無創(chuàng)產(chǎn)前篩查

重大出生缺陷無創(chuàng)產(chǎn)前篩查

內(nèi)容提要常見染色體疾病概述染色體非整倍體病發(fā)病機理傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)介紹無創(chuàng)產(chǎn)前項目工作流程四一二三一、染色體非整倍體概述（唐氏綜合征為例）BRCA17世紀考古學家挖掘出典型唐氏綜合征體征顱骨。素描畫中見到具有唐氏綜合征樣面容的兒童。JohnLangdonDown醫(yī)生第一次對唐氏綜合征的典型體征進行完整的描述并發(fā)表。Down’ssyndrome.法國遺傳學家(JeromeLeJeune)發(fā)現(xiàn)唐氏綜合征是由人體的第21號染色體的三體變異造成的現(xiàn)象。16世紀1866年1959年染色體非整倍體疾病臨床表現(xiàn)21、18、13-三體綜合征是人類最常見的三種染色體疾病，患兒面容特殊，絕大多數(shù)為嚴重智力障礙及器官畸形，對家庭和社會造成巨大危害和負擔?，F(xiàn)代醫(yī)學對胎兒染色體疾病尚無有效治療方法，最好的方法是在孕期通過產(chǎn)前篩查及診斷，發(fā)現(xiàn)異常并及時采取相應措施21三體核型分析圖21三體形成原因21三體發(fā)病率與產(chǎn)婦年齡關(guān)系三、現(xiàn)有的產(chǎn)前篩查與診斷手段產(chǎn)前篩查母血清學篩查頸項透明膜厚度篩查產(chǎn)前診斷羊水穿刺絨毛取樣

臍靜脈穿刺風險計算侵入性診斷方式傳統(tǒng)篩查方式的缺陷產(chǎn)前篩查（S）100,000篩查結(jié)果陽性（SP）7,000篩查結(jié)果陰性（SN）93,000唐氏綜合征胎兒400真陽性（TSP）340假陰性（FSN）60非唐氏綜合征胎兒99,600假陽性（FSP）6,660真陰性（TSN）92,940英國的統(tǒng)計顯示，1996-2002年全國因羊水穿刺導致的抬兒流失數(shù)為5619名無創(chuàng)產(chǎn)篩技術(shù)原理的提出胎兒DNA來源和特點來源：1胎兒細胞通過胎盤滲透到母血中，被母體免疫系統(tǒng)破壞，胎兒DNA殘留下來；2胎兒細胞凋亡；3胎盤滋養(yǎng)層細胞的凋亡基本特點：1含量有一定的變化規(guī)律。妊娠第4周開始可檢出胎兒游離DNA，隨著孕周增加而增加，存在個體差異，平均濃度。2分娩后短時間內(nèi)消失，平均半衰期為16.3min(4-30min)，2h就無法檢出。再次妊娠不影響檢測結(jié)果。3DNA片段較小，平均166bp左右。常規(guī)技術(shù)很難檢測母體和胎兒ＤＮＡ的混合物Uniquereads(單一序列讀取）:nomismatch,onelocation母血漿DNA+高通量測序以21-三體為例：100DNA單位/毫升血漿。其中，95個單位來源于母親，5個單位來源于胎兒

母親Chr21：95×2=190

正常胎兒

Chr21：5×2=10母體外周血中Chr21=190+10=200

21-三體胎兒Chr21：5×3=15

母親Chr21：95×2=190母體外周血中Chr21=190+15=205通過大規(guī)模并行測序，獲得分布在每條染色體上的真實的核酸片段數(shù)量，經(jīng)過計數(shù)與比較：正常胎兒或者

21-三體胎兒

無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測流程醫(yī)院楓林龍鼎實驗室10-13.5周早孕期篩查(檢出率85%)中孕期篩查(檢出率81%)15-20周16-22周羊水穿刺（流產(chǎn)率0.5-1%）

24-28周臍帶血取樣（流產(chǎn)率1-3%）12-24周無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測（準確率>99%）無創(chuàng)產(chǎn)檢的優(yōu)勢適應癥和禁忌癥適應癥：1、經(jīng)B超確認的單胎、活胎孕婦2、孕周在12周至24周之間3、可同時檢測18三體，13三體，45,X，47,XXY，

47,XYY，47,XXX等多種染色體非整倍體疾病禁忌癥：1、雙胎或多胎2、孕婦本人是染色體非整倍體患者3、孕婦接受過異體輸血、移植手術(shù)、干細胞或免疫細胞

治療抽取孕婦外周血5mL，采用EDTA抗凝；采血完畢后，輕微顛倒采血管4次，并及時將采血管放置于4℃冰箱中，在4小時內(nèi)進行血漿分離工作?！咀⒁馐马棥坎裳獣r孕婦無需空腹；采血管為5mLEDTA抗凝管。做7項檢測需要用10ml抗凝管；顛倒混勻時動作不能太劇烈，防止溶血。樣本采集1、將采血管在4℃環(huán)境下1600轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，上清（血漿）分裝到置于冰盒上且已編號的2.0ml的EP管中。【注意事項】1）嚴格核對樣本編號、確保編號唯一；2）開啟離心管時，不能碰到管內(nèi)蓋；3）吸取血漿過程中不要吸到中間層的白細胞。2、上述血漿4℃

16000轉(zhuǎn)/分離心10min，冰盒上將上清轉(zhuǎn)入已編號的2支2.0mlEP管中，每個離心管轉(zhuǎn)入600ul血漿。同時在每個2.0ml離心管上標記樣本編號、血漿體積、分離日期。

【注意事項】1）嚴格核對樣本編號、確保樣本編號唯一；2）開啟離心管管蓋時，不能碰到離心管內(nèi)蓋；3）將分離好的血漿貼上對應的條碼并用封口膜密封，密封結(jié)束后立即將血

漿放入-20℃或-80℃冰箱中，避免反復凍融?！咀⒁馐马棥咳毐ＷC在4小時內(nèi)進行血漿分離；分離后的血漿在-20℃冰箱中可保存3天，長期保存需存放于-80℃冰箱。樣本前處理樣本儲存與運輸1、全血樣本在冰袋(4℃)條件下運輸，且在4小時內(nèi)送達樣本接收處，樣本接收后要立即完成血漿分離。2、血漿樣本在干冰（-20℃

）條件下運輸，并確保樣本送達時有干冰剩余，到達后及時存放于-80℃冰箱中，禁止將樣本在室溫下放置?！咀⒁馐马棥?）泡沫箱的規(guī)格：壁厚6cm、外徑長39cm、外徑寬32cm、外徑高35cm。2）干冰用量：10公斤/2-3天；15公斤/4-5天；根據(jù)運送時間的長短，相應增加干冰用量。樣本數(shù)T21T18T13XOXXYXXXXYY樣本總數(shù)26619272891513753核型分析347619163108643假陽性—1101000假陰性—0000000檢出率—100%100%100%100%100%100%100%假陽性率—0.03%0.03%0.00%0.02%0.00%0.00%0.00%陽性預測值—9