液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用第一頁，共三十一頁，2022年，8月28日內(nèi)容1.LC-MS/MS的基本原理2.方法開發(fā)流程及優(yōu)化3.電離影響因素與溶液化學(xué)4.注意事項2023/2/142第二頁，共三十一頁，2022年，8月28日1.LC-MS/MS的基本原理2023/2/143第三頁，共三十一頁，2022年，8月28日ESIionsource4第四頁，共三十一頁，2022年，8月28日2023/2/145第五頁，共三十一頁，2022年，8月28日Front-endionoptics2023/2/146第六頁，共三十一頁，2022年，8月28日Quadrupole2023/2/147第七頁，共三十一頁，2022年，8月28日Collisioncell2023/2/148HexapoleQuadrupole：ionfocusingOctopole：iontransmissionN20.5ml/min第八頁，共三十一頁，2022年，8月28日Rearquadrupole

anddetector2023/2/149第九頁，共三十一頁，2022年，8月28日Pumpingsystem102torr10-210-310-5torrtorrtorr第十頁，共三十一頁，2022年，8月28日2.LC/MS/MS方法開發(fā)流程1電離模式的選擇2查閱文獻，參考樣品前處理的技術(shù)路線和色譜分離條件、質(zhì)譜參數(shù)條件等。3MRM參數(shù)優(yōu)化使用標準品優(yōu)化fragmentor和collisionenergy4離子源參數(shù)的優(yōu)化（源溫度、流速）5LC分離方法的優(yōu)化，1-3min為理想2023/2/1411第十一頁，共三十一頁，2022年，8月28日MRM參數(shù)優(yōu)化掃描（MS2Scan）2023/2/1412第十二頁，共三十一頁，2022年，8月28日選擇離子監(jiān)測（SIM）2023/2/1413優(yōu)化毛細管出口電壓（fragmentor），保證母離子的傳輸效率第十三頁，共三十一頁，2022年，8月28日子離子掃描（ProductIonScan）2023/2/1414使用已優(yōu)化好的fragmentor，選擇定性定量離子，優(yōu)化碰撞能量（collisionenergy），得到/優(yōu)化子離子的響應(yīng)，每個化合物一般選擇兩個強度最高的子離子，分別作定性離子與定量離子第十四頁，共三十一頁，2022年，8月28日多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）2023/2/1415使用已優(yōu)化好的fragmentor和collisionenergy，優(yōu)化Dwelltime第十五頁，共三十一頁，2022年，8月28日Dwelltime優(yōu)化2023/2/1416第十六頁，共三十一頁，2022年，8月28日Dwelltime優(yōu)化2023/2/1417第十七頁，共三十一頁，2022年，8月28日DynamicMRM標準MRM對多組分，出峰時間波動，靈敏度低。dMRM適合應(yīng)用于多組分同時分析，自動優(yōu)化分配DwellTime，兼顧靈敏度與數(shù)據(jù)采集質(zhì)量！2023/2/1418第十八頁，共三十一頁，2022年，8月28日2023/2/1419thenumberofMRMsatanytimearemanyfewerthanwithtimesegmentmethods,allowingmuchfasterMScycletimes第十九頁，共三十一頁，2022年，8月28日3.電離影響因素與溶液化學(xué)溶液的化學(xué)性質(zhì)

流動相

被分析物

基質(zhì)的性質(zhì)噴針內(nèi)部針的位置針的狀況霧化氣壓力高電壓電極

毛細管和噴霧室電壓設(shè)置

毛細管和噴霧室高壓部件的狀態(tài)絕緣體的狀態(tài)20第二十頁，共三十一頁，2022年，8月28日離子模式的選擇正離子ES模式適合于堿性樣品，amines，amides，aminoacids，antibiotics等酸性流動相負離子ES模式適合于酸性樣品，acids，hydroxyls，含強負電性基團有雜原子，可失去質(zhì)子。如COOH、OH中性偏堿性流動相可正可負比較靈敏度2023/2/1421第二十一頁，共三十一頁，2022年，8月28日溶劑匹配反相溶劑：甲醇、乙腈、水兼容液質(zhì)的鹽（常用）：甲酸、乙酸(0.01-1%)、甲酸銨、乙酸銨(小于20mM)慎用：三氟乙酸等不兼容鹽

硼酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽（不揮發(fā)或易形成離子對）2023/2/1422第二十二頁，共三十一頁，2022年，8月28日流動相中添加劑正離子模式-

甲酸、乙酸和三氟乙酸（慎用）負離子模式-氨水正離子＆負離子-甲酸銨或乙酸銨（不高于20mM）2023/2/1423第二十三頁，共三十一頁，2022年，8月28日電噴霧-離子對的形成對正離子檢測，由于離子對的形成，是溶液或氣相中的離子中和！[M+H]++A-[M+H+A]0

A=B,S,P有利于中性產(chǎn)物A=甲/乙酸鹽有利于生成帶電物質(zhì)離子對強度：B,S,P＞三氟乙酸＞乙酸鹽，甲酸鹽2023/2/1424第二十四頁，共三十一頁，2022年，8月28日電噴霧-離子對的形成對負離子，由于離子對的生成，使溶液或氣相中的離子中和！[M-H]-+C+[M-H+C]0

C=Na,K,Li有利于中性產(chǎn)物C=NH4+

有利于帶電物質(zhì)2023/2/1425第二十五頁，共三十一頁，2022年，8月28日ESI:離子競爭機制表面競爭被分析離子與電解質(zhì)離子轉(zhuǎn)換為氣相離子的競爭使被分析物相應(yīng)降低。電荷競爭OAc﹣+AH+→HOAc+A2023/2/1426第二十六頁，共三十一頁，2022年，8月28日4.注意事項使用0.22um孔隙濾膜過濾流動相含水＞50%,適當提高干燥氣體的流速和溫度選擇母離子：準分子離子，[M+H]+、[M-H]-優(yōu)先，避免選擇加和離子[M+Na]+,所需能量較低，靈敏度好。子離子的選擇：高質(zhì)量端的特征離子。2023/2/1427第二十七頁，共三十一頁，2022年，8月28日氣相離子的產(chǎn)生表面活性高（具低溶劑化能）的離子優(yōu)先轉(zhuǎn)移至霧滴表面，最終轉(zhuǎn)變?yōu)闅庀嚯x子--競爭機制應(yīng)采用表面活性低的緩沖鹽低濃度的揮發(fā)性的酸、堿及緩沖鹽2023/2/1428第二十八頁，共三十一頁，2022年，8月28日小結(jié)：流動相的考慮金屬離子緩沖鹽影響離子化表面活性劑影響去溶劑化離子對試劑可以離子化，而導(dǎo)致高背景噪音強離子對試劑可與待測物反應(yīng)，導(dǎo)致待測物不能離子化TEA干擾正離子模式(m/z102)TFA擾負離子模式(m/z113)增塑劑（鄰苯二甲酸酯）背景干擾，(m/z149,315,391)2023/2/1429第二十九頁，共三十一頁，2022年，8月28日API質(zhì)譜圖的解釋檢測到的離子種類依賴于溶劑添加劑和分析所用的條件。2023/2/1430正離子檢測-[M+H]+

酸性條件-[M+Na]+

，[M+K]+-[M+NH4]+有銨鹽緩沖鹽-[M+X]+X=溶劑或緩沖溶液中的陽離子-[2M+H]+高濃度時形成的二聚體離子-[M+H+S]+溶劑加合離子負離子檢測-[M-H]-堿性條件-[M+X]-X=溶劑或緩沖溶液中的陰離子-[M-H+S]-溶劑加合離子第三十頁，共三十一頁，2022年，8月28日名義分子量和平均分子量對于分子C