Sebia-全自動凝膠電泳儀的臨床應用

Sebia

全自動凝膠電泳儀

臨床應用襄陽市中心醫(yī)院1精選ppt課件使用范圍和檢測原理電泳技術就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小,形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對樣品進行分離,鑒定或提純的技術.在生化檢測中,主要用于分離各類蛋白分子.2精選ppt課件發(fā)展歷程1809年俄國科學家列伊斯首先發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1937年瑞典科學家Tiselius建立了界面電泳技術,并首次證明了血清是由白蛋白及α,β,γ球蛋白組成的因此獲得1948年諾貝爾化學獎.1950年后,區(qū)帶電泳從發(fā)展到成熟.1980年以來,毛細管電泳逐漸受到重視3精選ppt課件常用的電泳技術濾紙電泳醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳:瓊脂糖凝膠適用于蛋白質(zhì)和核酸的電泳支持介質(zhì),成本低,結(jié)果易保存.聚丙烯酰胺凝膠電泳:最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方法,特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測和測定蛋白質(zhì)分子量,一般用于科研.毛細管電泳:經(jīng)典電泳技術和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物4精選ppt課件血清蛋白電泳

免疫固定電泳非濃縮尿蛋白電泳5精選ppt課件血清蛋白電泳6精選ppt課件法國SEBIA凝膠電泳瓊脂糖凝膠介質(zhì)，分子篩效應，分辨率高不吸附蛋白質(zhì)，阻力小，分離清晰，透明度高PH8.8堿性環(huán)境根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷的多少和蛋白分子的大小及形狀分離不同的蛋白成分按泳動速度分成5個區(qū)帶

（每個區(qū)帶含1種或更多種的蛋白成分）

7精選ppt課件30人份瓊脂糖凝膠片血清蛋白電泳8精選ppt課件正常血清蛋白電泳圖譜9精選ppt課件血清蛋白電泳的正常參考值

10精選ppt課件各區(qū)帶構(gòu)成

Alb：白蛋白

α1：α1酸性糖蛋白；α1抗胰蛋白酶

α1脂蛋白;甲胎蛋白

α2：HP；α2巨球蛋白；α脂蛋白；CER

β：轉(zhuǎn)鐵蛋白；補體系統(tǒng)；β脂蛋白

纖維蛋白原；β2微球蛋白γ：IgG；IgM；IgA；IgD；IgE

CRP11精選ppt課件血清蛋白電泳可以幫助我們精確地描繪出患者血清蛋白質(zhì)的全貌，是生化儀測定蛋白質(zhì)的完善和補充可以提示是哪一種球蛋白異常，便于臨床有的放矢的進一步檢查，節(jié)省患者費用12精選ppt課件對單一克隆漿細胞異常增殖產(chǎn)生M蛋白的檢測,血清蛋白電泳是其首選的實驗診斷方法，由于MM髓外病灶在肝、脾、淋巴結(jié)多見，故認為肝功能異?；颊邞M行血清蛋白電泳檢測作為篩選可幫助對一些遺傳性疾病作出診斷，如：雙白蛋白血癥、α1抗胰蛋白酶缺陷，蛋白電泳呈現(xiàn)特征性圖譜13精選ppt課件血清蛋白電泳中發(fā)現(xiàn)的與急性時相反應蛋白相關的疾病

Alb↑脫水↓慢性消耗性疾病、慢性炎癥、出血、燒傷、蛋白丟失、腸病、因白蛋白減低而引起的肝臟功能下降、營養(yǎng)失調(diào)、腎病綜合征、妊娠α1↑妊娠↓低抗胰蛋白酶血癥α2↑腎上腺不足、腎上腺皮質(zhì)類固醇治療、糖尿病、腎病綜合征↓營養(yǎng)不良、巨紅細胞性貧血、蛋白丟失的腸病、嚴重肝病、Wilson‘s病β↑膽汁硬化、癌癥(有時)、Cushing‘s病、糖尿病(某些病例)甲狀腺機能減退、缺鐵性貧血、惡性高血壓、腎病、多動脈炎、阻塞性黃疸、妊娠↓營養(yǎng)不良

γ↑淀粉樣變性、慢性感染、慢性淋巴細胞白血病、硬化、Hodgkin‘s疾病、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、結(jié)締組織病、

巨細胞血癥↓血中丙種球蛋白缺乏、低丙種球蛋白癥14精選ppt課件

球蛋白區(qū)域的變化在肝病的臨床意義

α1球蛋白在肝炎初期，作為急性期反應物質(zhì)常增加，而肝損害嚴重時則降低，在致命的肝功能衰竭時可以降低到很低的水平15精選ppt課件

球蛋白區(qū)域的變化在肝病的臨床意義

α2球蛋白的降低可能由于結(jié)合珠蛋白合成降低所致，但在膽汁淤積性肝炎時由于α2脂蛋白增加可見到α2球蛋白部位增加，當亞急性肝炎和肝壞死時，α2球蛋白則明顯減少，故α2球蛋白的變化可作為肝障礙時的特征性指標，如明顯下降，提示預后不良16精選ppt課件球蛋白區(qū)域的變化在肝病的臨床意義

β球蛋白在肝炎早期幾乎沒有變化，但由于此組分也有脂蛋白，膽汁淤積性肝炎時與α2球蛋白一樣，多數(shù)明顯升高，當肝細胞損害嚴重時，由于肝臟合成減少則明顯降低17精選ppt課件

球蛋白區(qū)域的變化在肝病的臨床意義

幾乎所有肝臟疾病γ球蛋白均升高，且呈多株性的，其增加的范圍與疾病的嚴重程度相一致，若轉(zhuǎn)為慢性可見γ球蛋白明顯增高這是由于免疫球蛋白合成亢進所致。18精選ppt課件血清蛋白電泳圖譜在肝臟疾病的變化

T-PROTAlbα1α2βγ肝炎↓N↓↓ ↑↓↓ ↓ ↑肝硬化↓N↑↓↓N↓N↓ β-γ橋肝癌↓N↓↓甲胎蛋白

N↓N↑N19精選ppt課件20精選ppt課件血清蛋白電泳圖譜在腎病的改變

Alb明顯降低，α1-球蛋白輕度增加，α2-球蛋白明顯增加，β-球蛋白降低、正常、增高，γ-球蛋白降低、正常小兒類脂樣腎病時，γ-球蛋白可降低，有時可降低至零成人腎病綜合癥時，γ-球蛋白通常增加，特別是狼瘡性腎病。

21精選ppt課件22精選ppt課件23精選ppt課件24精選ppt課件25精選ppt課件26精選ppt課件腎病綜合征27精選ppt課件急性感染綜合征28精選ppt課件

先天性白蛋白缺乏癥29精選ppt課件雙白蛋白血癥30精選ppt課件α1抗胰蛋白酶缺乏癥31精選ppt課件貧血之高轉(zhuǎn)鐵蛋白32精選ppt課件免疫球蛋白增高33精選ppt課件血清蛋白電泳是

M蛋白（MonoclonalProtein）多克?。╬olyclonalProtein)

寡克?。∣ligoclonalProtein)的首選檢測項目34精選ppt課件

M蛋白疾?。∕onoclonalgammap-athies,MG）是由于單一克隆漿細胞無限增殖產(chǎn)生的均一單克隆蛋白（Monoclonal-proteins)所導致的一組疾病。M蛋白疾病的“M”含義是Myeloma,Macroglobulinemia和Malignantlymphoma，MonoclonalGammapathies均以“M”開頭。M蛋白在電泳上表現(xiàn)為高而狹窄的尖峰（高/寬>2:1）.35精選ppt課件多發(fā)性骨髓瘤的臨床特征：

骨質(zhì)疏松和溶骨現(xiàn)象

貧血，粒細胞、血小板減少

腎淀粉樣變性損害

免疫功能低下，易感增加36精選ppt課件多發(fā)性骨髓瘤的免疫學特征:血中出現(xiàn)M蛋白,正常Ig水平明顯減低尿中出現(xiàn)M蛋白和輕鏈蛋白(BJP)骨髓中漿細胞明顯增加無免疫活性Ig導致免疫功能低下37精選ppt課件巨球蛋白血癥（Waldenstrom氏）患者血中存在大量單克隆IgM，血粘度明顯增多，骨骼損害不常見，疾病發(fā)展類似淋巴瘤。38精選ppt課件

輕鏈病

輕鏈病多表現(xiàn)為腎臟損害，極易誤診為慢性腎炎。我們認為輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中；一是正常的輕鏈過剩（Kappa和Lambda同時出現(xiàn)），多出現(xiàn)于慢性肝病，SLE等多克隆增殖中。二是伴隨輕鏈。三是單一輕鏈，血和尿中只出現(xiàn)單一增殖的大量輕鏈。

39精選ppt課件重鏈病

由于制造Ig的漿細胞發(fā)生突變，并惡性增殖，只產(chǎn)生重鏈或產(chǎn)生的重鏈有缺陷，因而輕鏈和重鏈不能組成完整的Ig，血中出現(xiàn)大量無免疫功能的Ig片段---重鏈，由此產(chǎn)生一系列重鏈病變。重鏈病是免疫蛋白的結(jié)構(gòu)異常所致。常見三型。該病發(fā)病率極低。

40精選ppt課件M蛋白電泳圖譜M蛋白是單克隆性漿細胞或淋巴細胞大量增殖而產(chǎn)生的一種在氨基酸組成基排列順序上十分均一的異常球蛋白，其本質(zhì)是免疫球蛋白或其片斷M蛋白在α2～γ區(qū)形成濃密區(qū)帶用光度計可掃出基底較窄，高而尖銳的蛋白峰其標準為：在γ區(qū)，蛋白峰的高和寬之比應＞2：1；在

β區(qū)和α2區(qū)應＞1：141精選ppt課件42精選ppt課件43精選ppt課件44精選ppt課件位于β區(qū)的單克隆IgA45精選ppt課件單克隆帶46精選ppt課件寡克隆圖案47精選ppt課件輕鏈病48精選ppt課件老年性單克隆帶49精選ppt課件位于α2區(qū)單克隆帶50精選ppt課件多發(fā)性骨髓瘤的誤診原因分析51精選ppt課件52精選ppt課件53精選ppt課件多發(fā)性骨髓瘤診斷標準1.骨髓中漿細胞>15％，并有異常漿細胞（骨髓瘤細胞）或骨髓活檢為漿細胞瘤。為主要的診斷依據(jù)。2.血清中出現(xiàn)大量單克隆免疫球蛋白（M蛋白），IgG>35g/L；IgA>20g/L；IgD>2.0g/L；IgE>2.0g/L；IgM>15g/L或尿中出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白輕鏈，輕鏈排出>1g/24小時。3.無其他原因的溶骨病變或廣泛性骨質(zhì)疏松。54精選ppt課件

免疫固定電泳

對M蛋白的分型與鑒定已作為實驗室常規(guī)工作55精選ppt課件將待測血清或其他標本在瓊脂平板上作區(qū)帶電泳，分離后于其上覆蓋含抗κ或λ輕鏈或各類重鏈的抗血清濾紙，當抗體與某區(qū)帶中的單克隆免疫球蛋白結(jié)合后，便形成復合物而沉淀下來，再通過漂洗與染色，呈現(xiàn)濃而狹窄的著色區(qū)帶，即可判斷單克隆丙種球蛋白的輕鏈和重鏈型別。56精選ppt課件4人份瓊脂糖凝膠固定免疫電泳57精選ppt課件正常血漿免疫固定電泳58精選ppt課件IgM重鏈及κ輕鏈59精選ppt課件κ輕鏈型IgG并其他Ig缺乏60精選ppt課件κ輕鏈型IgA并其他Ig缺乏61精選ppt課件寡克隆帶62精選ppt課件移植病人之寡克隆帶63精選ppt課件艾滋病人之寡克隆帶64精選ppt課件游離λ輕鏈65精選ppt課件Electrophoreticexplorationofproteinuria非濃縮尿蛋白電泳

臨床應用66精選ppt課件腎單位生理及與血漿蛋白質(zhì)關系腎臟近二百萬個腎單位每天過濾1600升血液并產(chǎn)生180升原尿，經(jīng)腎小管重吸收后最終排出約1.5升終尿。白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白微蛋白白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白微蛋白腎小球濾過膜腎小管重吸收微蛋白腎小管分泌(Thamm-Horsfall蛋白)終尿中白蛋白占1/3，球蛋白占2/3。67精選ppt課件尿蛋白定義生理性尿蛋白為50—150毫克／天(大約100毫克／升以下)

主要成分為白蛋白(30毫克／天以下)病理性尿蛋白為超過1８0毫克／天

蛋白質(zhì)成分復雜多樣68精選ppt課件尿蛋白增加的原因生理性：間歇性(體位,高蛋白飲食,劇烈運動后,精神壓力大)腎前性：高血壓，高熱，心臟或肝臟衰竭,…

血中蛋白濃度過高(溢出性蛋白尿)腎性：腎小球或腎小管損害(或兩著均有)腎后性：泌尿生殖道損害69精選ppt課件十二烷基磺酸鈉-瓊脂糖凝膠電泳（SDS-AGE）技術的分析原理

SDS（SodiumDodecysulphate）是一種陰離子型表面活性劑，當其濃度達蛋白質(zhì)的5-10倍時，與還原劑共同作用，能使蛋白質(zhì)分子內(nèi)的氫建和二硫鍵斷裂，解離成單獨的亞基與SDS充分結(jié)合形成帶負電荷的亞基-SDS膠束，所帶電荷量遠遠超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，從而消除了不同分子之間的原有電荷差異。根據(jù)流體動力學的研究證明，這種復合物是橢圓形，短軸約為1.8A，但長軸的長度與亞基分子量的大小呈正比，加之瓊脂膠的分子篩作用，使電泳的遷移率與摩擦系數(shù)的反比關系只表現(xiàn)在蛋白質(zhì)分子量大小上，因此尿蛋白各組分便可按分子量的大小順序排列在瓊脂糖凝膠上。70精選ppt課件>70kDa<70kDa腎單位生理結(jié)構(gòu)腎小球濾過膜腎小管重吸收SDS-agarosegelelectrophoresis十二烷基磺酸鈉SDSSDS+-71精選ppt課件尿蛋白電泳以分子量排列原理SDSSDS+-分子量標記(kDa)14.430436794低分子量

(<70kDa)高分子量

(>70kDa)白蛋白72精選ppt課件Hydragel尿蛋白電泳結(jié)果解釋分子量標記(kDa)14.430436794白蛋白腎小管標記腎小球標記73精選ppt課件Hydragel尿蛋白電泳144002000030000430006700094000130000溶菌酶視黃醇結(jié)合蛋白輕鏈白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白?2-微球蛋白微球蛋白SerSerPMSerSer74精選ppt課件腎小球濾過功能低分子量蛋白質(zhì)，小于70

kDa,可被濾過。其他影響每種蛋白質(zhì)濾過的因數(shù)：形狀，所帶電荷，血漿濃度。濾過取決于腎動力參數(shù)。腎小球濾過膜的損害可導致大分子量的蛋白質(zhì)(超過70

kDa)漏出。75精選ppt課件腎小球性蛋白尿產(chǎn)生原因主要是腎小球受到炎癥，毒素等的損害，引起腎小球毛細血管壁通透性增加，濾出較多的血漿蛋白，超過了腎小管重吸收能力所形成的蛋白尿。

頻發(fā)于成人及嬰幼兒，一般尿蛋白總量常大于1000mg/天。

常見于腎小球疾病如急性腎小球腎炎，某些繼發(fā)性腎臟病變?nèi)缣悄虿∧I病，免疫復合物病如紅斑狼瘡性腎病等。

76精選ppt課件腎小球損害>70kDa<70kDa白蛋白<70kDa>70kDaSer77精選ppt課件電泳圖譜表現(xiàn)表現(xiàn)為漏出性蛋白尿，出現(xiàn)白蛋白及分子量更大的轉(zhuǎn)鐵蛋白，免疫球蛋白，有時甚至出現(xiàn)α2-巨球蛋白。

分子量越大損傷越嚴重，這里可以初步估計出蛋白尿的選擇性，作為判斷腎小球損傷嚴重程度及腎小球病變預后評價的一個重要指標。78精選ppt課件腎小管重吸收腎小管可重吸收被腎小球濾出的低分子量蛋白質(zhì)(<70

kDa)。(activeendocytosis)

99%被腎小球濾出的蛋白質(zhì)可被腎小管重吸收，例如，白蛋白每天可被濾出18

g，但在生理性終末尿中僅30

mg/天。腎小管損害可減弱對低分子量蛋白質(zhì)(<70

kDa)的重吸收。當血漿濃度增加超過腎小管重吸收閾值時，亦可出現(xiàn)低分子量蛋白質(zhì)。

79精選ppt課件腎小管性蛋白尿產(chǎn)生原因主要是由于炎癥或中毒等因素引起的近曲小管對低分子量蛋白質(zhì)重吸收功能減退而出現(xiàn)以低分子量蛋白質(zhì)為主的蛋白尿。

一般尿蛋白總量小于500mg/天，持續(xù)時間短。

常見于腎盂腎炎，間質(zhì)性腎炎，腎小管性酸中毒，重金屬（汞，鎘，鉍）中毒，應用慶大霉素，多粘菌素B及腎移植術后等。

80精選ppt課件腎小管損害>70kDa<70kDa白蛋白<70kDa>70kDaSer混合損害，以腎小管為主81精選ppt課件電泳圖譜表現(xiàn)出現(xiàn)較多的輕鏈二聚體，微球蛋白，游離輕鏈，視黃醇結(jié)合蛋白，溶菌酶，β2微球蛋白等低分子量蛋白質(zhì)，且各蛋白組分所占比例較均一。

其所含濃度越大提示腎小管損傷越嚴重。嬰幼兒腎小管性蛋白尿以視黃醇結(jié)合蛋白為主，而且尿視黃醇結(jié)合蛋白排泄量升高是較敏感的腎近曲小管損傷的診斷指標。

82精選ppt課件混合損害>70kDa<70kDa白蛋白<70kDa>70kDa83精選ppt課件腎前性蛋白尿主要是由于高血壓，高熱，心臟或肝臟衰竭等造成血中蛋白濃度病理性升高，超過腎小管重吸收能力時所排出的包含各種特殊蛋白成分。原因游離輕鏈，見于多發(fā)性骨髓瘤?2微球蛋白，見于淋巴組織增生綜合征溶菌酶，見于部分急性粒細胞白血病血紅蛋白，見于溶血性疾病α1酸性糖蛋白,見于支氣管肺癌肌紅蛋白，見于橫紋肌分解這些原因亦可導致腎臟病變

(有游離輕鏈時，可見特征性