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文檔簡介

目的要求基本原理試驗用品方法與步驟試驗結(jié)果試驗報告目的要求駕馭考馬斯亮藍(lán)的染色方法；了解細(xì)胞內(nèi)微絲的分布。試驗原理細(xì)胞質(zhì)中錯綜困難的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)稱為細(xì)胞骨架，主要包括微管、微絲和中間纖維?？捡R斯亮藍(lán)R250是一種一般的蛋白染料，它可以使多種蛋白質(zhì)著色，由于有些細(xì)胞骨架纖維在該試驗條件下不夠穩(wěn)定，有些類型的纖維太細(xì)，在光學(xué)顯微鏡下無法辨別，因此我們看到的主要是微絲組成的張力纖維。張力纖維在體外培育細(xì)胞中普遍存在，與細(xì)胞的附著、維持扁平鋪展的形態(tài)有關(guān)。試驗用品1．器材：烘箱、青霉素小瓶、培育細(xì)胞飛片、水浴鍋、載玻片、蓋玻片。2．試劑:0.01mol/LPBS；M-緩沖液；1%TritonX-100/M緩沖液；0.2%考馬斯亮藍(lán)染液；3%戊二醛-PBS溶液；3．試驗材料：洋蔥內(nèi)表皮，培育細(xì)胞飛片方法與步驟利用培育細(xì)胞為材料進(jìn)行骨架顯示時,先從培育箱中取出培育細(xì)胞飛片,棄去培育液,加入PBS漂洗,加入1%TritonX-100/M-緩沖液處理15分鐘;M緩沖液輕輕洗3次,然后加入3%戊二醛-PBS液固定15分鐘，PBS沖洗數(shù)次，0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色30分鐘，水洗，鏡檢。以洋蔥為材料進(jìn)行細(xì)胞骨架顯示時，先撕取一片洋蔥內(nèi)表皮，置于小平皿中進(jìn)行操作，其余步驟相同。留意事項PBS沖洗應(yīng)適度，否則洋蔥表皮細(xì)胞吸取大量水分易使液泡過分漲大，影響試驗結(jié)果的視察。試驗操作中，Triton的抽提是最關(guān)鍵的步驟，應(yīng)留意抽提適度。試驗結(jié)果洋蔥內(nèi)

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