藥學(xué)微生物 項目三 鏡檢技術(shù)2

鏡檢技術(shù)——光學(xué)顯微鏡一、顯微鏡顯微鏡光學(xué)顯微鏡：可見光作為光源電子顯微鏡：電子束作為光源顯微鏡是由一個透鏡或幾個透鏡的組合構(gòu)成的一種光學(xué)儀器，是人類進入原子時代的標志。根據(jù)光源不同，顯微鏡分光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡暗視野顯微鏡相位差顯微鏡視頻顯微鏡熒光顯微鏡體式顯微鏡倒置顯微鏡等投射電子顯微鏡掃描電子顯微鏡放大及分辨本領(lǐng)高于光學(xué)顯微鏡房間里的灰塵蝴蝶的翅膀香煙過濾嘴纖維表面的煙霧粒子打結(jié)的頭發(fā)伽利略改良了詹森父子的顯微鏡英國科學(xué)家胡克自制顯微鏡觀察細小物體，1665年出版《顯微圖譜》引入“細胞”第一架顯微鏡是荷蘭眼鏡工匠詹森父子在1590年前后制成的顯微鏡發(fā)展過程1878年德國物理學(xué)家阿貝現(xiàn)代光學(xué)顯微鏡，放大2000倍左右20世紀30年代第一架電子顯微鏡放大200萬倍左右。一、光學(xué)顯微鏡構(gòu)造顯微鏡機械部分光學(xué)部分目鏡物鏡聚光器反光鏡鏡臂鏡筒轉(zhuǎn)換器調(diào)節(jié)器載物臺鏡座光學(xué)顯微鏡是利用光學(xué)原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，以供人們提取微細結(jié)構(gòu)信息的光學(xué)儀器。1234567810111291、目鏡2、粗準焦螺旋3、細準焦螺旋4、鏡臂5、物鏡6、鏡柱7、鏡座8、鏡筒9、壓片夾10、載物臺11、遮光器12、反光鏡顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)物鏡目鏡聚光器光闌放大微小的物體或微細的結(jié)構(gòu)，形成倒立實像把像投射到目鏡光闌處放大物鏡映來的已放大的倒立實像校正物鏡余留下來的像差將物像投射到一定的位置上，便于放映或照相使來自光源的光線放大，聚成光束，透過載片照明樣品，射入物鏡顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)---物鏡顯微鏡的質(zhì)量主要取決于物鏡/價格昂貴物鏡的種類根據(jù)前透鏡與蓋玻片之間介質(zhì)的不同干燥系物鏡水浸系物鏡油浸系物鏡物鏡與蓋片之間不加任何液體4，10，20，40水浸物鏡刻有“W”或“Water”字樣水浸兩用物鏡刻有“Oil+w”字樣油浸物鏡刻有“oil或oel或imm”和“HI”字樣甘油浸物鏡刻有“Glyc”或Glyz”字樣物鏡鏡頭低倍鏡1一般放大倍數(shù)為10倍，空氣做光學(xué)介質(zhì)高倍鏡2一般放大倍數(shù)為100倍，空氣做光學(xué)介質(zhì)油鏡3香柏油做光學(xué)介質(zhì)，放大倍數(shù)最大物鏡上數(shù)字和符號意義（P25）S40：S--彈簧物鏡；40：放大倍數(shù)。40倍100倍等高倍物鏡工作距離小，成像時離物體表面近，都做成彈簧物鏡。A.0.65或N.A.1.65：物鏡數(shù)值孔徑，孔徑越大分辨率越強。160：鏡筒機械長度（mm）。0.17：所用蓋玻片最大厚度（mm）。目鏡1.目鏡：直插式：長度和放大倍數(shù)成

。2.物鏡：螺旋式：長度和放大倍數(shù)成

。特別說明：放大倍數(shù)和物鏡與蓋玻片之間的距離成

。反比正比反比目鏡與物鏡的比較鏡頭鏡頭長短視野亮度物像大小細胞數(shù)目鏡低倍高倍物鏡低倍高倍長亮小多短暗大少短亮小多長暗大少如圖6-4中①、②表示物鏡長度，③、④表示目鏡長度，⑤、⑥表示物鏡與玻片的距離，獲得最大物像時正確的組合為()A、①③⑤B、②④⑥C、①④⑥D(zhuǎn)、②③⑤D二、工作原理1.幾個重要的分辨率人眼：0.2mm光學(xué)顯微鏡：0.2um電子顯微鏡：0.2nm2.工作原理折射和折射率A凸透鏡的五種成象規(guī)律B顯微鏡的成像原理C油鏡工作原理D2.1凸透鏡的五種成象規(guī)律當物體位于透鏡物方二倍焦距以外時，則在象方二倍焦距以內(nèi)、焦點以外形成縮小的倒立實象；

當物體位于透鏡物方二倍焦距上時，則在象方二倍焦距上形成同樣大小的倒立實象；當物體位于透鏡物方二倍焦距以內(nèi)，焦點以外時，則在象方二倍焦距以外形成放大的倒立實象；

當物體位于透鏡物方焦點上時，則象方不能成象；當物體位于透鏡物方焦點以內(nèi)時，則象方也無象的形成，而在透鏡物方的同側(cè)比物體遠的位置形成放大的直立虛象。2.2油鏡工作原理顯微鏡使用時加入香柏油充填鏡頭和標本之間孔隙，香柏油折射率為1.51，大于空氣折射1.0，因此使通過折射損失的光線減少，視野明亮，便于觀察。顯微鏡成上下顛倒左右相反的像。

標本放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)低倍鏡：放大倍數(shù)小，通光量多，視野亮；高倍鏡：和低倍鏡正好相反2.3放大倍數(shù)該放大倍數(shù)指的是長度或?qū)挾?，而不是面積和體積。82644除以擴大的倍數(shù)（4）除以擴大的倍數(shù)的平方（42）細胞單行排列細胞均勻分布

放大倍數(shù)變大視野中細胞數(shù)目變少有兩種情況：,10x1010x40

擴大4倍2.4相關(guān)概念視野：是指一次所能觀察的被測標本的范圍。鏡像亮度：視野里所看到的像的亮暗程度。它與放大倍數(shù)成反比，即在光源一定的情況下，放大倍數(shù)越大，視野越暗。視野的大小與放大倍數(shù)成反比，即放大倍數(shù)越大視野越小，看到的標本范圍就越小。玻片移，污點移，則污點在玻片上A物鏡換，污點移，則污點在物鏡上B目鏡轉(zhuǎn)，污點移，則污點在目鏡上C2.5注意事項

二、顯微鏡使用(視頻觀看)取鏡和安放打開電源、拿取載玻片觀察（從低倍鏡到高倍鏡到油鏡）整理與存放一、取鏡和安放右手握住鏡臂，左手托住鏡座把顯微鏡放在實驗臺距邊緣5厘米左右處，略偏左，安裝好目鏡、物鏡二、打開電源、放片C1-2滴香柏油D過多會溢出弄臟載物臺E損壞鏡頭A電源和光源是同一個鍵B放片時避免手指接觸中央染色處三、觀察粗調(diào)時注意調(diào)整手勢，不要碰到微調(diào)旋鈕調(diào)到最高處不要繼續(xù)旋轉(zhuǎn)、易毀壞鏡頭、且香柏油進入鏡頭內(nèi)太多難以清洗緩慢旋轉(zhuǎn)注意事項用油鏡觀察后，取下玻片時，應(yīng)先使物鏡離開油鏡后再取出?？捎猛七M器前后左右調(diào)整觀察對象位置。四、整理與存放觀察完畢，先提升鏡筒，取下玻片標本;用紗布將顯微鏡外表擦拭干凈;取下目鏡鏡頭清洗（三步：擦鏡紙擦、二甲苯清洗、擦鏡紙擦），載玻片用擦鏡紙擦拭干凈;將顯微鏡放回原處.歸納小結(jié)：一、取鏡和安放右手握、左手托二、對光（1）低倍物鏡對準通光孔。（2）左眼看，右眼睜。（3）轉(zhuǎn)動反光鏡，看到明亮的視野。三、觀察（1）

標本放在載物臺上，壓住，正對通光孔。（2）

眼看物鏡，鏡筒下降，直到接近標本。（3）

左眼注視目鏡，鏡筒緩緩上升，直到看清物像.鞏固練習(xí)：1.使用顯微鏡時，取鏡要用一手__________，一手__________，。2.對光時，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使____倍鏡對準_________，轉(zhuǎn)動遮光器，使一個較大的________也對準__________。用____眼朝_______里注視，____眼睜開，然后用手調(diào)節(jié)_________，直到看到明亮的視野為止。握鏡臂托住鏡座通光孔光圈通光孔左目鏡右反光鏡低3、轉(zhuǎn)動___準焦螺旋，使鏡筒_______下降，直到物鏡接近玻片標本。4、為什么此時眼睛一定要看著物鏡？因為__________________________5、____時針方向轉(zhuǎn)動____準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動____準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。6、如果物像偏左，你應(yīng)將標本向_____移，才能使物像居中。粗緩慢要防止物鏡碰到玻片標本逆粗細左7.有一臺顯微鏡，它有兩個目鏡和兩個物鏡，目鏡的放大倍數(shù)分別為5×和15×，物鏡的放大倍數(shù)分別為10×和40×。請問，這臺顯微鏡的最大放大倍數(shù)是_______，最小的放大倍數(shù)_______。假如現(xiàn)在觀察一個標本，需要放大150×，應(yīng)該選用的目鏡為__________，物鏡為_______。8.用下列四組鏡頭看同一塊血液的玻片標本，其中可以看到血細胞數(shù)目最多的一組為（）A.目鏡——5×，物鏡——10×B.目鏡——5×，物鏡——40×C.目鏡——10×，物鏡——10×D.目鏡——10×，物鏡——40×600501510A9.在載玻片上寫下一個小小的字母“d”，用顯微鏡觀察時，會看到放大的圖像形狀是()b B.d C.q D.p10.顯微鏡放大倍數(shù)的計算方法是()A.以目鏡倍數(shù)為準B.以物鏡倍數(shù)為準C.目鏡與物鏡倍數(shù)的乘積D.目鏡與物鏡倍數(shù)之和DC12.遮光器上光圈的作用是()A.調(diào)節(jié)焦距B.調(diào)節(jié)光亮度C.調(diào)節(jié)光線角度D.調(diào)節(jié)圖像清晰度13.觀察同一材料的同一部位時，高倍物鏡與低倍物鏡相比，其（）

A、物像小、視野亮，看到的細胞數(shù)目多

B、物像小、視野暗，看到的細胞數(shù)目少

C、物像大、視野暗，看到的細胞數(shù)目少

D、物像大、視野亮，看到的細胞數(shù)目多

14.當顯