食品分析技術(shù)模塊三有害成分分析

模塊三有害成分分析項(xiàng)目1有害元素測定

任務(wù)1砷的測定

[任務(wù)導(dǎo)言]

污染食品的途徑毒性《食品中污染物限量》（GB2762-2005）規(guī)定食品中總砷的限量：食用油脂≤0.1mg/kg；果汁及果醬≤0.2mg/kg；食糖、可可脂及巧克力≤0.5mg/kg；其它可可制品≤1.0mg/kg。知識鏈接銀鹽法原理：樣品消化后，用碘化鉀、氯化亞錫將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，然后與鋅和鹽酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫生成砷化氫，被銀鹽溶液吸收后，形成紅色膠態(tài)物，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。反應(yīng)式如下：測砷裝置：見圖3-1

分析步驟（1）樣品處理硝酸-高氯酸-硫酸法以糧食等含水分少的固體食品為例：稱取5.00g粉碎樣品，置250mL定氮瓶中，加水少許使樣品濕潤，加數(shù)粒玻璃珠、10mL～15mL硝酸-高氯酸混合液，放置片刻，小火緩緩加熱，當(dāng)瓶內(nèi)溶液作用緩和后，放冷。沿瓶壁加入5mL硫酸，加熱，至瓶中液體開始變成棕色時(shí)，不斷沿瓶壁滴加硝酸-高氯酸混合液，到有機(jī)物完全分解。加大火力，至產(chǎn)生白煙，當(dāng)瓶口白煙冒凈后，瓶內(nèi)液體再產(chǎn)生白煙即消化完全，溶液應(yīng)澄明無色或微帶黃色。放冷。加20mL水，煮沸，至產(chǎn)生白煙為止（脫硝），如此處理2次，放冷。冷后的溶液移入50mL容量瓶中，水洗滌定氮瓶，洗液并入容量瓶中，放冷，加水定容，混勻。定容后的溶液每10mL相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)加入硫酸1mL。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。（2）測定吸取一定量的濕法消化液（相當(dāng)于5g樣品）和相同量的試劑空白液，分別置150mL錐形瓶中，補(bǔ)加硫酸到總量為5mL，加水至50mL～55mL。另吸取0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL砷標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置150mL錐形瓶中，加水至40mL，再加10mL硫酸（1+1）。于樣品消化液、試劑空白液和砷標(biāo)準(zhǔn)溶液中，各加3mL碘化鉀溶液（150g/L）、0.5mL酸性氯化亞錫溶液，混勻，靜置15min。再各加入3g鋅粒，立即分別塞上裝有乙酸鉛棉花的導(dǎo)氣管，并使管尖端插入盛有4mL銀鹽溶液的離心管中的液面下，常溫，反應(yīng)45min，取下離心管，加三氯甲烷補(bǔ)足4mL，用1cm比色杯，以零號管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長520nm處，測吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。結(jié)果計(jì)算式中：X——樣品中總砷的含量，mg/kg或mg/L；A1——測定用樣品消化液中砷的質(zhì)量，；A2——試劑空白液中砷的質(zhì)量，；m——樣品質(zhì)量或體積，g或mL；V1——樣品消化液的總體積，mL；V2——測定用樣品消化液的體積，mL。技術(shù)提示（1）氯化亞錫作用：將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷；還原反應(yīng)生成的碘；在鋅粒表面沉積錫層，抑制氫氣生成的速度；抑制某些干擾元素（如銻）的干擾。氯化亞錫試劑不穩(wěn)定，空氣中可氧化生成不溶性氯氧化物，失去還原作用，因此，在配制試劑時(shí)用濃鹽酸溶解為酸性溶液，加入數(shù)粒金屬錫，以保持試劑的還原性。（2）乙酸鉛棉花的作用：吸收可能產(chǎn)生的硫化氫，使硫化氫生成硫化鉛滯留在棉花上，防止生成灰黑色的硫化銀，干擾測定。（3）鋅粒的規(guī)格對測定有影響，一般認(rèn)為蜂窩狀鋅粒3g（或大顆鋅粒5g）都能獲得良好的效果。（4）銀鹽吸收液是由二乙基二硫代氨基甲酸銀、三氯甲烷和三乙醇胺組成的，其中，二乙基二硫代氨基甲酸銀的濃度不易控制，濃度過低，將影響測定的靈敏度和重現(xiàn)性。因此，配制試劑時(shí)應(yīng)放置過夜（或在水浴上微熱助溶），出現(xiàn)輕微渾濁，需過濾除去，試劑保存良好可使用一周。（5）吸收液吸收砷化氫后，呈色在150min內(nèi)穩(wěn)定。（6）本法是GB/T5009.11-2003第二法，適用于各類食品中總砷的測定。本法的檢出限：0.2mg/kg；本法的精密度要求：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。職業(yè)素質(zhì)拓展砷斑法方法概要：樣品消化后，用碘化鉀、氯化亞錫將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，然后與鋅和鹽酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫作用生成砷化氫，再與溴化汞試紙作用，生成黃色至橙色的色斑，與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較定量。測砷裝置：見圖3-2。測定方法：吸取一定量的樣品消化液（相當(dāng)于2g糧食，4g水果、蔬菜，4mL冷飲，5g植物油，其它樣品參照此量）和同量的試劑空白液，分別置于測砷瓶中，加5mL碘化鉀溶液（150g/L）、5滴酸性氯化亞錫溶液及5mL鹽酸（樣品如用硝酸-硫酸法或硝酸-高氯酸-硫酸法消化液，要減去樣品中硫酸的毫升數(shù)），加適量的水至35mL（植物油不再加水）。吸取0、0.5、1.0、2.0mL砷標(biāo)準(zhǔn)使用液，相當(dāng)于0、0.5、1.0、2.0μg砷，分別置測砷瓶中，各加5mL碘化鉀溶液（150g/L）、5滴酸性氯化亞錫溶液及5mL鹽酸，各加水至35mL（測定植物油時(shí)，需加水至60mL）。于盛有樣品消化液、試劑空白液和砷標(biāo)準(zhǔn)溶液的測砷瓶中，各加3g鋅粒，立即塞上預(yù)先裝有乙酸鉛棉花及溴化汞試紙的測砷管，25℃放置1h，取出樣品及試劑空白的溴化汞試紙，與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較。任務(wù)2鉛的測定[任務(wù)導(dǎo)言]《食品中污染物限量》（GB2762-2005）規(guī)定食品中鉛的限量：谷類、豆類、薯類、小水果、漿果、葡萄、鮮蛋、果酒≤0.2mg/kg；水果、蔬菜（球莖、葉菜、食用菌類除外）≤0.1mg/kg；可食用畜禽下水、魚類≤0.5mg/kg；嬰兒配方乳粉（乳為原料，以沖調(diào)后乳汁計(jì)）≤0.02mg/kg；鮮乳≤0.05mg/kg；球莖蔬菜、葉菜類≤0.3mg/kg；茶葉≤5mg/kg。知識鏈接

二硫腙簡介二硫腙性質(zhì)藍(lán)黑色結(jié)晶，溶于三氯甲烷或四氯化碳中，溶液呈綠色。當(dāng)濃度大時(shí)為兩色性（光通過時(shí)為紅色，反射光為綠色）；不溶于水，溶于堿性水溶液，微溶于乙醇。二硫腙易氧化，生成二苯基硫卡巴二腙。二硫腙的氧化物不溶于堿性或酸性水溶液，溶于三氯甲烷或四氯化碳中，溶液呈黃色或棕色，且不與金屬反應(yīng)，因此，市售的二硫腙需要經(jīng)過精制處理才能使用。二硫腙可以和許多金屬形成絡(luò)合物，此絡(luò)合物一般溶于有機(jī)溶劑如四氯化碳中，而且，有一定的顏色，利用這一性質(zhì)可以進(jìn)行金屬的分離、富集，并同時(shí)進(jìn)行比色分析。二硫腙比色法測定金屬的方法單色法或混色法二硫腙比色法原理樣品消化后，在pH8.5～9.0時(shí)，Pb2+與二硫腙生成紅色絡(luò)合物，溶于三氯甲烷。加入檸檬酸銨、氰化鉀和鹽酸羥胺等，防止鐵、鋅、銅等離子干擾，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。反應(yīng)式如下：任務(wù)指導(dǎo)

主要試劑

二硫腙-三氯甲烷溶液（0.5g/L）：保存在冰箱中，必要時(shí)可用下述方法純化。稱取0.5g研細(xì)的二硫腙，溶于50mL三氯甲烷中，如溶解不完全，可以用濾紙過濾到250mL分液漏斗中，用氨水（1+99）提取3次，每次100mL，將提取液用棉花過濾到500mL分液漏斗中，用鹽酸（1+1）調(diào)到酸性，將沉淀出的二硫腙，用三氯甲烷提取2次～3次，每次20mL，合并三氯甲烷層，用等量水洗滌2次，棄去洗滌液，在50℃水浴上加熱，除去三氯甲烷。將沉淀出的二硫腙用200、200、100mL三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷層即為二硫腙溶液?；?qū)⒊恋淼亩螂曛昧蛩岣稍锲髦?，干燥，備用。二硫腙使用液：吸?.0mL二硫腙溶液,加三氯甲烷至10mL，混勻。用1cm比色皿，用三氯甲烷調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長510nm處測吸光度（A），用下式計(jì)算配制100mL二硫腙使用液（70%透光率）需二硫腙溶液的毫升數(shù)（V）。分析步驟（1）樣品處理灰化法：以糧食及其他含水分少的樣品為例：稱取5.00g樣品，置瓷坩堝（或石英坩堝）中，炭化，移入高溫爐中，500℃灰化3h，放冷，取出坩堝，加硝酸（1+1），潤濕灰分，用小火蒸干，500℃灰化1h，放冷。取出坩堝。加硝酸（1+1），加熱，使灰分溶解，移入50mL容量瓶中，水洗滌坩堝，洗液并入容量瓶中，加水定容，混勻，備用。（2）測定吸取10.0mL消化后定容的溶液和同量的試劑空白液，分別置125mL分液漏中，各加水至20mL。吸取0，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50mL鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置125mL的分液漏斗中，各加硝酸（1+99）至20mL。于樣品消化液、試劑空白液和鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液中各加2.0mL檸檬酸銨溶液（200g/L），1.0mL鹽酸羥胺溶液（200g/L）和2滴酚紅指示液，用氨水（1+1）調(diào)至紅色，再各加2.0mL氰化鉀溶液(100g/mL)，混勻。各加5.0mL二硫腙使用液，劇烈振搖1min，靜置，分層后，三氯甲烷層通過脫脂棉，濾入1cm比色皿中，以三氯甲烷調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長510nm處測吸光度，各點(diǎn)減去零管吸收值后，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品與曲線比較。結(jié)果計(jì)算式中：X——樣品中鉛的含量，mg/kg（或mg/L）；m1——測定用樣液中鉛的質(zhì)量，；m2——試劑空白液中鉛的質(zhì)量，；m3——樣品質(zhì)量（或體積），g（或mL）；V1——樣品處理液的總體積，mL；V2——測定用樣品處理液總體積，mL。技術(shù)提示（1）樣液中可能含有Fe3+、Cu2+、Sn4+、Cd2+、Zn2+等，其中，F(xiàn)e3+在含氰化物的堿性溶液中可生成高鐵氰化物，能氧化二硫腙，因此，加入鹽酸羥胺將Fe3+還原為Fe2+，消除干擾。（2）Fe2+、Cu2+、Sn4+、Cd2+等都可與二硫腙作用生成有色化合物，加入掩蔽劑氰化鉀和檸檬酸銨，即可消除這些離子的干擾。另外，檸檬酸銨也可以阻止這些離子，在堿性溶液中沉淀析出。（3）氰化鉀劇毒，必須在溶液已調(diào)至堿性時(shí)添加。廢氰化鉀溶液應(yīng)當(dāng)加氫氧化鈉和硫酸亞鐵，生成鐵氰化鉀才能倒掉，以免中毒。任務(wù)3鎘的測定[任務(wù)導(dǎo)言]《食品中污染物限量》（GB2762-2005）規(guī)定食品中鎘的限量：花生、禽畜肝臟≤0.5mg/kg；大米、大豆、葉菜、芹菜、食用菌類≤0.2mg/kg；面粉、雜糧、禽畜肉類、根莖類蔬菜（芹菜除外）≤0.1mg/kg；其他蔬菜、水果、鮮蛋≤0.05mg/kg。知識鏈接石墨爐原子吸收光譜法原理：樣品經(jīng)灰化（或酸消解）后，注入原子吸收分光光度計(jì)石墨爐中，電熱原子化后，吸收228.8nm共振吸收線，在一定濃度范圍，其吸收值與鎘含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。任務(wù)指導(dǎo)

儀器（1）原子吸收分光光度計(jì)（附石墨爐及空心陰極燈）。（5）壓力消解器（或壓力消解罐）。主要試劑鎘標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取1.000g金屬鎘（99.99%），分次加入20mL鹽酸(1+1)，溶解，加2滴硝酸，移入1000mL容量瓶中，加水定容?；靹颉４巳芤好亢辽?.0mg鎘。（11）鎘標(biāo)準(zhǔn)使用液：每次吸取鎘標(biāo)準(zhǔn)儲備液10.0mL，置100mL容量瓶中,用硝酸(0.5mol/L）定容。如此經(jīng)過多次稀釋成每毫升含100.0ng鎘標(biāo)準(zhǔn)使用液。分析步驟（1）樣品處理（2）樣品的消解（壓力消解罐消解法）：稱取1.00～2.00g樣品（按壓力消解罐使用說明書取樣），置聚四氟乙烯內(nèi)罐，加硝酸2mL～4mL，浸泡過夜。再加入過氧化氫（30%）2mL～3mL（總量不能超過罐容積的1/3）。蓋好內(nèi)蓋，旋緊不銹鋼外套，放入恒溫干燥箱，120℃～140℃保持3h～4h，箱內(nèi)自然冷卻到室溫，用滴管將消化液洗入（或過濾入）（根據(jù)消化液有無沉淀而定）10mL～25mL的容量瓶中，用水少量多次洗滌罐，洗液并入容量瓶中，定容，混勻，備用。同時(shí)做試劑空白。（3）測定儀器條件：根據(jù)各自儀器性能調(diào)至最佳狀態(tài)。參考條件為波長：228.8nm；狹縫：0.5nm～1.0nm；燈電流：8mA～10mA；干燥溫度120℃，20s；灰化溫度350℃，15s～20s；原子化溫度1700℃～2300℃，4s～5s；背景校正為氘燈（或塞曼效應(yīng)）。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制樣液測定結(jié)果計(jì)算式中：X——樣品中鎘的含量，μg/kg（或μg/L）；A1——測定樣品消化液中鎘含量，ng/mL；A2——空白液中鎘含量，ng/mL；V——樣品消化液總體積，mL；m——樣品質(zhì)量（或體積），g（或mL）；

技術(shù)提示（1）本法檢出限為0.1/kg.（2）對于有干擾的試樣，可注入適量的基體改進(jìn)劑磷酸銨溶液（20g/L），（一般為＜5L）消除干擾。繪制鎘標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，也要加入與樣品測定時(shí)等量的基體改進(jìn)劑。（3）石墨爐原子吸收光譜法屬GB/T5009.15-2003中的第一法，適用于各類食品中鎘的測定。（4）精密度：在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。任務(wù)5汞的測定[任務(wù)導(dǎo)言]《食品中污染物限量》（GB2762-2005）規(guī)定食品中總汞的限量：糧食（成品糧）≤0.02mg/kg；薯類（土豆、白薯）、蔬菜、水果、鮮乳≤0.01mg/kg；肉、蛋（去殼）≤0.05mg/kg。；甲基汞的限量：魚（不包括食肉魚類）及其他水產(chǎn)品≤0.5mg/kg；食肉魚類（如鯊、金槍魚及其他）≤1.0mg/kg。

知識鏈接冷原子吸收光譜法原理：汞蒸氣對波長253.7nm的共振線，具有強(qiáng)烈的吸收作用。樣品消化后，使汞轉(zhuǎn)變?yōu)殡x子狀態(tài)。在強(qiáng)酸性介質(zhì)中，以氯化亞錫還原成元素汞，用氮?dú)猓ɑ蚋稍锟諝猓┳鳛檩d體，將元素汞吹入汞測定儀，進(jìn)行冷原子吸收測定，在一定濃度范圍內(nèi)，其吸收值與汞含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。任務(wù)指導(dǎo)

儀器汞蒸氣發(fā)生器。見圖3-3。試劑汞標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取0.1354g二氯化汞（干燥器干燥過的），加混合酸（1+1+8），溶解，移入100mL容量瓶中，再加混合酸（1+1+8）定容，混勻，此溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg汞。（8）汞標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.0mL汞標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置100mL容量瓶中，加混合酸（1+1+8）定容，此溶液每毫升相當(dāng)于10μg汞。再吸取此液1.0mL，置100mL容量瓶中，加混合酸（1+1+8）定容，此溶液每毫升相當(dāng)于0.10μg汞，臨用時(shí)配制。

分析步驟（1）樣品處理（回流消化法）（糧食等含水分少的食品）：稱取10.00g樣品，置消化裝置錐形瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，加45mL硝酸、10mL硫酸，轉(zhuǎn)動錐形瓶，防止局部炭化。裝上冷凝管，小火加熱，待開始發(fā)泡，停止加熱，發(fā)泡停止后，加熱回流2h，如果加熱過程中溶液變?yōu)樽厣?，再?mL硝酸，繼續(xù)回流2h，放冷，從冷凝管上端小心加20mL水，繼續(xù)加熱回流10min，放冷，用適量的水沖洗冷凝管，洗液并入消化液中，將消化液經(jīng)玻璃棉過濾于100mL容量瓶中，用少量的水洗錐形瓶、濾器

，洗液并入容量瓶中，加水定容，混勻，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。（2）測定吸取10.0mL樣液，置汞蒸氣發(fā)生器內(nèi)，連接抽氣裝置，沿瓶壁迅速加入3mL氯化亞錫溶液（300g/L），立即通過流速為1.0L/min的氮?dú)猓ɑ蚪?jīng)活性炭處理的空氣），使汞蒸氣經(jīng)過氯化鈣干燥管，進(jìn)入測汞儀中，讀取測汞儀上最大讀數(shù)，同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。吸取0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL汞標(biāo)準(zhǔn)使用液，置于試管中，各加10mL混合酸（1+1+8），置于汞蒸氣發(fā)生器內(nèi)，連接抽氣裝置，沿瓶壁迅速加入3mL氯化亞錫溶液（300g/L），立即通過流速為1.0L/min的氮?dú)猓ɑ蚪?jīng)活性炭處理的空氣），使汞蒸氣經(jīng)過氯化鈣干燥管，進(jìn)入測汞儀中，讀取測汞儀最大讀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果計(jì)算式中：X——樣品中汞的含量，mg/kg；A1——測定用樣品消化液中汞的質(zhì)量，；A2——試劑空白液中汞的質(zhì)量，；m——樣品質(zhì)量，g；V1——樣品消化液總體積，mL；V2——測定用樣品消化液總體積，mL。技術(shù)提示（1）汞是易揮發(fā)的金屬，在樣品消化過程中，必須保持氧化狀態(tài)，也就是要有過量的硝酸存在，以避免造成汞的損失。（2）分離測定痕量的汞時(shí)，要注意試劑中含有的汞。測汞前，玻璃儀器全部用硝酸（1+5）浸泡過夜，然后用水反復(fù)沖洗，最后用去離子水沖洗干凈。項(xiàng)目2農(nóng)藥殘留量的測定

任務(wù)1有機(jī)氯殘留量的測定知識鏈接

氣相色譜法原理：樣品中六六六、滴滴涕經(jīng)提取、凈化，用氣相色譜法測定，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。電子捕獲檢測器對于負(fù)電極的化合物，具有極高的靈敏度，利用這一特點(diǎn)，可分別測出痕量的六六六、滴滴涕。不同異構(gòu)體和代謝物可同時(shí)分別測定。出峰順序：任務(wù)指導(dǎo)儀器（1）氣相色譜儀：具電子捕獲檢測器及微處理機(jī)。（2）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。分析步驟（1）樣品制備谷類制成粉末，其制品制成勻漿；蔬菜、水果及其制品制成勻漿；肉品去皮、筋后，切成小塊，制成肉糜；蛋品去殼，制成勻漿；鮮乳混勻備用；食用油混勻備用。（2）提取稱取具有代表性的各類食品樣品勻漿20g，加水5mL（根據(jù)其水分含量加水，使總水量約20mL），加丙酮40mL，振蕩30min，加氯化鈉6g，搖勻。加石油醚30mL，振蕩30min，靜置分層。取上清液35mL，過無水硫酸鈉脫水，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，濃縮近干，用石油醚定容至5mL，加0.5mL濃硫酸，凈化，振搖0.5min，離心15min（3000r/min）。取上清液進(jìn)行GC分析。（3）氣相色譜測定填充柱氣相色譜條件：色譜柱：內(nèi)徑3mm，長2m的玻璃柱，內(nèi)裝涂1.5%OV-17和2%QF-1混合固定液的80目～100目硅藻土。載氣：高純氮，流速110mL/min；柱溫：185℃；檢測器溫度：225℃；進(jìn)樣口溫度：195℃。進(jìn)樣量：1～5。外標(biāo)法定量。結(jié)果計(jì)算、式中：X——樣品中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)體和代謝物的單一含量，mg/kg；A1——被測定樣品各組分的峰值（峰高或峰面積）；A2——各農(nóng)藥組分標(biāo)準(zhǔn)的峰值（峰高或峰面積）；m1——單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的含量，ng；m2——被測定樣品的取樣量，g；V1——被測定樣品的稀釋體積，mL；V2——被測定樣品的進(jìn)樣體積，μＬ時(shí)，技術(shù)提示八種農(nóng)藥的色譜圖如下。職業(yè)素質(zhì)拓展方法概要：樣品中六六六、滴滴涕用有機(jī)溶劑提取，再用硫酸處理，除去干擾物質(zhì)，濃縮，點(diǎn)樣，展開，用硝酸銀顯色，經(jīng)紫外線照射，生成棕黑色斑點(diǎn)，與標(biāo)準(zhǔn)比較，可概略定量。任務(wù)2有機(jī)磷殘留量的測定知識鏈接原理：樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥經(jīng)提取、分離、凈化后，在富氫焰上燃燒，以HPO碎片的形式，放射出波長526nm光，這種特征光通過濾光片選擇后，由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成電信號，經(jīng)微電流放大器放大后，被記錄下來。樣品的峰高與標(biāo)準(zhǔn)的峰高相比，計(jì)算出樣品相當(dāng)?shù)暮?。任?wù)指導(dǎo)儀器（1）氣相色譜儀：具火焰光度檢測器。（2）電動振蕩器。主要試劑（1）農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取適量的有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用苯（或三氯甲烷）先配制儲備液，冰箱中保存。（2）農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)，用二氯甲烷稀釋成敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷和甲拌磷每毫升相當(dāng)于1.0μg的標(biāo)準(zhǔn)使用液。稻瘟凈、倍硫磷、殺螟硫磷和蟲螨磷每毫升相當(dāng)于2.0μg的標(biāo)準(zhǔn)使用液。分析步驟（1）提取與凈化以蔬菜為例：將蔬菜切碎混勻。稱取10.00g樣品，置于250mL具塞錐形瓶中，根據(jù)蔬菜含水量，加30g～100g無水硫酸鈉脫水，劇烈振搖（如有固體硫酸鈉存在，說明無水硫酸鈉量充足）。根據(jù)蔬菜色素含量，加0.2g～0.8g活性炭，脫色。加70mL二氯甲烷，在振蕩器上振搖0.5h，濾紙過濾。量取35mL濾液，置蒸發(fā)皿中，在通風(fēng)櫥中室溫下，自然揮發(fā)近干，用二氯甲烷少量多次研洗殘?jiān)?，移?mL（或10mL）具塞試管中，定容2mL，備用。（2）色譜條件①色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑3mm，長1.5m～2.0m。Ⅰ分離測定敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷的色譜柱。內(nèi)裝涂以2.5%SE-30和3%QF-1混合固定液的60目～80目ChromosorbWAWDMCS；內(nèi)裝涂以1.5%OV-17和2%QF-1混合固定液的60目～80目ChromosorbWAWDMCS；內(nèi)裝涂以2%OV-101和2%QF-1混合固定液的60目～80目ChromosorbWAWDMCS。Ⅱ分離測定甲半磷、蟲螨磷、稻瘟凈、倍硫磷和殺螟硫磷的色譜柱。內(nèi)裝涂以3%PEGA和5%QF-1混合固定液的60目～80目ChromosorbWAWDMCS；內(nèi)裝涂以2%NPGA和3%QF-1混合固定液的60目～80目ChromosorbWAWDMCS。②氣流速度：載氣為氮?dú)?0mL/min；空氣50mL/min；氫氣180mL/min（氮?dú)?、空氣和氫氣之比按各儀器型號不同選擇各自的最佳比例條件）。③溫度：進(jìn)樣口：220℃；檢測器：240℃；柱溫：180℃，但測定敵敵畏是130℃。（3）測定將混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液2～5μＬ，分別注入氣相色譜儀中，測得不同濃度有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰高，分別繪制有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)，取樣液2～5μＬ注入氣相色譜儀中，測得的峰高從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)的含量。結(jié)果計(jì)算

式中：X——樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥的含量，mg/kg；A——進(jìn)樣體積中有機(jī)磷農(nóng)藥質(zhì)量，ng；m——進(jìn)樣體積（μＬ）相當(dāng)于樣品的質(zhì)量，g。技術(shù)提示（1）本法為GB/T5009.20-2003中食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量測定的第二法，適用于糧食、蔬菜、食用油等食品中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷、甲拌磷、稻瘟凈、殺螟硫磷、倍硫磷、蟲螨磷等農(nóng)藥的殘留量分析。（2）最低檢出量：0.1ng～0.3ng，進(jìn)樣量相當(dāng)于0.01g樣品，最低檢出濃度范圍0.01mg/kg～0.03mg/kg。（3）精密度：敵敵畏、甲拌磷、倍硫磷、殺螟硫磷在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。樂果、馬拉硫磷、對硫磷、稻瘟凈在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。項(xiàng)目3毒素的測定

任務(wù)1黃曲霉毒素B1的測定[任務(wù)導(dǎo)言]表3-2我國食品中黃曲霉毒素B1允許量食品黃曲霉毒素B1允許量玉米、花生、花生油不得超過≤20μg/kg玉米及花生仁制品（按原料折算）

不得超過≤20μg/kg大米、其它食用油不得超過≤10μg/kg其它糧食、豆類、發(fā)酵食品不得超過≤5μg/kg嬰兒代乳食品不得檢出其它食品可以參照以上標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行知識鏈接薄層色譜法原理：樣品中黃曲霉毒素B1經(jīng)提取、濃縮、薄層分離后，在波長365nm紫外光下，產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層上顯示熒光的最低檢出量來測定含量。任務(wù)指導(dǎo)主要試劑黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確吸取1.0mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0μg/mL），置10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容，混勻，此溶液每毫升相當(dāng)于1.0μg黃曲霉毒素B1。吸取1.0mL此稀釋液，置5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容，混勻，此溶液每毫升相當(dāng)于0.2μg黃曲霉毒素B1。再吸取黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.2μg/mL）1.0mL，置5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容，混勻，此溶液每毫升相當(dāng)于0.04μg黃曲霉毒素B1。分析步驟（1）提取（正已烷甲醇水溶液法）以液-液分配法，使樣品中的油脂和大部分色素被正已烷或石油醚提取，AFB1與醇溶性色素溶解于甲醇水溶液中。然后用三氯甲烷凈化，則AFB1進(jìn)入三氯甲烷層，醇溶性色素留在甲醇水溶液中。稱取20.00g粉碎過篩樣品（面粉、花生醬不需粉碎），置250mL具塞錐形瓶中，加30mL正已烷（或石油醚）和100mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一層水封閉，振蕩30min，靜置片刻，用疊成折疊式的快速定性濾紙，過濾于分液漏斗中，當(dāng)下層甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞錐形瓶內(nèi)。取20.00mL甲醇水溶液（相當(dāng)于4g樣品），置另一125mL分液漏斗中，加20mL三氯甲烷，振搖2min，靜置，分層，如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可滴加甲醇促使分層。放出三氯甲烷層，經(jīng)過盛有約10g預(yù)先用三氯甲烷潤濕的無水硫酸鈉的定量慢速濾紙，過濾于50mL蒸發(fā)皿中，再加5mL三氯甲烷于分液漏斗中，重復(fù)振搖提取，三氯甲烷層一并濾入蒸發(fā)皿中。最后用少量三氯甲烷洗過濾器，洗液并入蒸發(fā)皿中。將蒸發(fā)皿放在通風(fēng)櫥中，在65℃水浴上通風(fēng)揮干，然后放在冰盒上，冷卻2min～3min，準(zhǔn)確加入1mL苯-乙腈混合溶液（或?qū)⑷燃淄橛脻饪s蒸餾器減壓吹氣蒸干，再準(zhǔn)確加入1mL苯-乙腈混合溶液）。用帶橡皮頭的滴管的管尖，將殘?jiān)浞只旌?，如有苯的結(jié)晶析出，將蒸發(fā)皿從冰盒上取出，繼續(xù)溶解、混合，晶體即消失，再用此滴管吸取上清液，轉(zhuǎn)移于2mL具塞試管中，備用。（2）測定（單向展開法）①薄層板的制備：稱取約3g硅膠G，加相當(dāng)于硅膠G量2倍～3倍的水，用力研磨1min～2min，至成糊狀，立即倒入涂布器內(nèi)，推成5㎝×20㎝，厚度約0.25mm的薄層板3塊。在空氣中干燥約15min，100℃活化2h，取出，置干燥器中保存。一般可保存2d～3d，如放置時(shí)間較長，可重新活化后使用。②點(diǎn)樣：將薄層板邊緣附著的吸附劑刮凈，在距薄層板下端3cm的基線上，用微量注射器（或血色素吸管）滴加樣液。一塊板可滴加4個(gè)點(diǎn)，點(diǎn)間距和點(diǎn)距邊緣的距離約為1cm，點(diǎn)的直徑約為3mm。在同一塊板滴加點(diǎn)的大小應(yīng)一致，滴加時(shí)用吹風(fēng)機(jī)用冷風(fēng)邊吹邊滴加。滴加樣式如下：第1點(diǎn)：10μＬ0.04μg/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第2點(diǎn)：20μＬ樣液。第3點(diǎn)：20μＬ樣液+10μL0.04μg/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第4點(diǎn)：20μＬ樣液+10μＬ0.2μg/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。③展開與觀察：在展開槽內(nèi)加10mL無水乙醚，預(yù)展12cm，取出，揮干。再于另一展開槽內(nèi)，加10mL丙酮-三氯甲烷（8+92），展開10cm～12cm，取出，在紫外光下觀察結(jié)果，方法如下：由于樣液點(diǎn)上滴加黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液，可使黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)與樣液中的黃曲霉毒素B1熒光點(diǎn)重疊。如樣液為陰性，薄層板上的第3點(diǎn)中黃曲霉毒素B1為0.0004μg，可用作檢查在樣液內(nèi)黃曲霉毒素B1的最低檢出量是否正常出現(xiàn)；如為陽性，則起定位作用。薄層板上的第4點(diǎn)中黃曲霉毒素B1為0.002μg，主要起定位作用。如第2點(diǎn)在與黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的相應(yīng)位置上無藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，表示樣品中黃曲霉毒素B1含量在5μg/kg以下；如在相應(yīng)位置上有藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，則需進(jìn)行確正試驗(yàn)。④確正試驗(yàn)：為了證實(shí)薄層板上樣液熒光系由黃曲霉毒素B1產(chǎn)生的，加滴三氟乙酸，產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的衍生物，展開后，此衍生物的比移值約為0.1左右。

在薄層板左邊依次滴加2個(gè)點(diǎn)。第1點(diǎn)：10μＬ0.04μg/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第2點(diǎn)：20μＬ樣液。于以上兩點(diǎn)各加一小滴三氟乙酸蓋于其上，反應(yīng)5min，用吹風(fēng)機(jī)吹熱風(fēng)2min（使熱風(fēng)吹到薄層板上的溫度不高于40℃），再于薄層板上滴加以下2個(gè)點(diǎn)。第3點(diǎn)：10μＬ0.04μg/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第4點(diǎn)：20μＬ樣液。展開同上操作。在紫外燈下觀察樣液是否產(chǎn)生與黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相同的衍生物。沒有加三氟乙酸的3、4兩點(diǎn)，可依次作為樣液和標(biāo)準(zhǔn)衍生物空白對照。⑤稀釋定量：樣液中的黃曲霉毒素B1熒光點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，如與黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的最低檢出量（0.0004μg）的熒光強(qiáng)度一致，則樣品中黃曲霉毒素B1含量即為5μg/kg。如樣液中熒光強(qiáng)度比最低檢出量強(qiáng)，則根據(jù)其強(qiáng)度估計(jì)減少滴加數(shù)，直至樣液點(diǎn)的熒光強(qiáng)度與最低檢出量的熒光強(qiáng)度一致為止。滴加樣式如下：第1點(diǎn)：10μＬ0.04μg/mL黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第2點(diǎn)：根據(jù)情況滴加10μＬ樣液。第3點(diǎn)：根據(jù)情況滴加15μＬ樣液。第4點(diǎn)：根據(jù)情況滴加20μＬ樣液。結(jié)果計(jì)算式中：X——樣品中黃曲霉毒素B1的含量，μg/kg；V1——加入苯-乙腈混合液的體積，mL；V2——出現(xiàn)最低熒光時(shí)滴加樣液的體積，mL；D——樣液的總稀釋倍數(shù)；m——加入苯-乙腈混合液溶解時(shí)相當(dāng)樣品的質(zhì)量，g；0.0004——黃曲霉毒素B1的最低檢出量，。技術(shù)提示如用單向展開法展開后，薄層色譜由于雜質(zhì)的干擾，掩蓋了黃曲霉毒素B1的熒光強(qiáng)度，需采用雙向展開法。薄層板先用無水乙醚作橫向展開，將干擾的雜質(zhì)展至樣液點(diǎn)的一邊，而黃曲霉毒素B1不動，然后，再用丙酮-三氯甲烷（8+92）作縱向展開，樣品在黃曲霉毒素B1相應(yīng)處的雜質(zhì)底色大量減少，因而，提高了方法靈敏度。如用雙向展開中滴加2點(diǎn)法展開，仍有雜質(zhì)干擾時(shí)，則可改用滴加1點(diǎn)法。任務(wù)小結(jié)

任務(wù)2麻痹性貝類毒素(PSP)的測定知識鏈接生物法原理：根據(jù)小鼠注射貝類抽取液后的死亡時(shí)間，查出鼠單位，并按小鼠體重，較正鼠單位，計(jì)算確定每100g貝肉內(nèi)的麻痹性貝類毒素的含量。其測定結(jié)果代表存在于貝肉內(nèi)各種化學(xué)結(jié)構(gòu)的麻痹性貝類毒素的總量。分析步驟（1）樣品制備①牡蠣、蛤、貽貝和扇貝：用清水徹底洗凈貝類外殼，切斷閉殼肌，開殼，用清水淋洗內(nèi)部，去除泥沙和其他外來雜質(zhì)，仔細(xì)取出貝肉，切勿割破肉體。收集貝肉，瀝水5min(避免貝肉堆積)，撿出碎殼等雜物，將貝肉均質(zhì)。開殼前不能加熱（或用麻醉劑）。②冷凍貝類：在室溫下，使冷凍的樣品（帶殼或脫殼的）呈半冷凍狀態(tài)，按上述方法清洗、開殼、淋洗、取肉、均質(zhì)。③貝類罐頭：將罐內(nèi)所有內(nèi)容物(包括貝肉組織及汁液)，于均質(zhì)器中均質(zhì)。大容量的罐頭，則過濾分離貝肉及汁液，分別稱重，將固形物和湯汁按比例混合，充分均質(zhì)。（2）提取取100g處理后的樣品，置800mL燒杯中，加100mL鹽酸溶液（0.18mol/L），充分?jǐn)嚢?，檢查pH（pH2.0～4.0）。需要時(shí)，可滴加鹽酸溶液（5mol/L）或氫氧化鈉溶液（0.1mol/L），調(diào)整pH，加堿時(shí)，速度要慢，同時(shí)，需要不斷攪拌，防止局部堿化破壞毒素。將混合物加熱，并慢慢煮沸5min，冷卻至室溫，調(diào)節(jié)pH至2.0～4.0（切勿＞4.5）。將混合物移至量筒中并稀釋到200mL。將混合物倒回?zé)?，攪拌至均質(zhì)狀，使其沉降至上清液呈半透明狀態(tài)，不能堵塞注射器針頭即可，必要時(shí)，混合物（或上清液）以3000r/min離心5min，或用濾紙過濾。保留進(jìn)行小鼠注射用的足量液體。（3）小鼠試驗(yàn)①以感量為0.1g的天平將小鼠稱量，并記錄質(zhì)量。每個(gè)樣品注射給3只小鼠。②對每只試驗(yàn)小鼠，腹腔注射1mL提取液。注射時(shí)，若有一滴以上提取液溢出，需將該只小鼠丟棄，并重新注射一只小鼠。③記錄注射完畢時(shí)間，仔細(xì)觀察并用秒表記錄小鼠停止呼吸時(shí)的死亡時(shí)間（到小鼠呼出最后一口氣止）。④如注射樣品原液后，1只或2只小鼠的死亡時(shí)間＞7min，則需再注射至少3只小鼠，以確定樣品的毒力。如小鼠的死亡時(shí)間＜5min，則要稀釋樣品提取液后，再注射另一組小鼠（3只），得到5min～7min的死亡時(shí)間；稀釋提取液時(shí)，要逐滴加入鹽酸溶液（0.1mol/L或0.01mol/L），調(diào)節(jié)pH至2.0～4.0。結(jié)果計(jì)算式中：X——樣品中PSP含量，MU/100g；ki——每只小鼠的質(zhì)量校正系數(shù)；Mi——每只小鼠的鼠單位數(shù)，MU；D——樣品提取液的稀釋倍數(shù)；200——樣品量，g。項(xiàng)目4其它有害物質(zhì)的測定

任務(wù)1苯并(α)芘的測定知識鏈接熒光分光光度法原理：樣品先用有機(jī)溶劑提?。ɑ蚪?jīng)皂化后提?。?，再將提取液經(jīng)液-液分配（或色譜柱）凈化，然后在乙?；癁V紙上分離苯并（α）芘，因苯并（α）芘在紫外光照射下，呈藍(lán)紫色熒光斑點(diǎn)，將分離后有苯并（α）芘的濾紙部分剪下，用溶劑浸出后，用熒光分光光度計(jì)測熒光強(qiáng)度，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。任務(wù)指導(dǎo)儀器K-D全玻璃濃縮器。熒光分光光度計(jì)。

主要試劑（1）苯并（α）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取10.0mg苯并（α）芘，用苯溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并定容，此溶液每毫升相當(dāng)于苯并（α）芘100μg。冰箱中保存。（2）苯并（α）芘標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.0mL苯并（α）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，置10mL容量瓶中，用苯定容，同法依次用苯稀釋，最后配成每毫升相當(dāng)于1.0μg及0.1μg苯并（α）芘兩種標(biāo)準(zhǔn)使用液，冰箱中保存。分析步驟（1）樣品提取以植物油為例：稱取20.0g～25.0g的混勻油樣，用100mL環(huán)已烷分次洗入250mL分液漏斗中，以環(huán)已烷飽和過的二甲基甲酰胺提取3次，每次40mL，振搖1min，合并二甲基甲酰胺提取液，用40mL經(jīng)二甲基甲酰胺飽和過的環(huán)已烷提取1次，棄去環(huán)已烷層。二甲基甲酰胺提取液，合并于預(yù)先裝有240mL硫酸鈉溶液（20g/L）的500mL分液漏斗中，混勻，靜置數(shù)分鐘后，用環(huán)已烷提取2次，每次100mL，振搖3min，環(huán)已烷提取液合并于第1個(gè)500mL分液漏斗。也可用二甲基亞砜代替二甲基甲酰胺。用40℃～50℃溫水洗滌環(huán)已烷提取2次，每次100mL，振搖0.5min，分層后，棄去水層，收集環(huán)已烷層，于50℃～60℃水浴上，減壓濃縮至40mL，加適量無水硫酸鈉脫水。測定①將樣品及標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的苯浸出液移入熒光分光光度計(jì)的石英皿中，以365nm為激發(fā)波長，以365nm～460nm波長進(jìn)行熒光掃描，所得熒光光譜與標(biāo)準(zhǔn)苯并（α）芘的熒光光譜比較定性。②與樣品分析的同時(shí)做試劑空白，包括處理樣品所用的全部試劑同樣操作，分別讀取試樣、標(biāo)準(zhǔn)及試劑空白于波長406nm、（406+5）nm、（406-5）nm處的熒光強(qiáng)度，按基線法由下式計(jì)算所得的數(shù)值，為定量計(jì)算的熒光強(qiáng)度。結(jié)果計(jì)算式中：X——樣品中苯并（α）芘的含量，μg/kg；S——苯并（α）芘標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)質(zhì)量，μg；F——標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)浸出液熒光強(qiáng)度，mm；F1——樣品斑點(diǎn)浸出液熒光強(qiáng)度，mm；F2——試劑空白浸出液熒光強(qiáng)度，mm；V1——樣品濃縮液體積，mL；V2——點(diǎn)樣體積，mL；m——樣品質(zhì)量，g。技術(shù)提示（1）乙?；癁V紙一定要用最厚的（3號），浸泡均勻，結(jié)合酸不低于26%。（2）多環(huán)芳烴的稀釋液，對紫外線敏感，極易氧化破壞。所以整個(gè)實(shí)驗(yàn)要注意避光，樣品濃縮、層析時(shí)要用黑布遮蓋。任務(wù)2N-亞硝胺類的測定[任務(wù)導(dǎo)言]我國現(xiàn)行的《食品中污染物的限量》（GB2762-2005）中規(guī)定N-亞硝基化合物的限量：海產(chǎn)品中N-二甲基亞硝胺≤4μg/kg，N-二乙基亞硝胺≤μg/kg7；肉制品中N-二甲基亞硝胺≤μg/kg3，N-二乙基亞硝胺≤μg/kg5。知識鏈接氣相色譜-質(zhì)譜法原理：樣品中的N-亞硝胺類化合物，經(jīng)水蒸氣