高中生物浙科版現代生物科技專題第一章基因工程 第1章第1節(jié)

第一節(jié)工具酶的發(fā)現和基因工程的誕生課標解讀重點難點1.聯系遺傳工程的含義，說出基因工程的主要內容。2.結合“工具酶作用示意圖”說出限制性核酸內切酶和DNA連接酶的作用。3.結合“質粒分子結構示意圖”明確質粒的本質及特性。1.DNA重組技術所需3種基本工具的作用。(重點)2.基因工程載體需要具備的條件。(重難點)遺傳工程的概念1.狹義的遺傳工程指基因工程。2．廣義的遺傳工程泛指把一種生物的遺傳物質(細胞核、染色體脫氧核糖核酸等)移到另一種生物的細胞中去，并使這種遺傳物質所帶的遺傳信息在受體細胞中表達。基因工程的理論基礎和技術保障理論基礎DNA是遺傳物質的發(fā)現DNA雙螺旋結構的確立中心法則的認定和遺傳密碼的破譯技術保障基因轉移載體——質粒的發(fā)現多種限制性核酸內切酶和連接酶以及逆轉錄酶(工具酶)的發(fā)現DNA合成和測序技術的發(fā)明DNA體外重組的實現、重組DNA表達實驗的成功第一例轉基因動物問世、PCR技術的發(fā)明DNA重組技術的基本工具1.基因的——限制性核酸內切酶(1)作用：對DNA分子上不同的特定的核苷酸序列進行識別和切割。(2)作用特點：專一性。(3)作用結果：產生粘性末端，使DNA的重組成為可能。1.左圖中打開G與C化學鍵的酶c的名稱是什么？工具a使哪種化學鍵斷裂？【提示】解旋酶；磷酸二酯鍵。2．基因的——DNA連接酶(1)發(fā)現：1967年。(2)作用：將具有末端堿基互補配對的兩個DNA分子片斷連接在一起。(3)過程如圖所示：3．基因工程的載體(如圖)大腸桿菌質粒的分子結構示意圖(1)種類①質粒：是一種小型的環(huán)狀DNA分子。②λ噬菌體。③動植物病毒等。(2)特點①能自我復制。②具有一個至多個限制性核酸內切酶切割位點。③具有標記基因。④對受體細胞無害。(3)作用結果攜帶外源基因進入受體細胞。2.嘗試寫出圖示中的酶a及X的名稱？【提示】酶a是DNA連接酶，X是能合成胰島素的細菌細胞。1．一種限制性核酸內切酶可識別多種特定的核苷酸序列。(×)【提示】一種限制性核酸內切酶只識別一種核苷酸序列。2．基因工程的載體與物質跨膜轉運所需要的載體化學本質相同。(×)【提示】前者的化學本質是DNA，后者的化學本質是蛋白質。3．不同限制性核酸內切酶切割DNA后形成的粘性末端可能相同。(√)4．DNA連接酶可將任意兩個DNA片斷連接在一起。(×)【提示】可將兩個粘性末端相同的DNA片斷連接在一起。5．質粒上抗性基因的存在有利于目的基因表達的鑒定。(×)【提示】有利于導入目的基因的受體細胞的篩選。對限制性核酸內切酶的認識【問題導思】①限制性核酸內切酶在DNA的任何部位都能將DNA切開嗎？②限制性核酸內切酶作用于DNA的何種部位？③限制性核酸內切酶作用的產物叫什么？1．來源多數來自微生物。2．特點具有專一性，表現在以下兩個方面：(1)識別雙鏈DNA分子中特定的核苷酸序列。(2)在特定位點切割特定的序列，特定序列表現為中心對稱，如EcoRⅠ限制性核酸內切酶的切割序列(如圖所示)。3．作用切開DNA鏈中的磷酸二酯鍵(即連接相鄰脫氧核苷酸的鍵)，而不是堿基間的氫鍵。4．產物——粘性末端粘性末端：是限制性核酸內切酶在識別序列的中心軸線兩側將DNA的兩條鏈分別切開形成的。(如圖)從圖中可看出，經限制性核酸內切酶一次切割，可產生出兩個粘性末端，而且兩個末端反向并且可互補(圖中箭頭表示粘性末端方向)。1．不同種類的限制性核酸內切酶識別與切割的位點不同，這與酶催化作用的專一性特點是一致的。2．限制性核酸內切酶特異性識別的切割部位都具有回文序列，也就是在切割部位，一條鏈正向讀的堿基順序，與另一條鏈反向讀的順序完全一致。3．限制性核酸內切酶切點數與切后DNA條數的關系(1)線形DNA分子：切后DNA分子數＝切點數＋1。(2)環(huán)狀DNA分子：切后DNA分子數＝切點數。(2023·杭州高二質檢)下表為常用的限制性核酸內切酶及其識別序列和切割位點，由此推斷的以下說法中，正確的是()限制性核酸內切酶名稱識別序列和切割位點限制性核酸內切酶名稱識別序列和切割位點BamHⅠG↓GATCCKpnⅠGGTAC↓CEcoRⅠG↓AATTCSau3AⅠ↓GATCHindⅡGTY↓RACSmaⅠCCC↓GGG(注：Y＝C或T，R＝A或G)A．限制性核酸內切酶切割后不一定形成粘性末端B．限制性核酸內切酶的切割位點一定在識別序列的內部C．不同限制性核酸內切酶切割后一定形成不同的粘性末端D．一種限制性核酸內切酶一定只能識別一種核苷酸序列【審題導析】限制性核酸內切酶是一類酶，含有多種酶，區(qū)分這些酶種類的依據是識別序列與切割位點，而不是粘性末端?！揪v精析】由表中信息可知，HindⅡ能識別不同的核苷酸序列；核苷酸序列經限制性核酸內切酶切割后不一定形成粘性末端，可形成平末端，如SmaⅠ切割DNA形成的末端；Sau3AⅠ的切割位點在識別序列的外部；不同限制性核酸內切酶切割后可能形成相同的粘性末端，如BamHⅠ與Sau3AⅠ切割形成的末端?！敬鸢浮緼現有一長度為1000個堿基對(bp)的DNA分子，用限制性核酸內切酶EcoRⅠ酶切后得到的DNA分子仍是1000bp，用KpnⅠ單獨酶切得到400bp和600bp兩種長度的DNA分子，用EcoRⅠ、KpnⅠ同時酶切后得到200bp和600bp兩種長度的DNA分子。下圖中表示該DNA分子的酶切圖譜正確的是()【思維導圖】解答此題的思維流程如下：eq\x(\a\al(EcoRⅠ酶,切的結果))?eq\x(\a\al(環(huán)狀DNA))?eq\x(\a\al(分析KpnⅠ,酶切的情況))?eq\x(\a\al(確定酶,切位點))【精講精析】該題目要注意兩種限制性核酸內切酶切割后切點數及位置特點。根據題干信息可知：該DNA分子被EcoRⅠ酶切之后還是一個DNA分子且長度不變，說明該DNA是環(huán)狀DNA，其中有一個EcoRⅠ酶的切點；單獨用KpnⅠ酶切割該DNA形成兩個DNA分子，說明該DNA中有兩個KpnⅠ酶的切點，故答案為D。另外，該題也可用驗證法來解：將A、B、C、D四項一一代入驗證，看哪個選項符合題意?！敬鸢浮緿對DNA連接酶的認識【問題導思】①DNA連接酶與DNA聚合酶作用相同嗎？②連接堿基對之間的氫鍵也是DNA連接酶作用的結果嗎？③DNA復制過程中需要DNA連接酶的催化嗎？1．DNA連接酶作用將DNA片段間的磷酸二酯鍵連接起來特點將具有相同的粘性末端或平末端的DNA片段連接起來。在基因工程中，為了保證獲得相同的粘性末端，通常要用同一種限制性核酸內切酶處理目的基因和載體。實例E·coliDNA連接酶連接兩個粘性末端連接酶與DNA聚合酶的比較DNA連接酶DNA聚合酶相同點催化兩個脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵不同點模板不需要模板需要DNA的一條鏈為模板作用對象游離的DNA片段單個的脫氧核苷酸作用結果形成完整的DNA分子形成雙鏈DNA用途基因工程DNA復制幾種酶的作用部位圖解1．作用于a(磷酸二酯鍵)的酶有：限制性核酸內切酶、DNA連接酶、DNA聚合酶。2．作用于b(氫鍵)的酶只有解旋酶。下列關于DNA連接酶的作用，敘述正確的是()A．能將雙鏈DNA片段互補的粘性末端之間連接起來，也能將雙鏈DNA的粘性末端之間的氫鍵進行連接B．將單個核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸二酯鍵C．連接兩條DNA鏈上堿基之間的氫鍵D．將斷開的兩個DNA片段連接起來，重新形成磷酸二酯鍵【審題導析】解答此題的突破口在于明確DNA連接酶的作用為DNA片斷間的“封口”，而DNA聚合酶則是連接的單個脫氧核苷酸?！揪v精析】表面上看，DNA連接酶和DNA聚合酶兩者都是形成磷酸二酯鍵，但本質上有所區(qū)別：①DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。②DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板，將單個脫氧核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈；而DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個缺口同時連接起來。選項B是DNA聚合酶的作用。DNA連接酶不能連接氫鍵，選項A是錯誤的。【答案】D(2023·舟山高二檢測)下圖為DNA分子結構示意圖。對該圖的不正確描述是()A．④的名稱是胞嘧啶脫氧核苷酸B．解旋酶作用的部位是⑨C．某限制性核酸內切酶可選擇⑨處作為切點D．DNA連接酶可連接⑩處斷裂的化學鍵【審題導析】解答此題應注意圖示中氫鍵為DNA雙鏈堿基對的連接部位或粘性末端的堿基連接部位。磷酸二酯鍵為DNA單鏈中脫氧核苷酸之間的連接部位?！揪v精析】DNA的基本單位為脫氧核苷酸，而4種脫氧核苷酸是根據堿基類型來命名的。圖中⑨為氫鍵，⑩為磷酸二酯鍵，而解旋酶作用的部位是氫鍵，限制性核酸內切酶和DNA連接酶的作用部位都是磷酸二酯鍵?！敬鸢浮緾基因工程的載體及其必須具備的條件【問題導思】①質粒的本質是什么？②質粒為什么適合作為載體？③作為基因工程中的載體需要哪些條件？1．常見的載體——質粒(如圖)(1)具備條件①能自我復制：能夠在受體細胞中進行自我復制，或整合到染色體DNA上，隨染色體DNA進行同步復制。②有切割位點：有一個至多個限制性核酸內切酶切割位點，供外源基因插入。③具有標記基因：具有特殊的標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。④無毒害作用：對受體細胞無毒害作用，否則受體細胞將受到損傷甚至死亡。(2)作用①用它作為運輸工具，將目的基因送入受體細胞中去。②利用它在受體細胞內對目的基因進行大量復制。2．載體的種類(1)一類是細菌的質粒，質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌擬核DNA之外的，并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。(2)另一類是病毒，包括λ噬菌體和某些動植物病毒。在選擇動植物病毒作載體時，應選擇DNA病毒以便插入目的基因。(3)病毒載體作用的對象有專一性如圖為大腸桿菌及質粒載體的結構模式圖，據圖回答下列問題。(1)a代表的物質和質粒的化學本質相同，都是______，二者還具有其他共同點，如①________________，②________________(寫出兩條即可)。(2)若質粒DNA分子的切割末端為eq\o(\a\al(—A,—TGCGC))，則與之連接的目的基因切割末端應為________；可使用________把質粒和目的基因連接在一起。(3)氨芐青霉素抗性基因在質粒DNA上稱為______________________，其作用是__________________________________________?！舅季S導圖】解答此題的思維導圖如下：【精講精析】(1)讀圖a為大腸桿菌的擬核，其結構物質為DNA，而質粒為能進行自我復制的環(huán)狀DNA，均可作為遺傳物質通過復制遺傳給子代。(2)同一種限制性核酸內切酶切割后形成的末端是相同的，由給定的末端eq\o(\a\al(—A,—TGCGC))知，對應的目的基因切割末端為eq\o(\a\al(CGCGT—,A—))，縫合工具為DNA連接酶。(3)作為質粒的一個必備條件“標記基因”，其作用在于鑒定和篩選目的基因是否導入受體細胞。【答案】(1)DNA能夠自我復制具有遺傳效應(2)eq\o(\a\al(CGCGT—,A—))DNA連接酶(3)標記基因供重組細胞的鑒定和選擇本課知識小結網絡構建結論語句1．基因工程是狹義的遺傳工程。2．基因工程誕生的理論基礎：DNA是生物的主要遺傳物質，DNA的雙螺旋結構以及遺傳信息的傳遞方式。3．基因的“手術刀”是限制性核酸內切酶，它對DNA分子上不同的特定的核苷酸序列進行識別和切割。4．基因的“縫合針”是DNA連接酶，它能將具有末端堿基互補的2個DNA分子片斷連接在一起。5．基因的載體是質粒，它是能自主復制的雙鏈環(huán)狀DNA分子。1．20世紀70年代，人類科學史上又一重大成果——基因工程誕生了。它誕生的理論基礎不包括()A．DNA是生物體的主要遺傳物質B．人類基因組計劃的完成C．DNA雙螺旋結構的確立D．中心法則的成功揭示【解析】人類基因組計劃是在20世紀末提出的，晚于基因工程。因此，不是基因工程的理論基礎。【答案】B2．對下圖所示粘性末端的說法，錯誤的是()A．甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸內切酶催化產生的B．甲、乙具有相同的粘性末端，可形成重組DNA分子，但甲、丙之間不能C．DNA連接酶作用位點在b處，催化磷酸基團和脫氧核糖之間形成化學鍵D．切割甲的限制性核酸內切酶不能識別由甲、乙片段形成的重組DNA分子【解析】由圖分析可知，切割產生甲、乙、丙的限制性核酸內切酶的識別序列和切割位點分別是：—G↓AATTC—、—C↓AATTG—和—C↓TTAAG—，所以甲、乙、丙分別由3種不同的酶催化產生；相同的粘性末端才能形成重組DNA；甲、乙片段形成的重組DNA分子為：eq\o(\a\al(—CAATTC—,—GTTAAG—))，而這并不能被切割甲的酶所識別；b處表示的是DNA兩條鏈之間的氫鍵，解旋酶作用于此處，限制性核酸內切酶作用于a處?！敬鸢浮緾3．在基因工程中用來完成基因剪接的工具是()A．限制性核酸內切酶和水解酶B．限制性核酸內切酶和DNA連接酶C．限制性核酸內切酶和載體D．DNA連接酶和載體【解析】本題的關鍵是“剪接”二字，是既剪又接。限制性核酸內切酶是剪切基因的，而DNA連接酶是將DNA末端之間的縫隙“縫合”起來。所以，剪接的工具是限制性核酸內切酶和DNA連接酶?！敬鸢浮緽4．(2023·浙江余桃高二檢測)人們常選用的細菌質粒分子往往帶有一個抗菌素抗性基因，該抗性基因的主要作用是()A．提高受體細胞在自然環(huán)境中的耐藥性B．以便篩選含目的基因的受體細胞C．增加質粒分子的分子量D．便于與外源基因連接【解析】基因工程中使用細菌質粒做載體，目的是把目的基因導入到受體細胞里面，而作為載體上的抗性基因被看做是標記基因，用來做篩選工作?！敬鸢浮緽5．(2023·金華高二月考)基因工程又叫DNA重組技術。(1)基因工程中常用的載體有質粒、噬菌體、________。(2)進行基因操作時，要用同一種________分別切割質粒和目的基因，質粒的粘性末端和目的基因DNA片段的粘性末端就可通過____________而粘合。(3)假設以大腸桿菌質粒作為載體，用同種限制性核酸內切酶去切割質粒和目的基因，將切割后的質粒和目的基因片段混合，并加以DNA連接酶。連接產物至少有________種環(huán)狀DNA分子，它們分別是_______________________________________________________________________________________。(4)下圖為EcoRⅠ切割DNA分子示意圖由EcoRⅠ切割產生的DNA片段末端形式為________________。【解析】在切割質粒和目的基因時，要用同一種限制性核酸內切酶，使其產生相同的粘性末端，再加入適量的DNA連接酶，質粒的粘性末端與目的基因的粘性末端、目的基因的粘性末端之間或質粒的粘性末端之間就會因堿基互補配對而結合起來，形成重組DNA、質粒的自連或目的基因的自連三種環(huán)狀DNA分子。讀(4)圖知切割后形成的末端為eq\o(\a\al(AATTC—,G—))或eq\o(\a\al(—G,—CTTAA))，形式為粘性末端?！敬鸢浮?1)某些動植物病毒(2)限制性核酸內切酶堿基互補配對(3)3質粒自連、目的基因片段自連、質粒與目的基因片段相連的環(huán)狀DNA分子(4)eq\o(粘性末端)一、選擇題1．下列關于生物技術手段的操作水平的敘述，錯誤的是()A．雜交育種——個體水平B．多倍體育種——細胞水平C．基因工程——原子水平D．誘變育種——分子水平【解析】基因工程又稱DNA重組技術，即操作水平為分子水平?！敬鸢浮緾2．(2023·浙江瑞安市高二檢測)下面是4種限制性核酸內切酶所識別的DNA分子序列和剪切位點(↓表示剪切位點，切出的斷面為粘性末端)：限制性核酸內切酶1：—↓GATC—限制性核酸內切酶2：—CATG↓—限制性核酸內切酶3：—G↓GATCC—限制性核酸內切酶4：—CCGC↓GG—下列表達正確的是()A．限制性核酸內切酶1和3剪出的粘性末端相同B．在使用限制性核酸內切酶的同時還需要解旋酶C．限制性核酸內切酶1、2、4識別的序列都是由4個脫氧核苷酸組成的D．限制性核酸內切酶1和2切出的DNA片段可通過T4DNA連接酶拼接【解析】使用限制性核酸內切酶時不需要解旋酶解旋，一般用加熱解旋；限制性核酸內切酶4識別的序列是由6個脫氧核苷酸組成的；限制性核酸內切酶1和2切出的DNA片段不互補，不能連接?！敬鸢浮緼3．下列對基因工程的理解錯誤的是()A．基因工程又叫轉基因技術或重組DNA技術B．基因工程可以將一種生物的DNA片段轉移到另一種生物細胞內并讓其表達C．基因工程的出現受到技術發(fā)展的推動D．基因工程技術已經比較成熟，每次轉基因都可以成功，并且達到滿意的結果【解析】基因工程技術尚不是很完善，每次轉基因時都需要轉移大量的片段，然后再進行篩選，不能精確轉移，也不能讓目的基因百分之百表達?！敬鸢浮緿4．(2016·蘇州高二檢測)基因工程中所用到的工具酶包括()①DNA解旋酶②限制性核酸內切酶③DNA連接酶④質粒A．①②③B．②③④C．②③D．①③【解析】DNA解旋酶用于DNA復制過程中，不用于基因工程；質粒是基因工程的載體，但不是酶。因此C項正確。【答案】C5．已知某種限制性核酸內切酶在一線性DNA分子上有3個酶切位點，如圖中箭頭所指。如果該線性DNA分子在3個酶切位點上都被該酶切斷，則會產生a、b、c、d四種不同長度的DNA片段?，F有多個上述線性DNA分子，若每個DNA分子上至少有1個酶切位點被該酶切斷，則從理論上講，經該酶切割后，這些線性DNA分子最多能產生的不同長度DNA片段的種類數是()線性DNA分子的酶切示意圖A．1 B．2C．4 D．9【解析】若每個DNA分子上至少有1個酶切位點被酶切斷，則多個線性DNA可以切得的種類有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九種。【答案】D6．作為基因的運輸工具——載體，必須具備的條件之一及理由是()A．能夠在宿主細胞中穩(wěn)定地保存下來并大量復制，以便提供大量的目的基因B．具有多個限制性核酸內切酶切點，以便于目的基因的表達C．具有某些標記基因，以便為目的基因的表達提供條件D．能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定保存，以便于進行篩選【解析】作為載體要攜帶目的基因進入受體細胞并使之表達，必須能夠在宿主細胞內穩(wěn)定地保存并大量復制，以便通過復制提供大量的目的基因。同時要具有某些標記基因，是為了通過標記基因是否表達來判斷目的基因是否進入了受體細胞，從而進行篩選受體細胞。載體要具有多個限制性核酸內切酶切點，則是為了便于與外源基因連接。綜上所述，正確答案應為A?！敬鸢浮緼7．限制性核酸內切酶是一種核酸切割酶，可辨識并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下圖為四種限制性核酸內切酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ以及BglⅡ的辨識序列。箭頭表示每一種限制性核酸內切酶的特定切割部位，其中哪兩種限制性核酸內切酶所切割出來的DNA片段末端可以互補，其正確的末端互補序列是怎樣的()A．BamHⅠ和EcoRⅠ；末端互補序列為—AATT—B．BamHⅠ和HindⅢ；末端互補序列為—GATC—C．EcoRⅠ和HindⅢ；末端互補序列為—AATT—D．BamHⅠ和BglⅡ；末端互補序列為—GATC—【解析】分析每種限制性內切酶切割位點可知，BamHⅠ和BglⅡ切割核苷酸序列后，能產生互補的粘性末端。【答案】D8．下面是四種不同質粒的示意圖，其中ori為復制必需的序列，amp為氨芐青霉素抗性基因，tet為四環(huán)素抗性基因，箭頭表示某種限制性核酸內切酶的酶切位點。下列質粒中不能作為基因工程載體的是()【解析】質粒作為基因工程的載體，有兩個作用：一是通過標記基因對重組DNA分子是否進入受體細胞進行鑒定；二是在受體細胞中通過自我復制完成目的基因的擴增。圖中ori為復制必需序列，該序列不能被破壞，否則重組質粒就無法在受體細胞中進行自我復制；圖中的amp、tet均為標記基因，只需保留1個即可。【答案】C9.質粒是基因工程中最常用的載體，它存在于許多細菌體內。質粒上有標記基因如圖所示，通過標記基因可以推知外源基因(目的基因)是否轉入成功。外源基因插入的位置不同，細菌在培養(yǎng)基上的生長情況也不同，下表是外源基因插入位置(插入點有a、b、c)，請根據表中提供的細菌生長情況，推測①②③三種重組后細菌的外源基因插入點，正確的一組是()細菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上的生長狀況細菌在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上的生長狀況①能生長能生長②能生長不能生長③不能生長能生長A.①是c；②是b；③是aB．①是a和b；②是a；③是bC．①是a和b；②是b；③是aD．①是c；②是a；③是b【解析】對①細菌來說，能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長，也能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，說明抗氨芐青霉素基因和抗四環(huán)素基因都沒有被破壞，插入點是c；對②細菌來說，能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長，說明其抗氨芐青霉素基因正常，不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，說明其抗四環(huán)素基因被破壞，插入點應為b；對③細菌來說，不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長，說明其抗氨芐青霉素基因被插入而破壞，故插入點為a。【答案】A10．下表為幾種限制性核酸內切酶識別的序列和切割的位點。下圖，已知某DNA在目的基因的兩端1、2、3、4四處有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位點?，F用BamHⅠ和EcoRⅠ兩種酶同時切割該DNA片段(假設所用的酶均可將識別位點完全切開)。下列各種酶切位點情況中，可以防止酶切后單個含目的基因的DNA片段自身連接成環(huán)狀的是()限制性核酸內切酶BamHⅠEcoRⅠPstⅠ識別序列和切割位點eq\o(\a\al(↓,,,GGATCC,CCTAGG,,,↑))eq\o(\a\al(↓,,,GAATTC,CTTAAG,,,↑))eq\o(\a\al(↓,,,CTGCAG,GACGTC,,,↑))A．1為BamHⅠ，2為EcoRⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠB．1為EcoRⅠ，2為BamHⅠ，3為BamHⅠ，4為PstⅠC．1為PstⅠ，2為EcoRⅠ，3為EcoRⅠ，4為BamHⅠD．1為BamHⅠ，2為EcoRⅠ，3為PstⅠ，4為EcoRⅠ【解析】本題建議采用排除法?，F用BamHⅠ和EcoRⅠ兩種酶同時切割該DNA片段，若“2為BamHⅠ，3為BamHⅠ”，則酶切后單個含目的基因的DNA片段(2→3)自身連接成環(huán)狀，故B項錯誤；若“2為EcoRⅠ，3為EcoRⅠ”，則酶切后單個含目的基因的DNA片段(2→3)自身連接成環(huán)狀，故C項錯誤；若“2為EcoRⅠ,4為EcoRⅠ”，則酶切后單個含目的基因的DNA片段(2→4)自身連接成環(huán)狀，故D項錯誤?！敬鸢浮緼二、非選擇題11．如圖為DNA分子的切割和連接過程，請據圖回答：(1)EcoRⅠ是一種________酶，其識別序列是________，切割位點是________與________之間的________鍵，切割產生的DNA片段的末端形式為________。(2)不同來源的DNA片段結合，在這里需要的酶應是________酶，此酶的作用是在________與________之間形成________而起“縫合”作用的。【解析】本題考查限制性核酸內切酶和DNA連接酶的作用。(1)從圖中可以看出EcoRⅠ將DNA片段切割，應為限制性核酸內切酶，其識別序列是GAATTC，切點是G與A之間的磷酸二酯鍵，切割后產生的DNA片段的末端是粘性末端。(2)DNA連接酶可將不同來源的DNA片段連接，從圖中可以看出，此酶是通過在G與A之間形成磷酸二酯鍵的形式連接兩個片段，連接粘性末端的連接酶是E·coliDNA連接酶。還有一種T4DNA連接酶，既可連接粘性末端，也可連接平末端?！敬鸢浮?1)限制性核酸內切GAATTC