液相層析分離法

液相層析分離法第一頁，共八十五頁，2022年，8月28日按流動(dòng)相分類第二頁，共八十五頁，2022年，8月28日按原理分類紙色層：濾紙吸附的水作固定相，有機(jī)溶劑作流動(dòng)相。薄層色譜：把吸附劑粉末舖成薄層作為固定相。本章僅討論紙色層、薄層色譜法。第三頁，共八十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)、紙色層微量操作技術(shù)，簡(jiǎn)、分離效率高、但分離速度慢１、基本原理紙色層－紙上萃取色譜，它和萃取一樣，它也是根據(jù)不同物質(zhì)在兩相間的分配比不同而進(jìn)行分離的（相當(dāng)于逆流萃?。?。第四頁，共八十五頁，2022年，8月28日1.層析缸2.濾紙3.原點(diǎn)4.展開劑5.前沿6.7.斑點(diǎn)12345673第五頁，共八十五頁，2022年，8月28日xyRf的計(jì)算2.比移值Rf組份分離后,它們?cè)跒V紙上的位置用比移值Rf表示.[定義]:xy第六頁，共八十五頁，2022年，8月28日Rf的大小取決于溶質(zhì)在二相間的分配系數(shù)及濾紙的性質(zhì).不同的組分具有不同的分配系數(shù),因而也就有不同的Rf.這就是定性的依據(jù).3.影響Rf的因素(1).欲分離物的本性:物質(zhì)在兩相的分配系數(shù),決定了它的Rf大小;第七頁，共八十五頁，2022年，8月28日(2).層析溶劑:同一組分在不同溶劑中Rf不同。通常應(yīng)選這樣的層析劑，使溶質(zhì)的Rf在0.050.85之間,不同組分的Rf差值>0.05.(3).pH:影響它們的存在狀態(tài)(4).濾紙:質(zhì)地均一、厚薄適當(dāng)、具有一定機(jī)械強(qiáng)度、不含雜質(zhì)第八頁，共八十五頁，2022年，8月28日(5).溫度:在層析缸中用紅外燈照射。溫度會(huì)影響溶質(zhì)的分配系數(shù)及流動(dòng)相的擴(kuò)散速度。層析操作應(yīng)在恒溫下進(jìn)行，溫度不超過±0.5oC(6).展開方式:展開方式不同,Rf也不同。下行法的Rf最大，上行法的Rf較小，環(huán)行法的Rf也不大。第九頁，共八十五頁，2022年，8月28日操作技術(shù)(1).濾紙(擔(dān)體)Ａ．濾紙的選擇

a.要求濾紙質(zhì)地均勻、平整無折痕邊緣整齊

b.要求濾紙的纖維松緊適宜c.濾紙的雜質(zhì)含量少

第十頁，共八十五頁，2022年，8月28日層析濾紙的性能與規(guī)格型號(hào)標(biāo)重g/m2厚度(mm)吸水性(30min內(nèi)水上升mm)灰分g/m2性能1900.17150~1200.08快速2900.16120~900.08中速3900.1590~600.08慢速41800,34151~1210.08快速51800.32120~900.08中速61800.3090~600.08慢速第十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日濾紙的處理以0.1~0.4mol/LHCl(或2mol/LHAc)浸泡數(shù)小時(shí),除去無機(jī)雜質(zhì)后,取出用蒸餾水洗凈,再將濾紙放在丙酮-乙醇(1:1)中浸泡一周時(shí)間,除去有機(jī)雜質(zhì),再取出風(fēng)干備用.第十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日固定相紙層析－以吸著在纖維素上的水作固定相。反相紙層析－用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等作固定相。若分離芳香油等非極性物，以石蠟油、硅油作固定相。(2).試樣A.試樣的溶解盡量避免用水。一般用乙醇、丙酮、氯仿等，最好采用與展開劑極性相似的溶劑。液體樣，直接點(diǎn)樣。第十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日Ｂ．點(diǎn)樣方法a先用鉛筆在距紙條一端2~3cm處劃一條直線（起始線）并在線上隔一定距離劃一“x”號(hào)表示點(diǎn)樣位置；見下示意圖：第十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日b.點(diǎn)樣工具：微量注射器、毛細(xì)滴管（Φ＝0.5mm)；c.點(diǎn)樣方法：用點(diǎn)樣工具吸取試液輕輕與“x”號(hào)接觸，使點(diǎn)樣的斑點(diǎn)直徑為0.2~0.5cm,每次點(diǎn)樣2~20μl于濾紙上，以冷風(fēng)吹干；d.干后，將紙的兩邊用線縫好，以圓筒形式置于層析缸中展開。第十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日C.展開展開劑展開劑的選擇：欲分離物在兩相中的溶解度；展開劑的極性展開劑與欲分離物間應(yīng)無化學(xué)反應(yīng)欲分離物在展開劑中的分配系數(shù)最好不受溫度的影響欲分離物在兩相間的分配平衡瞬間達(dá)到第十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日展開劑

水飽和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丙酮、有機(jī)酸、有機(jī)堿，有時(shí)也加入一定比例的無機(jī)酸、無機(jī)堿、甲醇、乙醇等b.展層方法：展層前，層析缸與已點(diǎn)樣濾紙必須予先經(jīng)水蒸汽、溶劑蒸氣飽和。方法：將溶劑和水置于分液漏斗中充分振蕩，分層后，將水層放入小燒杯內(nèi)，置于層析缸中平衡一段時(shí)間，使濾紙吸飽蒸汽，然后移去小燒杯，將溶劑倒入溶劑槽中，立即將點(diǎn)好樣的濾紙的一端浸入溶劑槽內(nèi)展層。第十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日上行法

將點(diǎn)有試樣的濾紙條的下端浸入溶劑（但不能浸沒點(diǎn)樣處）上端固定在層析缸的上部，保持垂直，將缸密閉，使溶劑沿下端上升而展層。待溶液上升到距離紙上端3~4cm時(shí)，將濾紙取出，用鉛筆在溶劑前沿處畫線作記號(hào)（見右圖）第十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日對(duì)于Rf

十分接近的物質(zhì)可采取連續(xù)揮發(fā)的色譜法紙條的上端暴露在層析缸外，以便令上升的溶劑揮發(fā)；b.只要保持紙條下端與溶劑面接觸，溶劑便能不斷地上升而揮發(fā)，展層過程就自動(dòng)連續(xù)地進(jìn)行；第十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日c.若溶劑沸點(diǎn)＞100oC，則可在紙條暴露部分用紅外燈烘烤，促使溶劑揮發(fā)；d.該法不能測(cè)量前沿，但可達(dá)分離的目的。b.下行法溶劑自紙的上端向下降（借助于重力的作用），具有分離速度快及連續(xù)揮發(fā)色譜的優(yōu)點(diǎn)。第二十頁，共八十五頁，2022年，8月28日

玻片玻璃棒原點(diǎn)玻皿剪成鋸齒狀，便于溶劑滴下第二十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日c.環(huán)行法又叫徑向色譜法。這是一種既快又方便的方法。取一張圓形濾紙?jiān)谥睆降膬蛇吀鳟媰筛叫芯€，用剪刀沿這兩根線剪至圓心處，在紙的中央滴上試液，干后，將濾紙夾在兩個(gè)大小相同培養(yǎng)皿之間，使剪開的紙條的尾端浸入流動(dòng)相。第二十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日d.雙向展開法有時(shí)用一種溶劑不能將樣品中組份分開時(shí)，可以試用雙向展開法。該法是用正方形或長(zhǎng)方形濾紙，在紙的一角上點(diǎn)樣，先用一種展開劑朝一個(gè)方向展開，展開完畢，待溶劑揮發(fā)后，再用另一種展開劑朝與原來垂直的方向進(jìn)行第二次展層。

若前后二次展開劑選擇適當(dāng)，可使各種組份完全分離。例如，氨基酸的分離可用此法。雙向展開法也可以二次使用同一種展開劑展層。第二十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日D.顯色展層后，將濾紙從層析缸中取出，用鉛筆在溶劑前沿作記號(hào)a.有色物：直接觀察各個(gè)色斑無色物：物理法顯色：用紫外燈照，觀察有無吸收或發(fā)出各種不同顏色的熒光斑點(diǎn)，并用鉛筆畫下斑點(diǎn)的位置及大小。第二十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日Ｅ.分析定性：各物質(zhì)有各物質(zhì)的Rf。為了查明未知物的組成，最好是在同樣條件下與已知的純物質(zhì)做對(duì)照實(shí)驗(yàn)化學(xué)法顯色：利用各種物質(zhì)的特性反應(yīng)，噴灑適當(dāng)?shù)娘@色劑，若被分離的物質(zhì)含有羧酸，可噴酸堿指示劑溴甲酚綠，當(dāng)斑點(diǎn)呈黃色，說明羧酸確實(shí)存在；若被分離的物質(zhì)含有氨基酸，則可噴茚三酮，多數(shù)氨基酸呈紫色，個(gè)別氨基酸呈黃色。其它化合物所用顯色劑可從手冊(cè)里查閱。第二十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日xyRf

的計(jì)算:Rf=x/y第二十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日x1x2yRf的計(jì)算:Rf1=x1/yRf2=x2/y這樣每一個(gè)斑點(diǎn)用兩個(gè)Rf來描述第二十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日定量剪洗法：將斑點(diǎn)剪下，用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵摚缓笥酶鞣N儀器方法（如紅外、紫外、原子吸收、發(fā)射光譜），也可將斑點(diǎn)剪下灰化，再用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙?，測(cè)之。比較法：經(jīng)紙色譜將各種組份分開后，可在相同條件下，制得標(biāo)準(zhǔn)系列圖譜，與待測(cè)斑點(diǎn)顏色、面積進(jìn)行比較，確定其可能的含量。反射散射光譜法：

第二十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日

物質(zhì)受光照射時(shí)，通常發(fā)生兩種不同的反射現(xiàn)象（即鏡面反射與散射）。鏡面反射同鏡子反射一樣，光線不被物質(zhì)吸收，反射角等于入射角；散射則必須滿足Kubelka-Munk方程式：

其中，R=IR/I0，I0、IR分別為入射光與散射光強(qiáng)度，S為反射系數(shù)，K‘’為線性吸收系數(shù)，

為被測(cè)物的摩爾吸光系數(shù)，C為被測(cè)物的物質(zhì)的量濃度，K‘=/S。儀器上顯示的反射散射吸收值為AR=lgI0/IR=lg1/R。由上可建立方程組：

第二十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日

（2）式代入（1）式，得：（3）式即為反射散射吸收光譜測(cè)量值F與C的定量關(guān)系；若以F為縱坐標(biāo)、C為橫坐標(biāo)，則可得一截踞為2的直線，斜率為K。第三十頁，共八十五頁，2022年，8月28日?qǐng)D1.反射散射附件的光路示意圖M:反射鏡;S:樣品:PC:光電管

1234sMPCM1－長(zhǎng)頸漏斗，2－濾紙，3－墊板，4－抽濾瓶第三十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日F.應(yīng)用例１．氨基酸的分離（固定相為水）流動(dòng)相分離情況正丁醇：2mol/LHAc=1:1酪氨酸、二碘酪氨酸用水飽和的芐醇亮氨酸、異亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水＝16:16:0.1:3.9亮氨酸、異亮氨酸第三十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動(dòng)相分離情況２－丁醇：醋酸：水＝32:2:22甲狀腺素、二碘酪氨酸流動(dòng)相１：丁醇：HAc:H2O=4:1:5流動(dòng)相２：M－甲酚－酚：pH=9.33硼酸緩沖液=1:1亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、門冬氨酸、谷氨酰酸、門冬酰氨、精氨酸、組氨酸、賴氨酸、胱氨酸等第三十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日例2.糖的分離(固定相為水)流動(dòng)相分離情況醋酸乙脂:吡啶:水=2:1:1木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖丁醇:吡啶:水=45:25:40乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇:乙醇:水:NH3=40:10:49:1尿中葡萄糖丁醇:乙醇:水=10:1:2蜜二糖、果糖、葡萄糖、第三十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動(dòng)相分離情況流動(dòng)相１：酚流動(dòng)相２：丁醇:醋酸:水=1:1:1鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸丁醇:乙醇:水=4:1:5低聚糖75%2－丙醇：醋酸＝9:1直鏈淀粉丁醇:吡啶:水：苯=50:30:3:45棉子糖第三十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日例３．脂肪酸的分離（固定相為水）流動(dòng)相分離情況95%乙醇：濃氨水＝100:1同系的直鏈脂肪酸正己醇：1.5mol/L氨水＝1:1烷氧基酸流動(dòng)相1:乙醇：濃氨水:H2O=80:5:15流動(dòng)相2：乙二醇乙醚：桉樹腦：88%甲酸=5:5:2草酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、羥基醋酸、順丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、烏頭酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸第三十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動(dòng)相分離情況丁醇：醋酸：水＝4:1:5甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、苯芐胺甲醇：戊醇：苯：水＝4:2:2:2－萘胺、間苯二胺、對(duì)苯二胺、苯胺丁醇：1.5mol/L氨水＝1:1C7以下的脂肪酸例4.胺類的分離（固定相為水）第三十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日例5.醇、酚的分離（固定相為水）流動(dòng)相分離情況丁醇：5%NaHCO3＝1:1甲醇、乙醇、異丙醇、異丁醇、異戊醇、辛醇己烷飽和甲醇乙醇、異丙醇、丙醇、異丁醇、正丁醇丁醇：乙醇：水＝4:1.1:1.9乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇第三十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動(dòng)相分離情況丁醇：醋酸：水＝4:1:5苯甲酸、兒茶酚、肉桂酸、鄰香豆酸、沒食子酸、間羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲酸、5-甲基苯二酚、間苯三酚、2,4,6－三羥基苯甲酸、2,4－二羥基苯甲酸、1,2,3－苯三酚、對(duì)苯二酚、間苯二酚、β－羥基苯甲酸、鄰羥基苯甲酸、香草酸第三十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日例６核酸降解物（核苷酸、嘌呤、嘧啶堿基）的分離（固定相為水）流動(dòng)相分離情況飽和(NH4)2SO4：水：2－丙醇＝79:10:2鳥嘌呤、腺嘌呤、胞苷正丁醇：水：乙二醇：醋酸＝5:1:5:2AMP、ADP、ATP正丁醇：二苷酸：0.1mol/LHCl＝4:1:1黃嘌呤、鳥嘌呤正丁醇：二苷酸：水＝4:1:1腺嘌呤、次黃嘌呤第四十頁，共八十五頁，2022年，8月28日例７.其它類的分離（固定相為水）流動(dòng)相分離情況正丁醇：濃氨水：水＝4:1:5磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p’-sulfonyldianiline正丁醇：醋酸：水＝4:1:5對(duì)胺基苯甲酸、維生素C、N－甲基－菸酰胺、菸堿酰胺、菸酸、潘妥寧、泛酸、VB6、VB1VB甲苯：石油醚：乙醇：水＝200:100:30:70雌酮、雌二酮、雌三酮、馬烯雌酮、脫氫皮質(zhì)甾酮酸、孕甾酮、順式睪丸甾酮第四十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動(dòng)相分離情況丁醇：濃鹽酸＝98:2阿托品、莨菪胺、后馬托品、莨菪堿、、d－古苛堿、d－假古苛堿、托把柯卡因、金雀花堿、高金雀花堿、嗎啡、可待因、蒂巴因、海洛因、那可叮、可它寧、北美黃蓮堿、馬錢子堿、二甲馬錢子堿、奎嚀、辛可寧、辛可寧啶、毛果堿、異毛果堿、毛果心堿、菸堿、吡啶、膽堿、乙酰膽堿、波爾啶堿、檳榔堿第四十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日例8．無機(jī)應(yīng)用（固定相為水）流動(dòng)相分離情況12mol/LHCl：甲醇：丁醇：甲基異丁酮＝55:35:5:5K+、Rb+

、Cs+乙醇：水＝80:20Li+

、Na+

、K+10%HCl的水飽和丁醇Zn2+－Ga3+－In3+

－Al3+苯酚：甲醇：HCl＝5:3:2Al3+

－Ga3+

－In3+

－Tl3+第四十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日流動(dòng)相分離情況丁醇：HAc：乙酸乙脂：水＝10:2:1:7從Fe、Al、Ti中分離出Ga乙酸乙脂：水：HNO3＝85:10:5從稀土、Zr、Ti、Th中分離出Sc乙醚：濃HNO3＝87.5:12.5Hf－Zr4mol/LHCl飽和丁醇UO2－Th第四十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日例9．生物學(xué)應(yīng)用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛紅毛黃毛白毛兔毛的色譜圖毛發(fā)是這樣,皮膚是否是這樣??取不同顏色兔毛(300~500mg),干法灰化,溶于稀HCl中,用丙酮:丁醇:HCl=10:4:2,展開后,顯色第四十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日用紙色譜法分離A、B兩種物質(zhì)，在某條件下兩物質(zhì)的比移值Rf分別為0.36、0.40。設(shè)A、B兩物質(zhì)斑點(diǎn)的直徑分別為0.2cm,0.4cm,當(dāng)展開劑的前沿達(dá)到10cm時(shí)，A、B能否完全分離?設(shè)A、B兩物質(zhì)色譜斑點(diǎn)的中心距原點(diǎn)分別為x1,x2cm,則x1/10=0.36x2/10=0.40x2-x1=(0.40-0.36)10=0.4(cm)欲分離兩物質(zhì)，兩斑點(diǎn)中心距離至少為(0.20+0.40)/2=0.30cm,而實(shí)際兩斑點(diǎn)中心距離為0.4cm,故在此條件下AB兩物質(zhì)可得到完全分離。第四十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日用紙色譜分離混合物中物質(zhì)A和B，已知兩者的比移值分別為0.50和0.60，問欲使層析后斑點(diǎn)顯著分開，斑點(diǎn)間至少間隔1cm，(斑點(diǎn)直徑都是1cm)問濾紙應(yīng)截取多長(zhǎng)？解：設(shè)前沿為l，原點(diǎn)到A、B斑點(diǎn)中心距離分別為a、b，兩斑點(diǎn)間至少間隔1cm，那么兩斑點(diǎn)中心相距為2.0cm，則可列出：原點(diǎn)應(yīng)距濾紙下端4cm，前沿應(yīng)距濾紙上端2-3cm，應(yīng)截取濾紙長(zhǎng)20+4+2=26cm,濾紙條應(yīng)截取26-27cm長(zhǎng)。第四十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日用紙色譜法分離A、B兩種物質(zhì)，在一定條件下A、B兩物質(zhì)的比移值分別為0.35,0.45，設(shè)A、B兩物質(zhì)色譜斑點(diǎn)的直徑分別為0.50cm和0.80cm,要求展開劑前沿至少達(dá)到多少厘米時(shí)，A和B才能完全分離?設(shè)x1,x2分別為A﹑B兩物質(zhì)斑點(diǎn)距原點(diǎn)的距離：則x1/y=0.35x2/y=0.45

x2-x1=0.40+0.25=0.65又x2-x1=(0.45-0.35)y=0.65∴y=6.5(cm)第四十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日紙色譜法分離混合離子,若混合離子極性大小順序?yàn)锳>B>C,用弱極性有機(jī)溶劑展開后其Rf值大小順序?yàn)開_____________________。C,B,A第四十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日第二節(jié)、薄層色譜法原理和特點(diǎn)[原理]:當(dāng)展開劑從薄板上固定相的空隙中通過時(shí),由于各組分的K的不同和足夠多次的分配.[特點(diǎn)]:裝置簡(jiǎn)、操作方便展開時(shí)間短樣品負(fù)荷量大、斑點(diǎn)擴(kuò)散少第五十頁，共八十五頁，2022年，8月28日[缺點(diǎn)］：Rf值的重復(fù)性差[克服辦法］：標(biāo)樣和試樣在同一塊板上展開●同一張色譜圖可用不同的試劑顯斑，也可用濃硫酸等強(qiáng)氧化劑或在400~500ｏＣ加熱碳化檢出?！襁m用面廣，可用不同吸附劑或展開劑。第五十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日吸附劑（固定相）決定吸附性能的因素：吸附劑的化學(xué)組成、活性、表面積［要求］：合適的吸附力與展開劑、被吸附物質(zhì)均不起化學(xué)反應(yīng)粒度細(xì)小而且均勻（范氏方程，減少渦流擴(kuò)散項(xiàng)）第五十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日●對(duì)不同的組分有不同的吸附量,因而能較好的把試樣中各組分分離。●在所有的溶劑和洗脫劑中不溶解。（１）氧化鋁層析用的商品氧化鋁根據(jù)制備的酸度不同可分為如下三種類型：a酸性氧化鋁：pH=3.5～4.5,適用于分離酸性化合物，如某些酸性色素、二羧酸氨基酸、酸性多肽以及對(duì)酸性穩(wěn)定的中性物質(zhì)。b中性氧化鋁：pH=6.9～7.1,應(yīng)用較廣泛，適用分離生物堿、揮發(fā)油、萜類、甾體、蒽醌以及在酸堿中不穩(wěn)定的酯、內(nèi)酯等化合物。可用于分離酸性或堿性氧化鋁分離的物質(zhì)．第五十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日C堿性氧化鋁:pH=9～10，酸性較強(qiáng)的化合物在堿性氧化鋁上吸附的很牢（所以，酸性物質(zhì)分離不好），故通常用于分離碳?xì)浠衔铩⑸飰A類和對(duì)堿性物質(zhì)比較穩(wěn)定的中性物質(zhì)、堿性物質(zhì)。一般薄板要求把氧化鋁活化成Ⅱ~Ⅲ級(jí)使用．

氧化鋁的活性與含水量密切相關(guān)（含一定量的水份時(shí)，吸附劑表面的吸附中心會(huì)被水分子占據(jù)）第五十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日活性ⅠⅡⅢⅣⅤ含水量（％）０３６１０１５故加熱驅(qū)除水－活化；加入一定量的水－失活Δ100~150oC,除去Al2O3中與羥基結(jié)合的部分水份，使Al2O3有一定的活性Δ150~300oC，Al2O3活性達(dá)Ⅱ～Ⅲ級(jí)Δ300~400oC，Al2O3活性達(dá)Ⅰ～Ⅱ級(jí)Δ>600oC，Al2O3進(jìn)一步脫水并開始燒結(jié)第五十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日

由于脫水過程受到許多因素的影響，因此，每批生產(chǎn)的Al2O3，其表面積和表面孔穴結(jié)構(gòu)并不一致，活性也不相同。

Al2O3活性的測(cè)定：取20μL染料溶液（偶氮苯30mg、對(duì)－甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、和對(duì)氨基偶氮苯各20mg，溶解于50mLCCl4中），加到薄板上，用CCl4展層，根據(jù)下表確定活性。第五十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日活性ⅡⅢⅣⅤRf,偶氮苯0.590.740.850.95Rf,對(duì)-甲氧基偶氮苯0.160.490.690.89Rf,蘇丹黃0.010.250.570.78Rf,蘇丹紅0.000.100.330.56Rf,偶氮苯0.000.030.080.19第五十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日市售的供薄層色譜用的Al2O3有:Al2O3－H氧化鋁中無粘合劑Al2O3－G氧化鋁中含煅石膏（一般5％煅石膏）［煅石膏CaSO4，作為粘合劑］Al2O3－HF254

氧化鋁中不含煅石膏，僅含熒光指示劑（在254nm下呈黃綠色熒光）Al2O3－GF254

氧化鋁中既含煅石膏又含熒光指示劑（在254nm下呈黃綠色熒光）上述商品可以直接調(diào)料涂敷（1份料，2份水調(diào)合）第五十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日（２）．硅膠（吸附性較Al2O3弱）

硅膠是微酸性吸附劑，且適用于酸性、中性物質(zhì)的分離（如有機(jī)酸、氨基酸、萜類、甾體）堿性物質(zhì)則能與硅膠作用（當(dāng)用中性溶劑展層，堿性物質(zhì)有時(shí)停留在原點(diǎn)不動(dòng)，或者得到拖尾的斑點(diǎn)，而不能很好的分離）活性ⅠⅡⅢⅣⅤ含水量（％）

05152535注:硅膠薄層的活化溫度不能高于200oC硅膠的吸附能力也跟其含水量有關(guān)，其吸附能力也分為五級(jí)．第五十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日硅膠的結(jié)構(gòu)為:第六十頁，共八十五頁，2022年，8月28日

硅膠活性的測(cè)定：稱取二甲黃、蘇丹紅、靛酚藍(lán)各40mg溶于100mL苯中，將此混合液滴加于薄層上，用石油醚展開10cm，混合物應(yīng)不動(dòng)；如用苯展開，則應(yīng)分成三個(gè)斑點(diǎn)，其Rf值分別為：二甲黃0.58，蘇丹紅0.19，靛酚藍(lán)0.08（展層時(shí)間30~45min），則認(rèn)為此硅膠合格。經(jīng)本法測(cè)定的活性與Al2O3活性Ⅱ~Ⅲ級(jí)相當(dāng)。第六十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日

薄層用商品硅膠有：硅膠H（不含粘結(jié)劑）、硅膠G（含粘結(jié)劑煅石膏）、硅膠HF254（含熒光物質(zhì)的硅膠）硅膠GF254（含有煅石膏和熒光劑）

此外，硅藻土、硅酸鹽、雜多酸鹽、聚酰胺、纖維素也可用作吸附劑。第六十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日(3).選擇吸附劑的規(guī)律：極性物質(zhì)被極性表面的吸附劑吸附；親水性的吸附劑適用于在非水溶液中吸附物質(zhì)；疏水性的吸附劑適用于在水溶液中吸附物質(zhì)．第六十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日３．展開劑（流動(dòng)相）

展開劑的洗脫作用實(shí)質(zhì)是展開劑分子與欲分離組分竟?fàn)幷紦?jù)表面吸附中心的過程。強(qiáng)極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力強(qiáng)，所以，有強(qiáng)的洗脫作用，非極性展開劑分子占據(jù)吸附中心的能力弱，所以，有弱的洗脫作用。（1）常用展開劑的極性：石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烯<苯<甲苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸第六十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日（2）欲分離組分的極性：飽和碳?xì)浠衔锵捣菢O性化合物，不被吸附或吸附不牢。在其結(jié)構(gòu)中引進(jìn)某些功能團(tuán)則極性增加。取代基團(tuán)極性越強(qiáng)，整個(gè)分子極性越強(qiáng)。常見功能團(tuán)按其極性增加的順序是：烷烴<烯烴<醚類<硝基化合物<二甲胺<酯類<酮類<醛類<硫醇<胺類<酰胺<醇類<酚類<羧酸類第六十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日當(dāng)有機(jī)分子的基本母核相同時(shí)，極性基團(tuán)越多，整個(gè)分子的極性越大分子的雙鍵越多，吸附能力越強(qiáng)；共軛雙鍵越多，吸附能力越強(qiáng)分子中取代基團(tuán)的空間排列對(duì)吸附性也有影響，如同一母核中羥基處于能形成內(nèi)氫鍵位置時(shí)，其吸附能力弱于不能形成內(nèi)氫鍵的化合物第六十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日（3）展開劑選擇的基本原則①吸附薄層第六十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日②分配薄層展開劑的選擇原則是根據(jù)物質(zhì)在展開劑的溶解度，或根據(jù)物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同而進(jìn)行的．一般在選擇展開劑時(shí)可將試樣中各組分溶解度相差最大的溶劑組成展開劑．③離子交換薄層展開劑是根據(jù)被分離物質(zhì)是酸還是堿，是陰離子還是陽離子．④凝膠薄層常用于分離不同分子量的非離子化分子的混合物．常用的展開劑是水或鹽的水溶液、緩沖液等．第六十八頁，共八十五頁，2022年，8月28日4.操作技術(shù)（1）制板玻璃板

a.平整、去油、去污（可用濃H2SO4-K2CrO7洗液浸洗，或丙酮擦洗，自來水洗凈后，烘干）b.玻璃板的尺寸根據(jù)自己的需要自由選擇，小的可用2.57.5cm的載玻片,大的可用2020cm的玻片。第六十九頁，共八十五頁，2022年，8月28日涂布液取一定量的吸附劑放入研缽中，加入需要的水或適當(dāng)?shù)娜軇?，研磨時(shí)間以調(diào)成稀糊狀為度，當(dāng)濃度均一后，即成膠狀物，色澤潔白為最佳，立即傾入玻璃板上，用下述方法涂布。涂布方法:玻棒涂布第七十頁，共八十五頁，2022年，8月28日玻片刮涂?jī)A斜涂布（利用流平性）-簡(jiǎn)，但均勻性差涂布器活化薄板首先風(fēng)干，否則濕板一下加熱到高溫，烘出的薄板很酥松，使用效果不好。氧化鋁G板在150~160oC,烘4小時(shí)(Ⅱ級(jí)左右)硅膠G板在110oC烘1小時(shí)薄板經(jīng)活化后，一定要儲(chǔ)藏在密閉的干燥器或烘箱中備用。第七十一頁，共八十五頁，2022年，8月28日(2)點(diǎn)樣適當(dāng)?shù)狞c(diǎn)樣量，集中的斑點(diǎn)是得到一個(gè)好的色譜的必要條件。如何才適當(dāng)？不同的分離要求、不同的薄板（有厚有?。?、不同的吸附劑（性能不一），需要不同的點(diǎn)樣量。從下圖可見：點(diǎn)樣量少了，不易檢出；點(diǎn)樣量多了，易拖尾或擴(kuò)散，影響分離效果。第七十二頁，共八十五頁，2022年，8月28日0.12503000.50.30.1Rfg第七十三頁，共八十五頁，2022年，8月28日

純物質(zhì)的鑒定，若又有高靈敏度的顯色劑，點(diǎn)樣量只需g或ng；若進(jìn)行天然物或中間產(chǎn)物的分離時(shí)，點(diǎn)樣量需50g~幾百微克；若進(jìn)行制備色譜，進(jìn)樣量可達(dá)1mg。點(diǎn)樣時(shí)可用內(nèi)徑約1mm，管口平整的毛細(xì)管或微量吸管吸取試液后，輕輕接觸板面，分?jǐn)?shù)次滴加樣品。第七十四頁，共八十五頁，2022年，8月28日注意點(diǎn)：a.溶解試樣的溶劑最好是揮發(fā)性的b.點(diǎn)樣宜分幾次點(diǎn)加,即點(diǎn)一次后,用吹風(fēng)機(jī)的冷風(fēng)吹干,再點(diǎn),再吹干,.......,反復(fù),直到點(diǎn)完所要求的量c.點(diǎn)樣量的體積盡可能小些(2~10L左右)d.點(diǎn)樣最好是在密閉的室中或比較干燥的環(huán)境下完成,避免薄板吸水降低活性.第七十五頁，共八十五頁，2022年，8月28日15cm2.5cm1.5cm溶劑前沿第七十六頁，共八十五頁，2022年，8月28日（３）展層薄層的展開需在密閉的器皿中進(jìn)行，密閉容器應(yīng)用展開溶劑予先飽和。展開方式和紙層析相同。但不加粘合劑的薄板只能作近水平式（與平面成20~10oC角）的上行或下行的展層而不能垂直展層。第七十七頁，共八十五頁，2022年，8月28日把點(diǎn)好樣品的薄板浸入0.5cm深的適宜展開劑中，當(dāng)展開劑移動(dòng)至離起點(diǎn)約10~20cm處(約30min)，將薄板取出放平，用鉛筆