轉(zhuǎn)基因食品定性檢測(cè)

轉(zhuǎn)基因食品定性檢測(cè)第一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日相關(guān)系列標(biāo)準(zhǔn)：第三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日應(yīng)用范圍：GB/T19495的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的核酸定性PCR方法。本部分適用于種子、飼料、食品和環(huán)境樣品中轉(zhuǎn)基因成分的定性PCR檢測(cè)。第四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)原理：一般原理：定性分析包括對(duì)測(cè)試樣品目標(biāo)核算序列的篩選檢測(cè)和特異性檢測(cè)。在設(shè)置合適的對(duì)照和在檢測(cè)下限的情況下，定性檢測(cè)結(jié)果要清楚判斷樣品是否為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品。本檢測(cè)方法包括：目標(biāo)序列的擴(kuò)增和檢測(cè)，擴(kuò)增片段特異性的確證。第五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR擴(kuò)增目標(biāo)序列的擴(kuò)增是在反應(yīng)緩沖液中，脫氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行的催化反應(yīng)。在反應(yīng)混合體系中不應(yīng)存在DNA聚合酶的抑制劑。DNA擴(kuò)增是一個(gè)循環(huán)的過(guò)程：—通過(guò)加熱使雙螺旋DNA變性為單鏈核酸：—在合適的溫度下引物和目標(biāo)序列發(fā)生退火；—在合適的溫度下，結(jié)合在兩條單鏈上的引物通過(guò)DNA聚合酶作用進(jìn)行PCR延伸反應(yīng)。第六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR產(chǎn)物檢測(cè)和確證可以通過(guò)凝膠電泳或其他方法檢測(cè)PCR產(chǎn)物，必要是可以將PCR產(chǎn)物從凝膠中分離出來(lái)進(jìn)行檢測(cè)?？梢酝ㄟ^(guò)限制性內(nèi)切酶酶切分析、雜交、DNA序列分析或者熔點(diǎn)曲線分析等方法對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行確證。采用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)時(shí)，擴(kuò)增及檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行。第七頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)步驟：第八頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第九頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第十頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日引物設(shè)計(jì)原則第十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR方法的選擇：第十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR反應(yīng)條件及驗(yàn)證第十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日結(jié)果判定：第十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日植物基因組DNA提取方法：CTAB法SDS法試劑盒法第十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日一、物種特異性檢測(cè)：第十七頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第十八頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR反應(yīng)體系：第十九頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR反應(yīng)參數(shù)設(shè)置：第二十頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR結(jié)果確證：第二十一頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日二、篩選檢測(cè)方法第二十二頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日第二十三頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR反應(yīng)體系：第二十四頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR反應(yīng)參數(shù)：第二十五頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022年，8月28日PCR結(jié)果確證：第二十六頁(yè)，共二十八頁(yè)，2022