GB/T 25878-2010對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒(IHHNV)檢測(cè)PCR法

ICS6502030

B41..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T25878—2010

對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒

IHHNV檢測(cè)PCR法

()

PolmerasechainreactionPCRmethodforinfectioushodermaland

y()yp

haematooieticnecrosisvirusIHHNV

p()

2011-01-10發(fā)布2011-06-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T25878—2010

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄和附錄為資料性附錄

AB。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部全國水產(chǎn)技術(shù)推廣總站

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人黃倢楊冰朱澤聞宋曉玲孫喜模趙紅萍劉莉

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25878—2010

對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒

IHHNV檢測(cè)PCR法

()

警告使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問題

:,。

使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧┎⒈ＷC符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件

,。

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)方法的

(IHHNV)(PCR)

原理所需試劑和材料儀器和設(shè)備操作步驟和結(jié)果判定

、、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于對(duì)蝦環(huán)境生物餌料生物和其他各種非生物樣品中傳染性皮下及造血組織壞死病毒

、、

的定性檢測(cè)不適于對(duì)病毒量或感染活性的估測(cè)以及宿主感染程度的評(píng)估

(IHHNV)。。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)然而鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。,。

斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第部分壓片顯微鏡檢查法

SC/T7202.1—20071:

斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第部分檢測(cè)法

SC/T7202.2—20072:PCR

3原理

31對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒及其流行特征

.

傳染性皮下及造血組織壞死病毒

(infectioushypodermalandhaematopoieticnecrosisvirus,

粒子大小為是無囊膜二十面體在氯化銫中的浮力密度為含線

IHHNV)20nm~22nm,,1.40g/mL,

狀單鏈長度為衣殼由個(gè)分子質(zhì)量分別為的多肽組成

DNA,4.1kb,474kD、47kD、39kD、37.5kD。

可感染世界各地的養(yǎng)殖對(duì)蝦其感染細(xì)角濱對(duì)蝦Litopenaeusstylirostris會(huì)引起急性傳

IHHNV,()

染病和高死亡率稚蝦受到的危害最嚴(yán)重感染凡納濱對(duì)蝦Litopenaeusvannamei

(90%),。IHHNV()

會(huì)引起慢性矮小殘缺綜合癥主要影響是患病對(duì)蝦生長緩慢畸形受感染存活對(duì)蝦終生帶毒

“”(RDS),,,,

通過垂直和水平傳播

。

32技術(shù)原理

.

的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是以的一段個(gè)堿基

IHHNV(polymerasechainreaction,PCR)IHHNV389(b)

長度的特異性序列作為模板以與模板兩端序列互補(bǔ)的一對(duì)特異性寡核苷酸序列作為引物在四

DNA,,

種脫氧核糖核苷三磷酸存在下利用依賴的聚合酶的合成作用經(jīng)過數(shù)十次變性退火和延

,DNADNA,、

伸的反應(yīng)循環(huán)使模板上介于兩個(gè)引物之間的片段得到特異性地級(jí)數(shù)擴(kuò)增再通過電泳等手段檢

,DNA,

測(cè)到被特異性擴(kuò)增的片段從而揭示微量的存在

,IHHNVDNA。

4試劑和材料

41所需試劑除引物陽性對(duì)照和陰性對(duì)照以外按照中第章的規(guī)定

.、,SC/T7202.2—20075。

42引物保存

.100ng/μLF:5′-CGG-AAC-ACA-ACC-CGA-CTT-TA-3′,-20℃。

43引物保存

.100ng/μL