sds尿蛋白及本周氏電泳的意義課件

SDS尿蛋白電泳Sebia

腎病的現(xiàn)狀腎單位的生理結(jié)構(gòu)和各類(lèi)生理蛋白腎小管的廢棄物排放

最后形成的尿液含有1/3的白蛋白和2/3球蛋白腎小管重新吸收白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白腎小球過(guò)濾白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白尿蛋白含量增加的原因間歇性的

生理因素：食高蛋白飲食后，精神激動(dòng)、劇烈運(yùn)動(dòng)、長(zhǎng)時(shí)間受寒，站立過(guò)久,病理性的：

●腎前性（溢出性）●腎性●腎后性●腎小球損傷●腎小管損傷●混合性●選擇性●非選擇性>67kDa<67kDa溢出性蛋白尿血漿中相對(duì)分子質(zhì)量較小或陽(yáng)性電荷蛋白異常增多經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)，超過(guò)腎小管重吸收能力形成蛋白尿。腎小球?yàn)V過(guò)、腎小管重吸收均正常。常見(jiàn)蛋白種類(lèi)及疾病

游離輕鏈見(jiàn)于多發(fā)性骨髓瘤

?2微球蛋白見(jiàn)于淋巴組織增生綜合征

溶菌酶見(jiàn)于部分急性粒細(xì)胞白血病

血紅蛋白溶血性疾病,血型不合輸血

α1酸性糖蛋白

見(jiàn)于支氣管肺癌

肌紅蛋白擠壓傷,心肌梗死……腎前性(溢出)蛋白尿7腎性蛋白尿腎小球性蛋白尿

腎小球?yàn)V過(guò)膜因炎癥、免疫、代謝等因素?fù)p傷后濾過(guò)膜孔徑增大、斷裂和（或）靜電屏障作用減弱。

根據(jù)濾過(guò)膜損傷程度及尿蛋白的組分，尿蛋白分為2類(lèi)：（1）選擇性蛋白尿（selectiveproteinuria）：相對(duì)分子質(zhì)量中等的清蛋白為主

（2）非選擇性蛋白尿（non-selectiveproteinuria）：以相對(duì)分子質(zhì)量較大和中等的蛋白質(zhì)同時(shí)存在為主。反映腎小球毛細(xì)管壁有嚴(yán)重?cái)嗔押蛽p傷。腎小管性蛋白尿

腎小管在受到感染、中毒損傷或繼發(fā)于腎小球疾病時(shí)，因重吸收能力降低或抑制，而出現(xiàn)的以相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白為主的蛋白尿。腎小球過(guò)濾大分子量蛋白（主要為＞67kDa）無(wú)法透過(guò)腎小球進(jìn)入腎小管其他決定各種蛋白被過(guò)濾的因素:分析形狀,帶電量,血漿濃度.還有一些血液動(dòng)力學(xué)因素可影響蛋白的過(guò)濾.腎小球損傷原因糖尿病感染性損傷(細(xì)菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,單核白血球增多癥

,…)其他系統(tǒng)性疾病(自動(dòng)免疫系統(tǒng),癌癥,…)中毒現(xiàn)象(重金屬,藥物中毒,…)此時(shí),我們可以在尿蛋白中發(fā)現(xiàn)白蛋白和其他大分子量蛋白(大于67

kDa)。腎小管損傷腎小管損傷將會(huì)改變其對(duì)小蛋白分子的重新吸收能力(小于67

kDa的蛋白)產(chǎn)生原因遺傳原因(Fanconisyndrome)代謝性疾病(糖尿病,草酸中毒)免疫球蛋白單克隆擴(kuò)增(myeloma,Waldenstr?m)藥物作用(氨基甙類(lèi)抗生素)中毒(金屬中毒,氨基甙類(lèi))白蛋白(<30%)及其它小分子蛋白(小于67

kDa)都將會(huì)在尿液中被找到。>67kDa<67kDa<67kDa>67kDa混合性損傷混合性蛋白尿腎臟病變同時(shí)或相繼累及腎小球和腎小管時(shí)而產(chǎn)生的蛋白尿。各組分所占比例因病變損害部位不同而不一致。>67kDa<67kDa尿液的收集和保存尿液收集:-24小時(shí)尿

-晨尿中段

要注意是否為間歇性蛋白尿保存 -新鮮尿液 -4°C保存最多一周

-注意防腐，避免反復(fù)凍融（導(dǎo)致IgG濃度降低） -檢測(cè)前離心(10min3000rpm）定量分析蛋白尿篩查

-溴酚藍(lán)試紙條檢測(cè)(>150-200mg/L):蛋白尿陽(yáng)性變藍(lán)，本周氏蛋白時(shí)會(huì)產(chǎn)生假陰性定量檢測(cè)方法

-比濁法（不建議使用） -建議采用比色法（焦性沒(méi)食子酚紅，考馬斯藍(lán)）尿中總蛋白的定量分析無(wú)法檢測(cè)到低濃度的本周氏蛋白特異蛋白測(cè)定免疫法定量測(cè)定腎小球性標(biāo)志蛋白:Albumin,IgG,Transferrin腎小管性標(biāo)志蛋白:b2microglobulin,RBP,a1microglobulin

如果需要更多的特異蛋白信息，需要更多的測(cè)試在HYDRAGEL5PROTEINURIE

凝膠上主要的尿蛋白電泳條帶區(qū)域分析起源于腎小管的各類(lèi)蛋白(分子量<67kDa)起源于腎小球的各類(lèi)蛋白(分子量>67kDa)白蛋白(分子量:67kDa)a1-微球蛋白

(MW:33kDa)游離輕鏈

(MW25kDa)轉(zhuǎn)鐵蛋白

(MW:80kDa)Cystatin(MW:11kDda)b2-微球蛋白

(MW:12kDa)溶菌酶

(MW:15kDa)視黃醇結(jié)合蛋白(MW:21kDa)游離輕鏈的二聚體(MW50kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)結(jié)合珠蛋白加樣位置a2-巨球蛋白

(MW:900kDa)注:(CystatinC),血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C5PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa150KDa67KDa腎小球性蛋白尿血清Glomerularproteins(>67kDa)腎小球性蛋白臨床病例2:Lightchainmyeloma輕鏈性骨髓瘤4:MacroscopicHematuria肉眼血尿MW5:OverloadProteinuriawithpolymerisedBJ本周氏蛋白多聚體

本周氏蛋白（Bence-JonesProteins,BJP)HenryBenceJones于1844年在一個(gè)骨髓瘤患者尿中發(fā)現(xiàn)的一種具有特殊凝溶性質(zhì)的蛋白該種蛋白40－60℃發(fā)生沉淀，加熱煮沸時(shí)溶解，冷卻后又沉淀。后被證明是單克隆的免疫球蛋白輕鏈二聚體。大多數(shù)骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白50~60℃室溫90~100℃本周氏蛋白

漿細(xì)胞增生癥影響血液中出現(xiàn)游離輕鏈尿液中出現(xiàn)起因結(jié)果骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.....腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病本周氏蛋白陽(yáng)性患者多表現(xiàn)為腎臟損害極易誤診為慢性腎炎輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中正常的輕鏈過(guò)剩慢性肝病、紅斑狼瘡等多克隆增殖性疾病伴隨輕鏈單一輕鏈

本周氏蛋白免疫固定電泳方法

儀器：Sebia瓊脂糖凝膠電泳儀試劑：本周氏蛋白電泳試劑

方法：點(diǎn)樣，電泳，加抗體反應(yīng)，

條帶檢測(cè)ELP泳道:固定液GAM泳道：抗IgG.A.M重鏈抗血清K泳道：抗

輕鏈抗血清L泳道：抗

輕鏈抗血清Kfree

泳道：抗游離

輕鏈抗血清Lfree泳道：抗

游離輕鏈抗血清重鏈參考泳道復(fù)合輕鏈游離輕鏈免疫球蛋白免疫球蛋白是機(jī)體的正常生理成分多克隆分類(lèi)重鏈：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE輕鏈：κ、λ10種類(lèi)型抗復(fù)合輕鏈抗血清結(jié)合位置抗游離輕鏈抗血清結(jié)合位置，不能與完整抗體的輕鏈結(jié)合本周氏蛋白檢測(cè)結(jié)果解析游離kappa復(fù)合kappa游離lambda

LambdaBenceJonesprotein(G,AorM)kappa

kappaBenceJones2differentlevelsofpolymerizationBenceJonessuspectedNoBenceJonessuspectedBenceJonessuspectedBencesJonessuspectedBenceJones?BenceJones