腎穿活檢組織標(biāo)本制作與染色培訓(xùn)資料

腎穿活檢組織標(biāo)本(biāoběn)

制作與染色

余姚市人民醫(yī)院

第一頁，共13頁。一﹑取材(qǔcái)腎活檢標(biāo)本經(jīng)皮質(zhì)穿刺取檢，分皮質(zhì)和髓質(zhì)，在解剖(jiěpōu)顯微鏡下，腎皮質(zhì)組織色較淡，腎小球?yàn)槿玑樇獯笮〉募t色小點(diǎn)，不規(guī)則分布。穿刺所得的組織，一般包括以下幾種成分：皮質(zhì)組織；皮髓交界組織；皮質(zhì)-髓質(zhì)-皮質(zhì)組織。

第二頁，共13頁。固定

固定液：

常規(guī):１０％中性福爾馬林。

電鏡:3%戌二醛。

固定時間：最好不低于8小時。脫水、包埋、切片

隨常規(guī)脫水機(jī)脫水，盡量用小包埋模塊(mókuài)包埋，以利于連續(xù)切片。切片厚度１－２um，烤片溫度60℃。1小時。

第三頁，共13頁。HE染色：

觀察(guānchá)組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)形態(tài)，通過它能顯示整個疾病的全貌，明確病變的性質(zhì)和分布的特點(diǎn)染色結(jié)果

腎小球輪廓清晰，細(xì)胞核、質(zhì)藍(lán)紅對比鮮明，各種細(xì)胞成分著色鮮艷。第四頁，共13頁。特殊染色

六氨銀染色腎小球腎炎的病變主要表現(xiàn)在腎小球，尤其是腎小球基膜的改變。常規(guī)HE染色不能清晰(qīngxī)地顯示基膜，主要通過PAMS染色才能將基膜清晰(qīngxī)地顯示出來。第五頁，共13頁。染色原理：

腎小球基膜富含粘多糖，必須經(jīng)過氧化才能(cáinéng)暴露醛基，醛基把六胺銀還原為黑色的金屬銀。試劑配制（1）1%高碘酸水溶液（2）5%鉻酸水溶液（3）2%草酸水溶液（4）3%六次甲基四胺水溶液（5）5%硝酸銀水溶液（6）5%硼砂水溶液（7）0.1%氯化金水溶液（8）3%硫代硫酸鈉水溶液第六頁，共13頁。方法（1）1%高碘酸氧化10min，蒸餾水洗。（2）5%鉻酸氧化20min，蒸餾水洗。（3）2%草酸泡洗1min，蒸餾水洗三次。（4）新鮮配制六胺銀溶液（六胺銀染液：3%六次甲基四胺水20ml，5%硝酸銀1ml，四硼酸鈉2.4ml）用50ml規(guī)格的染色玻璃缸750W微波爐的中低檔預(yù)熱。（5）將切片置入六胺銀溶液中于60度水浴箱中孵育15～25min（6）蒸餾水漂洗3次。（7）0.1%氯化金調(diào)色1～2min，蒸餾水洗。（8）3%硫代硫酸鈉處理(chǔlǐ)1～2min，蒸餾水洗。（9）復(fù)染蘇木素，伊紅（10）常規(guī)脫水，中性樹膠封固第七頁，共13頁。第八頁，共13頁。Masson

三色染色(rǎnsè)

第九頁，共13頁。Masson三色(sānsè)染色主要是用來觀察腎小球嗜復(fù)紅蛋白沉積物（免疫復(fù)合物）及腎臟內(nèi)膠原纖維增生等。

我科采用改良后方法，通過組織切片的補(bǔ)充固定，試劑濃度的改良組合、調(diào)整染色時間。對腎穿活檢切片進(jìn)行了新舊兩種方法的試驗(yàn)比較，取得了較為滿意的效果第十頁，共13頁。第十一頁，共13頁。高碘酸-無色品紅在腎小球疾病中，常導(dǎo)致腎小球基底膜的改變(