藥物分析第十四章維生素類藥物的分析

第十四章

維生素類藥物的分析

概述

維生素維持正常生理功能所必需的、微量營養(yǎng)物質(zhì)，人體不能合成維生素。必須從外界食物中攝取。維生素的發(fā)現(xiàn)是20世紀的偉大發(fā)現(xiàn)之一。1897年,C.艾克曼在爪哇發(fā)現(xiàn)只吃精磨的白米即可患腳氣病，未經(jīng)碾磨的糙米能治療這種病。并發(fā)現(xiàn)可治腳氣病的物質(zhì)能用水或酒精提取,當時稱這種物質(zhì)為“水溶性B”。

ChristiaanEijkman1929諾貝爾生物醫(yī)學(xué)獎TheDiscoveryofVitamin發(fā)現(xiàn)簡史必需維生素13種維生素A，維生素B，維生素C，維生素D，維生素E，維生素K，維生素H（生物素），維生素P，維生素PP，維生素M，維生素T，維生素U，水溶性維生素。分類AB1CDEVitaminsContents維生素A的簡介是魚類肝臟中提取的一種不飽和脂肪醇，又稱魚肝油。目前主要采用人工合成。在體內(nèi)以視黃醇的形式儲存，缺乏會影響視色素的合成，導(dǎo)致夜盲癥，視力減退。第一節(jié)維生素A的分析全反式第一節(jié)維生素A的分析結(jié)構(gòu)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烯黃色棱形，62-64℃淡黃色棱形，57-58℃無定型，28-29℃去氫維生素VitA2去水維生素VitA3易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)第一節(jié)維生素A的分析

溶解性:與三氯甲烷、乙醚、環(huán)已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。不穩(wěn)定性：含有多個不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，特別是在加熱和金屬離子存在時更易氧化變質(zhì)從而失活。第一節(jié)維生素A的分析性質(zhì)紫外吸收：共軛多烯醇側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在325-328nm之間有最大吸收，可用于鑒別。第一節(jié)維生素A的分析

λmax

相對生物效價順反異構(gòu)維生素A325.5100%全反式新維生素Aa32875%2－順新維生素Ab320.524%4－順新維生素Ac310.515%2，4－順異維生素Aa32321%6－順異維生素Ab32424%2，6－順第一節(jié)維生素A的分析天然維生素A主要是反式CHCl3可用于鑒別和含量測定

與三氯化銻呈色:三氯甲烷+三氯化銻=不穩(wěn)定的藍色與三氯化銻呈色反應(yīng)第一節(jié)維生素A的分析鑒別實驗VitASbCl3CHCl3(無水無醇)藍色紫紅色（一）Carr-Price反應(yīng)藍色紫紅第一節(jié)維生素A的分析條件：無水、無醇SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正離子的正電荷消失第一節(jié)維生素A的分析要求儀器和試劑必須干燥無水，三氯甲烷必須無醇第一節(jié)維生素A的分析λmax為326nm一個吸收峰λmax為350～390nm三個吸收峰五個共軛雙鍵六個共軛雙鍵最大吸收峰紅移（二）UV法第一節(jié)維生素A的分析第一節(jié)維生素A的分析維生素A在無水乙醇溶液中溶解,立即進行UV掃描,在360nm處有一最大吸收峰.當鹽酸水浴加熱30s,迅速冷卻,此過程發(fā)生脫水反應(yīng),掃描時出現(xiàn)三個吸收峰USP顯色劑磷鉬酸規(guī)定斑點顏色和Rf值BP

對照品法顯色劑三氯化銻（三）TLC法第一節(jié)維生素A的分析展開劑：環(huán)己烷-乙醚（80：20）均顯藍色斑點，維生素醇（Rf=0.1）維生素醋酸酯（Rf=0.45）

維生素棕櫚酸酯（Rf=0.7）

酸值

取乙醇與乙醚各15ml，置錐形瓶中，加酚酞指示劑5滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）至顯粉紅色，再加本品2.0g，振搖使溶解，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，酸值應(yīng)不大于2.0（附錄VIIH）雜質(zhì)檢查過氧化值取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振搖使溶解，加碘化鉀的飽和溶液1ml，振搖1分鐘，加水100ml與淀粉指示液1ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定至紫藍色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）不得過1.5ml。雜質(zhì)檢查第一節(jié)維生素A的分析含量測定（一）UV法（三點校正法）第一節(jié)維生素A的分析維生素A在325~328nm的波長范圍內(nèi)有最大吸收，可用紫外法進行含量測定但維生素A原料常混有雜質(zhì)如：第一節(jié)維生素A的分析

維生素A的氧化產(chǎn)物第一節(jié)維生素A的分析

維生素A在光照下產(chǎn)生的無活性的聚合物第一節(jié)維生素A的分析第一節(jié)維生素A的分析第一節(jié)維生素A的分析測定對象：VitA醋酸酯時，ChP2015規(guī)定第一法等波長差法第一節(jié)維生素A的分析第二法等吸收比法測定對象：VitA醇時，ChP2015規(guī)定第一節(jié)維生素A的分析合成的或天然的維生素A均為酯式維生素A，根據(jù)供試品中干擾雜質(zhì)的多少，可采用：（1）直接測定法

（2）皂化法

第一節(jié)維生素A的分析求求效價（1）基本步驟4.測定方法A選擇，A328測定或A328校正求標示百分含量（1）第一法（直接測定法，適用于純度高的維生素A醋酸酯的測定）1）方法取樣品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解在300、316、328、340、360nm測吸收度，以確定最大吸收波長（A328或A328校正）。第一節(jié)維生素A的分析b.判斷法最大吸收波長在326-329nm之間，且5個波長下的絕對值差值均不超過0.02時，可直接用328nm波長處的測得的吸收度值求得吸收系數(shù)。

a.計算吸收度比值（Ai/A328）：與中國藥典的吸收度比值相比較，判斷每個差值的絕對值是否超過0.02。第一節(jié)維生素A的分析最大吸收波長在326-329nm之間，計算5個波長下的絕對差值，如果有一個或幾個超過0.02，應(yīng)按以下的方法進行判斷：

A328校正=3.52（2A328–A316-A340）第一節(jié)維生素A的分析（1）第一法（直接測定法，適用于純度高的維生素A醋酸酯的測定）1）方法取樣品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解在300、316、328、340、360nm測吸收度，

確定A2）計算

a.吸光系數(shù)E1%1cm第一節(jié)維生素A的分析

b.求效價（IU/g）：效價指每g供試品所含維生素的A的國際單位數(shù)。

第一節(jié)維生素A的分析1IU=0.344μg全反式維生素A醋酸酯IU/g=

第一節(jié)維生素A的分析每克純品相當多少個單位（IU）?1IU=0.344μg全反式維生素A醋酸酯第一節(jié)維生素A的分析第一節(jié)維生素A的分析c.求維生素A占標示量的百分含量A—A328或A328校正D——供試品的稀釋倍數(shù)換算因子——維生素A醋酸酯在環(huán)己烷中1900；

維生素A醇在異丙醇中1830W為平均內(nèi)容物重量；W為稱取內(nèi)容物重量（供試品取用量）L—比色池厚度標示量為處方中規(guī)定的每粒中所含的國際單位數(shù)第一節(jié)維生素A的分析

VitAD膠丸中VitA的含量測定

精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物0.2399g至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為第一節(jié)維生素A的分析A300：0.354A316

：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299求本品中維生素A的含量？第一節(jié)維生素A的分析A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.344

0.5550.9071.0000.8110.299

+0.01－0.010+0.02+0.04

－－－－－=====第一節(jié)維生素A的分析第一節(jié)維生素A的分析適用于維生素A醇（等吸收比法）第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此法[皂化法、6/7A法]（2）第二法第一節(jié)維生素A的分析水溶性脂溶性第一節(jié)維生素A的分析

判斷max是否在323～327nm之間取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定

計算是否第一節(jié)維生素A的分析

判斷A300/A325是否大于0.73是否取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定

計算A325(校正)03%－3%f第一節(jié)維生素A的分析高效液相色譜法流動相：正己烷－異丙醇（997︰3）檢測波長：325nm系統(tǒng)適用性實驗考察分離度——是否能將維生素A醋酸酯順式和反式分開第一節(jié)維生素A的分析三氯化銻比色法λmax618nm～620nm標準曲線法第一節(jié)維生素A的分析缺點：呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分干擾與標準曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性優(yōu)點：簡便快速第一節(jié)維生素A的分析小結(jié)維生素A—共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)乙烯性質(zhì)：脂溶性；不穩(wěn)定，可與三氯化銻呈色鑒別：三氯化銻反應(yīng)；UV；TLC含量測定：

紫外-分光光度法（三點校正）

三氯化銻比色法AB1CDEVitaminsContents

維生素B1廣泛分布于米糠、麥麩和酵母中，具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消化的正常功能。主要用于治療維生素B1缺乏癥、多發(fā)性神經(jīng)炎及胃腸疾病。第一節(jié)維生素B1的分析氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)亞甲基氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-（2-羥基乙基）噻唑鎓鹽酸鹽結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素B1（鹽酸硫胺）第二節(jié)維生素B1的分析結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素B1為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚水溶液呈酸性1.溶解性性質(zhì)噻唑環(huán)、嘧啶環(huán)共軛雙鍵12.5μg/ml鹽酸溶液（9→1000）λmax=246nm2.硫色素熒光反應(yīng)3.UV雜原子的反應(yīng)，能與某些生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測定。4.與生物堿沉淀試劑反應(yīng)5.氯化物的特性與NaOH共熱，形成硫化鈉，＋硝酸鉛生成黑色沉淀；6.硫元素反應(yīng)7.紅外光譜特征二、鑒別試驗（一）硫色素熒光反應(yīng)——為維生素B1所特有NaOH－H2O環(huán)合[O]－2H硫色素Thiochtome溶于丁醇，顯藍色熒光維生素B1VitB1H+H+H+沉淀反應(yīng)H+S元素反應(yīng)Cl-反應(yīng)硫元素反應(yīng)和氯化物反應(yīng)H+CompanyLogo三、含量測定高氯酸滴定液（0.1mol/L）的滴定度(T)為16.86mg/ml。喹那啶紅－亞甲藍(紫紅→天藍)非水溶液滴定法紫外分光光度法維生素B1分子中具有共軛雙鍵，在紫外區(qū)有吸收1——0.1MHCl2——H203——H3PO4buffer4——alcohol246232255注意維生素B1片的測定片劑、注射劑=421（每片）相當于標示量的%=A=ECLChP11×

標示量%×

WEA

×%cm×

100D××

100平均片重（每ml）相當于標示量的×

標示量%×VEA×%cm×

100D×

100NaOH硫色素熒光法：維生素B1的專屬性反應(yīng)原理1、2.

方法VitB1鐵氰化鉀NaOH硫色素異丁醇熒光λex-365nmλem-435nm+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇對照液+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇供試液SdAb特點3、小結(jié)維生素B1（鹽酸硫胺）——氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基連接而成季銨鹽。性質(zhì)：水溶性；硫色素反應(yīng)；可與生物堿沉淀劑反應(yīng)鑒別：硫色素反應(yīng)；沉淀反應(yīng)；Cl、S反應(yīng)含量測定：非水滴定；紫外分光光度法；

硫色素熒光法AB1CDEVitaminsContents第三節(jié)維生素C的分析維生素C是膠原蛋白形成所必需的，有助于保持間質(zhì)的完整，維生素C缺乏可導(dǎo)致齒齦腫脹，出血，皮下瘀點，關(guān)節(jié)及肌肉疼痛，毛囊角化，嚴重缺乏可引起壞血病。所以維生素C又稱為抗壞血酸。L-抗壞血酸(有生物活性)L-二酮古羅糖酸L-去氫抗壞血酸無生物活性第三節(jié)維生素C的分析結(jié)構(gòu)與性質(zhì)C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.572.酸性一元酸性質(zhì)1.溶解性易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶于三氯甲烷或乙醚L(+)－抗壞血酸活性最強比旋度+20.5°~+21.5°手性C（C4、C5）3.旋光性**含有四個光學(xué)異構(gòu)體有活性有活性無活性4.還原性二烯醇結(jié)構(gòu)與堿反應(yīng)5.水解反應(yīng)弱堿中生成單鈉鹽，強堿中水解△糖類的顯色反應(yīng)50℃結(jié)構(gòu)與糖類相似6.具糖的性質(zhì)五碳糖維生素C7.UV特征維生素C具有共軛雙鍵利用還原性：與氧化劑的反應(yīng)鑒別試驗（一）與AgNO3反應(yīng)去氫抗壞血酸黑色（二）與2，6-二氯靛酚反應(yīng)氧化型玫瑰紅色（酸性）還原型藍色(堿性)無色與堿性酒石酸銅反應(yīng)與KMnO4反應(yīng)（三）與其他氧化劑反應(yīng)磚紅色沉淀試劑褪色磷鉬酸鉬藍與磷鉬酸反應(yīng)（四）薄層色譜法（五）糖類反應(yīng)H2O-CO2戊糖-3H2O糠醛50℃藍色維生素C可在三氯醋酸或鹽酸存在下水解、脫羧、生成戊糖，再失水，轉(zhuǎn)化為糠醛，加入吡咯，加熱至50℃產(chǎn)生藍色0.01mol/LHCl（五）紫外光譜法BP2010雜質(zhì)檢查（一）溶液的澄清度與顏色檢查內(nèi)酯環(huán)水解糠醛縮合呈色高于或低于pH.0-6.0空氣、光線、溫度維生素C脫羧控制有色雜質(zhì)維生素C（二）鐵、銅離子（三）草酸的檢查草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對Vc的原料，尤其是注射液，要進行草酸檢查；加入CaCl2，比濁法；原子吸收分光光度法（二）鐵、銅離子原子吸收分光光度法四、含量測定維生素C維生素C制劑碘量法二氯靛酚法紫外分光光度法高效液相色譜法指示劑淀粉指示液（一）碘量法原理：利用Vc強的還原性HAc

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6。2、方法原料藥（2）酸性環(huán)境稀醋酸

（1）新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定

趕走水中O2，減少O2的干擾3、注意事項（4）附加劑干擾的排除片劑——過濾注射劑

——抗氧劑

——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5（二）2，6-二氯靛酚滴定法快速滴定，專屬性強，用于含VitC的制劑與食品分析自身指示終點1.原理2.方法（2）快速滴定2min內(nèi)

（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質(zhì)干擾（3）亦可剩余比色測定

（定量過量）（測剩余染料）3.注意事項（4）二氯靛酚不穩(wěn)定，須臨用前配制并標定專屬性強，多用于含Vc的制劑和食品的分析配制方法：NaHCO342mg+水→50ml，加二氯靛酚鈉二水合物0.5g+水→200ml,過濾，即得。標定方法：用干燥的維生素C對照品進行標定（三）高效液相色譜法人血漿中VitC濃度的HPLC法測定小結(jié)維生素C（L—抗壞血酸）——烯二醇結(jié)構(gòu)性質(zhì)：水溶性；酸性；旋光性；還原性；水解性

糖類性質(zhì)；紫外吸收特性鑒別：硝酸銀反應(yīng)；二氯靛酚鈉反應(yīng)；

氧化反應(yīng)；TLC；糖類反應(yīng)；紫外雜質(zhì)檢查：澄清度與顏色檢查

鐵、銅離子檢查

草酸檢查含量測定：碘量法；二氯靛酚滴定法；

高效液相色譜

AB1CDEVitaminsContentsSourcesSunlightFoodsFortifiedMilkFishOilsDeficiency佝僂病牙齒松動雞胸骨質(zhì)疏松腳成弓形Function促進鈣、磷的吸收；促進骨骼和牙齒的正常生長；調(diào)節(jié)檸檬酸的代謝第四節(jié)維生素D的分析膽甾醇7-脫氫膽甾醇維生素D3(膽骨化醇)維生素D2(麥角骨化醇)麥角甾醇維生素D是一類抗佝僂病維生素的總稱，目前有10多種，都是甾醇衍生物。

維生素D2

維生素D3第四節(jié)維生素D的分析維生素D2、D3無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭，無味；遇光或空氣均易變質(zhì)。

溶解性:維生素D2在三氯甲烷中極易溶解,在丙酮乙醇乙醚中易溶；維生素D3在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚極易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。不穩(wěn)定性:毒性增強.含有多個烯鍵，所以極不穩(wěn)定，宜氧化變質(zhì)，效價降低，毒性增強。第四節(jié)維生素D的分析旋光性:有五到六個手性碳原子,均具有旋光性.維生素D26個手性碳原子

維生素D35個手性碳原子

第四節(jié)維生素D的分析顯色反應(yīng)甾類化合物氯仿溶液黃色紅色紫色綠色紫外吸收特性無水乙醇265nm

維生素D2

為460－490

維生素D3

為465－495醋酐硫酸E1cm1%E1%1cm二、鑒別試驗

（一）顯色反應(yīng)1．與醋酐-濃硫酸反應(yīng)

氯仿溶液黃色

紅色

紫色

綠色醋酐硫酸2．與三氯化銻反應(yīng)本品1,2-二氯乙烷

三氯化銻試液

橙紅色

粉紅色

3．其它顯色反應(yīng)

維生素D

三氯化鐵

橙黃色

二氯丙醇乙酰氯綠色

（二）比旋度鑒別無水乙醇溶液

維生素D2

比旋度為＋102.5°至＋107.5°維生素D3

比旋度為＋105°至＋112°（三）其它鑒別方法薄層色譜法、HPLC法制備衍生物測熔點紫外、紅外吸收光譜

（四）維生素D2、D3的區(qū)別反應(yīng)維生素D2

維生素D3

96%乙醇

10ml取0.1ml

乙醇1ml和85%硫酸5ml

紅色λmax570nm

黃色

λmax495nm

三、雜質(zhì)檢查（一）麥角甾醇的檢查維生素D290%乙醇溶液

洋地黃皂苷溶液不得發(fā)生渾濁或沉淀（二）前維生素D的光照產(chǎn)物（三）有關(guān)物質(zhì)檢查Ch.P2010——NP-HPLC含量測定USP34-NF29化學(xué)法色譜法微生物法BP2010化學(xué)法色譜法光譜法四、含量測定正相高效液相色譜法（一）維生素D測定法

含量以單位表示每單位相當于維生素D0.025μg注意：計算的是維生素D及前維生素D經(jīng)折算成維生素D的總量

固定相：硅膠

流動相：正己烷－正戊醇（997：3）

檢測波長：254nm第一法：用于無維生素A醇及其他干擾的供試品第二法：(1)皂化提取;(2)凈化用色譜柱系統(tǒng)分離收集維生素D，得供試品溶液B;(3)按第一法進行測定。第三法：當樣品經(jīng)皂化提取及凈化用色譜系統(tǒng)分離收集后，前維生素D峰仍受干擾時，采用此法。小結(jié)維生素D—抗佝僂病維生素的總稱性質(zhì)：脂溶性；不穩(wěn)定；旋光性；

顯色反應(yīng)；紫外鑒別：顯色反應(yīng)；比旋度；VD2、VD3區(qū)別雜質(zhì)檢查：麥角甾醇；

前維生素D光照產(chǎn)物；有關(guān)物質(zhì)含量測定：三法AB1CDEVitaminsContents主要講解第五節(jié)維生素E的分析維生素E早在20世紀20年代就被人們發(fā)現(xiàn)，Evans和他的同事在研究生殖過程中發(fā)現(xiàn)，酸敗的豬油可以引起大鼠的不孕癥。是與生育有關(guān)的維生素的總稱1936年分離出結(jié)晶體1938年被瑞士化學(xué)家人工合成維生素E的顯微照片維生素E膠囊維生素E類結(jié)構(gòu)與相對活性名稱R1R2烴鏈相對活性α-生育酚CH3CH3C16H331.0β-生育酚CH3HC16H330.5γ-生育酚HCH3C16H330.2δ-生育酚HHC16H330.1ε-生育酚CH3HC16H270.5維生素E的結(jié)構(gòu)[2R*(4R*,8R*)]-3,4-二氫-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基)-2H-苯并吡喃-6-醇醋酸酯α-生育酚醋酸酯生物效價右旋體：消旋體=1.4：10（天然品）（合成品）維生素E的性質(zhì)性狀:黃色或金黃色粘稠狀透明液體脂溶性:溶于丙酮、乙醇、乙醚或植物油等有機溶劑中水溶性:不溶于水穩(wěn)定性:無氧時對熱、酸穩(wěn)定，對堿不穩(wěn)定，

對氧敏感，遇光可被氧化，色漸變深，UV：乙醇溶液中λmax284nm（一）硝酸反應(yīng)二、鑒別試驗生育酚HNO3（橙紅色）生育紅維生素E在硝酸酸性條件下，水解生成生育酚水解三氯化鐵－聯(lián)吡啶反應(yīng)△[O]（二）生育酚對-生育醌紅色Fe3+[O]λmax=284nmλmin=254nm0.01%無水乙醇中UV法（三）薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）

TLC法（四）VitERf

=0.7-生育酚Rf

=0.5-生育醌Rf

=0.9維生素E合成過程2,3,5-三甲基對二苯酚植醇+α-生育酚α-生育酚醋酸酯

三、雜質(zhì)檢查

三、雜質(zhì)檢查

（一）酸度游離醋酸（二）生育酚

硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黃→灰紫）

利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰

三、雜質(zhì)檢查

1.原理2.試劑問藥典中規(guī)定的維生素E中所含的游離生育酚的限量是多少？計算每ml硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）相當于0.002154g的游離生育酚≤2.15％限量

(三)有關(guān)物質(zhì)的檢查

(四)殘留溶劑：環(huán)己烷的檢查四、含量測定GC法（一）GC特點1、選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強→衍生化。易受樣品蒸氣壓限制載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測器→氫火焰離子化檢測器(FID)內(nèi)標→正三十二烷

n≥500R≥2內(nèi)標法加校正因子定量2、VitE測定的色譜條件內(nèi)標法供試液（樣品+內(nèi)標）內(nèi)標物對照液（對照+內(nèi)標）是樣品中不存在的物質(zhì)與被測組分峰靠近能與各組分完全分離與被測組分的量接近樣品→dl－α－生育酚固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相→甲醇-水（49：1）檢測波長→292nmR＞2.6RSD≤0.8%（二）HPLC法（外標法）（三）熒光分光光度法對照品→dl－α－生育酚在220~400nm波長范圍內(nèi)，以發(fā)射、激發(fā)波長間隔Δλ為40nm掃描同步熒光光譜，測定同步熒光峰的熒光強度信號值。VE=F樣品-F空白F標準-F空白4.0（mg/L)第六節(jié)復(fù)方制劑中多種維生素的分析一、離子對HPLC法測定多種維生素以樟腦磺酸作為離子對試劑，以二