藥物長期毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則

關(guān)于藥物長期毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則第一頁，共二十七頁，2022年，8月28日一、毒理學(xué)的研究方法急性毒性長期毒性特殊毒理學(xué)方法（致突變實(shí)驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)、致癌作用試驗(yàn)）第二頁，共二十七頁，2022年，8月28日長期毒性長期毒性是指以低劑量外來化合物長期給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸，觀察其對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。包括行為改變、血液、生化反應(yīng)以及各器官的損害程度等。長期毒性試驗(yàn)是確定外來化合物的毒性下限，即長期接觸該化合物可以引起機(jī)體危害的閾劑量和無作用劑量。為進(jìn)行該化合物的危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)與制定人接觸該化合物的安全限量標(biāo)準(zhǔn)提供毒理學(xué)依據(jù)，如最高容許濃度和每日容許攝入量等。第三頁，共二十七頁，2022年，8月28日1.對(duì)照原則在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，要求相比較的各組間動(dòng)物的種類、性別、年齡、體重等盡可能地一致。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組同等重要，兩組的動(dòng)物數(shù)應(yīng)相等。(1)空白對(duì)照：又稱正常對(duì)照(2)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照：又稱有效對(duì)照或陽性對(duì)照(3)組間對(duì)照：(4)自身對(duì)照：一、試驗(yàn)設(shè)計(jì)遵循三原則第四頁，共二十七頁，2022年，8月28日2.重復(fù)原則(1)足夠的實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)：

(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性：3.隨機(jī)原則為了減少個(gè)體差異這種非處理因素的干擾，應(yīng)于實(shí)驗(yàn)前將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物依統(tǒng)計(jì)學(xué)原則進(jìn)行隨機(jī)分組，以此達(dá)到盡可能降低非處理因素的混雜效應(yīng)，從而提高每組動(dòng)物間均衡性的目的。第五頁，共二十七頁，2022年，8月28日二、長期毒性試驗(yàn)的基本目的

1.預(yù)測(cè)受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)，包括不良反應(yīng)的性質(zhì)、程度、劑量-反應(yīng)和時(shí)間-反應(yīng)關(guān)系、可逆性等

2.預(yù)測(cè)臨床試驗(yàn)的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍（下圖）第六頁，共二十七頁，2022年，8月28日Log[Dose]BiologicalResponseNOEL:NoObservableEffectLevelNOAEL:NoObservableAdverseEffectLevelLOEL:LowestObservableEffectLevelLOAEL:LowestObservableAdverseEffectLevelFEL:FrankEffectLevel第七頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.其它毒作用的敏感檢測(cè)指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志毒作用機(jī)制研究受試物的毒物動(dòng)力學(xué)和代謝研究中毒的解救措施3.推測(cè)受試物重復(fù)給藥的臨床毒性靶器官或靶組織

4.提示臨床試驗(yàn)中需重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的指標(biāo)第八頁，共二十七頁，2022年，8月28日三、長期毒性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容1.受試物長期毒性試驗(yàn)的受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗(yàn)受試物和上市藥品，因此受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，一般用中試樣品，并注明受試物的名稱、來源、批號(hào)含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等第九頁，共二十七頁，2022年，8月28日2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物嚙齒類，常用6-9周齡大鼠；非嚙齒類，常用6-12月齡Beagle犬或猴。健康、體重均一，雌性應(yīng)未孕，動(dòng)物雌雄各半。當(dāng)臨床擬用于單性別時(shí)，可采用相應(yīng)性別的動(dòng)物。每組動(dòng)物的數(shù)量應(yīng)能夠滿足試驗(yàn)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)的需要。一般大鼠可為雌、雄各10~30只，犬或者猴可為雌、雄各3~6只。第十頁，共二十七頁，2022年，8月28日3.給藥方式4.給藥頻率原則上應(yīng)每天給藥，且每天給藥時(shí)間相同。試驗(yàn)周期長（3個(gè)月或以上）者，也可采取每周給藥6天。特殊類型的受試物由于其毒性特點(diǎn)和臨床給藥方案等原因，應(yīng)根據(jù)具體藥物的特點(diǎn)設(shè)計(jì)給藥頻率原則上應(yīng)與臨床擬用藥途徑相同。如選擇其他的給藥途徑，應(yīng)說明理由第十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.給藥期限根據(jù)藥物的給藥療程確定給藥期限：?jiǎn)未谓o藥：2周≤2周1個(gè)月≤1個(gè)月1或3個(gè)月≤3個(gè)月3或6個(gè)月≤6個(gè)月6或9個(gè)月＞6個(gè)月6或9個(gè)月第十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日6.給藥劑量

三個(gè)劑量組：高、中、低+空白組低劑量組原則上應(yīng)高于動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)的等效劑量或預(yù)期的臨床治療劑量的等效劑量。高劑量組原則上應(yīng)使動(dòng)物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，甚至可引起少量動(dòng)物死亡（對(duì)于毒性較小的中藥，可盡量采用最大給藥量）。在高、低劑量之間至少應(yīng)再設(shè)一個(gè)中劑量組。第十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日Log[Dose]BiologicalResponse低劑量組：NOAEL中劑量組：LOAEL高劑量組第十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日

7.觀察指標(biāo)

1.一般狀況觀察在試驗(yàn)期間，應(yīng)觀察動(dòng)物外觀體征、行為活動(dòng)、腺體分泌、呼吸、糞便、攝食量、體重、給藥局部反應(yīng)。2.血液學(xué)指標(biāo)至少應(yīng)觀察紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類、血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、凝血酶原時(shí)間等。當(dāng)受試物可能對(duì)造血系統(tǒng)有影響時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行骨髓的檢查。見表1第十五頁，共二十七頁，2022年，8月28日血液學(xué)指標(biāo)●紅細(xì)胞計(jì)數(shù)●血紅蛋白●紅細(xì)胞容積●平均紅細(xì)胞容積●平均紅細(xì)胞血紅蛋白●平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度●網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)●白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類●血小板計(jì)數(shù)●凝血酶原時(shí)間表1血液學(xué)指標(biāo)第十六頁，共二十七頁，2022年，8月28日

3.血液生化檢查見表2血液生化學(xué)指標(biāo)●天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶●丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶●堿性磷酸酶●γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（非嚙齒類動(dòng)物）●尿素氮●肌酐●總蛋白●白蛋白●血糖●總膽紅素●總膽固醇●甘油三酯●鈉離子濃度●鉀離子濃度●氯離子濃度●肌酸磷酸激酶表2血液生化學(xué)指標(biāo)第十七頁，共二十七頁，2022年，8月28日4、體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查非嚙齒類動(dòng)物還應(yīng)進(jìn)行體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查等。見表3非嚙齒類動(dòng)物尿液分析指標(biāo)●尿液外觀●比重●pH值●尿糖●尿蛋白●尿膽紅素●尿膽原●酮體●潛血●白細(xì)胞表3非嚙齒類動(dòng)物尿液分析指標(biāo)

第十八頁，共二十七頁，2022年，8月28日5、系統(tǒng)尸解和組織病理學(xué)檢查5．1臟器系數(shù)應(yīng)對(duì)臟器進(jìn)行稱重，并計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=臟器濕重/動(dòng)物總體重，具體見表4長期毒性試驗(yàn)中需稱重并計(jì)算臟器系數(shù)的器官●腦●心臟●肝臟●肺臟●脾臟●腎臟●腎上腺●胸腺●睪丸●附睪●子宮●卵巢表4長期毒性試驗(yàn)中需稱重并計(jì)算臟器系數(shù)的器官第十九頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.2系統(tǒng)尸解應(yīng)對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行尸解，尸解應(yīng)全面細(xì)致，為組織病理學(xué)檢查提供參考。具體臟器、組織參見下。腦（大腦、小腦、腦干），脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、小腸和大腸、肝臟、膽囊*腎臟、腎上腺、脾臟、胰腺、氣管、肺、主動(dòng)脈、心臟、附睪、睪丸、卵巢、子宮、前列腺乳腺、坐骨神經(jīng)、膀胱、眼（眼科檢查發(fā)現(xiàn)異常時(shí)）*、視神經(jīng)*、給藥局部、骨髓、淋巴結(jié)（包括給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）第二十頁，共二十七頁，2022年，8月28日如有合理的理由說明所申報(bào)的中藥、天然藥物復(fù)方制劑有一定的安全性，所檢查的臟器和組織可減少為：心、肝、脾肺、腎、腦、胃、小腸、大腸、垂體、脊髓、骨髓、淋巴結(jié)、膀胱、睪丸、附睪、子宮、卵巢、胸腺、腎上腺及給藥局部組織等。第二十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日5.3病理切片的檢查

取得到的臟器進(jìn)行病理切片的制作，制作過程包括取材、固定、脫水與透明、浸蠟、包埋、切片、攤片、染色、封片等過程，對(duì)病理切片進(jìn)行分析，觀察藥物對(duì)其的毒性反應(yīng)。第二十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日其它的注意事項(xiàng)：1.適應(yīng)期：嚙齒：5-7天，非嚙齒：1-2周2.一般觀察：每周稱量一次大鼠體重和飼料消耗，進(jìn)行大鼠的一般情況觀察，包括：外觀體征（毛色、皮膚、腹脹、消瘦、）、行為活動(dòng)（抽搐、共濟(jì)失調(diào)、）、腺體分泌（眼、鼻、耳、生殖器）、呼吸（呼吸減慢、呼吸急促）、排泄物（顏色、形狀）和死亡情況（死亡時(shí)間、死亡前反應(yīng)）以及死亡時(shí)間分布。3.長期毒性試驗(yàn)應(yīng)在給藥結(jié)束時(shí)留存部分動(dòng)物進(jìn)行恢復(fù)期觀察，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)。根據(jù)毒性反應(yīng)的情況確定恢復(fù)期。一般半個(gè)月。第二十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日通常實(shí)驗(yàn)記錄的項(xiàng)目和內(nèi)容為：（1）實(shí)驗(yàn)名稱、實(shí)驗(yàn)日期、實(shí)驗(yàn)者；（2）受試對(duì)象：動(dòng)物種類、品系、編號(hào)、體重、性別、健康狀況、飼料、離體器官名稱等；（3）實(shí)驗(yàn)藥物或試劑：名稱、來源（生產(chǎn)廠）、劑型、批號(hào)、規(guī)格、含量、濃度、給藥體積、給藥劑量、給藥時(shí)間、給藥間隔、療程等；（4）實(shí)驗(yàn)儀器：主要儀器名稱、生產(chǎn)廠、型號(hào)、規(guī)格等；第二十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日（5）