儀器分析-分子發(fā)光

儀器分析6分子發(fā)光分析法Molecular楊海Y分子光譜分析法：基于物質(zhì)分子與光波(電磁作用時(shí)，物質(zhì)可見分光光2熒光分光光度 多標(biāo)記分析 激光共聚焦顯微 小動(dòng) 成像系 一、熒光及熒光的產(chǎn)二、影響熒光的因三、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)4綠色熒光蛋白——2年化學(xué)下村修馬丁查爾菲錢永健 例如熒光標(biāo)記——生命科學(xué)的“指燈”染色觀 熒光標(biāo)8、熒光的定義9熒光的產(chǎn)基態(tài)0熒光的產(chǎn)激發(fā)1熒光的產(chǎn)能量轉(zhuǎn)換2熒光的產(chǎn)發(fā)射3熒光的產(chǎn)熒光，又作“螢光”，是指一種光致發(fā)光的冷光現(xiàn)光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比射光的的波長長的發(fā)射光；而且一旦停止激光，發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即。具有這種性質(zhì)發(fā)射光就被稱之為熒 內(nèi)轉(zhuǎn) 反系 無輻謝躍遷竄 振動(dòng)弛豫熒 系 外轉(zhuǎn)移無輻射躍 竄 回到基 內(nèi)轉(zhuǎn)移能 之間 ST 之間 反系間竄躍由外部 取能量遲 輻謝躍遷 熒光：光 10 外轉(zhuǎn) 遲滯熒光 熒光的產(chǎn)熒光磷光化學(xué)發(fā)光生物發(fā)光散射光熒光的產(chǎn)光致漂白作用熒光的產(chǎn)、熒光光譜☆特點(diǎn)激發(fā)光譜與發(fā)射光：固定測(cè)量波長為熒光最大M：固定激發(fā)光波長為其最大激特點(diǎn)：斯托克位移特點(diǎn)：激發(fā)光譜特點(diǎn)：激發(fā)光譜與吸收光譜形狀相似一、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)、熒光與分子結(jié)構(gòu)φ=發(fā)射的光子數(shù)/吸收的光子＝熒光光強(qiáng)吸收的光強(qiáng)I化合化合苯萘蒽 λemmax躍遷類躍遷是產(chǎn)生熒光的主要躍遷一般比n11倍，5—要共軛效應(yīng) 化合苯苯苯化合苯苯苯苯苯甲λemmax相對(duì)熒光強(qiáng)剛性平面多數(shù)具有剛性平面結(jié)構(gòu)的有機(jī)分子具有熒光。N無熒 偶氮 聯(lián)N有熒光 偶氮 代基效應(yīng)—HN2，—NHR，—NR2，—OH，—OR，—p→π—C=O，—COOH，—不產(chǎn)生p→π共 化合萘1-甲基1-氟1-氯1-溴1-碘化合萘1-甲基1-氟1-氯1-溴1-碘λλPmaxτ~空間位阻對(duì)熒光發(fā)射的影 立體異構(gòu)體對(duì)熒光發(fā)射的影 H3CN SO- - H 電離效應(yīng)對(duì)熒光發(fā)射的影 pH=1,有熒 pH=13,無熒重原子取代基效應(yīng)，，的系間竄躍由于重原子含有重原子的溶劑，由于重原子效應(yīng)熒光減弱、磷光增強(qiáng)、影響熒光強(qiáng)度的因素☆熒光強(qiáng)度與溶液濃度的當(dāng)入射光強(qiáng)度一定f=Kc即熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成之正比，但這種線性關(guān)系只有在極稀的溶液中時(shí)才成立。對(duì)于較濃溶液，由于猝滅現(xiàn)象和自吸收等原因，使熒光強(qiáng)度和波長一端有時(shí)，當(dāng)溶液濃度較大時(shí)，一部分熒光發(fā)射被自身熒光分析法的應(yīng) 一、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)熒光光譜光 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)氙 ，熒光的測(cè)量通常在 樣品 與激發(fā)光成直角的 向上進(jìn) 光 激 數(shù)據(jù)處 儀器控?zé)晒夤庾V檢測(cè)器：熒光光譜儀及應(yīng)、熒光分析法AlgIt IF2.30kFI0εbIA IFk,F,I0 s直接熒光標(biāo)準(zhǔn)曲熒光熄滅工作熒光分析法的應(yīng)熒光分析方法的特點(diǎn)靈敏度高。檢測(cè)限比吸收光譜法低個(gè)數(shù)量級(jí)。通級(jí)定量分析：標(biāo)準(zhǔn)曲相對(duì)熒光強(qiáng)度 一、熒光二、影響熒光的因三、熒光四、化學(xué)發(fā)光及分子發(fā)光的應(yīng)化學(xué)發(fā)光吸收化學(xué)能使分子發(fā)光的要有有利的化學(xué)反應(yīng)歷程，使化學(xué)反應(yīng)的能量至少能被一種物質(zhì)所接受并生成激發(fā)態(tài)，（），化光催化酶促化學(xué)發(fā) -化學(xué)發(fā)光免疫分析系中的熒光檢測(cè)化學(xué)發(fā)光免疫分析系 拜耳公司化學(xué)發(fā)光免疫分檢標(biāo)記免疫分析的常見類型直接 間接 競爭$$例小動(dòng)成像系利用熒光素酶D像機(jī)偵測(cè)訊號(hào)，藉以觀察與分析同一動(dòng)物或植物于特定時(shí)間點(diǎn)的反應(yīng)光xM52氣體麻醉系 f/0.95–f/16,50 10個(gè)（波長分別為430,465,500,605,640,675,710745nm，帶寬 695-770,810-875 時(shí)間 43x38x43 20–40 熒光成像 體內(nèi)分布示蹤將巰基丙酸修飾的發(fā)射波長為8量子點(diǎn)由于效應(yīng)靶向到Small2010,6, 可見光+→酶報(bào)告系以熒物來檢)PP肺癌9、判斷、藥物、毒性 貝克曼庫爾特流式細(xì)胞儀w同時(shí)多參多色熒速度快 個(gè)細(xì)胞微粒細(xì)胞凋亡研究究細(xì)胞凋亡有重要意義。應(yīng)用可根據(jù)細(xì)胞在凋亡過程中發(fā)生一系 表達(dá)該抗原的細(xì)胞 光強(qiáng)度 大多數(shù)儀器是在3 m大小的孔徑中將單細(xì) 前向角散射光a側(cè)向角散射a細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對(duì)復(fù)雜捕獲管分選(Catch電荷式流式細(xì)胞儀分 原始數(shù)據(jù)直方圖m二維點(diǎn)圖等高線圖密度 三維圖D單參數(shù)直方圖每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可整理成分布統(tǒng)計(jì)，以分布直方圖來顯示。橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，縱坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)DNA含量直方圖和抗原表達(dá)直方 ， 外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn) 雙色熒光標(biāo)記細(xì)胞散點(diǎn) 等高 密度A-設(shè)分析B對(duì)C P%D P%例共聚焦顯微鏡 84聚焦1購置時(shí)間：價(jià)值：~￥7分辨共聚焦顯微購置時(shí)間：價(jià)格a（） 88M多色標(biāo)記成像 Step Step Step CancerRes M的不足普通約2阿貝極限約了解分子發(fā)光熒光、磷光、化學(xué)發(fā)基本原掌握影響熒光強(qiáng)度的主要因素掌握熒光光譜和熒光分析的特點(diǎn)了解熒光光譜儀的基本了解發(fā)光分析定性和定SS儀器的重現(xiàn)性。規(guī)定，用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差來度量。 drs/絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏 次測(cè)量平均(xx