氨基酸紙色譜

【實驗目的】

1．掌握紙色譜的操作方法。2．了解紙色譜的基本原理。第1頁/共12頁【實驗原理】色譜又可稱層析，是一種分離混合物的物理方法。其分離原理是混合物中各組分在兩相之間溶解能力、吸附能力或其它親和作用的差別，使其在兩相中分配系數(shù)不同，當兩相做相對運動時，組分在兩相間進行連續(xù)多次分配，使各組分達到彼此分離。其中一相是不動的稱為固定相，另一相是攜帶混合物流過此固定相的流體稱為流動相。第2頁/共12頁當流動相所含混合物經(jīng)過固定相時，由于各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上有差異，與固定相發(fā)生作用的大小、強弱也有差異，換言之，在相同流動相下，不同組分在固定相中的滯留時間有長有短，從而按先后不同的次序從固定相中流出。這種借助在兩相間分配差異而使混合物中各組分分離的技術(shù)方法，稱為色譜法。第3頁/共12頁紙色譜是以濾紙為載體，固定相是濾紙纖維上吸附的水分；流動相(通常稱為展開劑)一般是指與水相混溶的有機溶劑，樣品在固定相水與流動相展開劑之間連續(xù)抽提，依靠溶質(zhì)在兩相間的分配系數(shù)不同而達到分離的目的。第4頁/共12頁氨基酸是無色的化合物，可與茚三酮反應產(chǎn)生顏色，因此，溶劑自濾紙揮發(fā)后，噴上茚三酮溶液后加熱，可形成色斑而確定其位置。第5頁/共12頁【實驗步驟】1．點樣

取16cm×6cm的中速色譜濾紙在距離底邊2cm處用鉛筆劃起始線，在起點線上分別點上標準品及混合樣品溶液（樣點間距1cm），點樣直徑控制在2mm～4mm，然后將其晾干或在紅外燈下烘干。第6頁/共12頁

2．展開

向色譜缸中加25mL展開劑，蓋上蓋子約5min（使缸內(nèi)展開劑蒸氣飽和），將點樣后的濾紙懸掛在缸內(nèi)（圖4-2）使紙底邊浸入展開劑約0.3cm～0.5cm，待溶劑前沿展開到合適部位（約8cm～10cm），取出，劃出前沿線，

第7頁/共12頁第8頁/共12頁

3．顯色將展開完畢的濾紙，用電吹風吹干，使展開劑揮發(fā)。然后，噴上0.5％的茚三酮溶液，再用電吹風熱風吹干，即出現(xiàn)氨基酸的色斑。第9頁/共12頁

4．計算Rf值分別計算丙氨酸、亮氨酸及未知溶液中各成分的Rf值。通常用相對比移值Rf表示物質(zhì)相對距離。Rf值的大小與物質(zhì)結(jié)構(gòu)、展開劑系統(tǒng)、濾紙種類、溫度、pH、時間等有關(guān)。在同樣條件下，Rf值只與各物質(zhì)的分配系數(shù)有關(guān)。因此，用Rf值來進行比較，就可以初步鑒定出混合樣品中的不同物質(zhì)。第10頁/共12頁注意事項樣點不能過大2.展開劑液面不能高于起始線第11頁/共12頁【思考題】1．紙色譜法所依據(jù)的原理是什么?2．紙色譜中，為什么樣品點樣處不能浸泡