GB/T 18647-2002動物球蟲病診斷技術(shù)

ICS.11.220B41中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18647—2002動物球蟲病診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforanimalcoccidiosis2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T18647-2002球蟲病(coccidiosis)是多種動物的一種重要寄生蟲病，對家畜、家禽、魚類和野生動物等均有不同程度的危害，各國均有發(fā)生。本病對家禽和免危害較大，急性暴發(fā)的死亡率可超過30%；其次是豬、牛、羊等大家畜，急性感染常引起下痛,生長嚴(yán)重受阻;也偶有魚類和野生動物發(fā)生球蟲病的報道。特別在集約化的養(yǎng)殖中.若控制不嚴(yán)，會造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。本病的病原為孢子蟲綱(Sporozoa）,球蟲亞綱(Coccidia）,艾美耳科（Eimeriidae）中的艾美耳屬（Eimueria）、等孢屬(Lsospora)、泰澤屬(Tysceria）、溫?fù)P屬(Wenyonella)的球蟲。每種動物都有各自特有的球蟲種，文獻(xiàn)記錄畜禽和野生動物的球蟲種已達(dá)1340種。國內(nèi)外對球蟲病診斷的經(jīng)典方法是病原檢查，并結(jié)合臨床癥狀和病理部檢進(jìn)行綜合診斷。盡管國內(nèi)外學(xué)者建立了多種免疫學(xué)和血清學(xué)技術(shù).如色素試驗法、子孢子制動反應(yīng)、間接血凝試驗、免疫熒光抗體試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、隨機(jī)引物擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)等，但由于這些方法檢出的準(zhǔn)確性和操作復(fù)雜等問題，尚不能代替現(xiàn)有方法。最常用的方法仍是病原檢查和綜合診斷技術(shù)。病原檢查簡單、易行,既可定量、又可定性,既可用于發(fā)病前、又可用于發(fā)病后.以確定動物或動物群感染球蟲的程度。綜合診斷主要用于發(fā)病或死亡后的診斷，確定動物或動物群是否因感染球蟲而發(fā)病或死亡。病原檢查可廣泛用于流行病學(xué)調(diào)查、防治藥物的篩選和臨床驗證、進(jìn)出口檢疫、無本病健康動物群的建立等、為了規(guī)范球蟲與球蟲病的檢疫方法·使得檢出結(jié)果客觀、準(zhǔn)確、一致,以保證《中華人民共和國動物防疫法》的實施，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B為標(biāo)準(zhǔn)的附錄，附錄C為提示的附錄.本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海家畜寄生蟲病研究所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：黃兵、陳兆國、白啟

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18647-2002動物球蟲病診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforanimalcoccidiosis適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物球蟲病的病原檢查和綜合診斷技術(shù)本標(biāo)準(zhǔn)適用于禽類和免的球蟲病(感染)的診斷。病原檢查21材料準(zhǔn)備2.1.1飽和鹽水.配制方法見附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄）2.1.260目銅絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)、100mL量杯、50mL和100mL燒杯、5mL玻璃瓶、吸管、攝子、天平、離心機(jī)、麥?zhǔn)舷x卵計數(shù)板、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。2.1.3被檢動物或動物群的新鮮糞便不少于200g。2.2操作方法2.2.1定性檢查2.2.1.1取被檢動物或動物群的新鮮糞便10g.放入50mL燒杯中，加入適量水2.2.1.2輕輕攪勺，經(jīng)60目銅絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過濾。2.2.1.3將濾液移人4支10mL～15mL試管,2500r/min離心10min。2.2.1.4傾去上清液,各管沉淀物中加入少量飽和鹽水.混勾。各管的沉淀物混懸液移入一個5mL玻璃瓶。2.2.1.5用飽和鹽水(見附錄A)加滿·蓋上蓋玻片(蓋玻片須能與液面接觸）,靜置10min2.2.1.6取下蓋玻片.放在載玻片上。2.2.1.7暨載玻片于顯微鏡臺上.用10×10或10×40的倍數(shù)進(jìn)行檢查2.2.1.8判定：a）發(fā)現(xiàn)球蟲卵囊,判為陽性，說明該動物(群)已感染球蟲，并可根據(jù)附錄C(提示的附錄)卵囊形態(tài)特征·初步確定為哪一屬的球蟲；b）未發(fā)現(xiàn)球蟲卵囊，需重復(fù)檢查5次,仍未見球蟲卵囊，本糞樣可判為陰性。只有連續(xù)檢查糞便7d～10d,均未發(fā)現(xiàn)球蟲卵囊，方可說明該動物(群)未感染球蟲。2.2.2定量檢查2.2.2.1對定性檢查中呈陽性的糞樣，要進(jìn)行定量檢查2.2.2.2取待檢糞樣2g·放入50mL燒杯。2.2.2.3加入少量自來水?dāng)嚬?經(jīng)60目銅絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過濾,并用自來水沖洗幾次濾網(wǎng)2.2.2.4濾液經(jīng)2500r/min離心10min。2.2.2.5用少量飽和鹽水將沉淀物攪勾，移入100mL量杯·加飽和鹽水至60mL處·充分混勾2.2.2.6用吸管吸取混懸液注滿麥?zhǔn)舷x卵計數(shù)板，靜置5mi