第三章+微生物發(fā)酵培養(yǎng)基

第三章微生物發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分培養(yǎng)基的分類發(fā)酵培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基成分的營養(yǎng)與作用培養(yǎng)基確定方法一、培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分微生物的營養(yǎng)活動(dòng)，是依靠向外界分泌大量的酶．將周圍環(huán)境中大分子的蛋白質(zhì)、糖類、脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)分解成小分子化合物，再借助細(xì)胞膜的滲透作用，吸收這些小分子營養(yǎng)來實(shí)現(xiàn)的。所有發(fā)酵培養(yǎng)基都必須提供微生物生長繁殖和產(chǎn)物合成所需的能源，包括碳源、氮源、無機(jī)元素、生長因子及水、氧氣等。對(duì)于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)，除考慮上述微生物的需要外，還必須重視培養(yǎng)基原料的價(jià)格和來源。

微生物的營養(yǎng)來源

自養(yǎng)菌：光；氫，硫胺；亞硝酸鹽，亞鐵鹽。異養(yǎng)菌：碳水化合物等有機(jī)物，石油天然氣和石油化工產(chǎn)品，如醋酸。（1）能源碳酸氣；淀粉水解糖，糖蜜、亞硫酸鹽紙漿廢液等石油、正構(gòu)石蠟，天然氣醋酸、甲醇、乙醇等石油化工產(chǎn)品（2）碳源：豆餅或蠶蛹水解液，味精廢液，玉米漿，酒糟水等有機(jī)氮尿素，硫酸銨，氨水，硝酸鹽等無機(jī)氮?dú)鈶B(tài)氮（3）氮源(4)無機(jī)鹽磷酸鹽，鉀鹽，鎂鹽，鈣鹽等其他礦鹽鐵、錳、鈷等微量元素其他（5）特殊生長因子硫胺素、生物素、對(duì)氨基苯甲酸、肌醇等二、培養(yǎng)基的分類

篩選菌種保藏菌種檢驗(yàn)雜菌培養(yǎng)種子發(fā)酵生產(chǎn)（一）、培養(yǎng)基的用途（二）、培養(yǎng)基的分類（1）按培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基。（2）按物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基（3）按用途選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基等（1）天然培養(yǎng)基

采用化學(xué)成分還不清楚或化學(xué)成分還不恒定的各種植物和動(dòng)物組織或微生物的浸出物、水解液等物質(zhì)(例如牛肉膏、酵母膏、麥芽汁、蛋白胨等)制成的。適合于各類異養(yǎng)微生物生長，而一般自養(yǎng)微生物都不能生長。（2）合成培養(yǎng)基用化學(xué)成分和數(shù)量完全了解的物質(zhì)配制而成的。成分精確，重復(fù)性強(qiáng)，可以減少不能控制的因素適用于在實(shí)驗(yàn)室范圍作有關(guān)營養(yǎng)、代謝、分類鑒定、生物測(cè)定及選育菌種、遺傳分析等定量研究工作。但一般微生物在合成培養(yǎng)基上生長較慢，有些微生物營養(yǎng)要求復(fù)雜，在合成培養(yǎng)基上不能生長。（3）半合成培養(yǎng)基多數(shù)培養(yǎng)基配制是采用一部分天然有機(jī)物作碳源、氮源和生長因子的來源，再適當(dāng)加入一些化學(xué)藥品以補(bǔ)充無機(jī)鹽成分，使其更能充分滿足微生物對(duì)營養(yǎng)的需要。大多數(shù)微生物都能在此培養(yǎng)基上生長繁殖。因此，在微生物工業(yè)生產(chǎn)上和試驗(yàn)研究中被廣泛使用。（4）液體培養(yǎng)基：常用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)及生理代謝等基本理論研究工作。發(fā)酵工業(yè)多用作培養(yǎng)種子和發(fā)酵的培養(yǎng)基。根據(jù)微生物對(duì)氧的要求情況，分別作靜止或通風(fēng)攪拌培養(yǎng)。在菌種篩選工作和菌種培養(yǎng)工作中，也常用液體培養(yǎng)基進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)微生物在液體培養(yǎng)基中生長的情況有時(shí)也可用作鑒定菌種的參考。生理代謝菌種篩選種子培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)（5）固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑配成的，最常用的凝固劑是瓊脂。可分為：斜面試管、平板等作用：固體培養(yǎng)基在菌種的分離、保藏、菌落特征的觀察、活菌計(jì)數(shù)和鑒定菌種方面是不可缺少的。在制曲、酶制劑、檸檬酸等生產(chǎn)中，用來培養(yǎng)霉菌等的固體種子和發(fā)酵培養(yǎng)基是由麩皮等農(nóng)作物加無機(jī)元素等制成的。（6）增殖培養(yǎng)基：可以配制成適合某種微生物生長而不適合其他微生物生長，從而達(dá)到從自然界分離這種微生物的目的。（7）鑒別培養(yǎng)基：是根據(jù)微生物能否利用培養(yǎng)基中某種營養(yǎng)成分，借助指示劑的顯色反應(yīng)，以鑒別不同種類的微生物。（8）選擇培養(yǎng)基：是在培養(yǎng)基內(nèi)加入某種化學(xué)物質(zhì)以抑制不需要菌的生長，而促進(jìn)某種需要菌的生長。（三）、發(fā)酵生產(chǎn)中的培養(yǎng)基類型

工業(yè)發(fā)酵中培養(yǎng)基往往是依據(jù)生產(chǎn)流程和作用分為：斜面培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)基1、斜面培養(yǎng)基作用：供微生物細(xì)胞生長繁殖用的，包括細(xì)菌，酵母等的斜面培養(yǎng)基以及霉菌、放線菌生孢子培養(yǎng)基或麩曲培養(yǎng)基等。這類培養(yǎng)基主要作用是供給細(xì)胞生長繁殖所需的各類營養(yǎng)物質(zhì)。特點(diǎn)：富含有機(jī)氮源，少含或不含糖分。有機(jī)氮有利于菌體的生長繁殖，能獲得更多的細(xì)胞。對(duì)于放線菌或霉菌的產(chǎn)孢子培養(yǎng)基，則氮源和碳源均不宜太豐富，否則容易長菌絲而較少形成孢子。斜面培養(yǎng)基中宜加少量無機(jī)鹽類，供給必要的生長因子和微量元素。

2、種子培養(yǎng)基

(包括搖瓶種子和小罐種子培養(yǎng)基)

培養(yǎng)種子的目的：擴(kuò)大培養(yǎng)，增加細(xì)胞數(shù)量；同時(shí)也必須培養(yǎng)出強(qiáng)壯、健康、活性高的細(xì)胞。為了使細(xì)胞迅速進(jìn)行分裂或菌絲快速生長。必須有較完全和豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，特別需要充足的氮源和生長因子。種子培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度不必太高。供孢子發(fā)芽生長用的種子培養(yǎng)基，可添加一些易被吸收利用的碳源和氮源。種子培養(yǎng)基成分還應(yīng)考慮與發(fā)酵培養(yǎng)基的主要成分相近。種子培養(yǎng)基特點(diǎn)：3、發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基是發(fā)酵生產(chǎn)中最主要的培養(yǎng)基，它不僅耗用大量的原材料，而且也是決定發(fā)酵生產(chǎn)成功與否的重要因素。發(fā)酵培養(yǎng)基的選擇考慮的因素：（1）根據(jù)產(chǎn)物合成的特點(diǎn)來設(shè)計(jì)培養(yǎng)基：對(duì)菌體生長與產(chǎn)物相偶聯(lián)的發(fā)酵類型，充分滿足細(xì)胞生長繁殖的培養(yǎng)基就能獲得最大的產(chǎn)物。對(duì)于生產(chǎn)氨基酸等含氮的化合物時(shí)，它的發(fā)酵培養(yǎng)基除供給充足的碳源物質(zhì)外，還應(yīng)該添加足夠的銨鹽或尿素等氮素化合物。（2）發(fā)酵培養(yǎng)基的各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度應(yīng)盡可能高些，這樣在同等或相近的轉(zhuǎn)化率條件下有利于提高單位容積發(fā)酵罐的利用率，增加經(jīng)濟(jì)效益。（3）發(fā)酵培養(yǎng)基需耗用大量原料，因此，原料來源、原材料的質(zhì)量以及價(jià)格等必須予以重視。三、發(fā)酵培養(yǎng)基選擇的要求

(1)必須提供合成微生物細(xì)胞和發(fā)酵產(chǎn)物的基本成分。(2)有利于減少培養(yǎng)基原料的單耗，即提高單位營養(yǎng)物質(zhì)所合成產(chǎn)物數(shù)量或最大產(chǎn)率。(3)有利于提高培養(yǎng)基和產(chǎn)物的濃度，以提高單位容積發(fā)酵罐的生產(chǎn)能力。(4)有利于提高產(chǎn)物的合成速度，縮短發(fā)酵周期。(5)盡量減少副產(chǎn)物的形成，便于產(chǎn)物的分離純化。(6)原料價(jià)格低廉，質(zhì)量穩(wěn)定，取材容易。(7)所用原料盡可能減少對(duì)發(fā)酵過程中通氣攪拌的影響，利于提高氧的利用率，降低能耗。(8)有利于產(chǎn)品的分離純化，并盡可能減少產(chǎn)生“三廢”的物質(zhì)。發(fā)酵培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)和注意事項(xiàng)

1、提供必要的營養(yǎng)成分：培養(yǎng)基成分必須滿足細(xì)胞生長，代謝活動(dòng)和合成產(chǎn)物所需的基本要求。2、配制合適的濃度：可以從發(fā)酵動(dòng)力學(xué)有關(guān)生長、產(chǎn)物合成和基質(zhì)利用物料平衡的關(guān)系中大致推算所需原料或大致計(jì)算出所需主要原料的需要量。3、主成分與其他成分的配比。4、控制合適的pH：微生物的生長繁殖或產(chǎn)物的合成往往需要—定的pH環(huán)境，在最適pH值下有利于加快各種酶的反應(yīng)。因此在整個(gè)發(fā)酵過程中應(yīng)使培養(yǎng)基的pH適合于微生物生長或產(chǎn)物合成所需。

pH的具體控制方法可以在微生物培養(yǎng)過程中加入酸或堿或流加某些營養(yǎng)物質(zhì)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，但更應(yīng)在配制培養(yǎng)基時(shí)考慮所用營養(yǎng)物質(zhì)的組成成分，使其pH值適合該微生物生長或合成代謝產(chǎn)物的需要。還要注意有些營養(yǎng)物質(zhì)被利用后培養(yǎng)基的pH變化情況.控制pH最常用的方法是在培養(yǎng)基中添加具有一定緩沖能力的物質(zhì)作為營養(yǎng)物，如以磷酸鹽作為磷的成分；或者避免使用容易產(chǎn)生生理酸性或堿性使培養(yǎng)基pH波動(dòng)太大的物質(zhì)。5、避免產(chǎn)生微生物不能利用的物質(zhì)或形成沉淀葡萄糖與銨鹽或氨基酸的氨基在滅菌高溫下作用形成深褐色物質(zhì)。這種物質(zhì)不被微生物利用。因此這兩類營養(yǎng)物不宜直接配在一起進(jìn)行滅菌，而應(yīng)采用分開滅菌后再加入發(fā)酵罐內(nèi)。硫酸銨中的SO42-與鈣鹽易形成難溶的硫酸鈣，因此二者也不宜直接配成培養(yǎng)基。6、注意代謝調(diào)節(jié)物的影響：有些物質(zhì)存在于培養(yǎng)基中往往能明顯地促進(jìn)、或抑制發(fā)酵產(chǎn)物的形成。前體物質(zhì)誘導(dǎo)劑阻遏物抑制劑金屬離子(1)添加有關(guān)前體物質(zhì)：前作物質(zhì)：是指當(dāng)添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中的某些化學(xué)物質(zhì)基本上不改變其分子結(jié)構(gòu)而直接進(jìn)入產(chǎn)物中的小分子物質(zhì)，從而在一定條件下控制產(chǎn)物的合成方向和提高產(chǎn)量。在發(fā)酵中添加前體物質(zhì)將有利于產(chǎn)物的合成和顯著提高產(chǎn)量，如苯乙酸及其衍生物被認(rèn)為是青霉素的前體物質(zhì)。(2)添加誘導(dǎo)物：目前工業(yè)用微生物酶多數(shù)為誘導(dǎo)酶，如蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等。誘導(dǎo)物的存在能大大強(qiáng)化誘導(dǎo)酶的生物合成。酶的正常底物或底物的類似物都可作為誘導(dǎo)物。在各種微生物酶的發(fā)酵培養(yǎng)基中必須加入誘導(dǎo)物，例如淀粉、糊精或麥芽糖是淀粉酶或糖化酶的誘導(dǎo)物。只有添加這些物質(zhì)的培養(yǎng)基，才能獲得高產(chǎn)。

(3)注意阻遏物或抑制劑的影響培養(yǎng)基中存在反饋?zhàn)瓒粑锘蚍纸庾瓒粑锞苡绊懨傅暮铣?，降低發(fā)酵產(chǎn)量。有些酶的抑制劑卻能提高某些代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量，最早利用抑制劑提高中間代謝物產(chǎn)量的例子是甘油發(fā)酵中加入亞硫酸鈉。在培養(yǎng)基配制時(shí)必須注意加入有益的抑制劑，而避免混入有害的抑制物。7、金屬離子的影響：有些種類的發(fā)酵生產(chǎn)對(duì)金屬離子相當(dāng)敏感，因?yàn)橛行┙饘匐x子是中間代謝酶的抑制劑或激活劑。因此對(duì)于有重大影響的金屬離子必須嚴(yán)格控制。如檸檬酸發(fā)酵中鐵、錳和鋅離子都能明顯影響產(chǎn)量；鈣離子對(duì)細(xì)菌淀粉酶的生產(chǎn)有促進(jìn)作用；鈷離子對(duì)葡萄糖異構(gòu)酶的發(fā)酵是必需的。這些在培養(yǎng)基配制時(shí)都必須予以注意。四、培養(yǎng)基組成物質(zhì)的營養(yǎng)與作用碳素化合物氮素化合物水微量元素(無機(jī)鹽類)生長因子

(1)碳素化合物(a)碳素化合物的作用:構(gòu)成菌體成分的重要元素，產(chǎn)生各種代謝產(chǎn)物和細(xì)胞內(nèi)貯藏物質(zhì)的主要原料，同時(shí)又是化能異養(yǎng)型微生物的能量來源。

糖：單糖中的己糖，寡糖中的蔗糖、麥芽糖、棉子糖，多糖中的淀粉、纖維素、半纖維素、甲殼質(zhì)和果膠質(zhì)等，其中淀粉是大多數(shù)微生物都能利用的碳源。有機(jī)酸：如糖酸、檸檬酸、反丁烯二酸、琥珀酸、蘋果酸、丙酮酸、酒石酸等。

注意引起pH變化（b）碳源種類葡萄糖：是最易利用的糖，并且作為加速微生物生長的一種有效的糖。葡萄糖效應(yīng)：培養(yǎng)基中含有過多的葡萄糖會(huì)抑制微生物的生長原因：1、過多的葡萄糖會(huì)過分加速菌體的呼吸，以致培養(yǎng)基中的溶解氧不能滿足需要。2、葡萄糖代謝產(chǎn)物會(huì)產(chǎn)生反饋抑制糖蜜：是制糖廠生產(chǎn)糖時(shí)的結(jié)晶母液，是蔗糖廠的副產(chǎn)物。含有較豐富的糖、氨素化合物和無機(jī)維生素等，是微生物工業(yè)的價(jià)廉物美的原料。注意：不同產(chǎn)地、氣候、收獲季節(jié)、制糖工藝不同，糖蜜的組分也不同糖蜜的性質(zhì)一般為黃褐色或黑褐色，pH5-7.5，略帶甜味，有硫磺火焦糖味，粘稠狀糖蜜糖蜜的預(yù)處理：澄清處理：

除灰分（影響純度）和蛋白（容易產(chǎn)生泡沫）硫酸和石灰處理法：稀釋（1：1）調(diào)pH（酸或中性）加熱中和沉淀過濾澄清液脫鈣：Na2CO4沉淀過濾除生物素影響營養(yǎng)缺陷型菌株的生長淀粉：一般要經(jīng)菌體產(chǎn)生的胞外酶水解成單糖后再被吸收利用。可克服葡萄代謝過快的弊病。來源豐富，價(jià)格比較低廉。常用的為玉米淀粉、小麥淀粉和甘薯淀。醇類中甘露醇、甘油、低濃度的乙醇。脂肪酸如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等低級(jí)脂肪酸都可用作碳源。油酸和亞油酸等高級(jí)脂肪酸可被不少放線菌和真菌作為碳源和能源利用，低濃度的高級(jí)脂肪酸可刺激細(xì)菌生長，但濃度較高時(shí)往往有毒害作用。

正烷烴：一般是指從石油裂得到的14C至18C的直鏈烷烴混合物。糖蜜：是制糖廠生產(chǎn)糖時(shí)的結(jié)晶母液，是蔗糖廠的副產(chǎn)物。含有較豐富的糖、氨素化合物和無機(jī)維生素等，是微生物工業(yè)的價(jià)廉物美的原料。淀粉：一般要經(jīng)菌體產(chǎn)生的胞外酶水解成單糖后再被吸收利用。可克服葡萄代謝過快的弊病。來源豐富，價(jià)格比較低廉。常用的為玉米淀粉、小麥淀粉和甘薯淀。油和脂肪：在微生物分泌的脂肪酶作用下水解為甘油和脂肪酸，在溶解氧的參與下，氧化成水和CO2。因此用脂肪作碳源時(shí)需比糖代謝供給更多的氧。(2)氮素化合物

氮是構(gòu)成微生物細(xì)胞蛋白質(zhì)和核酸的主要元素，而蛋白質(zhì)和核酸是微生物原生質(zhì)的主要組成部分。氮素一般不提供能量，但硝化細(xì)菌卻能利用氨作為氮源和能源。就某一類微生物而言，由于其合成能力的差異，對(duì)氮營養(yǎng)的需要也有很大區(qū)別。氮的來源可分為無機(jī)氮和有機(jī)氮：有機(jī)氮源：花生餅粉、黃豆餅粉、棉子餅粉、玉米漿、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母膏、魚粉、蠶蛹粉、尿素、廢菌絲體和酒糟等。它們?cè)谖⑸锓置诘牡鞍酌缸饔孟拢獬砂被?，被菌體進(jìn)一步分解代謝。含有豐富的蛋白質(zhì)、多肽和游離的氨基酸還含有少量的糖類、脂肪、無機(jī)鹽、維生素及生長因子。有機(jī)氮源特點(diǎn)：

銨鹽、硝酸鹽、氨水等。無機(jī)氮源：無機(jī)氮的特點(diǎn)：微生物對(duì)其吸收利用比有機(jī)物快，所以也稱速效氮。利用無機(jī)氮時(shí)應(yīng)注意引起的pH變化。實(shí)驗(yàn)室中常用蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等作為有機(jī)氮源；工業(yè)生產(chǎn)上常用硫酸銨、尿素、氨水、豆餅粉、花生餅粉、麩皮等原料作氮源。(3)水

水是良好的溶劑，菌體所需要的營養(yǎng)物質(zhì)都是溶解于水中被吸收的。滲透、分泌、排泄等作用都是以水為媒介的；水直接參與代謝作用中的許多反應(yīng)。所以，水在生物化學(xué)反應(yīng)中占有極為重要的地位。水的比熱高，能有效地吸收代謝過程中所放出的熱，使細(xì)胞內(nèi)溫度不致驟然上升。水是熱的良導(dǎo)體，有利于放熱，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的溫度。(4)微量元素(無機(jī)鹽類)

無機(jī)鹽類是微生物生命活動(dòng)所不可缺少的物質(zhì)。主要功用是：①構(gòu)成菌體成分；②作為酶活性基的組成部分或維持酶的活性；③調(diào)節(jié)滲透壓、pH值、氧化還原電位等；④作為自養(yǎng)菌的能源。

無機(jī)元素包括主要元素(又稱大量元素)和微量元素兩類，這是依據(jù)微生物對(duì)它們需要量的大小劃分的。主要元素有P、S、Mg、K、Ca等；微量元素有Fe、Cu、Mn、Zn、Mo、Co、B等。當(dāng)鹽濃度太高時(shí)，對(duì)微生物生長有抑制作用，而在較低濃度時(shí)卻能刺激生長。一般在復(fù)合培養(yǎng)基中由于加入許多動(dòng)植物原料等都含有微量元素。磷：是核酸和蛋白質(zhì)的必要成分，也是ATP的成分。在代謝途徑調(diào)節(jié)方面，起著重要作用。促進(jìn)微生物生長，但過量時(shí)，許多產(chǎn)物的合成受抑制。鈣：培養(yǎng)基中鈣鹽過多時(shí)，會(huì)形成磷酸鈣沉淀。可分別消毒或逐步補(bǔ)加。鎂：處于離子狀態(tài)時(shí)，是許多酶的輔酶的激活劑，不但影響基質(zhì)的氧化，也影響蛋白質(zhì)的合成。以硫酸鎂加入，但在堿性溶液中會(huì)形成沉淀。元素人為提供形式生理功能大

量

元

素PKH2PO4磷酸二氫鉀

K2HPO4磷酸氫二鉀核酸、磷酸和輔酶的成分SMgSO4硫酸銨含硫氨基酸（半胱氨酸、甲硫氨酸等）和含硫維生素（生物素、硫胺素等）的成分KKH2PO4磷酸二氫鉀

K2HPO4磷酸氫二鉀某些酶（果糖激酶、磷酸丙酮酸轉(zhuǎn)磷酸酶等）的輔因子；維持電位差和滲透壓NaNaCl氯化鈉維持滲透壓；某些細(xì)菌和藍(lán)細(xì)菌所需CaCa(NO3)2

硝酸鈣

CaCl2

氯化鈣某些胞外酶的穩(wěn)定劑、蛋白酶等的輔因子；細(xì)菌形成芽孢和某些真菌形成孢子所需MgMgSO4硫酸鎂固氮酶等的輔因子；葉綠素等的成分FeFeSO4硫酸鐵細(xì)胞色素的成分；合成葉綠素、白喉毒素和氧高鐵血紅素所需元素人為提供形式生理功能微

量

元

素MnMnSO4硫酸錳超氧化物歧化酶、氨肽酶和L-阿拉伯糖異構(gòu)酶等的輔因子CuCuSO4硫酸銅氧化酶、酪氨酸酶的輔因子CoCoSO4硫酸鈷維生素B12復(fù)合物的成分；肽酶的輔因子ZnZnSO4硫酸鋅堿性磷酸酶以及多種脫氫酶、肽酶和脫羧酶的輔因子Mo(NH4)6Mo7O24鉬酸銨固氮酶和同化型及異化型硝酸鹽還原酶的成分(5)生長因子

廣義說，凡是微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物質(zhì)都稱為生長因子(又稱生長素)，包括氨基酸、嘌呤、嘧啶、維生素等；狹義說，生長素僅指維生素。與微生物有關(guān)的維生素主要是B族維生素，這些維生素是各種酶的活性基的組成部分，沒有它們，酶就不能活動(dòng)。凡是缺少合成生長素類物質(zhì)的微生物(即缺少了合成生長素過程中的某種酶)，統(tǒng)稱為營養(yǎng)缺陷型。五、培養(yǎng)基確定方法（1）首先必須做好調(diào)查研究工作，了解菌種的來源、生活習(xí)慣、生理生化特性和一般的營養(yǎng)要求。

工業(yè)生產(chǎn)主要應(yīng)用細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類微生物。它們對(duì)營養(yǎng)的要求既有共性，也有各自的特性，應(yīng)根據(jù)不同類型微生物的生理特性考慮培養(yǎng)基的組成。（2）其次，對(duì)生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)條件，生物合成的代謝途徑，代謝產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)、一般提煉方法和產(chǎn)品質(zhì)量要求等也需要有所了解，以便在選擇培養(yǎng)基時(shí)做到心中有數(shù)。（3）最好先選擇一種較好的化學(xué)合成培養(yǎng)基做基礎(chǔ)，開始時(shí)先做一些搖瓶試驗(yàn);然后進(jìn)一步做小型發(fā)酵罐培養(yǎng)，摸索菌種對(duì)各種主要有機(jī)碳源和氮源的利用情況和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的能力。注意培養(yǎng)過程中的pH變化，觀察適合于菌種生長繁殖和適合于代謝產(chǎn)物形成的兩種不同pH，不斷調(diào)整配比來適應(yīng)上述各種情況。（4）注意每次只限一個(gè)變動(dòng)條件。有了初步結(jié)果以后，先確定一個(gè)培養(yǎng)基配比。其次再確定各種重要的金屬和非金屬離子對(duì)發(fā)酵的影響，即對(duì)各種無機(jī)元素的營養(yǎng)要求，試驗(yàn)其最高、最低和最適用量。在合成培養(yǎng)基上得出一定結(jié)果后，再做復(fù)合培養(yǎng)基試驗(yàn)。最后試驗(yàn)各種發(fā)酵條件和培養(yǎng)基的關(guān)系。培養(yǎng)基內(nèi)pH可由添加碳酸鈣來調(diào)節(jié)，其他如硝酸鈉、硫酸銨也可用來調(diào)節(jié)。（5）有些發(fā)酵產(chǎn)物，如抗生素等，除了配制培養(yǎng)基以外，還要通過中間補(bǔ)