酶學(xué)分析技術(shù)二

第五章

酶學(xué)分析技術(shù)P136-176

第一節(jié)血清酶

2一、血清酶的來源

根據(jù)酶的來源及其在血漿中發(fā)揮催化功能的情況，將其分為：P143一般代謝酶組織專一酶血漿特異酶非血漿特異酶外分泌酶細(xì)胞酶一般代謝酶組織專一酶血漿特異酶非血漿特異酶外分泌酶細(xì)胞酶血清酶3

名稱

血漿特異酶

非血漿特異酶

外分泌酶細(xì)胞酶一般代謝酶組織專一酶來源肝消化腺或其它外分泌腺

各組織器官

（無器官專一性）

肝

（有器官專一性）

種類凝血酶原、Ⅹ因子、Ⅻ因子、纖溶酶原、ChE、CER、LCAT、脂蛋白脂肪酶等

胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶、ACP、ALP等LDH、AST、ALT、CK、MDH等

OCT等

4二、血清酶的去路酶蛋白在血管內(nèi)的失活與降解（主要代謝去路）血清酶的半壽期（T1/2)：酶失活至原來活性一半所需時間。有助于了解同一疾病不同酶升高持續(xù)時間的差異。

只有血清酶的來源與去路保持平衡，才能維持酶活性保持相對恒定。但一些病理情況（合成異常，釋放增加，排出異常）往往促使這種平衡被打破，導(dǎo)致血清酶活性的變化。P1435三、血清酶變化的病理機制（一）合成異常合成減少合成增多肝損害導(dǎo)致合成酶的能力受損（ChE、LCAT）酶基因變異引起酶合成減少（銅氧化酶）增生性疾?。ü趋兰膊。珹LP)惡性腫瘤（前列腺癌，ACP)酶的誘導(dǎo)作用（乙醇，γ-GT）P1446（二）釋放增加（大多數(shù)血清酶增高的主要機制）細(xì)胞內(nèi)外酶濃度的差異

對于非血漿特異酶，細(xì)胞內(nèi)外濃度差可在千倍以上，只要有少量細(xì)胞壞死或病變，血中酶濃度明顯升高。對血漿特異酶，細(xì)胞病變很少引起血中酶濃度明顯升高。

線粒體酶不易從細(xì)胞中釋出，如ASTm的檢測往往反映肝細(xì)胞的損傷程度，且是AMI中最后升高的酶，用于判斷預(yù)后；有些酶在細(xì)胞內(nèi)與結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合，較難釋放。P1457（三）排出異常腎功能減退，血清AMY活性升高可能因酶排泄障礙而在血液中滯留。膽道梗阻，血清ALP升高的原因是梗阻區(qū)ALP合成加強，ALP排泄受阻而逆流入血。大多數(shù)酶，不存在以上的清除機制。P1458四、血清酶的生理差異性別多數(shù)差距不大，少數(shù)酶如CK,ALP,GGT,等男性大于女性年齡：ALP新生兒高于成人，1-5歲增至成人2-3倍，然后逐漸下降，10-15歲明顯升高，為成人3-5倍，20歲降至成人值。進(jìn)食：

血清中大多數(shù)酶不受進(jìn)食影響，故測定酶活性不一定需要空腹采血。但高脂，高糖飲食后ALP活性增高，酗酒GGT增高。禁食數(shù)天后AMY下降。運動:激烈肌肉運動后，CK,LD,AST,ALD等活性升高。妊娠：7-9個月，CK為月經(jīng)初潮前一半分娩因子宮收縮，CK活性增高。

P1459標(biāo)本的采集、運輸與保存溶血：細(xì)胞內(nèi)酶而言，細(xì)胞內(nèi)外濃度差異大；所以應(yīng)及時進(jìn)行分離，靜脈采血后應(yīng)在1～2h內(nèi)分離血清。抗凝劑：利用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA抗凝的血漿一般不用作酶活性測定；肝素對ALT、AST、CK、LD、ACP檢測均無影響，可用于急診；臨床多用血清為首選測定標(biāo)本。溫度：大部分酶在低溫中比較穩(wěn)定，一般在血清分離當(dāng)天測定，否則應(yīng)放冰箱冷藏；通常在0～4°C下使用、處理及保存，除了一些冷變性的酶；液氮可作為酶學(xué)測定時血清標(biāo)本及質(zhì)控長期保存的方法。P155

10

同工酶及其亞型測定11一、概念同工酶（isoenzyme）

同一種屬中由不同基因或等位基因所編碼的多肽鏈單體、純聚體或雜化體，具有相同的催化功能，但其分子組成、空間構(gòu)象、理化性質(zhì)、生物學(xué)性質(zhì)以及器官分布和細(xì)胞內(nèi)定位不同的一類酶。亞型（isoform）

即指基因在編碼過程中由于翻譯后修飾的差異所形成的多種形式的一類酶，往往在基因編碼產(chǎn)物從細(xì)胞內(nèi)釋入血漿時因肽酶作用降解而形成。P161

12二、分析方法

臨床同工酶的分析可分為兩步首先精確地分離出某酶的各同工酶組分測定酶的總活性和各同工酶或亞型組分的活性P162

13二、分析方法（一）電泳法原理使用最為廣泛簡便、快速、分離效果好、不破壞酶的天然構(gòu)象可分為：乙酸纖維素薄膜電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳及毛細(xì)管電泳測定步驟為：區(qū)帶分離、活性顯色和檢測結(jié)果方法

同工酶氨基酸組成不同（一級結(jié)構(gòu)不同），pI不同，電泳遷移率也就不同，電泳可將其分開。P163

14（二）色譜法

（三）免疫分析法（四）動力學(xué)分析法（五）蛋白酶水解法P16415三、同工酶檢測意義提高酶診斷的特異性提高診斷的靈敏度對某些疾病的預(yù)后有評價價值

有些同工酶有明顯的組織分布和細(xì)胞內(nèi)定位差異

有些同工酶的變化可在總酶變化之前發(fā)生線粒體酶的測定16

臨床常用血清酶分析17一、轉(zhuǎn)氨酶（Aminotransferases

）及其同工酶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanineaminotransferases，ALT)/谷丙轉(zhuǎn)氨酶GPT天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartateaminotransferases，AST/谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT1.催化反應(yīng)L-丙氨酸＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸L-天冬氨酸＋α-酮戊二酸α-草酰乙酸＋L-谷氨酸ALTAST

兩種酶均需要磷酸吡哆醛（VitB6）為輔基，不含磷酸吡哆醛的酶蛋白為脫輔基酶蛋白，無催化活性。P166

182.組織分布

ALT大量存在于肝組織，其次為腎、心、骨骼肌等。其有兩種活性同工酶，α(ALTs)、β(ALTm)，分別存在細(xì)胞質(zhì)及線粒體中。肝細(xì)胞中ALT大多存在細(xì)胞質(zhì)，少量在線粒體，肝細(xì)胞壞死時血清中以ALTs為主。

AST存在多種器官，按含量多少為心、肝、骨骼肌和腎。其有兩種同工酶ASTs、ASTm，分別存在細(xì)胞質(zhì)及線粒體中。細(xì)胞輕度損傷ASTs顯著升高，而嚴(yán)重?fù)p傷時ASTm

大量出現(xiàn)于血清中。血中AST升高多來自心臟或肝臟損傷。P166193.標(biāo)本

溶血標(biāo)本不能用于檢測宜用血清，4℃

冰箱中可貯存1星期，活性無明顯改變。4.臨床意義

ALT是反映肝損傷的一個靈敏指標(biāo)

急性肝炎早期升高，ALT>AST；急性肝炎恢復(fù)指標(biāo)

Deritis比值可用于肝炎診斷、鑒別診斷及判斷轉(zhuǎn)歸酶膽分離是肝細(xì)胞壞死先兆P16720

AST主要用于肝臟疾病的診斷AMI發(fā)病6-8h即升高，48-60h達(dá)高峰，4-5d恢復(fù)正常。由于AST在AMI時升高遲于CK，恢復(fù)早于LD，故目前診斷AMI價值不大。急性肝炎，AST升高程度不及ALT；慢性肝炎，特別肝硬化、慢性活動性肝炎時，AST升高程度超過ALT。P167

21二、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-glutamyltranspeptid,γ-GT/GGT）1.催化反應(yīng)又稱：γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GTP/GGTP)

一種含巰基的線粒體酶，可催化γ-谷氨?；鶑墓入赘孰模℅SH）或其它含γ-谷氨?；衔镏修D(zhuǎn)移至另一肽或氨基酸分子上。

GSH＋氨基酸

γ-谷氨酰氨基酸＋半胱氨酰甘氨酸GGTP167

222.組織分布

腎臟中含量最多，其次為胰、肺、肝等。血清中的GGT主要來自肝膽。3.標(biāo)本

GGT較穩(wěn)定，室溫下可放置2d，

4℃可存放1w，-20℃可儲存1y；RBC中幾乎無GGT，因此溶血標(biāo)本可以檢測。P167234.臨床意義

有助肝膽疾病的鑒別診斷

膽道疾病，GGT陽性率高，而且升高明顯，可高達(dá)5-30ULN，肝實質(zhì)疾病是GGT一般只是中度升高，可達(dá)2-5ULN

與ALP聯(lián)合進(jìn)行肝臟疾病檢測

若ALP升高而GGT正常，則完全排除ALP的肝來源，若ALP和GGT都增加，則應(yīng)先排除肝外引起GGT增加的原因，一旦排除，則GGT增高為肝病所致。(1)肝膽疾病檢出陽性率最高的酶P168

244.臨床意義

(2)用于判斷惡性腫瘤有無肝轉(zhuǎn)移(3)乙醇、巴比妥類藥物等可誘導(dǎo)GGT的升高。P168

25三、肌酸激酶及其同工酶和亞型肌酸激酶（creatinekinase，CK）1.催化反應(yīng)

CK催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之間的磷酸轉(zhuǎn)移的可逆性反應(yīng)，所產(chǎn)生的磷酸肌酸含高能磷酸鍵，是肌肉收縮時能量的直接來源。

磷酸肌酸＋ADP肌酸＋ATPCKP168262.組織分布

廣泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和腦。CK由兩種不同亞基（M，B）組成的二聚體，細(xì)胞質(zhì)中存在三種同工酶：CK-BB(CK1)、CK-MB(CK2)、CK-MM(CK3)，線粒體中存在CK-Mt(CK4)，其電泳速率最慢。

CK同工酶又可分為不同亞型，CK-MM有三種亞型，CK-MM1，CK-MM2，CK-MM3，電泳速率依次減慢；CK-MB有CK-MB2和CK-MB1兩種亞型。3.標(biāo)本

不得用溶血標(biāo)本，RBC中含有AK，可干擾測定，引起測定值偏高；測定樣品宜用血清或肝素抗凝血漿，其它抗凝劑都抑制CK活性。P168

274.臨床意義

CK及其同工酶和亞型是目前臨床上測定次數(shù)最多的酶之一，主要用于心肌、骨骼肌和腦疾患的診斷。(1)AMI的早期診斷總CK在AMI診斷中意義不大CK-MB為診斷AMI的金指標(biāo)CK-MM3/CK-MM1>1.0為診斷AMI的標(biāo)準(zhǔn)（排除急性骨骼肌損傷）CK-MB2>1.9U/L或CK-MB2/CK-MB1>1.5為診斷AMI的標(biāo)準(zhǔn)之一(2)全身疾病特別是肌肉疾病時，CK極度升高P169

28四、乳酸脫氫酶及其同工酶和亞型乳酸脫氫酶（lactatedehydrogenase，LD/LDH）1.催化反應(yīng)

LD催化乳酸氧化成丙酮酸，同時將氫轉(zhuǎn)移給輔酶而成為NADH，依條件不同而有可逆性。L-乳酸＋NAD+

丙酮酸＋NADH＋H+pH8.8～9.8Ph7.4～7.8P169

292.組織分布

LD是一種含鋅的糖酵解酶，廣泛存在于人體各組織中，以肝、心肌、腎、肌肉、RBC含量最高。

LD是由兩種不同亞基（M和H）組成的四聚體，形成5種結(jié)構(gòu)不同的同工酶，即LD1(H4)，LD2(H3M)，LD3(H2M2)，LD4(HM3)和LD5(M4)。

1.以LD1為主，主要在心肌，可占總LD活性50％以上，也存在于RBC內(nèi)；

2.以LD5為主，以橫紋肌為代表，肝臟中也有；

3.以LD3為主，存在于脾肺。一般成年人血中LD同工酶存在如下規(guī)律：LD2>LD1>LD3>LD4>LD5，部分正常兒童血中可見LD1>LD2。303.標(biāo)本

一般用血清，用血漿需離心去除血小板（血小板中含有大量的LD），采血后迅速分離血清；因RBC中LD含量比血清高100倍以上，不宜用溶血標(biāo)本。

LD4、LD5宜冷變性，不應(yīng)放在冰箱中，25℃放2-3d，LD活性變化不大。314.臨床意義

亞急性心肌梗死診斷有一定價值，但其特異性差；(1)診斷心臟疾病

心肌梗死和心肌炎時以LD1和LD2升高為主，大多數(shù)AMI患者血中會出現(xiàn)“反轉(zhuǎn)比率”，即LD1>LD2；(2)診斷肝臟疾病

肝細(xì)胞損傷時常出現(xiàn)LD5>LD4;

急性肝炎時LD1LD2相對下降，LD5升高；慢性肝炎時LD5升高，且LD1<LD3；肝硬化時為LD2下降和LD5升高；肝癌時LD5升高，但LD1>LD3；(3)診斷骨骼肌疾病

骨骼肌損傷時常出現(xiàn)LD5>LD4;P170

32五、堿性磷酸酶及其同工酶堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP/AKP）1.催化反應(yīng)

一種含鋅的糖蛋白，在堿性環(huán)境中（pH10.0）可以水解各種天然及人工合成的磷酸單酯化合物。2.組織分布

ALP廣泛存在于各組織器官中，其含量以肝臟為最多，其次為腎、胎盤、小腸和骨骼等。血清中的ALP主要來自肝臟和骨骼。

生長期兒童血清內(nèi)ALP主要來自成骨母細(xì)胞和生長中的骨軟骨細(xì)胞，少量來自肝。P170

333.標(biāo)本

空腹采血，避免脂肪餐的影響；樣品用血清，不能用明顯溶血標(biāo)本；在室溫或冰箱放置，活性逐漸升高，可增加5-10％，應(yīng)在采血當(dāng)日測定。4.臨床意義

很多骨骼疾病如變形性骨炎等患者血中ALP升高，我國常用于早期診斷佝僂病和軟骨病。(1)診斷骨骼性疾病

(2)診斷肝膽系統(tǒng)疾病，尤其是黃疸

急性肝炎時ALP增高達(dá)2-5ULN，肝硬化、膽石癥和腫瘤引起的膽汁淤積，ALP增高達(dá)5-20ULN。90％以上肝外膽道阻塞患者血清ALP升高，升高程度和阻塞程度、病變程度成正比。P170

34六、酸性磷酸酶及其同工酶酸性磷酸酶（acidphosphatase，ACP）1.催化反應(yīng)

作用類似ALP的磷酸酶（最適pH在7.0以下）2.組織分布

ACP存在于人體不同組織，如前列腺、紅細(xì)胞、血小板、腎臟、肝臟、脾臟、胃、肌肉及骨髓中，以前列腺含量最多。正常男性血清中ACP約有1/3-1/2來自前列腺。3.標(biāo)本

血清或肝素抗凝血漿，37℃

或偏堿時滅活很快，pH降至6.5以下，酶比較穩(wěn)定。P171

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臨床意義

主要用于診斷前列腺癌，血清ACP顯著上升，轉(zhuǎn)移性癌患者可達(dá)40-50ULN。由于ACP不穩(wěn)定，測定困難，目前正被其它前列腺標(biāo)志物如PSA所取代。P171

36七、淀粉酶及其同工酶淀粉酶（amylase，AMY/AMS）1.催化反應(yīng)

將多種糖化合物，如淀粉、肝糖原等水解成糊精、麥芽糖和少量葡萄糖等產(chǎn)物的一組酶。2.組織分布

人體胰腺含AMY最多，唾液腺也分泌大量AMY入口腔，還見于卵巢、肺、睪丸、橫紋肌和脂肪組織中。

AMY是一種需鈣金屬酶，其最適pH在6.5-7.5之間，鹵素和其它陰離子有激活作用。P172

373.標(biāo)本

多用血清或肝素抗凝血漿，其它抗凝劑都有抑制作用，不宜用去鈣血漿測定AMY。4.臨床意義(1)評價胰腺外分泌功能的一種輔助診斷指標(biāo)。

(2)急性胰腺炎早期檢測血AMY，在后期測定尿AMY更有價值。

(3)AMY診斷胰腺炎其增幅與病情不成比例時，常預(yù)示壞死性胰腺炎。P172

38八、脂肪酶脂肪酶（