第四章 生物化學(xué)-核酸化學(xué)

第四章核酸化學(xué)4.6

核酸的分離、合成和鑒定4.1概述4.2核苷酸4.3核酸的結(jié)構(gòu)4.4核酸的性質(zhì)4.5

核酸的生物學(xué)功能4.1概述1.核酸（nucleicacid）的發(fā)現(xiàn)1869年，F(xiàn).Miescher從細(xì)胞核中分離出核素。A.Kossel發(fā)現(xiàn)核素是蛋白質(zhì)和核酸的復(fù)合物，并分析出核酸的組成及各組成成分的比例。核酸核苷酸磷酸核苷戊糖堿基水解

2.核酸的組成和分類核酸分為：脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid，DNA）—主要集中在細(xì)胞核，線粒體和葉綠體中也有少量DNA；核糖核酸（ribonucleicacid，RNA）—90%分布在細(xì)胞質(zhì)中，10％存在于細(xì)胞核中。3.核酸的重要性

核酸是遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)1928:Griffith1928年，英國軍醫(yī)FrederickGriffith(1881~1941)以老鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將活的良性肺炎雙球菌與死的惡性肺炎雙球菌混合，可以引起轉(zhuǎn)型，得到活的惡性菌，使老鼠死亡。

OswaldAvery(1877-1955)

MicrobiologistAveryledtheteamthatshowedthatDNAistheunitofinheritance.OneNobellaureatehascalledthediscovery"thehistoricalplatformofmodernDNAresearch",andhisworkinspiredWatsonandCricktoseekDNA'sstructure.1944年完成的肺炎球菌轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，證明DNA攜帶遺傳信息。4.2核苷酸(nucleotide)

4.2.1核苷酸的結(jié)構(gòu)1.戊糖

RNA中含D-核糖(ribose)DNA中含D-2-脫氧核糖(deoxyribose)2.堿基(base)包括嘧啶堿和嘌呤堿兩類稀有堿基（minorbase）假尿嘧啶核苷次黃嘌呤核苷二氫尿嘧啶核苷甲基鳥嘌呤核苷3.核苷（nucleoside）戊糖和堿基縮合而成的糖苷稱為核苷。N9N1β1’β1’腺嘌呤核苷（adenosine，A）胞嘧啶脫氧核苷（deoxycytidine，dC）戊糖C1和嘧啶堿N1相連接戊糖C1和嘌呤堿N9相連接RNA中主要的核糖核苷DNA中主要的脫氧核糖核苷腺嘌呤核苷（adenosine，A）腺嘌呤脫氧核苷（deoxyadenosine，dA）鳥嘌呤核苷（guanosine，G）鳥嘌呤脫氧核苷（deoxyguanosine，dG）胞嘧啶核苷（cytidine，C）胞嘧啶脫氧核苷（deoxycytidine，dC）尿嘧啶核苷（uridine，U）胸腺嘧啶脫氧核苷（deoxythymidine，dT）核糖核苷和脫氧核糖核苷核苷常用單字母符號(hào)表示：如腺苷用A表示，脫氧核苷在符號(hào)前加小寫字母d，如脫氧腺苷用dA表示。稀有核苷（修飾核苷）修飾堿基與核糖或脫氧核糖連接5，6-二氫尿苷正常堿基與修飾核糖連接2`-O-甲基腺苷堿基和核糖以特殊方式連接假尿嘧啶核苷C54.核苷酸（nucleotide）核苷中戊糖的羥基磷酸酯化就形成核苷酸核糖核苷酸：2`-、3`-和5`-核苷酸脫氧核糖核苷酸：3`-和5`-脫氧核苷酸自然界存在的核苷酸為5`-核苷酸核苷酸DNARNA核苷酸核苷戊糖D-2-脫氧核糖D-核糖堿基嘌呤堿嘧啶堿腺嘌呤、鳥嘌呤胞嘧啶、胸腺嘧啶腺嘌呤、鳥嘌呤胞嘧啶、尿嘧啶酸磷酸磷酸兩類核酸的基本化學(xué)組成4.2.2核苷酸的性質(zhì)1.一般物理性質(zhì)無色粉末或結(jié)晶；易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑；酸性溶液中不穩(wěn)定，中性和堿性溶液中很穩(wěn)定；具有旋光性

2.互變異構(gòu)現(xiàn)象堿基上帶有酮基的核苷酸能轉(zhuǎn)化為烯醇式。3.紫外吸收在240~290nm有吸收，最大值在260nm附近。不同的核苷酸有不同的吸收特性。測(cè)定兩個(gè)波長的吸收值之比260/280，判斷樣品的純度。純DNA的值為1.8，純RNA的值為2.0。樣品中如有雜蛋白及苯酚，比值即明顯降低。4.核苷酸的兩性解離4.2.3核苷酸的重要衍生物1.5`-二磷酸核苷酸和5`-三磷酸核苷酸核苷三磷酸化合物在生物體內(nèi)的能量代謝中起著重要的作用。

ATP（三磷酸腺苷）在生物體內(nèi)化學(xué)能的儲(chǔ)存和利用中起關(guān)鍵作用；

GTP參加蛋白質(zhì)和嘌呤的合成

CTP參加磷脂的合成

UTP參加多糖的合成2.環(huán)化核苷酸

核苷酸的5`-磷酸與核糖C3`的羥基結(jié)合成環(huán)。生理功能：作為激素作用的媒介物，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生理生化過程，控制生物的生長、分化和細(xì)胞對(duì)激素的效應(yīng)。3.輔酶類核苷酸輔酶A（CoA）3`磷酸腺苷酸泛酸氨基乙硫醇酰基載體輔酶I（CoI,NAD)輔酶Ⅱ(CoII，NADP）黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）煙酰胺腺嘌呤核苷酸煙酰胺腺嘌呤二核苷酸4.3核酸的結(jié)構(gòu)4.3.1DNA的結(jié)構(gòu)1.DNA的堿基組成四種主要的堿基：腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶。規(guī)律：Chargaff當(dāng)量規(guī)則：A=T；G=C；1949年Chargaff發(fā)現(xiàn)A與T及C與G配對(duì)現(xiàn)象。ErwinChargaff(1905-2002)

ChargaffdiscoveredthepairingrulesofDNAletters,noticingthatAmatchestoTandCtoG.具有種屬特異性；沒有組織特異性。2.DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)

指DNA分子中核苷酸排列的順序。

核酸中核苷酸之間是通過3`，5`-磷酸二酯鍵連結(jié)。HHHp3.DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)1951年，RosalindFranklin得到DNA分子的X-ray衍射照片，1953年，Watson與Crick解出了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，此為分子生物學(xué)上的大進(jìn)步。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)（1）DNA分子由兩條DNA單鏈組成。兩條鏈沿著同一根軸平行盤繞，形成右手雙螺旋結(jié)構(gòu)。螺旋中的兩條鏈方向相反，即其中一條鏈的方向?yàn)?′→3′，而另一條鏈的方向?yàn)?′→5′。（2）嘌呤堿和嘧啶堿基位于螺旋的內(nèi)側(cè)，磷酸和脫氧核糖基位于螺旋外側(cè)。堿基環(huán)平面與螺旋軸垂直，糖基環(huán)平面與堿基環(huán)平面成90°角。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)（3）螺旋橫截面的直徑約為2nm，每條鏈相鄰兩個(gè)堿基平面之間的距離為3.4nm，每10個(gè)核苷酸形成一個(gè)螺旋，其螺矩（即螺旋旋轉(zhuǎn)一圈）高度為34nm。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點(diǎn)（4）兩條DNA鏈通過氫鍵相互結(jié)合形成雙螺旋。堿基的相互結(jié)合具有嚴(yán)格的配對(duì)規(guī)律，即A與T結(jié)合，G與C結(jié)合，這種配對(duì)關(guān)系，稱為堿基互補(bǔ)。A和T之間形成兩個(gè)氫鍵，G與C之間形成三個(gè)氫鍵。在DNA分子中，嘌呤堿基的總數(shù)與嘧啶堿基的總數(shù)相等。DNA雙螺旋的穩(wěn)定性DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)在生理?xiàng)l件下是很穩(wěn)定的。維持這種穩(wěn)定性的因素包括：氫鍵：兩條DNA鏈之間可形成大量的氫鍵；堿基堆積力：堿基上的芳香環(huán)具有疏水性質(zhì)，堿基的堆積使堿基之間發(fā)生締合形成了堿基堆積力，芳香族堿基的堆積，在DNA分子內(nèi)部形成了一個(gè)疏水核心，消除了介質(zhì)中水分子對(duì)堿基之間氫鍵的影響，有助于氫鍵的形成。離子鍵：是磷酸殘基上的負(fù)電荷與介質(zhì)中的陽離子（如Na+、K+和Mg2+）形成的鍵。從而降低了DNA鏈之間因負(fù)電荷而產(chǎn)生的的排斥力，增加了DNA分子的穩(wěn)定性。改變介質(zhì)條件和環(huán)境溫度，將影響雙螺旋的穩(wěn)定性。DNA雙螺旋的種類Watson-Crick的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)是DNA鈉鹽在相對(duì)濕度為92%時(shí)的一種狀態(tài)。M.Wilkins等將DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)分為A、B、C三種不同類型。類型結(jié)晶狀態(tài)螺距，nm每圈螺旋堿基對(duì)數(shù)堿基傾角ABC75%相對(duì)濕度，鈉鹽92%相對(duì)濕度，鈉鹽66%相對(duì)濕度，鋰鹽2.83.43.111109.320o0o6o左手螺旋DNA1979年，A.Rich等從d（GCGCGC）的X-射線衍射結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，該片段以左手螺旋存在于晶體中，提出了左手螺旋的Z-DNA模型。

A-DNA、B-DNA及Z-DNA的比較A-DNAB-DNAZ-DNA外形每圈螺旋堿基對(duì)數(shù)螺距螺旋直徑堿基傾角右手，粗短112.82.619右手，適中103.420左手，細(xì)長124.461.89

與DNA堿基順序相關(guān)的特殊結(jié)構(gòu)回文結(jié)構(gòu)堿基順序顛倒重復(fù)，具有2倍對(duì)稱的DNA段落。鏡像重復(fù)顛倒重復(fù)存在與同一條鏈H-DNADNA順序具有多嘧啶-多嘌呤的特點(diǎn)，并具有鏡像重復(fù)。1953年初提出了DNA的三螺旋模型LinusPauling(1901-94)

Thetitanoftwentieth-centurychemistry.Paulingledthewayinworkingoutthestructureofbigbiologicalmolecules,andWatsonandCricksawhimastheirmaincompetitor.Inearly1953,workingwithoutthebenefitofX-raypictures,hepublishedapapersuggestingthatDNAwasatriplehelix.4.DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)：雙螺旋鏈的扭曲或再次螺旋。如：超螺旋結(jié)構(gòu)線狀DNA形成的超螺旋環(huán)狀DNA形成的超螺旋真核生物DNA的存在形式

真核生物DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)是該DNA雙鏈盤繞在組蛋白上形成的負(fù)超螺旋。這種以組蛋白為核心繞以DNA片段的顆粒稱為核小體（nucleosome）。

完整的核小體由兩部分組成，即核小體核心（nucleosomecore），以及連接各核心顆粒之間的區(qū)域稱連接區(qū)（linker）。

DNA雙螺旋——核小體——串珠狀多核小體細(xì)絲——螺線管——超螺線管——染色單體1.RNA的堿基組成RNA中含有腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶四種基本堿基。堿基配對(duì)：A=U；G=C4.3.2RNA的結(jié)構(gòu)

2.

RNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)

RNA分子一級(jí)結(jié)構(gòu)：指各核苷酸鏈中核苷酸的排列順序。核苷酸間通過3`，5`-磷酸二酯鍵連接3.RNA的類型核糖體RNA（rRNA）信使RNA（mRNA）轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）含量80%5%10-15%功能和蛋白質(zhì)一起組裝成核糖體，是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所蛋白質(zhì)合成的模板在蛋白質(zhì)生物合成中起轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸到核糖體的作用4.RNA的高級(jí)結(jié)構(gòu)大多數(shù)天然RNA分子是單鏈的，多數(shù)核苷酸鏈發(fā)生自身回折，形成雙螺旋區(qū)；不能配對(duì)的堿基形成環(huán)狀突起。這種構(gòu)象就是RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)。A-U

G-C雙螺旋區(qū)tRNA的三葉草形二級(jí)結(jié)構(gòu)特征：tRNA分子一般由四臂四環(huán)組成；氨基酸臂反密碼臂二氫尿嘧啶臂TψC臂反密碼環(huán)二氫尿嘧啶環(huán)（DHU環(huán)）TψC環(huán)可變環(huán)（額外環(huán)）反密碼子7對(duì)5對(duì)4對(duì)5對(duì)tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)在三葉草型二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，突環(huán)上未配對(duì)的堿基由于整個(gè)分子的扭曲而配成對(duì)，目前已知的tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)均為倒L型TψC環(huán)DHU環(huán)反密碼環(huán)mRNA的結(jié)構(gòu)5'3'm7GpppAAA……An編碼區(qū)AUGUAA多聚腺苷酸(polyA)帽子結(jié)構(gòu)7-甲基鳥嘌呤核苷三磷酸真核細(xì)胞mRNA的3’-末端有一段長達(dá)200個(gè)核苷酸左右的聚腺苷酸(polyA)，稱為“尾結(jié)構(gòu)”，5’-末端有一個(gè)甲基化的鳥苷酸，稱“帽結(jié)構(gòu)”。真核生物mRNA與原核生物的不同之處

真核生物mRNA的特殊結(jié)構(gòu)：5’-末端的帽結(jié)構(gòu)：m7G-ppp5’-Nmp促進(jìn)核糖體與mRNA的結(jié)合加速翻譯的起始速度增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性3’-末端的polyA結(jié)構(gòu):參與mRNA從核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性真核生物mRNA含有內(nèi)含子:在核內(nèi)需經(jīng)過一系列的加工、修飾及剪接等去除內(nèi)含子，轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓膍RNA，進(jìn)入胞漿。rRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)原核生物核糖體中有三類rRNA：5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA；真核生物核糖體中有四類rRNA：5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA；大腸桿菌16SrRNA大腸桿菌5SrRNA真核生物18SrRNA4.3.3核酸中核苷酸順序的測(cè)定1.核酸酶（nucleases）能水解核酸的酶稱為核酸酶。催化在水參與下磷酸二酯鍵的切斷。a—產(chǎn)生5`磷酸末端b—產(chǎn)生3`磷酸末端核酸酶底物作用點(diǎn)外切核酸酶蛇毒磷酸二酯酶牛脾磷酸二酯酶RNA、DNARNA、DNAab內(nèi)切核酸酶RNaseA枯草桿菌RnaseRnaseT1RnaseT2DnaseIDnaseIIRNA-PyRNARNA-GRNADNADNAbbbbab脫氧核糖核酸酶（DNase）

核糖核酸酶（Rnase）

非特異性核酸酶限制性內(nèi)切酶（restrictionendonuclease）對(duì)DNA具有較高的堿基專一性，能使別DNA分子中特定的堿基順序，并在特定的位置切割。產(chǎn)生粘性末端產(chǎn)生平整末端4.4核酸的性質(zhì)1.性狀和溶解度DNA為白色纖維狀固體；RNA為白色粉末；微溶于水；不溶于有機(jī)溶劑；鈉鹽易溶于水2.粘度DNA溶液粘度極大；RNA比DNA粘度小。3.分子大小相對(duì)分子量都很大，DNA相對(duì)分子量的比RNA的大。

可用紫外分光光度計(jì)測(cè)定樣品是否純品：純DNA:A260/A280=1.8純RNA:A260/A280=2.0核酸含量1A相當(dāng)于50ug/ml雙螺旋DNA或40ug/ml單螺旋DNA（或RNA）或20ug/ml寡核苷酸。4.

吸收光譜核酸在240~290nm有紫外吸收，一般在260nm左右有最大吸收。摩爾磷吸收系數(shù)E（P）：以每升核酸溶液中1mol磷為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算核酸的吸收系數(shù)。

W－每升溶液中磷的重量（g）

DNA：E（p）=6000~8000RNA：E（p）=7000~10000

5.變性、復(fù)性和雜交核酸的變性（denaturation）引起核酸變性的因素溫度升高；酸、堿、射線；尿素等變性劑。變性后現(xiàn)象260nm紫外吸收值升高（增色效應(yīng)）；粘度降低；沉降速度增加；失去部分或全部生物活性。

DNA的變性溫度：加熱DNA溶液，使其對(duì)260nm紫外光的吸收度突然增加，達(dá)到其最大值一半時(shí)的溫度為DNA的變性溫度（熔解溫度，熔點(diǎn)Tm）。DNA的Tm值大小與下列因素有關(guān)G-C含量（G+C）%=（Tm-69.3）×2.44DNA的均一性均一性高，Tm較低。介質(zhì)中的離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度較低的介質(zhì)中，DNA的Tm較低。大腸桿菌DNA在不同濃度KCl中的熔解復(fù)性（renaturation）變性DNA在適當(dāng)?shù)臈l件下，兩條彼此分開的單鏈可以重新締合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一過程稱為復(fù)性。DNA的復(fù)性主要受以下因素影響：DNA的復(fù)雜程度：越簡單越容易復(fù)性；DNA濃度的大?。涸礁咴揭讖?fù)性；DNA片段的大小：越小越易復(fù)性；溫度：比Tm低25oC左右最易復(fù)性，如超過Tm再迅速冷卻不能復(fù)性，熱變性DNA緩慢冷卻時(shí)才可復(fù)性。雜交（hybridization）兩種來源不同具有互補(bǔ)堿基序列的多核苷酸片斷在溶液中冷卻時(shí)可以再形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。雜交DNA分子DNA/RNA雜交分子6、沉降密度：RNA>雙鏈DNA；環(huán)狀DNA>開環(huán)、線狀DNA單鏈DNA>雙鏈DNA沉降速度：RNA>環(huán)狀DNA>開環(huán)、線狀DNA

4.5核酸的生物學(xué)功能4.5.1DNA是生物遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。DNA的復(fù)制方式—半保留復(fù)制4.5.2RNA與生物遺傳信息的表達(dá)首先，DNA通過轉(zhuǎn)錄作用，將其所攜帶的遺傳信息（基因）傳遞給mRNA,在mRNA、tRNA和rRNA的共同作用下，完成蛋白質(zhì)的合成。中心法則生物的遺傳信息從DNA傳遞給mRNA的過程稱為轉(zhuǎn)錄。根據(jù)mRNA鏈上的遺傳信息合成蛋白質(zhì)的過程，被稱為翻譯和表達(dá)。1958年Crick將生物遺傳信息的這種傳遞方式稱為中心法則。mRNA是DNA的轉(zhuǎn)錄本，攜帶有合成蛋白質(zhì)的全部信息。蛋白質(zhì)的生物合成實(shí)際上是以mRNA作為模板進(jìn)行的。遺傳密碼

4.5.3蛋白質(zhì)的生物合成4.5.4遺傳變異的化學(xué)本質(zhì)DNA結(jié)構(gòu)的改變將導(dǎo)致相應(yīng)蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)（氨基酸順序）的變化，從而引起生物特征或性狀發(fā)生變異。所以，一切生物的變異和進(jìn)化都可以認(rèn)為是由于DNA結(jié)構(gòu)的改變而引起蛋白質(zhì)組成和性質(zhì)變化的結(jié)果。DNA結(jié)構(gòu)變化的類型及影響因素DNA遺傳密碼的改變主要有如下幾種類型：堿基順序顛倒，如TA被顛倒成AT；某個(gè)堿基被調(diào)換，如AT換成GC；③少了或多了一對(duì)或幾對(duì)堿基，例如：5’ATGGCTATGC3’變成5’ATGGTATGC3’3’TACCGATACG5’3’TACCATACG5’基因突變由于DNA堿基順序的改變引起生物遺傳性狀顯著變化的現(xiàn)象，稱為基因“突變”。(1)DNA分子中堿基互變異構(gòu)DNA分子的堿基，存在酮式—烯醇式或氨式—亞胺式互變異構(gòu)。不同的互變異構(gòu)體形成氫鍵的方向和能力不同，有可能導(dǎo)致復(fù)制時(shí)出現(xiàn)錯(cuò)誤。例如在正常情況下，A（氨式結(jié)構(gòu)）與T（酮式結(jié)構(gòu)）配對(duì)；當(dāng)A以亞胺式存在時(shí)（幾率非常?。?，則與C配對(duì)。(2)物理因素能夠引起基因突變的物理因素主要包括：紫外線（UV）、高能射線和電離輻射等。當(dāng)DNA受到大劑量紫外線（波長260nm附近）照射時(shí)，可引起DNA鏈上相鄰的兩個(gè)嘧啶堿基共價(jià)聚合，形成二聚體，例如TT二聚體。光聚合反應(yīng)

胸腺嘧啶堿基在紫外光照射下，可以發(fā)生二聚加成反應(yīng)：

在DNA分子中，如果兩個(gè)胸腺嘧啶堿基相鄰，在紫外光照射下，可能發(fā)生上述聚合反應(yīng)，其結(jié)果是破壞了正常復(fù)制或轉(zhuǎn)錄。(3)化學(xué)因素化學(xué)因素是引起DNA結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的最常見因素，主要包括：烷基化試劑亞硝酸鹽堿基類似物烷基化反應(yīng)由于含氧堿基存在酮式和烯醇式的互變異構(gòu)，烯醇式中的羥基可以被烷基化轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的烯醇醚。鳥嘌呤核苷烷基化形成6-甲氧基鳥嘌呤核苷后，不再與C配對(duì)，而與T配對(duì)。這種情況將引起DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及信息表達(dá)出現(xiàn)錯(cuò)誤。環(huán)外氨基的反應(yīng)

胞嘧啶核苷在亞硝酸作用下，可以形成重氮鹽，再轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ず塑铡Ｒ虼松矬w內(nèi)亞硝酸的存在有可能改變DNA的堿基組成。腺嘌呤核苷和鳥嘌呤核苷也能發(fā)生類似的反應(yīng)，分別形成次黃嘌呤核苷（I）和黃嘌呤核苷（X）。堿基類似物是一類結(jié)構(gòu)與核酸堿基相似的人工合成或天然化合物，由于它們的結(jié)構(gòu)與核酸的堿基相似，當(dāng)這些物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞后能夠摻入到DNA鏈中，干擾DNA的正常復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。4.6核酸的分離、合成和鑒定原理4.6.1核酸的分離和純化提取分離核酸的一般原則：破碎細(xì)胞，提取核蛋白使其與其他細(xì)胞成分分離；用蛋白質(zhì)變性劑或蛋白酶處理除去蛋白質(zhì)；獲得的核酸溶液用乙醇等使其沉淀。4.6.2合成酶促合成法化學(xué)合成法4.6.3鑒定和含量測(cè)定含量測(cè)定1、定磷法RNA平均含磷量：9.0%DNA平均含磷量：9.2%2、定糖法核糖的測(cè)定脫氧核糖的測(cè)定3、紫外吸收法提要核酸分為兩大類：DNA和RNA，所有生物都含有這兩類核酸。核酸是線形多聚核苷酸，其基本結(jié)構(gòu)單位是核苷酸；核苷酸又是由堿基、戊糖及磷酸組成?？臻g結(jié)構(gòu)Watson-