標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 25876-2010 牛早期胚胎性別的鑒定 巢式PCR法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn),旨在提供一種通過巢式聚合酶鏈反應(yīng)(Nested PCR)技術(shù)來鑒定牛早期胚胎性別的方法。該標(biāo)準(zhǔn)適用于實驗室條件下對牛早期胚胎進(jìn)行性別鑒定。
根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn),首先需要從牛的早期胚胎中提取DNA。然后,采用特定引物通過兩輪PCR擴(kuò)增目標(biāo)序列,第一輪使用一對外部引物擴(kuò)增較大片段,第二輪則利用內(nèi)部引物對第一輪產(chǎn)物中的特定區(qū)域進(jìn)一步放大。這種方法能夠提高檢測靈敏度和特異性,從而更準(zhǔn)確地識別胚胎性別相關(guān)基因片段。
整個過程包括樣品準(zhǔn)備、DNA提取與純化、設(shè)計合適的引物序列、執(zhí)行巢式PCR反應(yīng)以及最后的結(jié)果分析等步驟。其中,選擇恰當(dāng)?shù)囊飳τ诖_保實驗成功至關(guān)重要。此外,還需注意控制實驗條件如溫度循環(huán)參數(shù)等,以保證擴(kuò)增效率和準(zhǔn)確性。
本標(biāo)準(zhǔn)還詳細(xì)規(guī)定了質(zhì)量控制措施和技術(shù)要求,比如如何避免污染、怎樣設(shè)置陽性對照和陰性對照實驗等,確保每次測試結(jié)果可靠有效。通過遵循這些指導(dǎo)原則,研究人員可以有效地利用巢式PCR技術(shù)來進(jìn)行牛早期胚胎性別鑒定工作。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2011-01-10 頒布
- 2011-06-01 實施
文檔簡介
ICS6502030
B43..
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T25876—2010
牛早期胚胎性別的鑒定巢式PCR法
MethodofnestedPCRforsexidentificationofearlycattleembryo
2011-01-10發(fā)布2011-06-01實施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會
中華人民共和國
國家標(biāo)準(zhǔn)
牛早期胚胎性別的鑒定巢式PCR法
GB/T25876—2010
*
中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行
北京復(fù)興門外三里河北街號
16
郵政編碼
:100045
網(wǎng)址
電話
:6852394668517548
中國標(biāo)準(zhǔn)出版社秦皇島印刷廠印刷
各地新華書店經(jīng)銷
*
開本印張字?jǐn)?shù)千字
880×12301/160.57
年月第一版年月第一次印刷
2011220112
*
書號
:155066·1-41599
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GB/T25876—2010
前言
本標(biāo)準(zhǔn)的附錄為規(guī)范性附錄附錄為資料性附錄
B,A。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出
。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口
。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
:。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張淑君楊利國李翔劉輝劉文舉胡修忠
:、、、、、。
Ⅰ
GB/T25876—2010
牛早期胚胎性別的鑒定巢式PCR法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛早期胚胎性別鑒定的巢式方法
PCR。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于奶牛和肉牛胚胎或胎兒的性別鑒定
。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有
。,
的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)然而鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究
(),,
是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)
。,。
分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
GB/T6682
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)
。
31
.
巢式PCRnestedpolymerasechainreaction
利用兩套引物巢式引物對進(jìn)行兩輪擴(kuò)增反應(yīng)在第一輪擴(kuò)增中外引物用以產(chǎn)
PCR(PCR)PCR,,
生擴(kuò)增產(chǎn)物此產(chǎn)物在內(nèi)引物的存在下作為模板進(jìn)行第二輪擴(kuò)增
,,DNA,。
32
.
SRY基因SRYgene
哺乳動物染色體上決定雄性性別的基因
Y。
33
.
HBB基因HBBgene
珠蛋白基因位于常染色體上
β,。
4原理
利用巢式反應(yīng)的敏感性高和特異性強(qiáng)的特性對少量胚胎細(xì)胞的SRY基因片段進(jìn)行擴(kuò)增以
PCR,,
HBB基因的擴(kuò)增作為陽性參照電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶鑒定胚胎性別
,PCR,。
5引物
SRY
15′CTACTCCCCAACCGTCAGAAC3′
5′AGCCCAAACCCATCAACCTA3′
SRY
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