種由肝臟合成的，能與肺炎雙球菌c多糖起反應(yīng)的急性時相反應(yīng)蛋白。crp能結(jié)合多種細菌、真菌、原蟲以及核酸、磷脂酰膽堿等，有激活補體、促進吞噬和調(diào)節(jié)免疫的作用。廣泛存在于血清和其他體液中。[參考值]

<2.87mg/l(速率散射比濁法)

第七節(jié)其他免疫檢測

88[臨床意義]

crp是急性時相反應(yīng)極靈敏的指標(biāo)。①crp升高：見于化膿性感染、組織壞死、惡性腫瘤、結(jié)締組織病、器官移植急性排斥等，且有助于早期診斷；②鑒別細菌性或非細菌性感染：前者crp升高，后者不升高；③鑒別風(fēng)濕熱活動期和穩(wěn)定期：前者升高，后者不升高；④鑒別器質(zhì)性和功能性疾?。呵罢呱撸笳卟簧?。但是，孕婦含量較高。

第七節(jié)其他免疫檢測

89第四節(jié)

病毒性肝炎的檢測

病毒性肝炎血清標(biāo)志物包括肝炎病毒本身、組成該病毒的成分以及抗病毒抗體等。由于各種肝炎病毒的基因結(jié)構(gòu)，抗原構(gòu)造均不相同，刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體各異，因此，各種肝炎病毒有其特異的血清標(biāo)志物。臨床上通過對各種肝炎病毒的血清標(biāo)志物檢測，能準(zhǔn)確地進行病毒性肝炎的分型。

90一、甲型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

甲型肝炎病毒(hepatitisavirus)為小核糖核酸病毒科的一種，1986年將其歸類為腸道病毒屬72型，最近將hav歸類為嗜肝rna病毒。hav是直徑27-32nm的20面體球狀顆粒，核心為單鏈正股rna。hav為甲型病毒性肝炎的病原體，主要通過糞－口途徑傳播。在體內(nèi)，hav主要在肝細胞內(nèi)進行復(fù)制，通過膽汁從糞便排出。雖然hav可分4個基因型，但因各株之間氨基酸的同源性很高，故只有一個血清型，只形成一個抗原抗體系統(tǒng)。目前主要通過elisa檢測抗-havigm和抗-havigg以及hav-rna血清標(biāo)志物對甲型肝炎進行病原學(xué)的檢測。91一、甲型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

92（一）甲型肝炎病毒抗原測定[參考值]

陰性[臨床意義]havag陽性：見于70.6-87.5%甲肝患者，可作為急性感染的證據(jù)（二）hav-rna對診斷特別是早期診斷具有特異性。一、甲型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

93（三）甲型肝炎病毒抗體測定[參考值]elisa法陰性[臨床意義]抗-havigm型抗體在發(fā)病后1—2周內(nèi)出現(xiàn)，3個月后滴度下降，12個月后可為陰性?？?havigm型抗體陽性，可診斷為急性甲型肝炎。抗-haviga型抗體是早期診斷甲肝的指標(biāo)之一?？?havigg型抗體出現(xiàn)較抗-havigm稍晚，幾乎可終身存在，抗-havigg型抗體陽，則表示過去曾受過hav感染，是一種保護性抗體，可用于甲肝的流行病學(xué)調(diào)查。一、甲型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

94二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus，hbv)為嗜肝dna病毒，完整的hbv顆粒直徑42nm，又稱dane顆粒，分為包膜與核心兩部分，包膜上的糖蛋白，含有乙型肝炎病毒表面抗原(hbsag)，hbsag在肝細胞漿內(nèi)合成，可大量釋放入血液中，本身無傳染性。核心部分含有環(huán)狀雙股dna、dna聚合酶(dnap)、核心抗原(hbcag)和e抗原(hbeag)等，是病毒復(fù)制的主體。

95是hbv完整顆粒，具有感染性二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

96電鏡下的hbv97二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

98

hbv為乙型病毒性肝炎的病原體，主要通過血液途徑進行傳播，亦可由性接觸傳播和母嬰垂直傳播。一般機體感染hbv后產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，形成三種不同的抗原抗體系統(tǒng)，分別是：乙型肝炎病毒表面抗原（hbsag)；乙型肝炎病毒表面抗體(anti-hbs或抗-hbs)；乙型肝炎病毒e抗原(hbeag)；乙型肝炎病毒e抗體(anti-hbe或抗-hbe)；乙型肝炎病毒核心抗原(hbcag)；乙型肝炎病毒核心抗體(anti-hbc或抗-hbc)。

乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物，主要通過elisa，ria等方法進行檢測，健康人檢測結(jié)果為陰性。

二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

99(一)乙型肝炎病毒六項檢測[參考值][臨床意義]1.hbsag陽性主要在感染hbv后1-2個月在血清中出現(xiàn)，可維持?jǐn)?shù)周、數(shù)月至數(shù)年，也可能長期存在。雖然hbsag本身不具傳染性，但因其常與hbv同時存在，常被用來作為傳染性的標(biāo)志之一。hbsag陽性見于①乙型肝炎潛伏期和急性期；②慢性遷延性肝炎,慢性活動性肝炎,肝硬化,肝癌；③慢性hbsag攜帶者。

hbsag也可從許多乙肝患者體液和分泌物中測出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

100

2.抗-hbs陽性抗-hbs是機體針對hbsag產(chǎn)生的中和抗體，它是一種保護性抗體，表明機體具有一定的免疫力?？?hbs一般在hbsag轉(zhuǎn)陰后出現(xiàn)，是疾病恢復(fù)的開始，抗體可持續(xù)多年，其滴度與特異性保護作用相平行。①表示既往曾感染過hbv，現(xiàn)已恢復(fù)，而且對hbv有一定的免疫力；②接種乙肝疫苗后(一般只出現(xiàn)抗-hbs單項陽性)；③被動性獲得抗-hbs抗體，如接受免疫球蛋白或輸血治療的患者。

二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

1013.hbeag陽性hbeag位于dane顆粒的核心部分，為一種可溶性抗原。①表明患有乙型肝炎，常在hbsag陽性的血清中檢出，在這種血液中含有較多的dane顆粒，是病毒復(fù)制活躍，傳染性強的指標(biāo)；②hbeag持續(xù)陽性的乙型肝炎，易轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿窝?；③hbeag和hbsag陽性的孕婦可將乙肝病毒垂直傳播給新生兒，其感染的陽性率為70％-90％；④hbeag陽性的hbsag攜帶者，將來發(fā)生肝損傷的可能性極大。

二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

102

4.抗-hbe陽性抗-hbe是hbeag的對應(yīng)抗體，但它不是中和抗體，出現(xiàn)于急性感染的恢復(fù)期，持續(xù)時間較長，抗-hbe和hbeag一般不會同時陽性，抗-hbe陽轉(zhuǎn)，hbeag即消失。①多見于hbeag轉(zhuǎn)陰的病人，意味著hbv部分被清除或抑制，復(fù)制減少，傳染性降低；②部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌病人可檢出抗-hbe。二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

1035.抗-hbc陽性抗-hbc是hbcag的對應(yīng)抗體，它不是中和抗體，而是反映肝細胞受到hbv侵害的一種指標(biāo)，主要包括igm、igg和iga等三型，目前常用的方法是檢測總抗-hbc，也可分別檢測抗-hbc的igm、igg或iga?？?hbcigm是機體感染hbv后在血液中最早出現(xiàn)的特異性抗體，在肝炎的急性期滴度高，是診斷急性乙型肝炎和判斷病毒復(fù)制活躍的指標(biāo)，并提示病人血液有強傳染性?？?hbcigm陽性還見于慢性活動性肝炎?？?hbcigg在機體感染hbv后1個月左右開始升高。臨床上測定的總抗-hbc主要反應(yīng)的是抗-hbc

igg，其陽性高滴度，表明患有乙型肝炎，是指正在感染；抗-hbcigg低滴度則是既往感染過hbv的指標(biāo)，在體內(nèi)持續(xù)時間長，具有流行病學(xué)的意義。

二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

1046.hbcag陽性hbcag是dane顆粒的核心部分，主要存在于受感染的肝細胞核內(nèi)，不游離于血清中，檢測比較麻煩，因此臨床上不作常規(guī)檢查。

hbcag陽性提示患者血液中有感染性的hbv存在，其含量較高，表示復(fù)制活躍，傳染性強，預(yù)后較差。二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

105

發(fā)病期黃疸althbsaghbeag抗-hbe抗－h(huán)bcigm抗－h(huán)bcigg抗-hbs潛伏期1－6mhbv感染

01月2月3月6月1年10年二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

106二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

107

hbv五項血清標(biāo)志物聯(lián)合檢測的臨床意義常見模式hbsag

抗-hbs

hbeag

抗-hbe

抗-hbc

臨床意義1+-+-+

急性或慢性乙型肝炎,高傳染性2+---+急性、慢性乙型肝炎或慢性

hbsag攜帶者3+--+

+急性乙肝趨向恢復(fù)或慢性乙肝，弱傳染性4-+--+急性hbv感染康復(fù)期或有既往感染史，目前保持免疫力5---+

+乙肝恢復(fù)期，弱傳染性6----+急性hbv感染“窗口期”或既往感染過乙肝，有流行病學(xué)意義7-+---疫苗接種后或hbv感染后康復(fù)8-+

-+

+急性乙肝康復(fù)期，開始產(chǎn)生免疫9-----非乙肝感染108(二)乙型肝炎病毒前s1(pres1)蛋白與抗前s1抗體測定前s1蛋白是hbv外膜蛋白的成分，由108～119個氨基酸組成，通常連接在前s2蛋白的氨基末端。前s1蛋白第21～47位氨基酸為肝細胞膜的受體，hbv可通過這一受體粘附至肝細胞膜上，從而侵入肝細胞。前s1蛋白抗原性較強，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗-前s1抗體。[臨床意義]前sl蛋白陽性提示病毒復(fù)制活躍，具有較強的傳染性?？?前s1抗體是hbv的中和抗體，能阻止hbv入侵肝細胞，抗-前s1抗體較早出現(xiàn)，表明病程短，提示預(yù)后良好?？埂皊1陽性，見于急性乙肝恢復(fù)早期，常表示hbv正在或已經(jīng)被清除，是觀察乙肝病情，了解預(yù)后有效的指標(biāo)。

二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

109乙肝表面抗原226氨基酸小分子蛋白(主蛋白shbs)55氨基酸前s2區(qū)226氨基酸中分子蛋白(mhbs)226氨基酸55氨基酸前s2區(qū)108-119氨基酸前s1區(qū)大分子蛋白(lhbs)presl的21-47肽段乙肝前s2(pres2)結(jié)構(gòu)110(三)乙型肝炎病毒前s2(pres2)蛋白與抗前s2抗體測定前s2蛋白是hbv侵入肝細胞的主要結(jié)構(gòu)成分，乙型肝炎病毒前s2抗體(抗-pres2)，是hbv的中和抗體[臨床意義]pres2陽性提示hbv復(fù)制異?；钴S,有傳染性,抗-pres2陽性見于乙肝急性期及恢復(fù)早期,提示hbv已被清除,預(yù)后較好二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

111(四)乙型肝炎病毒dna(hbv-dna)定性和定量測定

血液中hbvdna的存在是hbv感染最直接，最靈敏和最特異的檢測指標(biāo)。[參考值]定性pcr法、熒光定量pcr法：陰性[臨床意義]1．hbvdna陽性是急性乙肝病毒感染的可靠指標(biāo)。2.用于應(yīng)用hbsag疫苗后垂直傳播阻斷效果的監(jiān)測。3．抗病毒藥物治療乙肝的療效評價4．篩查獻血員，防止乙肝病毒輸血后感染。5．監(jiān)測血制品的傳染性、乙肝疫苗的安全性。（五）乙型肝炎病毒ymdd變異測定二、乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

112三、丙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測

丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus，hcv)屬于黃病毒科，直徑30-60nm，由核心和包膜兩部分組成。核心部分含有單鏈正股rna。hcv為丙型病毒性肝炎的病原體，主要通過血液傳播，是引起輸血后肝炎的病原體之一。病人感染hcv后，主要在宿主的肝細胞內(nèi)復(fù)制引起丙型肝炎，病情雖較乙型肝炎輕，但更易轉(zhuǎn)為慢性。臨床上診斷hcv感染的主要依據(jù)為抗-hcvigm、抗-hcvigg和hcv-rna測定，健康人檢測結(jié)果為陰性。113黃病毒科丙型肝炎病毒屬直徑30～60nm

球狀顆粒由包膜、核衣殼和病毒核心構(gòu)成單股正鏈rna，9500個核苷酸包膜

結(jié)構(gòu)區(qū)編碼結(jié)構(gòu)蛋白非結(jié)構(gòu)區(qū)編碼非結(jié)構(gòu)蛋白或功能蛋白三、丙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測114(一)丙型肝炎病毒(hcv)抗體測定

抗-hcv測定常用elisa法進行檢測。[臨床意義]1．抗-hcv為一種非保護性抗體，測定陽性是診斷hcv感染的重要依據(jù)。2．抗-hcvigm陽性，①常見于急性hcv感染，是診斷丙肝的早期敏感指標(biāo)；②是hcv活動的指標(biāo)，在慢性hcv感染時，若抗-hcvigm陽性只表示病變活動，常伴有alt升高；③是判斷hcv傳染性的指標(biāo)。3.抗-hcvigg出現(xiàn)晚于抗-hcvigm，陽性表明體內(nèi)有hcv感染，但不能作為hcv感染的早期診斷指標(biāo)。在疾病早期抗-hcvigg陰性不能完全排除hcv感染，必要時行hcv-rna的檢測。三、丙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測115(二)丙型肝炎病毒rna(hcv-rna)定性和定量測定血液中hcv-rna的存在是hcv