第四章 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和實(shí)施

第四章

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和實(shí)施一.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則

1.相似性2.可靠性3.重復(fù)性

4.可控性5.經(jīng)濟(jì)性6.倫理性

二.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)課題的設(shè)計(jì)

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

2.動(dòng)物分組原則

三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)施

1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的訂購(gòu)

2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法

3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安死術(shù)

四.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與外推生命科學(xué)研究的設(shè)計(jì)中遵循的原則

1.相似性(比較醫(yī)學(xué))

為了避免直接在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，必須在人為設(shè)計(jì)的條件下，選擇動(dòng)物作為人類的替代者。結(jié)論.無(wú)論何種動(dòng)物均與人類不屬同種生物。2.被判為對(duì)動(dòng)物無(wú)效的藥物，不等于臨床無(wú)效。

設(shè)計(jì)的一個(gè)重要原則是：所獲結(jié)果應(yīng)盡可能類似于人類的情況。12.可靠性

課題研究結(jié)果要可靠，就要求使用的動(dòng)物模型能夠準(zhǔn)確模擬人類的疾病，即可特異地，真實(shí)地反映某種疾病或機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)變化，應(yīng)具備該種疾病的主要癥狀和體征，經(jīng)化驗(yàn)或X光照片，心電圖，病理切片等證實(shí)。

要使實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠,就必須使用質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

如不合格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物易自發(fā)地出現(xiàn)某些相應(yīng)病變的癥狀，就不應(yīng)選用。

為了確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理后的反應(yīng)可靠性，還要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境保持穩(wěn)定，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的需要，以及保障實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境免受實(shí)驗(yàn)危害。3.重復(fù)性

科學(xué)與實(shí)用、經(jīng)典與創(chuàng)新

科學(xué)研究成果必須能夠重復(fù)，所用動(dòng)物模型應(yīng)能重復(fù)培育，且能實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。如用一次定量放血法可導(dǎo)致動(dòng)物百分之百呈出血性休克，百分之百死亡，這就符合可重復(fù)和達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化的要求。但結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈的后果差異太大，不同犬同一動(dòng)脈相同部位的結(jié)扎后果無(wú)法預(yù)測(cè)，不能標(biāo)準(zhǔn)化;

改用實(shí)驗(yàn)小鼠、大鼠、地鼠或豚鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，其結(jié)果就比較一致，可標(biāo)準(zhǔn)化。

用犬做心肌梗死模型應(yīng)較合適，犬的冠狀動(dòng)脈循環(huán)與人相似，且適宜做暴露心臟的剖胸手術(shù)；4.可控性

對(duì)動(dòng)物及其實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程控制

在課題研究中使用的動(dòng)物模型應(yīng)考慮到今后臨床應(yīng)用和便于控制其疾病的發(fā)展，以利課題的順利進(jìn)展。

如雌激素能終止實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠的早期妊娠，但不能終止人的妊娠。

以實(shí)驗(yàn)大鼠或小鼠篩選帶有雌激素活性的藥物時(shí)，常發(fā)現(xiàn)這類藥物能終止妊娠，似乎是有效的避孕藥，但用于人類卻不成功。如果已知待測(cè)藥物含有雌激素，就不能使用實(shí)驗(yàn)大鼠或小鼠觀察其終止妊娠的作用。

實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠對(duì)革蘭氏陰性菌有較強(qiáng)的抵抗力，不宜選用實(shí)驗(yàn)大鼠或小鼠作實(shí)驗(yàn)性腹膜炎動(dòng)物模型，不容易導(dǎo)致腹膜炎。

有的動(dòng)物對(duì)某些致病因子特別敏感，很難控制，極易死亡，不適宜研究

...

,.如犬腹腔注射糞便濾液引起腹膜炎，有80％在24h內(nèi)死亡；等不及實(shí)驗(yàn)治療觀察；且糞便濾液中細(xì)菌菌株難于控制，不能準(zhǔn)確重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。5.經(jīng)濟(jì)性

經(jīng)費(fèi)預(yù)算和其他考慮

在設(shè)計(jì)和執(zhí)行課題計(jì)劃時(shí)，對(duì)選用的動(dòng)物和采用的方法應(yīng)符合課題經(jīng)費(fèi)預(yù)算。

靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類最相似，但其數(shù)量少，價(jià)格貴，不宜多用。目前已有為數(shù)眾多的實(shí)驗(yàn)小鼠、大鼠、豚鼠和地鼠能復(fù)制成十分近似人類疾病的動(dòng)物模型。其年齡、性別、體重等可根據(jù)課題需要而選擇，

價(jià)格比靈長(zhǎng)類動(dòng)物低，便于飼養(yǎng)管理和實(shí)驗(yàn)操作，可按需使用。6.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的福利與倫理

使用合格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以減少使用數(shù)量。

根據(jù)動(dòng)物的習(xí)性，給予適當(dāng)?shù)木幼】臻g，進(jìn)行科學(xué)的飼養(yǎng)管理。

使用適當(dāng)?shù)穆樗帲瑴p輕動(dòng)物緊張，最后對(duì)動(dòng)物采用安死術(shù)。

盡可能采用“替代”，包括生命系統(tǒng)和非生命系統(tǒng)的替代。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的福利與倫理隨著世界上動(dòng)物保護(hù)主義的興起，而醫(yī)學(xué)生命科學(xué)研究又不得不使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的前提下產(chǎn)生的。因此，1959年Russell和Burch發(fā)表的《仁慈的試驗(yàn)技術(shù)原理》一書(shū)中提出的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)應(yīng)采取替代、減少和優(yōu)化原則（即“3R”）被廣大生命科學(xué)工作者所接受。1.替代（replacement）原則：是指在試驗(yàn)系統(tǒng)中盡可能用低等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物替代高等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，用離體培養(yǎng)的細(xì)胞、組織、器官替代動(dòng)物個(gè)體，用微生物替代動(dòng)物，用物理、化學(xué)等非生命系統(tǒng)替代生命系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)，并能獲得相同試驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)方法。2.減少（reduction）原則：是指如果某一研究方案中必須使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，同時(shí)又沒(méi)有可行的替代方法，則應(yīng)通過(guò)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，把使用動(dòng)物的數(shù)量降低到實(shí)現(xiàn)科研目的最小量，或用較少的動(dòng)物獲得更多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，或者綜合利用動(dòng)物。3優(yōu)化（refinement）原則：是指通過(guò)改善動(dòng)物設(shè)施、飼養(yǎng)管理和實(shí)驗(yàn)條件，精選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、技術(shù)路線和實(shí)驗(yàn)手段，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，熟練掌握動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，盡量減少實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物機(jī)體的損傷，減輕動(dòng)物遭受的痛苦和應(yīng)激反應(yīng)，使動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得出科學(xué)的結(jié)果。違背倫理

把小狗小貓放入微波加熱裝置中，以研究微波加熱引起的傷害與一般發(fā)熱引起傷害的差別，結(jié)果使這些動(dòng)物在數(shù)十分鐘內(nèi)極其痛苦地死亡。

其他一些實(shí)驗(yàn)手段，如“砸碎”、“冷凍”、“出血”、“壓力或應(yīng)激”、“脊髓損傷”、“剝奪蛋白質(zhì)”等都屬于違背倫理的操作。

在飼養(yǎng)管理和使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物過(guò)程中，要采取有效措施，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免遭不必要的傷害、饑渴、不適、驚恐、折磨、疾病和疼痛，保證動(dòng)物能夠?qū)崿F(xiàn)自然行為，受到良好的管理和照料，為其提供清潔、舒適的生活環(huán)境，提供充足的保證健康的食物、飲水，避免或減輕疼痛和痛苦等。

化妝品公司為了觀察洗發(fā)香波的毒性，把它滴入兔眼，持續(xù)三周觀察兔眼的潰爛情況。兔會(huì)發(fā)出慘痛的嘶叫，拼命抓眼，最后雙目失明。二.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)課題的設(shè)計(jì)(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的研究中，通常以動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，但由于不同種動(dòng)物具有不同生物學(xué)特性，即使同品種不同亞系間也存在一定的差異，必須根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)課題的要求和目的選擇合適的動(dòng)物。1.選擇的基本原則1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇動(dòng)物2)選擇在結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝以及發(fā)病機(jī)理與人相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3)選用解剖、生理上有特點(diǎn)的動(dòng)物4)選用特殊生理反應(yīng)的動(dòng)物以符合不同的實(shí)驗(yàn)要求

(1)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇動(dòng)物

按照實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵筮x用合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，是保證實(shí)驗(yàn)研究成功的關(guān)鍵。

各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均具有各自生物學(xué)特點(diǎn)，只要選擇恰當(dāng)，妥善使用，將能簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作，使實(shí)驗(yàn)易于成功。如：犬的甲狀旁腺位于兩個(gè)甲狀腺端部的表面，位置比較固定.作甲狀旁腺摘除實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選犬而不用兔。兔的甲狀旁腺分布的比較散，位置不固定。甲狀腺摘除實(shí)驗(yàn)要保留甲狀旁腺的功能，就要選兔不選犬。

豬是二十世紀(jì)才開(kāi)發(fā)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

豬的皮膚在結(jié)構(gòu)上與人皮膚有很多相似點(diǎn)，經(jīng)處理后的豬皮片，常被用作嚴(yán)重?zé)齻∪说倪^(guò)度性皮膚。豬的心血管系統(tǒng)與人類也較為接近，尤其是小型豬的開(kāi)發(fā)成功，為豬的大規(guī)模實(shí)驗(yàn)提供了有利條件兩棲類動(dòng)物，如蛙類,其大腦很不發(fā)達(dá)，但脊髓的發(fā)展已符合實(shí)驗(yàn)要求，達(dá)到簡(jiǎn)單、直觀、明確、容易分析結(jié)果。(2)選擇在結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝以及發(fā)病機(jī)理與人相似的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究，絕大多數(shù)是利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的某些與人類相近似的特性，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，了解人類疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，以利解決疾病的預(yù)防和治療。

通常實(shí)驗(yàn)動(dòng)物愈高等,進(jìn)化愈完善,其機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)愈復(fù)雜，反應(yīng)就愈近似于人類。

靈長(zhǎng)類動(dòng)物與人在分類學(xué)上地位最相近，是研究人類多種疾病的理想動(dòng)物；是牙科學(xué)，胚胎學(xué)，病理學(xué)，解剖學(xué)，生理學(xué)，免疫學(xué)等多種學(xué)科的常用動(dòng)物；也是研究人類生殖課題的首選動(dòng)物。如獼猴，其生殖生理與人類非常接近，月經(jīng)周期為28d，是研究人類生殖生理的理想動(dòng)物。

很多傳染性疾病，有較強(qiáng)感染種屬特異性，如人類乙型肝炎病毒（HBV），在自然情況下只感染人和黑猩猩。靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物價(jià)格昂貴，飼育要求高，目前至少有66種靈長(zhǎng)類動(dòng)物被列入瀕危保護(hù)動(dòng)物。若要廣泛地，大量地使用尚有困難。尤其是黑猩猩等，不但數(shù)量有限、實(shí)驗(yàn)操作麻煩；還是瀕危保護(hù)動(dòng)物。動(dòng)物進(jìn)化程度越高并不是所有器官和功能都越接近人類

如犬有發(fā)達(dá)的血液循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)，以及與人基本相似的消化過(guò)程，在毒理學(xué)方面的反應(yīng)與人類比較接近。貓可以耐受麻醉與腦的部分破壞術(shù)，其反應(yīng)機(jī)能與人相似。豬的皮膚組織學(xué)結(jié)構(gòu)與人相似；豬的心臟瓣膜可以直接植入人體，以修補(bǔ)人的心臟瓣膜之缺陷

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室研究血脂代謝常用大鼠和小鼠；然而，已有許多證據(jù)表明，大鼠和小鼠血清脂蛋白的構(gòu)成和體內(nèi)脂質(zhì)代謝過(guò)程與人類相距甚遠(yuǎn)，不能真實(shí)反映人類脂代謝狀態(tài)。國(guó)際上高脂血癥動(dòng)物模型趨向于豚鼠和金黃地鼠。脂蛋白在循環(huán)血液中存在形式（%）低密度脂蛋白高密度脂蛋白極低密度脂蛋白低密度/高密度人類6030102豚鼠7020103.5兔4050100.8地鼠395650.7小鼠167860.21大鼠1080100.13(3)選用解剖生理上有特點(diǎn)的動(dòng)物

外科實(shí)驗(yàn),通常選用體形稍大的、耐受力較強(qiáng)的動(dòng)物，如大鼠、犬等動(dòng)物。這將對(duì)實(shí)驗(yàn)的成功起著重要的作用。

如：兔頸部的交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)和減壓神經(jīng)是單獨(dú)平行分布人、犬、貓、豬等減壓神經(jīng)是分布在交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)之間,且不易分開(kāi)；

選用兔觀察減壓神經(jīng)對(duì)心臟影響較為合適。

大鼠沒(méi)有膽囊，不適合作膽囊功能的研究，適合作膽道插管和收集膽汁實(shí)驗(yàn)。

大鼠、小鼠的性成熟期早，性周期和妊娠期短，產(chǎn)仔數(shù)多，生命周期短，適用于避孕藥物、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、毒理、胚胎學(xué)和致畸等方面的研究。兔耳的動(dòng)脈和靜脈都較明顯，如需反復(fù)藥物注射和耳靜脈采血,實(shí)驗(yàn)兔是較為理想的選擇。兔和貓是典型的刺激性排卵動(dòng)物，成年母兔常被作為誘發(fā)排卵觀察和避孕藥物的研究。青紫藍(lán)兔的后肢腘部和腹溝股處的淋巴結(jié)較明顯，通常在體表即可觸及到，適合于作淋巴結(jié)內(nèi)注射的免疫性研究。

約有80%的沙鼠左右兩側(cè)大腦血管不相交通；

且排尿量和飲水量極少；適合于作腦血管疾病和腎功能的研究。(4)選用特殊生理反應(yīng)的動(dòng)物以符合不同的實(shí)驗(yàn)要求

鴿、犬、猴和貓的嘔吐反射十分靈敏，適合于作嘔吐反射試驗(yàn)；

而嚙齒類動(dòng)物，尤其是大鼠、小鼠則基本沒(méi)有嘔吐反射，故需灌胃的實(shí)驗(yàn)選擇大鼠、小鼠為合適。

兔的體溫變化十分靈敏，適合作熱源試驗(yàn)。鼠、小鼠體溫調(diào)節(jié)差，不適合作致熱源試驗(yàn)。豚鼠體內(nèi)缺乏合成維生素C酶,只能從飼料中得以補(bǔ)充。維生素C缺乏1個(gè)月后,會(huì)出現(xiàn)壞血病當(dāng)?shù)呐R床癥狀，一旦給予補(bǔ)充則癥狀消失。2.動(dòng)物選擇的一般規(guī)律(1)選擇標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

(2)年齡和體重

(3)性別

(4)生理狀況

(5)健康狀況

(6)品種、品系

(7)多種動(dòng)物聯(lián)合使用

(1)選擇標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指遺傳背景清楚，微生物學(xué)和寄生蟲(chóng)學(xué)質(zhì)量得到控制，飼養(yǎng)環(huán)境及其飼料營(yíng)養(yǎng)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物。

切忌隨意使用來(lái)源不清的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

應(yīng)根據(jù)研究的目的要求，選用符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

在微生物學(xué)方面，應(yīng)選用清潔級(jí)、無(wú)特定病原體動(dòng)物，或無(wú)菌動(dòng)物等如在遺傳學(xué)方面可選用近交系、封閉群、突變系或雜交F1動(dòng)物。大、中型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，如兔、犬、猴等，也應(yīng)選擇無(wú)人獸共患疾病和遺傳背景清楚的普通級(jí)動(dòng)物。不同微生物學(xué)等級(jí)的

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較項(xiàng)目GFSPFCV傳染病無(wú)無(wú)有或可能有寄生蟲(chóng)無(wú)很少有或可能有實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確較準(zhǔn)確有疑問(wèn)應(yīng)用動(dòng)物數(shù)少量少量多或大量長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)效果可能好可能好困難死亡率很低低高長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)存活率約100％約90％40％左右實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)可能可能不可能統(tǒng)計(jì)價(jià)值很好較好不準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果的價(jià)值很高高有疑問(wèn)(2)年齡和體重

在毒理或感染等實(shí)驗(yàn)中，幼齡動(dòng)物較成年動(dòng)物敏感；因此，通常選用成年鼠。

在飼育環(huán)境和飼料營(yíng)養(yǎng)均達(dá)標(biāo)的條件下，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的年齡與體重，基本上成正比。若發(fā)現(xiàn)動(dòng)物個(gè)體間體重超過(guò)10％，則該群（組）動(dòng)物自身存在差異，不宜用作實(shí)驗(yàn)(3)性別

同品種或同品系的不同性別動(dòng)物，對(duì)同一實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)有差異。

雌性動(dòng)物易受性周期、懷孕、哺乳等影響。

通常采用雌雄各半的原則；

。（4）生理狀況雌性動(dòng)物在妊娠期和哺乳期,以及動(dòng)物換毛季節(jié)等不適宜作實(shí)驗(yàn)。

（5）健康狀況實(shí)驗(yàn)動(dòng)物患病時(shí)，不可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，若是大動(dòng)物，待其康復(fù)后再考慮是否使用；若是小動(dòng)物予以淘汰。(6)品種、品系

不同品種和品系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，具有不同的生物學(xué)特性，對(duì)相同試驗(yàn)會(huì)出現(xiàn)不同的反應(yīng)結(jié)果。

如果實(shí)驗(yàn)需要的是近交系動(dòng)物，而誤用了非近交系動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)將不可能成功。

常用的BALB/c小鼠，已有不少亞系，在不同實(shí)驗(yàn)室制備的鼠原性單克隆抗體的效價(jià)差異就很大。

C3H、AKR、NZB、NZW、SHR等均是良好的模型動(dòng)物，具相應(yīng)的適用范圍，若有選錯(cuò)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果將會(huì)令人費(fèi)解。(7)多種動(dòng)物聯(lián)合使用

實(shí)驗(yàn)中使用一種動(dòng)物所獲得的結(jié)果總是有限的，同時(shí)使用2種，或2種以上的動(dòng)物所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果更有利于作出正確的判斷。

在新藥的臨床前研究中，就規(guī)定必須使用一種嚙齒類動(dòng)物（大鼠），另一種大型動(dòng)物（犬或猴或小型豬）。(二)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組原則

在研究中，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組應(yīng)按照機(jī)遇均等的原則進(jìn)行，即隨機(jī)性原則。

目的是盡量減少干擾因素造成的實(shí)驗(yàn)誤差，不受實(shí)驗(yàn)人員主觀因素，或其它偏性誤差的影響。

隨機(jī)化的手段可采用編號(hào)卡片抽簽法,隨機(jī)數(shù)字表或采用計(jì)算機(jī)的隨機(jī)數(shù)字鍵進(jìn)行。設(shè)對(duì)照組的問(wèn)題在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中準(zhǔn)確設(shè)立對(duì)照組非常重要，常有忽視或錯(cuò)誤設(shè)立對(duì)照組的情況，導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)失敗。對(duì)照方法1.空白對(duì)照是在不給任何措施的情況下觀察動(dòng)物自發(fā)變化的規(guī)律。2.實(shí)驗(yàn)對(duì)照是采用與實(shí)驗(yàn)組相同操作條件的對(duì)照。3.有效對(duì)照在藥物研究中，用已知有效藥物作對(duì)照，考核方法可靠性和新藥的有效性。4.配對(duì)對(duì)照自身對(duì)照。（實(shí)驗(yàn)前后或身體兩側(cè)5.交叉對(duì)照對(duì)照組作為實(shí)驗(yàn)組的重復(fù)。6.實(shí)驗(yàn)重復(fù)和肯定即多種動(dòng)物的聯(lián)合使用7歷史對(duì)照與正常值對(duì)照必須非常慎重，否則將會(huì)得出不恰當(dāng)甚至錯(cuò)誤結(jié)論。1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的訂購(gòu)2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安死術(shù)

三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)施1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物訂購(gòu)必須向具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證的單位訂購(gòu)符合實(shí)驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在運(yùn)輸過(guò)程中，必須符合相應(yīng)的微生物學(xué)等級(jí)要求。普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)入后，必須進(jìn)行健康檢查和隔離檢疫，才能用于實(shí)驗(yàn)。

不同運(yùn)輸時(shí)間對(duì)大鼠體重的影響運(yùn)輸時(shí)間h運(yùn)輸前體重g運(yùn)輸后體重g體重變化g100%*體重變化/運(yùn)輸前體重0.5254.56±8.51247.70±7.686.86±1.582.69±0.591.0255.14±11.32246.93±11.148.20±1.213.22±0.471.5255.22±13.26244.25±13.0210.98±1.944.30±0.74對(duì)照254.30±9.21252.20±9.212.10±0.730.83±0.29大鼠運(yùn)輸后血糖和白細(xì)胞的測(cè)定結(jié)果分組

血糖mmol·L-1WBC109·L-1運(yùn)輸時(shí)間h恢復(fù)時(shí)間h0.506.72±0.309.18±1.581.006.86±0.429,29±1.301.505.40±0.569.33±1.101.5247.24±0.4414.42±2.161.5486.50±0.3914.66±1.801.5726.45±0.3417.40±2.161.5966.52±0.3217.00±1.77對(duì)照-6.33±0.3816.25±1.282023/2/4華東師范大學(xué)41（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的保定（2）動(dòng)物標(biāo)記和除毛法（3）給藥途徑和方法

（4）麻醉和采血技術(shù)2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保定

應(yīng)以不使動(dòng)物產(chǎn)生痛苦、符合生理特性、減少應(yīng)激、便于實(shí)驗(yàn)操作為原則。動(dòng)作輕緩忌動(dòng)作突然用力過(guò)猛避免抓耳朵呼得應(yīng)，抱著走避免驚嚇動(dòng)物2023/2/4華東師范大學(xué)43籠號(hào)項(xiàng)圈針刺耳記耳環(huán)（牌）芯片

生物染色劑（如：苦味酸的80-90%酒精飽和溶液、堿性品紅、甲基蘭等）

（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物除毛法（剪毛，拔毛，脫毛。剃毛）

標(biāo)記號(hào)碼清楚、持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物除毛法久、簡(jiǎn)便、易認(rèn)和耐久適用。掛牌剪趾剪毛2023/2/4華東師范大學(xué)44（3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥方法動(dòng)物自動(dòng)攝入（加樣飼料勻質(zhì)化摻入待測(cè)物質(zhì)對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)平衡的干擾飼料中待測(cè)物質(zhì)與其他成分間可能產(chǎn)生的相互作用）2.灌胃3.注射給藥注射給藥的方法

A.皮內(nèi)注射B.皮下注射C.肌肉注射D.腹腔注射

E.靜脈注射F.腦內(nèi)接種

G.其他接種法A.皮內(nèi)注射對(duì)實(shí)驗(yàn)兔和豚鼠,常以其背部或腹部為皮內(nèi)注射部位。如欲觀察動(dòng)物的皮膚反應(yīng),宜選擇白化的動(dòng)物或局部為白色處接種。B.皮下注射的部位小鼠的背部;大鼠的背部或側(cè)下腹部;貓，犬的大腿外側(cè)皮下兔在背部或耳根部;豚鼠的大腿內(nèi)側(cè),或小腹部等脂肪少的部位;C.肌肉注射對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肌肉注射,通常選用的部位為:后肢的股二頭肌和臀部肌肉。注射時(shí)應(yīng)避開(kāi)骨質(zhì)結(jié)構(gòu)、神經(jīng)和血管D.腹腔注射

注射時(shí)沿腹白線右側(cè)向左側(cè)約呈450角度進(jìn)針，應(yīng)避開(kāi)肝臟、脾臟、腎臟、胃、大小腸、腹膜等臟器，預(yù)防藥液返流E.

靜脈注射對(duì)家兔靜脈注射,通常在其耳緣靜脈。因一次注射后，注射部位的血管常常形成拴塞，妨礙血液通流，如欲多次注射，應(yīng)先自耳尖部之血管開(kāi)始注射，逐次下移。F腦內(nèi)接種多在微生物學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)用。常用動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)小鼠；實(shí)驗(yàn)兔和豚鼠由于顱骨較硬，需用穿顱鋼錐穿透顱骨，再用注射器針頭刺入腦內(nèi)。

注射速度一定要慢，避免引起顱內(nèi)壓急速升高。.G其他接種法某些科研工作中,也需將接種物劃痕接種于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的皮膚上;吸入鼻腔;接種于氣管；接種于眼內(nèi)或睪丸內(nèi).做角膜劃痕接種或鼻腔接種常需對(duì)動(dòng)物進(jìn)行局部麻醉(5％可卡因)或乙醚輕度麻醉。不同種類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同給藥方法一次給藥能耐受的最大容量mL(四).采血和麻醉技術(shù)

采血方法的選擇，取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮退枰恳约皠?dòng)物種類。

如欲獲取全血，血漿或血球，采血后可注入含抗凝劑的容器內(nèi),或盛有玻璃珠的試管或玻瓶?jī)?nèi);

如欲得清晰的血清，可于早晨未飼喂前采血。采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液的方法采血量采血部位動(dòng)物種類少量血尾靜脈大鼠、小鼠眶靜脈叢兔、大鼠、小鼠耳靜脈兔、犬、貓、豬、山羊、綿羊中量血心臟大鼠、小鼠耳中央動(dòng)脈、耳靜脈豚鼠、大鼠、小鼠足背中央靜脈兔頸靜脈豚鼠前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈兔、犬、貓后肢內(nèi)側(cè)皮下小隱靜脈犬、貓、猴大量血腋下靜脈大鼠、小鼠股動(dòng)脈、頸動(dòng)脈兔、犬、貓、猴頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊心臟兔、犬、貓、猴實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采血量（ml）動(dòng)物種類最大安全采血量最小致死采血量小鼠0.10.3大鼠12豚鼠510兔1040犬50300猴1560(四）、動(dòng)物麻醉的方法

包括全身麻醉、局部麻醉、針刺麻醉、復(fù)合麻醉、低溫麻醉等，一般實(shí)驗(yàn)常選擇全身麻醉。

.全身麻醉前的準(zhǔn)備麻醉藥物與器械的準(zhǔn)備。準(zhǔn)確計(jì)算麻醉藥物的劑量。麻醉中毒解救藥物的準(zhǔn)備。麻醉前禁食：

對(duì)大多數(shù)哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和鳥(niǎo)類動(dòng)物，10～12h。反芻類動(dòng)物中，大體型的成年動(dòng)物，麻醉前空腹時(shí)間達(dá)36～48h。.全身麻醉的方法A、吸入麻醉

吸入麻醉的方法是用揮發(fā)性麻醉劑或氣體麻醉劑使動(dòng)物吸入體內(nèi)，達(dá)到麻醉的效果。揮發(fā)性麻醉劑常用的有：乙醚、氯仿、氟脘、異氟脘等。氣體麻醉劑常用有環(huán)丙烷、氧化亞氮等；是嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用的麻醉方法B、非吸入麻醉

通常采用的是注射方法，可經(jīng)靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射等達(dá)到麻醉的效果。常用的麻醉藥有戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、水合氯醛、鹽酸氯胺酮等，注射方法和劑量可查表。種類戊巴比妥硫噴妥鈉鹽酸氯氨酮水合氯醛烏拉坦Mg/kg途徑Mg/kg途徑Mg/kg途徑Mg/kg途徑Mg/kg途徑小鼠35I.V.25I.V.----50I.P.50I.P.22~44I.M.400I.P.大鼠25I.V.20I.V.----50I.P.40I.P.22~44I.M.300I.P.0.75I.P.豚鼠30I.V.20I.V.----40I.P.55I.P.22~44I.M.200~300I.P.1.50I.P.家兔30I.V.--------40I.P.20I.P.22~44I.M.1.0I.V.倉(cāng)鼠20I.V.--------35I.P.40I.P.----200~300I.P.豬20~30I.V.9~10I.V.10~15I.M.15I.V.5I.V.10~15I.M.猴35I.V.25I.V.----60I.P.15~40I.M.----犬30I.V.25I.V.----125I.V.1.0I.V.貓25I.V.28I.V.15~30I.M.300I.V.1.25~1.50I.V.羊30I.V.--------實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用麻醉藥的劑量和注射途徑注：I.V.為靜脈內(nèi)注射；I.P.為腹膜內(nèi)注射；I.M.為肌肉注射；S.C.為皮下注射C.局部麻醉

0.5～1%鹽酸普魯卡因，是無(wú)刺激性的快速局部麻醉劑；對(duì)皮膚和黏膜的穿透力較弱，需注射給藥才能產(chǎn)生局麻作用。注射后1～3min內(nèi)產(chǎn)生麻醉，可維持30～45min。

丁卡因的局麻作用比普魯卡因強(qiáng)10倍，動(dòng)物吸收后的毒性作用也相應(yīng)加強(qiáng)，能穿透黏膜，作用迅速，1～3min生效，持續(xù)60～90min。

利多卡因常用于表面、浸潤(rùn)、傳導(dǎo)麻醉和硬脊膜外腔麻醉。作用效力和穿透力均比普魯卡因強(qiáng)兩倍，作用時(shí)間也較長(zhǎng)。常用濃度為0.