消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型

2023/2/2王大方1第八章

消化系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型Theanimalmodelsofdigestivessystemdiseases第一頁(yè)，共94頁(yè)。講授內(nèi)容胃炎動(dòng)物模型消化性潰瘍模型病毒性肝炎模型〔乙型肝炎〕脂肪肝、肝硬化模型胰腺炎模型2023/2/2王大方2第二頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方3第一節(jié)

急性胃炎動(dòng)物模型

第三頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方4Gastritis胃黏膜層的炎癥〔上皮細(xì)胞、固有層、黏膜肌〕上皮細(xì)胞固有層黏膜肌急性固有層中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)糜爛出血慢性淺表性：淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)萎縮性：炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，固有層腺

體減少，細(xì)胞增生損傷與修復(fù)交替進(jìn)行，病程遷延第四頁(yè)，共94頁(yè)。胃炎模型的種類2023/2/2王大方51、HP法2、藥物、乙醇、應(yīng)激法3、非甾體抗炎藥法4、復(fù)合法5、酸制劑法第五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方6HP法HelicobacterpyloriSpiral-shapedGram-negative,oxidaseandcatalase-positivemotilebacteriumwith4-6flagella(Thrusterandanchor)Microaerophilic,i.e.itrequiresoxygenbutatlowerlevelsthanthosecontainedintheatmosphere(5-8%)Withitsflagellaanditsspiralshape,thebacteriumdrillsintothemucuslayerofthestomach,andcaneitherbefoundsuspendedinthegastricmucosaorattachedtoepithelialcellsBarryJ.MarshallandJ.RobinWarrengottheNobelPrizein20052005諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，Warren和Marshall第六頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方7Producesadhesinswhichbindtomembrane-

associatedlipidsandcarbohydratesandhelpits

adhesiontoepithelialcellsBreaksdownurea(NH2CONH2)toNH3andHCO-3Stomachacidity

ChassaingB.Gastroenterology,,140(6):1720–8第七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方8實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠〔18-22g〕，蒙古沙鼠〔55-60g〕，仔犬、仔豬操作方法HP標(biāo)準(zhǔn)菌株灌胃〔109-1010CFU/ml〕法實(shí)驗(yàn)前12小時(shí)禁食禁水實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)，碳酸氫鈉灌胃0.5ml/只/次每?jī)商煲淮巍哺籼旃辔浮?周時(shí)模型成功率90%保證HP活性及濃度第八頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方9INFLAMMATIONGASTRITISMAP3KINASESmuropeptideNaumannM,TrendsinMicrobiology,2004,12(1):29–36H.Pyloriinducesinflammation第九頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方10體重300g左右雄性Wistar大鼠。酸制劑法急性胃炎動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物第十頁(yè)，共94頁(yè)。大鼠禁食24h，在清醒狀態(tài)下，用下述試劑或物質(zhì)灌胃：〔1〕水楊酸制劑〔如20mmol/L阿司匹林或水楊酸溶液〕按100mg/kg體重灌胃；〔2〕10mmol/L的醋酸；〔3〕不同濃度的鹽酸〔1，10，100mmol/L〕；〔4〕同種動(dòng)物膽汁；〔5〕2mmol/L的牛磺膽酸；〔6〕15%的乙醇；〔2〕-〔6〕可單獨(dú)或幾種合用〔2ml左右〕灌胃；急性胃炎動(dòng)物模型操作方法第十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方124h后處死動(dòng)物，剖檢可見(jiàn)胃內(nèi)發(fā)生急性彌漫性炎癥改變。胃黏膜外表有淺表腐敗、出血，粘膜層內(nèi)見(jiàn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。急性胃炎動(dòng)物模型結(jié)果病變第十二頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方13第十三頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方14觀察指標(biāo)：？組織：HE，免疫熒光，干濕重比等NOS，PGE2等PCR：特定基因或炎癥因子Western：特定激酶或信號(hào)分子，特定基因等……第十四頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方15第二節(jié)

急性胃潰瘍動(dòng)物模型

第十五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方16潰瘍病的病因致潰瘍因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾體抗炎藥不合理應(yīng)用、幽門(mén)螺桿菌感染等。防御因素：粘液-碳酸氫鹽屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮細(xì)胞的更新、表皮生長(zhǎng)因子和內(nèi)生性前列腺素等。潰瘍的形成主要由于防御因素和致潰瘍因素的平衡失調(diào)所致。第十六頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方17①應(yīng)激法②幽門(mén)結(jié)扎法③藥物法④醋酸法常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型

在抗?jié)兯幬锼幮W(xué)試驗(yàn)中，應(yīng)激法、幽門(mén)結(jié)扎法和醋酸法制備的胃潰瘍模型為必做實(shí)驗(yàn)，利血平法和乙醇法可任選其一。乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松……第十七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方18①應(yīng)激法②幽門(mén)結(jié)扎法③藥物法④醋酸法常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型治療性給藥——醋酸法復(fù)制的模型預(yù)防性給藥——其他模型乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松……第十八頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方19①應(yīng)激法②幽門(mén)結(jié)扎法③藥物法④醋酸法常用的方法急性胃潰瘍動(dòng)物模型陽(yáng)性對(duì)照藥：H2受體拮抗藥——西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等加強(qiáng)胃黏膜防御功能——甘珀酸，果膠鉍，硫糖鋁乙醇組胺促胃液素腎上腺類固醇水楊酸鹽血清素利血平保泰松……第十九頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方20研究抗胃潰瘍藥物

胃黏膜形態(tài)觀察胃分泌試驗(yàn)胃黏膜血流量測(cè)量胃粘液測(cè)定抗炎鎮(zhèn)痛試驗(yàn)抑制幽門(mén)螺桿菌試驗(yàn)等

第二十頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方21幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型

第二十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方22

幽門(mén)結(jié)扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，損傷胃黏膜造成胃潰瘍。

成年大鼠，雄雌均可。幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型造模機(jī)制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物第二十二頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方231.給藥3天。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食(24h)不禁水。2.自胸骨劍突下沿腹中線切開(kāi)腹壁，切口約2~3cm。在左側(cè)肋緣部位用手指輕輕上推暴露胃。3.在胃幽門(mén)與十二指腸連接處用結(jié)扎線將幽門(mén)結(jié)扎，注意勿將鄰近的其他器官、血管結(jié)扎。同時(shí)經(jīng)十二指腸給予受試藥?？p合腹壁切口，用紗布包扎切口。幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型操作方法第二十三頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方244.幽門(mén)結(jié)扎后，停頓供水供食，術(shù)后18h處死大鼠，取胃固定、剖檢。5.沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，洗凈胃內(nèi)容物，將胃壁展開(kāi)，胃黏膜面向上用大頭釘固定在蠟板上。6.用肉眼或放大鏡觀察胃黏膜面，記錄每只動(dòng)物產(chǎn)生的潰瘍數(shù)、潰瘍程度、潰瘍面積〔或潰瘍指數(shù)〕及病變的情況。幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型第二十四頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方25病變程度的評(píng)價(jià)1—潰瘍面積

通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑和橫徑S=π〔d1/2〕〔d2/2〕式中S為潰瘍面積，d1為通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑，d2為通過(guò)潰瘍中心量取的最大橫徑。

幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型第二十五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方26病變程度的評(píng)價(jià)2—潰瘍指數(shù)

可計(jì)數(shù)前胃部潰瘍面積，以其總和作為潰瘍指數(shù)。幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型第二十六頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方27病變程度的評(píng)價(jià)3—潰瘍程度〔Okabe法〕

在解剖顯微鏡下測(cè)量潰瘍面積，將每只鼠潰瘍面積的總合分為5個(gè)等級(jí)作為潰瘍指數(shù)：潰瘍面積(mm2)：

1-1213-2526-3738-50≥50mm2或穿孔潰瘍指數(shù):1級(jí)2級(jí)3級(jí)4級(jí)5級(jí)幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型第二十七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方28

模型組潰瘍指數(shù)－給藥組潰瘍指數(shù)潰瘍抑制百分率＝×100%

模型組潰瘍指數(shù)

發(fā)生潰瘍的動(dòng)物數(shù)潰瘍發(fā)生百分率＝×100%

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)病變程度的評(píng)價(jià)3—潰瘍程度〔Okabe法〕幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型第二十八頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方29形成的潰瘍主要發(fā)生在對(duì)胃液抵抗力較弱的前胃部〔瘤胃〕，多為圓形或橢圓形。但病變較表淺，屬于胃黏膜急性出血性腐敗，與人類胃潰瘍的典型病變差距較大。結(jié)果幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型第二十九頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方301.該模型是Shay等創(chuàng)立的模型，方法簡(jiǎn)單，潰瘍發(fā)生快，發(fā)生率達(dá)97%，主要用于觀察藥物對(duì)潰瘍形成的預(yù)防作用。幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型模型評(píng)價(jià)與本卷須知2.原法規(guī)定大鼠禁食48~72h。一般經(jīng)歷是：體重小于180g，禁食24~48h，這樣動(dòng)物可以耐受手術(shù)；體重超過(guò)180g，禁食48~72h，可進(jìn)步潰瘍發(fā)生率。3.對(duì)籠具的要求。第三十頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方314.術(shù)中要求。幽門(mén)結(jié)扎法胃潰瘍模型模型評(píng)價(jià)與本卷須知5.觀察藥物對(duì)潰瘍的影響時(shí)，動(dòng)物應(yīng)預(yù)先給藥或同時(shí)給藥，假設(shè)粗制劑可采用灌胃給藥，應(yīng)確認(rèn)胃內(nèi)已排空前方能結(jié)扎幽門(mén)。粗制劑可在幽門(mén)結(jié)扎的同時(shí)采用十二指腸內(nèi)注入給藥較好。6.陽(yáng)性對(duì)照藥:灌胃給予西咪替丁〔甲氰咪胍〕體重雷尼替丁體重第三十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方32大鼠胃的解剖及幽門(mén)結(jié)扎法所致胃潰瘍圖第三十二頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方33第三十三頁(yè)，共94頁(yè)。大鼠慢性胃潰瘍模型第三十四頁(yè)，共94頁(yè)。第三十五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方36第三節(jié)

急性和慢性肝損傷動(dòng)物模型

第三十六頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方37常用的肝損傷物質(zhì)四氯化碳D-半乳糖胺硫代乙酰胺刀豆蛋白A

第三十七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方38一、四氯化碳急性肝損傷模型第三十八頁(yè)，共94頁(yè)。CCl4在肝內(nèi)經(jīng)NADPH和肝微粒體細(xì)胞色素P450混合功能氧化酶的作用，生成活潑的三氯甲基自由基〔CCl3?〕和氯自由基〔Cl3?〕。這些自由基能與細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜上大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，引起富含不飽和脂肪酸的生物膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致膜構(gòu)造和功能完好性的破壞，肝細(xì)胞損傷壞死；三氯甲基自由基還能抑制細(xì)胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性，使Ca2+內(nèi)流增加，從而引起細(xì)胞中毒死亡；三氯甲基自由基能與蛋白質(zhì)形成共價(jià)鍵，損害線粒體使NADH及ATP在肝內(nèi)生成減少，脂肪酸氧化受抑制，影響肝臟能量生成障礙，并使三酰甘油和脂肪酸在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積。造模機(jī)制CCl4急性肝損傷模型第三十九頁(yè)，共94頁(yè)。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物CCl4致急性肝損傷所需劑量和用法動(dòng)物(CCl4)劑量用法形成肝損傷

(ml/kg體重)所需時(shí)間

0.5%10頸背部皮下注射1次約24h小鼠0.1%10腹腔注射1次約24h0.2%10于1、4、7日各灌胃1次末次后12~24h25%5皮下注射1次1~8d

大鼠25%5皮下注射2次,間隔4日1~8d

15%1每隔3日灌胃1次，共3次末次后16h

家兔50%0.5皮下注射1次，共3次

4~7d

33%1.5隔日灌胃1次，共2次7d

CCl4急性肝損傷模型第四十頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方411.根據(jù)所用CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同；2.一般在給予CCl4后16~24h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶〔ALT〕和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶〔AST〕活性升高，并能反映肝損傷的程度；3.形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。結(jié)果CCl4急性肝損傷模型第四十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方421.根據(jù)所用CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同；2.一般在給予CCl4后16~24h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶〔ALT〕和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶〔AST〕活性升高，并能反映肝損傷的程度；3.形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。結(jié)果CCl4急性肝損傷模型第四十二頁(yè)，共94頁(yè)。第四十三頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方44第四十四頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方45CCl4急性肝損傷模型第四十五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方461．CCl4肝損傷模型是最常用的急性肝損傷模型，造模方法簡(jiǎn)單，成功率高，重復(fù)性好，價(jià)格低廉。2．CCl4劑量不宜過(guò)大，以免造成動(dòng)物中毒死亡。3．CCl4是無(wú)色澄清的有毒液體，難溶于水，一般用花生油、橄欖油、豆油等植物油混合成所需濃度。模型評(píng)價(jià)與本卷須知CCl4急性肝損傷模型第四十六頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方47四氯化碳的配制

CCl4常配成乳劑使用，如需配成10%乳劑，可取5ml植物油和5g阿拉伯膠，放在乳缽中研勻，再加純CCl410ml研勻，然后加蒸餾水10～15ml調(diào)成乳狀，最后加蒸餾水使體積至100ml，用前搖勻。第四十七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方484．用CCl4復(fù)制肝損傷模型的主要缺點(diǎn)是，不同動(dòng)物個(gè)體肝損傷的程度差異較大。小鼠承受CCl4后肝臟病理學(xué)改變與血清ALT等生化指標(biāo)改變的相關(guān)性不如大鼠好。5．CCl4可從呼吸道、皮膚吸收，對(duì)人體有毒性，注意防護(hù)。模型評(píng)價(jià)與本卷須知CCl4急性肝損傷模型第四十八頁(yè)，共94頁(yè)。病毒性肝炎模型〔HBV〕2023/2/2王大方49全球因乙肝死亡100萬(wàn)/年，居第7位。我國(guó)30萬(wàn)第四十九頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方50第五十頁(yè)，共94頁(yè)。乙肝病毒〔HBV〕的特性

2023/2/2王大方51〔1〕HBV具有頑強(qiáng)的抵抗力：對(duì)熱、對(duì)低溫、對(duì)枯燥、對(duì)紫外線及一般濃度的化學(xué)消毒劑，都能耐受；在零下20度時(shí)可存活20年；在37度時(shí)可存活7天?！?〕HBV的嗜肝性：PreS1和S2特異識(shí)別肝細(xì)胞外表受體〔3〕嚴(yán)格的種屬特性：到目前為止，只有人、黑猩猩、長(zhǎng)臂猿、狒狒對(duì)HBV易于感染第五十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方52structuralmaintenanceofchromosomes，Smc5/6DecorsièreAetal.Nature.2016Mar17;531(7594):386-9.HepatitisBvirusencodestheregulatoryHBxproteinwhoseprimaryroleistopromotetranscriptionoftheviralgenome,whichpersistsasanextrachromosomalDNAcircleininfectedcells.第五十二頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方53目前唯一的HBV自然感染動(dòng)物模型HLA-I分子和HBV的CTL多肽表位與人類有重疊，可用于研究HBV感染的CTL應(yīng)答價(jià)格昂貴，存在倫理學(xué)限制大猩猩（Gorilla）第五十三頁(yè)，共94頁(yè)。樹(shù)鼩〔Treeshrew/Tupaiabelangeri〕2023/2/2王大方54與松鼠大小相近，與靈長(zhǎng)類動(dòng)物親緣關(guān)系較近可被HBV感染，但感染率極低。將HBsAg和HBeAg陽(yáng)性患者血清經(jīng)股靜脈接種。幼年和圍生期樹(shù)鼩感染率較高本錢(qián)低、操作方便、倫理限制弱年樹(shù)鼩肝細(xì)胞發(fā)現(xiàn)有HBV和丁肝病毒的共受體：鈉離子-?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)多肽〔sodiumtaurocholatecotransportingpeptide，NTCP〕YanH,.JVirol.Jul;87(14):7977-91.第五十四頁(yè)，共94頁(yè)。鴨〔Duck〕2023/2/2王大方55采用肌肉注射、靜脈注射、腹腔甚至肝內(nèi)注射、鴨胚靜脈注射等方式將DHBV注射到鴨體內(nèi)，感染率比較高?？捎脕?lái)研究HBV外表受體、病毒復(fù)制和基因突變；研究病毒持續(xù)存在和去除機(jī)制，藥物挑選等本錢(qián)低、操作方便、倫理限制弱，與人的親源關(guān)系遠(yuǎn)，研究成果的實(shí)際轉(zhuǎn)化受限ZhangYY,FrontMed.Jun;8(2):129-34.MasonWS.ColdSpringHarbPerspectMed.Apr1;5(4).第五十五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方56旱獺〔Woodchuck〕第五十六頁(yè)，共94頁(yè)。小鼠〔mouse〕2023/2/2王大方57采用高壓水動(dòng)力法向小鼠尾靜脈注射HBV質(zhì)粒DNA，合適研究HBV變異株的生物學(xué)特性研究針對(duì)HBV的免疫應(yīng)答，免疫調(diào)節(jié)、天然免疫等；建立可持續(xù)感染模型++IannaconeM,ColdSpringHarbPerspectMed.Aug20;5(11).第五十七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方58第四節(jié)

脂肪肝和肝硬化動(dòng)物模型第五十八頁(yè)，共94頁(yè)。脂肪肝模型2023/2/2王大方59NAFLD〔nonalcoholicfattyliverdisease〕特殊品系動(dòng)物1、ADK〔－/－〕小鼠：

2002年美國(guó)蘇黎士大學(xué)Boison所發(fā)現(xiàn)建立。胚胎期發(fā)育正常，于出生后4天即發(fā)生肝細(xì)胞小泡性脂肪變性，并于14天內(nèi)死于脂肪肝。2、FLS小鼠模型：1999年日本Soga等利用近親繁殖的方法建立。自發(fā)形成脂肪肝，不伴有肥胖和糖尿病。3、JVS小鼠模型：1996年KuwajimaM等發(fā)現(xiàn)幼年內(nèi)臟脂肪變小鼠〔juvenilevisceralsteatosismouse，JVS小鼠〕存在原發(fā)性肉毒堿缺乏，使脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)入線粒體的過(guò)程受阻，脂肪酸在肝細(xì)胞漿內(nèi)積聚。4、ArKO小鼠：Australia亨利醫(yī)學(xué)研究院Robert等建立。芳香酶Cyp9〔摧化C19類固醇轉(zhuǎn)化為C18雌激素〕基因敲除小鼠不能合成內(nèi)源性雌激素，無(wú)論雌性或雄性鼠，腹腔內(nèi)脂肪細(xì)胞的體積和數(shù)量增加。ArKO小鼠肝臟具有特征性的大量脂肪滴積累。

第五十九頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方605、BHE大鼠：BerdanierCD1991年發(fā)現(xiàn)的一種生后300天自發(fā)形成糖耐量異常，導(dǎo)致高脂血癥、脂肪肝，但無(wú)肥胖的特殊種系。6、PBB/Ld小鼠：HuntCE1976年發(fā)現(xiàn)，隨成熟期的成長(zhǎng)自發(fā)形成特征性的脂肪組織細(xì)胞構(gòu)造增加、血清免疫反響性胰島素增加、糖耐量減低、脂肪肝和高脂血癥。為研究成年起始肥胖的一個(gè)代表小鼠品系。7、Zucker大鼠〔fa/farat〕和ob/ob小鼠〔ob/obmice〕：遺傳性食欲抑制激素leptin的基因缺乏鼠，可發(fā)生高胰島素血癥、胰島素抵抗而自發(fā)形成糖尿病、肥胖和脂肪肝。第六十頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方61肝纖維化肝纖維化是指各種致肝臟損傷因素長(zhǎng)期反復(fù)作用于肝臟，引起肝細(xì)胞變性、壞死和炎癥，在修復(fù)過(guò)程中導(dǎo)致ECM異常增多和過(guò)度沉積的病理過(guò)程。肝纖維化的形成，主要是由于肝星狀細(xì)胞激活，ECM成分生成過(guò)多，降解相對(duì)缺乏，膠原等ECM在肝內(nèi)大量沉積所致。第六十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方62病因與分類病毒性肝纖維化血吸蟲(chóng)性肝纖維化酒精性肝纖維化膽汁性肝纖維化代謝性肝纖維化中毒性肝纖維化營(yíng)養(yǎng)不良性肝纖維化心源性肝纖維化四氯化碳誘發(fā)第六十二頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方63肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？第六十三頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方64肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？

肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死

肝內(nèi)纖維組織增生

肝細(xì)胞結(jié)節(jié)狀再生這三種病變反復(fù)交織進(jìn)展肝內(nèi)血循環(huán)改建假小葉形成肝硬化第六十四頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方65四氯化碳肝纖維化肝硬化模型假如長(zhǎng)期反復(fù)屢次給予CCl4，可導(dǎo)致肝內(nèi)纖維增生，逐漸形成肝硬化。

造模機(jī)制第六十五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方661．皮下注射40%~50%CCl4植物油溶液，首次5ml/kg體重，以后2ml/kg體重，每周2次，共10周。動(dòng)物自由飲水進(jìn)食。2．制備肝臟組織石蠟切片，HE和膠原纖維染色，進(jìn)展病理學(xué)檢查。操作方法CCl4肝纖維化肝硬化模型第六十六頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方67該模型較為可靠，復(fù)制時(shí)間較短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，合適于肝纖維化發(fā)生、開(kāi)展過(guò)程的動(dòng)態(tài)觀察和研究，是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型。模型評(píng)價(jià)CCl4肝纖維化肝硬化模型第六十七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方68第2周：肝小葉中央?yún)^(qū)出現(xiàn)片狀肝細(xì)胞變性壞死，未見(jiàn)明顯纖維組織增生。第4周：除肝細(xì)胞變性壞死外，肝內(nèi)開(kāi)場(chǎng)形成較薄的纖維間隔。第6周：肝臟纖維間隔進(jìn)一步增厚，有假小葉形成。第8周：肝組織正常構(gòu)造破壞，形成厚的纖維間隔，并分割形成假小葉。實(shí)驗(yàn)中大鼠成活率在60%左右。結(jié)果CCl4肝纖維化肝硬化模型第六十八頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方69參與肝纖維化的細(xì)胞???肝星狀細(xì)胞庫(kù)普弗細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞Pit細(xì)胞肝細(xì)胞第六十九頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方70形態(tài)學(xué)觀察：可使用各種膠原纖維染 色，并可做圖象分析；血清膠原代謝指標(biāo)檢測(cè)

如PIIIP、HA、FN等。檢測(cè)指標(biāo)CCl4復(fù)合因素模型肝組織中相關(guān)基因表達(dá)，如膠原等第七十頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方71壞死后性肝硬化第七十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方72A：正常肝小葉

(Mallory染色)；B，C：肝硬化(Massontrichrome)第七十二頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方73第五節(jié)

胰腺炎動(dòng)物模型第七十三頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方74引起胰腺自身消化其他酶反響引起胰蛋白酶被激活的原因：〔1〕膽汁反流；〔2〕胰液分泌亢進(jìn)；〔3〕病毒感染、外傷、藥物等造成腺泡的損傷。膽汁和腸液中的腸激酶激活發(fā)病機(jī)制胰蛋白酶原胰蛋白酶第七十四頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方75急性胰腺炎模型

急性胰腺炎的主要表現(xiàn)為胰腺呈炎癥水腫、出血和壞死。

臨床表現(xiàn)為突然發(fā)作的上腹部劇烈疼痛并可出現(xiàn)休克。急性胰腺炎第七十五頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方76急性胰腺炎模型?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法急性胰腺炎第七十六頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方77早期?；悄懰徕c可直接導(dǎo)致胰腺腺泡細(xì)胞或小導(dǎo)管壁的細(xì)胞溶解，進(jìn)一步的損害可能是膽鹽激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，產(chǎn)生腺泡自身消化。采用胰管逆行注射法誘發(fā)動(dòng)物急性胰腺炎，是根據(jù)胰管、膽管共同通路和膽汁反流理論，模擬人類膽源性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制造模機(jī)制急性胰腺炎第七十七頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方78正常情況下主胰管的壓力高于總膽管，膽汁不會(huì)進(jìn)入胰管。但當(dāng)膽總管阻塞時(shí)，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。大鼠的膽管和胰管為共同開(kāi)口的管道，解剖上稱為膽胰管，從膽胰管上分出6~8支胰管的分支進(jìn)入胰腺本質(zhì)。生理解剖特點(diǎn)急性胰腺炎第七十八頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方79大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，3%戊巴比妥鈉〔40mg/kg〕腹腔注射麻醉。上腹正中切口進(jìn)入腹腔，提起胃和十二指腸，顯露出胰腺，識(shí)別膽胰管走向，于肝門(mén)處用微型無(wú)損傷動(dòng)脈夾夾閉膽總管，以防藥液逆流進(jìn)入肝臟。用4號(hào)鈍針頭朝胰腺方向穿刺十二指腸前壁，在其漿膜下潛行通過(guò)十二指腸乳頭穿入膽胰管，用手指固定針頭，緩慢〔約2min〕注入3.5%或5%?；悄懰徕c溶液1ml/kg體重。300~350gWistar或SD大鼠操作方法3.5%或5%?；悄懰徕c急性胰腺炎第七十九頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方804.另一種穿刺方法是，用4號(hào)針頭緊貼膽胰管匯入十二指腸處，自腸外穿刺膽胰管。1min。檢查無(wú)漏膽，逐層關(guān)腹。6.假手術(shù)組僅翻動(dòng)胰腺和十二指腸后關(guān)腹。15h處死動(dòng)物，解剖時(shí)肉眼觀察胰腺大體變化。取胰腺等組織，10%中性緩沖甲醛液固定，常規(guī)制備石蠟切片，在光鏡下觀察胰腺等臟器的改變。取血測(cè)定血清淀粉酶程度。操作方法急性胰腺炎第八十頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方81術(shù)后15h血清淀粉酶程度明顯升高。肉眼觀察，胰腺充血腫脹，包膜緊張，出現(xiàn)不同程度出血壞死，腹腔內(nèi)可見(jiàn)血性腹水，胰腺周圍大網(wǎng)膜和腸系膜出現(xiàn)淡黃色的皂化斑。胃腸道明顯水腫，腎臟明顯增大，顏色晦暗。光鏡檢查，于術(shù)后15h可見(jiàn)胰腺組織大片出血、凝固性壞死及脂肪壞死，壞死區(qū)之間有大量中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，表現(xiàn)為急性出血壞死性胰腺炎。結(jié)果急性胰腺炎第八十一頁(yè)，共94頁(yè)。2023/2/2王大方82本模型在病因、發(fā)病機(jī)制及胰腺病變等方面與人類急性胰腺炎相似，是目前被公認(rèn)的、比較常用的復(fù)制急性胰腺炎的方法。通過(guò)改變注射速度、注射持續(xù)時(shí)間、所用?；悄懰徕c的濃度或劑量可控制胰腺病變的程度，操作簡(jiǎn)單，造模成功率較高，重復(fù)性較好，合適于評(píng)價(jià)藥物對(duì)急性胰腺炎的防治效果。