臨床免疫學檢驗：14 自身免疫性疾病及其檢測

第二十二章自身免疫性疾病及其

免疫檢測

P274自身免疫性疾?。╝utoimmunediseases,AID)

指機體針對自身組織產(chǎn)生自身抗體或致敏淋巴細胞，而導致自身組織器官損傷或功能障礙，這種病理狀態(tài)稱為自身免疫性疾病。AID的基本特征誘因可有可無。有一定的遺傳傾向。女性患者多見，發(fā)病率隨年齡增長而增加?；颊哐逯锌蓹z出高效價的自身抗體和（或）自身致敏T淋巴細胞。一些自身抗體在自身免疫病中呈現(xiàn)交叉重疊現(xiàn)象:即在同一種自身免疫病患者體內(nèi)可檢測到多種自身抗體，而不同的自身免疫病也可存在同一種自身抗體。

IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明顯。病損局部可發(fā)現(xiàn)有淋巴細胞、漿細胞、嗜酸性粒細胞浸潤及免疫復合物沉積。免疫抑制劑治療可取得一定療效。AID的分類器官特異性自身免疫性疾?。╫rganspecificautoimmunedisease）

是指病變局限于某一特定器官或組織，可以檢出對該組織器官成分特異性的自身抗體或致敏T淋巴細胞。非器官特異性自身免疫性疾?。╪on-organspecificautoimmnuedisease）

是指侵犯多種組織器官或系統(tǒng)的一組疾病，可檢出對多種器官或組織成分的自身抗體或致敏T淋巴細胞。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemiclupuserythematosus,SLE）是一種累積多器官、多系統(tǒng)的結締組織疾病，好發(fā)于年輕女性。臨床表現(xiàn)不一，常出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹、關節(jié)腫痛、腎損害等。疾病多呈漸進性，一般先累及一個系統(tǒng)，以后擴展到多系統(tǒng)損害，尤以腎損害最為普遍。本病引起組織損傷的主要機理是Ⅲ型超敏反應患者體內(nèi)可查到多種自身抗體，如抗核抗體、類風濕因子、抗核糖體抗體、抗心磷脂抗體；IgG、IgA、IgM升高；血清免疫復合物升高；補體水平下降及病損局部免疫復合物的沉積。系統(tǒng)性紅斑狼瘡

細胞核物質(zhì)(如DNA、RNA、核內(nèi)可溶性蛋白)刺激機體產(chǎn)生抗核抗體，形成IC，沉積于周身毛細血管、關節(jié)滑膜、心臟瓣膜等處，引起全身性損傷。類風濕性關節(jié)炎（rheumatoidarthritis，RA）本病是以慢性對稱性多關節(jié)炎為主要表現(xiàn)的一種全身性疾病。多發(fā)于青壯年，起病遲緩，早期常有乏力、低熱、食欲減退。本病的典型特征是小關節(jié)及周圍組織呈對稱性、多發(fā)性損害，部分患者可有心、肺和血管受累。本病致病機制也主要為Ⅲ型超敏反應，患者由于感染、炎癥等原因產(chǎn)生了自身抗原——變性IgG，刺激機體產(chǎn)生抗變性IgG抗體（即RF）。免疫學檢查可見70-80%患者血清和關節(jié)滑膜液中有類風濕因子（rheumatoidfactor,RF)，即抗變性IgG抗體；以及血清IgG、IgA、IgM升高。類風濕性關節(jié)炎體內(nèi)變性IgG刺激機體產(chǎn)生抗體(稱為類風濕因子,IgM類)，形成IC，沉積于全身小關節(jié)滑膜處，引起小關節(jié)紅腫、變形僵直、失去運動功能。自身免疫性溶血性貧血（autoimmunehemolyticanemia,AIHA）由于機體免疫功能異常，或服用某些藥物后改變了紅細胞表面抗原性，產(chǎn)生了抗紅細胞自身抗體。自身抗體與紅細胞結合，通過激活補體等Ⅱ型超敏反應的機制使紅細胞的破壞而導致貧血的一組疾病。自身免疫性血小板減少性紫癜和中性粒細胞減少癥的發(fā)病機制與此相似。重癥肌無力（myastheniagravis,MG）患者體內(nèi)存在神經(jīng)肌肉接頭處的乙酰膽堿受體的自身抗體。這種自身抗體結合到橫紋肌細胞的乙酰膽堿受體上，對此受體起封閉和破壞作用，使肌細胞對運動神經(jīng)元釋放的乙酰膽堿的反應性降低，引起骨骼肌軟弱無力。疾病最早出現(xiàn)的癥狀是眼肌無力，進而累積其他部位，并呈進行性加重。此病發(fā)病機制為Ⅱ型超敏反應。

自身抗體的特點

正常人血清中存在有多種微量的自身抗體，如ANA、類風濕因子、抗平滑肌抗體、抗微粒體抗體等，它們能清除體內(nèi)衰老細胞、變性細胞從而起到免疫穩(wěn)定作用，此為生理性自身抗體。隨著年齡的增長，正常人血清中自身抗體陽性率增加。當自身抗體效價持續(xù)在高滴度時，易發(fā)生AID。有自身抗體的存在，不一定是AID；在AID時，一般可檢測到自身抗體。自身抗體檢測的臨床價值自身抗體是AID的重要標志，病人血清中存在高效價自身抗體是AID的特點之一。每種AID都伴有特征性的自身抗體譜。自身抗體的檢測在自身免疫病的診斷及療效評價方面具有重要意義。

AID的相關實驗檢測（P295)免疫球蛋白檢測：IgG、IgA、IgM升高；其中IgG升高明顯補體檢測：在Ⅱ/Ⅲ型超敏反應引起的AID中，其總補體活性、單一補體活性降低；當疾病緩解時，補體含量可恢復正常免疫復合物檢測：循環(huán)免疫復合物、局部免疫復合物檢測。自身抗體檢測自身抗體檢測與自身免疫性疾病的診斷（P282）

抗核抗體（antinuclearantibody,ANA)的檢測ANA的定義大多數(shù)屬IgG類，也有IgM和IgA。無器官特異性和種屬特異性，主要存在于血清中，也可存在滑膜液、胸水和尿液中。ANA原指抗細胞核抗原成分的自身抗體的總稱。ANA廣義地指抗細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總和。ANA所針對的靶抗原由細胞核擴展到整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架及細胞周期等。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有幾十種具不同臨床意義的ANA，形成抗核抗體譜（antinuclearantibodies,ANAs）

ANAs的組成抗DNA抗體：抗dsDNA、抗ssDNA抗體抗組蛋白抗體（AHA)：抗H1、H2A、H2B、H3、H4等抗ENA抗體：抗Sm、抗核糖核蛋白（RNP）、抗SS-A、抗SS-B等抗非組蛋白抗體：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖細胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、抗PL-12、抗著絲點抗體等抗核仁抗體：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA抗細胞其它成分抗體：抗高爾基體、抗中心體、抗線粒體、抗肌動蛋白、抗核層蛋白等抗雙鏈DNA（doublestrandedDNA，dsDNA）抗體

抗dsDNA抗體對SLE有較高特異性，70-90%

活動性SLE患者該抗體陽性，是SLE的診斷標準之一?？菇M蛋白抗體（anti-histonicantibody,AHA）

組蛋白是一種與DNA結合的富含賴氨酸和精氨酸的堿性蛋白，由H1、H2A、H2B、H3和H4五個亞單位組成，其相應抗體稱抗組蛋白抗體。

AHA在藥物性狼瘡患者中陽性率達90-100%，而SLE病人陽性率僅有20-35%，類風濕性關節(jié)炎病人為36%。

抗可提取性核抗原（extractablenuclearantigen，ENA）抗體ENA抗原是指可用鹽水或PBS從細胞核中提取的Ag抗Sm抗體：抗Sm抗體是SLE的特異性標志，疾病特異度達99%，為提高SLE的診斷準確率，可將抗Sm抗體和抗dsDNA抗體同時檢測?？筍S-A、SS-B抗體：抗SS-A和抗SS-B抗體并存是干燥綜合癥的特異標志?？购颂呛说鞍卓贵w核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又稱u1RNP。抗u1RNP抗體在混合性結締組織病(MCTD)陽性率為95%以上，是MCTD的標志抗體?？筍cl-70抗體（抗非組蛋白抗體）抗Scl-70是進行性全身性硬化癥（PSS）的標志抗體，陽性率為50-64%。

抗Jo-1抗體抗Jo-1抗體對肌炎和間質(zhì)性肺纖維化有高度特異性，抗體的效價與疾病的活動性相關。

抗線粒體抗體（anti-mitochondrialantibody,AMA）原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）時AMA陽性率可達90%以上。AMA是PBC的血清學指標。

ANA的檢測方法免疫熒光法（間接免疫熒光法）免疫印跡法（Westernblotting）-ENA抗體譜的檢測間接免疫熒光法（indirectimmunofluorescence，IIF）

原理：被檢血清中的ANA（IgG型）與基質(zhì)片中細胞核抗原形成特異性抗原抗體復合物，熒光素標記的抗人IgG（二抗）再與之結合，在熒光顯微鏡下見到細胞核有熒光著色為陽性反應。是檢測血清總ANA的常規(guī)方法，可作為初篩試驗。間接法特異性抗體與相應抗原反應，熒光素標記的抗抗體再與第一抗體結合。

間接熒光抗體染色法示意圖熒光抗體染色熒光染色核型分析

均質(zhì)型：核染色均勻一致，最為多見，與抗dsDNA抗體和AHA有關。高滴度主要見于SLE，低滴度主要見于RA、慢性肝臟疾病及藥物性狼瘡

周邊型：又稱核膜型，熒光染色在核膜周圍，與抗核層蛋白抗體有關。高滴度主要見于SLE及原發(fā)性膽汁性肝硬化斑點（顆粒）型：核染色呈斑點、顆粒狀，與抗ENA抗體有關。高滴度主要見于MCTD、SLE及硬化癥等

核仁型：常與抗核仁抗體有關。高滴度主要見于硬皮病等自身抗體檢測抗核抗體(均質(zhì)型)抗核抗體(核膜型)抗核抗體(斑點型)熒光抗體技術的應用IIF的基質(zhì)片原多采用小鼠肝印片或切片作為反應的細胞核基質(zhì)Ag。目前多選擇Hep-2細胞（人喉癌上皮細胞）作為基質(zhì)片，ANA檢出陽性率可提高10-20%；而且Hep-2核大，結構清晰，核抗原種類豐富、含量高，更易于觀察到各種類型的熒光染色形態(tài)。值得注意的是，對ANA特異性種類的判斷僅憑熒光染色模型是不夠的，需進一步采用ELISA、免疫印跡法等來確定抗體的特異性。

免疫印跡法-ENA抗體譜的檢測又稱酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑法(enzymelinkedimmunoelectrotransferblot,EITB)類風濕性因子檢測（P290）類風濕因子測定類風濕性因子（rheumatoidfactor,RF）是抗變性IgG的自身抗體。IgG、IgM、IgD、IgA、IgE

五種類型，其中主要為IgM、IgG型。IgM型RF與RA活動性無密切相關；IgG類RF與RA病人滑膜炎、血管炎癥狀密切相關RF的檢測膠乳凝集試驗將變性IgG包被聚苯乙烯膠乳顆粒使之成為Ag致敏顆粒，在與血清中RF相遇時可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。此法簡便，但靈敏度和特異性不高，重復性差，且只能檢出IgM型RF。免疫比濁法此法檢測RF準確、快速、敏感；定量測定。ELISA間接法該法用于測定不同類型的RF，如IgG型、IgM型、IgA型RF。用熱凝集IgG進行包被，加入待檢血清后，再分別加入酶標記的抗人IgG、IgM、IgA抗體，最后加入底物顯色。Ag:

變性IgGAb:

抗變性IgG抗體(類風濕因子)類風濕因子檢測:膠乳凝集試驗

其他自身抗體的檢測及

臨床意義抗甲狀腺球蛋白抗體（anti-thyroglobulinantibody,ATGA）

臨床意義

血清ATGA是診斷甲狀腺自身免疫疾病的一個特異性指標。甲亢、慢性淋巴細胞性甲狀腺炎、橋本甲狀腺炎、萎縮性或原發(fā)性甲狀腺功能低下等患者TGA表現(xiàn)為陽性，而甲狀腺腫瘤病人一般為陰性，故可作為甲狀腺腫塊的鑒別指標。方法

電化學法、ELISA法?？辜谞钕傥⒘ｓw抗體（thyroidmicrosomalantibody,TMA）是針對甲狀腺微粒體有效抗原成分——過氧化物酶（thyroidperoxidase,TPO）的抗體。方法

ELISA臨床意義多見于甲亢和橋本甲狀腺炎病人。TGA和TMA聯(lián)合測定可作為臨床診斷和鑒別診斷自身免疫性甲狀腺炎的重要依據(jù)。

抗心磷脂抗體（anticardiolipinantibodyACLA）方法

RIA、ELISA等。臨床意義

近年研究表明ACA與SLE