動(dòng)物細(xì)胞工程ppt復(fù)習(xí)課程

專題(zhuāntí)2.2動(dòng)物細(xì)胞工程第一頁(yè)，共57頁(yè)。動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合單克隆抗體(kàngtǐ)制備細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)第二頁(yè)，共57頁(yè)。2.2.1動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)第三頁(yè)，共57頁(yè)。動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)第四頁(yè)，共57頁(yè)。（一）、概念(gàiniàn)是指從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些(zhèxiē)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。（二）、原理(yuánlǐ)細(xì)胞分裂增殖第五頁(yè)，共57頁(yè)。（三）、過(guò)程(guòchéng)幼齡動(dòng)物剪碎組織原代細(xì)胞培養(yǎng)取動(dòng)物器官和組織細(xì)胞懸浮液傳代細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞第六頁(yè)，共57頁(yè)。細(xì)胞貼壁:培養(yǎng)貼附性細(xì)胞時(shí),細(xì)胞要能貼附于底物(dǐwù)上才能生長(zhǎng)繁殖.第七頁(yè)，共57頁(yè)。細(xì)胞(xìbāo)接觸抑制細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷(bùduàn)增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。第八頁(yè)，共57頁(yè)。有關(guān)(yǒuguān)概念原代培養(yǎng)：從機(jī)體(jītǐ)取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。一般培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。第九頁(yè)，共57頁(yè)。歸納(guīnà)過(guò)程取的組織(zǔzhī)、器官細(xì)胞(xìbāo)懸浮液

酶

貼滿瓶壁的細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞加入

液動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物胰蛋白培養(yǎng)接觸抑制原代

培養(yǎng)(分裝前)1-10代細(xì)胞第十頁(yè)，共57頁(yè)。遺傳物質(zhì)

改變?cè)?xì)胞培養(yǎng)(péiyǎng)加

液40—50代細(xì)胞(xìbāo)(細(xì)胞(xìbāo)株)未遺傳物質(zhì)

改變無(wú)限(wúxiàn)傳代（細(xì)胞系）已傳代培養(yǎng)胰蛋白

酶

第十一頁(yè)，共57頁(yè)。有關(guān)(yǒuguān)概念細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有(zhǐyǒu)部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第十二頁(yè)，共57頁(yè)。思考題：1、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡(yòulínɡ)個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？2、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散(fēnsàn)成單個(gè)細(xì)胞？因?yàn)檫@些組織或器官，分裂(fēnliè)能力旺盛，易于培養(yǎng)。成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。第十三頁(yè)，共57頁(yè)。3、胰蛋白酶(yídànbáiméi)的作用是什么呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)(wùzhì)主要是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)。4、細(xì)胞膜的主要(zhǔyào)成份是什么？蛋白質(zhì)和磷脂5、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？能第十四頁(yè)，共57頁(yè)。6、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物(dòngwù)組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問(wèn)題呢？7、能夠用胃蛋白酶代替(dàitì)胰蛋白酶嗎？為什么？注意(zhùyì)時(shí)間的控制

不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近第十五頁(yè)，共57頁(yè)。1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境(huánjìng)

保證(bǎozhèng)細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖添加(tiānjiā)一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清等。（四）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件2、營(yíng)養(yǎng)第十六頁(yè)，共57頁(yè)。3、溫度(wēndù)和PH

培養(yǎng)(péiyǎng)室中控制,使之達(dá)到36.5±0.5℃,7.2~7.4培養(yǎng)箱中提供(tígōng)O2和CO2（95%空氣和5%CO2）4、氣體環(huán)境：第十七頁(yè)，共57頁(yè)。植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的

細(xì)胞培養(yǎng)基特有成分

、植物激素葡萄糖、培養(yǎng)結(jié)果植物體培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得全能性增殖(zēngzhí)蔗糖(zhètáng)動(dòng)物血清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞,某些蛋白質(zhì)第十八頁(yè)，共57頁(yè)。（五）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(jìshù)的應(yīng)用（3）細(xì)胞(xìbāo)的生理、藥理、病理研究（1）培養(yǎng)(péiyǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植（2）基因工程的受體細(xì)胞第十九頁(yè)，共57頁(yè)。前景(qiánjǐng)展望資料(zīliào)一：第二十頁(yè)，共57頁(yè)。培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)。許多致畸、致癌物質(zhì)加入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)發(fā)生染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的變異。根據(jù)變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，可以判斷某種物質(zhì)的毒性?，F(xiàn)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)成為檢測(cè)有毒物質(zhì)的快速(kuàisù)而靈敏的有效手段。資料(zīliào)二：第二十一頁(yè)，共57頁(yè)。人工關(guān)節(jié)——軟骨(ruǎngǔ)再生1.第一次手術(shù):從病人關(guān)節(jié)軟骨中未受力的部分，取出一片約為葡萄干大小的健康軟骨組織。2.分離(fēnlí)軟骨細(xì)胞并經(jīng)三星期的體外培養(yǎng)，使細(xì)胞數(shù)增加約10～20倍。3.第二次手術(shù):清理軟骨受損的部分，從下方骨頭部位取出一片約與傷口大小相同的骨膜，縫在傷口上方，再將軟骨細(xì)胞注射到骨膜下方。資料(zīliào)三：結(jié)果:經(jīng)過(guò)復(fù)健一年后即可恢復(fù)正常的生活。第二十二頁(yè)，共57頁(yè)。動(dòng)物(dòngwù)體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物(dòngwù)第二十三頁(yè)，共57頁(yè)。（一）、動(dòng)物細(xì)胞核移植(yízhí)的概念：

動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)(yǐjing)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.克隆動(dòng)物(dòngwù)：用核移植的方法得到的動(dòng)物(dòngwù)。第二十四頁(yè)，共57頁(yè)。動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組(zhònɡzǔ)并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體第二十五頁(yè)，共57頁(yè)。（二）、分類(fēnlèi)：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度(chéngdù)低，恢復(fù)全能性容易

細(xì)胞分化程度(chéngdù)高，恢復(fù)全能性困難克隆動(dòng)物:用核移植方法得到的動(dòng)物.

克?。╟lone）是指通過(guò)無(wú)性生殖而產(chǎn)生的遺傳上均一的生物群，即具有完全相同的遺傳組成的一群細(xì)胞或者生物的個(gè)體?？寺≡谙ＥD語(yǔ)中是“小樹枝葉”的意思，用以指無(wú)性增殖物。

第二十六頁(yè)，共57頁(yè)。第二十七頁(yè)，共57頁(yè)。第二十八頁(yè)，共57頁(yè)。去核卵細(xì)胞供體細(xì)胞(xìbāo)電刺激使兩細(xì)胞融合重組(zhònɡzǔ)細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C胚胎移植卵細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)性生殖(wúxìngshēngzhí)（三）、體細(xì)胞的核移植過(guò)程高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B第二十九頁(yè)，共57頁(yè)。（四）、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用(yìngyòng)前景1、在畜牧業(yè)中可以加速(jiāsù)家畜遺傳改良的進(jìn)程2、保護(hù)瀕危(bīnwēi)物種3、生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植的供體第三十頁(yè)，共57頁(yè)。（五）、體細(xì)胞核移植技術(shù)(jìshù)存在的問(wèn)題1、克隆動(dòng)物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚(qīngchu)。2、克隆技術(shù)效率低，畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問(wèn)題。3、生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴。第三十一頁(yè)，共57頁(yè)。2、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程(guòchéng)中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是（）

A．獲得不死性的細(xì)胞B．10代以內(nèi)細(xì)胞C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞1、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)(jīchǔ)是（）

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

AD課堂反饋(fǎnkuì)練習(xí)第三十二頁(yè)，共57頁(yè)。3、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是：（）A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散C、細(xì)胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代(chuándài)培養(yǎng)的過(guò)渡過(guò)程中D、培養(yǎng)至50代后傳代(chuándài)細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變B第三十三頁(yè)，共57頁(yè)。4、一般說(shuō)來(lái)，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足(mǎnzú)以下條件（）①無(wú)毒的環(huán)境(huánjìng)②無(wú)菌的環(huán)境(huánjìng)③培養(yǎng)基需要加入血清④溫度與動(dòng)物體溫相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D(zhuǎn)第三十四頁(yè)，共57頁(yè)。5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)(tèdiǎn)（）①細(xì)胞貼壁②有絲分裂③細(xì)胞分化④接觸抑制⑤減數(shù)分裂⑥原代培養(yǎng)一般傳1－10代A、①②④⑥B、②③④⑤C、①③④⑥D(zhuǎn)、③④⑤⑥A第三十五頁(yè)，共57頁(yè)。6、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答：（1）容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般(yībān)取自______________________。（2）容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是，然后用酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來(lái)，這樣做的目的是。動(dòng)物(dòngwù)胚胎或幼齡動(dòng)物(dòngwù)剪碎胰蛋白(dànbái)使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)第三十六頁(yè)，共57頁(yè)。（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成分有________________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老(shuāilǎo)死亡，這是培養(yǎng)到第代，到這時(shí)的培養(yǎng)稱為__。（4）為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用處理，然后配置成，再分裝。`動(dòng)物(dòngwù)血清10原代培養(yǎng)(péiyǎng)胰蛋白酶細(xì)胞懸浮液第三十七頁(yè)，共57頁(yè)。第三十八頁(yè)，共57頁(yè)。動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合與單克隆抗體第三十九頁(yè)，共57頁(yè)。動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合第四十頁(yè)，共57頁(yè)。細(xì)胞(xìbāo)A細(xì)胞(xìbāo)B雜種(zázhǒng)細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法第四十一頁(yè)，共57頁(yè)。用滅活的病毒誘導(dǎo)(yòudǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核第四十二頁(yè)，共57頁(yè)。細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)(yòudǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒必須(bìxū)滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過(guò)程中使用的病毒需要滅活？第四十三頁(yè)，共57頁(yè)。第四十四頁(yè)，共57頁(yè)。第四十五頁(yè)，共57頁(yè)。第四十六頁(yè)，共57頁(yè)。第四十七頁(yè)，共57頁(yè)。第四十八頁(yè)，共57頁(yè)。第四十九頁(yè)，共57頁(yè)。二、單克隆抗體(kàngtǐ)什么是抗體？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有(jùyǒu)免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。第五十頁(yè)，共57頁(yè)。單克隆抗體(kàngtǐ)由單個(gè)B淋巴細(xì)胞(xìbāo)經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞(xìbāo)群，這一細(xì)胞(xìbāo)群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高第五十一頁(yè)，共57頁(yè)。單克隆抗體制備(zhìbèi)過(guò)程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選(shāixuǎn)雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體(kàngtǐ)的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體第五十二頁(yè)，共57頁(yè)。單克隆抗體(kàngtǐ)的應(yīng)用與常規(guī)(chángguī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高。