專題一 基因工程復習課

專題1基因工程一、基因工程的工具及其操作程序1．基因工程的基本工具作用作用部位限制酶DNA連接酶載體切割目的基因和載體連接DNA片段，形成重組DNA攜帶目的基因進入受體細胞核苷酸的脫氧核糖與磷酸間形成的磷酸二酯鍵限制酶DNA連接酶載體作用特點(條件)常用類型(1)識別特定的核苷酸序列(2)在特定位點上切割(1)E·coliDNA連接酶只連接黏性末端(2)T4DNA連接酶連接黏性末端和平末端(1)能在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定存在并大量復制(2)有多個限制酶切割位點(3)具有特殊的標記基因EcoRⅠ限制酶SmaⅠ限制酶E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒1.限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾。2.DNA連接酶起作用時不需要模板。2.載體(1)作用①將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細胞內(nèi)。②利用它在宿主細胞內(nèi)對目的基因進行大量復制。(2)具備的條件①能在宿主細胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復制。②有多個限制酶切割位點。③具有特殊的標記基因，以便進行篩選。1.獲取目的基因和切割載體時使用同一種限制酶，目的是產(chǎn)生相同的黏性末端。2.獲取一個目的基因需限制酶切割兩次，共產(chǎn)生4個黏性末端或平末端。3.限制酶切割位點的選擇必須保證標記基因的完整性，以便于檢測和篩選。2.基因工程的基本操作程序(1)目的基因的獲?、購幕蛭膸熘蝎@取目的基因優(yōu)點：有了基因文庫，就可以隨時從中提取所需要的目的基因，引入受體細胞使之表達。目的基因的獲取

基因表達載體的構(gòu)建

將目的基因?qū)胧荏w細胞

目的基因的檢測與鑒定②人工合成目的基因③利用PCR技術(shù)擴增目的基因a．PCR：是一項在生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。PCR擴增是獲取目的基因的一種非常有用的方法，也是進行分子鑒定和檢測的一種很靈敏的方法。b．目的：通過指數(shù)式擴增獲取大量的目的基因。(2)基因表達載體的構(gòu)建①目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，并使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。(2)基因表達載體的構(gòu)建方法

(1)一般來說，天然載體往往不能滿足人類的所有要求，因此人們根據(jù)不同的目的和需要，需要對某些天然的載體進行人工改造。(2)插入的目的基因的表達需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒的插入部位之前需有啟動子，之后需有終止子。1．(2009年濰坊模擬)質(zhì)粒作為“分子運輸車”的條件是 (

)①能夠自我復制②雙鏈環(huán)狀DNA分子③有多個限制酶切點④有標記基因⑤真核細胞中沒有A．①②③④⑤

B．①②③④C．①③④

D．②③⑤【答案】

C2．(2009年南通調(diào)研)下列關(guān)于基因表達載體構(gòu)建的相關(guān)敘述，不正確的是

(

)A．需要限制酶和DNA連接酶B．必須在細胞內(nèi)進行C．抗生素抗性基因可作為標記基因D．啟動子位于目的基因的首端【答案】

B(3)將目的基因?qū)胧荏w細胞①目的：目的基因進入受體細胞內(nèi)并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程。②受體細胞種類不同，導入方法不同。受體細胞種類方法植物細胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA→轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌→導入植物細胞→穩(wěn)定維持和表達②基因槍法③花粉管通道法受體細胞種類方法動物細胞顯微注射法：目的基因的表達載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→新性狀動物微生物細胞Ca2＋處理受體細胞→感受態(tài)細胞→表達載體與感受態(tài)細胞混合→感受態(tài)細胞吸收DNA分子③受體生物不同，所用的受體細胞種類也不相同。a．植物：可以是卵細胞(受精卵)、體細胞(可經(jīng)組織培養(yǎng)成為完整植株)。b．動物：受精卵(因為體細胞的全能性受到嚴格限制)。④轉(zhuǎn)化實質(zhì)：目的基因整合到受體細胞染色體基因組中。基因工程中受體細胞的選擇基因工程的目的不同，可選用的受體細胞不同。(1)培育轉(zhuǎn)基因動物，受體細胞一般選用受精卵。(2)培育轉(zhuǎn)基因植物，受體細胞可選用受精卵或體細胞，若選用體細胞，再通過植物組織培養(yǎng)，即可獲得轉(zhuǎn)基因植株。(3)若生產(chǎn)基因工程藥品，受體細胞一般選用細菌，利用細菌繁殖速度快的特點，可在短期內(nèi)獲得大量產(chǎn)品。(4)目的基因的檢測與鑒定類型步驟檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子檢測導入檢測目的基因是否插入受體細胞染色體的DNA上表達檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)DNA分子雜交技術(shù)(DNA和DNA之間)核酸分子雜交技術(shù)(DNA和mRNA之間)蛋白質(zhì)分子雜交(抗原和抗體之間)是否成功顯示出雜交帶同上同上個體生物學水平的鑒定①抗蟲或抗病的接種實驗②基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品活性的比較【例2】

(2009·福建高考·T32)轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四種限制酶切割位點。請回答：(1)構(gòu)建含抗病基因的表達載體A時，應選用限制酶__________________，對_________________

進行切割。(2)培養(yǎng)基中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導入抗病基因的香蕉細胞，應使基因表達載體A中含有______________，作為標記基因。PstⅠ、EcoRⅠ含抗病基因的DNA、質(zhì)粒抗卡那霉素基因1.使用限制酶切割目的基因和質(zhì)粒時，既要保證形成相同黏性末端，又要考慮保證目的基因和質(zhì)粒中的標記基因的完整性。2.標記基因是鑒別受體細胞中是否含目的基因的依據(jù)。利用質(zhì)粒作載體時往往利用其上的某抗性基因作標記基因，又可利用其抗性在適當?shù)倪x擇培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)。二、基因工程的應用成果及蛋白質(zhì)工程1．基因工程的應用成果(1)乳腺生物反應器與微生物生產(chǎn)的比較類型項目乳腺生物反應器微生物生產(chǎn)基因結(jié)構(gòu)動物基因結(jié)構(gòu)與人類基因結(jié)構(gòu)相同與人類基因結(jié)構(gòu)不同基因表達與天然蛋白質(zhì)活性沒有區(qū)別由于缺少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細胞器，產(chǎn)物可能不具有生物活性產(chǎn)物提取從乳汁中較易分離提取從細胞中提取，較為復雜生產(chǎn)設(shè)備畜牧業(yè)生產(chǎn)，加工提取設(shè)備工業(yè)生產(chǎn)，設(shè)備精良(2)基因治療

項目類型

外源基因類型及舉例過程特點成果舉例體外基因治療腺苷酸脫氨酶基因①從病人體內(nèi)獲得某種細胞②細胞培養(yǎng)③體外完成基因轉(zhuǎn)移④篩選并擴增培養(yǎng)⑤重新輸入患者體內(nèi)操作復雜，但成功率高治療復合型免疫缺陷癥體內(nèi)基因治療治療遺傳性囊性纖維化病的基因外源基因―→載體攜帶體內(nèi)相應組織細胞操作簡單，成功率低治療遺傳性囊性纖維化病

基因治療是治療人類遺傳病的根本方法，但由于尚未全面了解基因調(diào)控機制和疾病的分子機理，基因治療只處于初期的臨床試驗階段。2．蛋白質(zhì)工程(1)概念：是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(2)過程：預期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應有的氨基酸序列→找到對應的脫氧核苷酸序列。(3)蛋白質(zhì)工程與基因工程比較項目蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過程預期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應有的氨基酸序列→找到對應的脫氧核苷酸序列獲取目的基因→構(gòu)建基因表達載體→將目的基因?qū)胧荏w細胞→目的基因的檢測與鑒定實質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的生物類型或生物產(chǎn)品結(jié)果生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)一般是生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)聯(lián)系蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來的第二代基因工程。對現(xiàn)有蛋白質(zhì)的改造或制造新的蛋白質(zhì)，必須通過基因修飾或基因合成實現(xiàn)

蛋白質(zhì)工程的實施步驟(蛋白質(zhì)工程的實質(zhì)即“中心法則”的逆推：4．(2010年南京調(diào)研)下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法，正確的是 (

)A．蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對蛋白質(zhì)分子直接進行操作B．蛋白質(zhì)工程能生產(chǎn)出自然界中不曾存在過的新型蛋白質(zhì)分子C．對蛋白質(zhì)的改造是通過直接改造相應的mRNA來實現(xiàn)的D．蛋白質(zhì)工程的流程和天然