實(shí)驗(yàn)七 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)第一頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)原理磺基水楊酸對(duì)脯氨酸有特定反應(yīng)，當(dāng)用磺基水楊酸提取植物樣品時(shí)，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中。然后用酸性茚三酮加熱處理后，茚三酮與脯氨酸反應(yīng)，生成穩(wěn)定的紅色化合物，再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出脯氨酸的含量。脯氨酸的測(cè)定第二頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日脯氨酸的測(cè)定（一）材料及試劑1.材料：植物葉片。2.試劑及配制：2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：將1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol·L－1磷酸中，攪拌加熱（70℃）溶解，貯于冰箱中。(配置的酸性茚三酮溶液僅在24h內(nèi)穩(wěn)定，因此最好現(xiàn)用現(xiàn)配。)3％磺基水楊酸配配制：3g磺基水楊酸加蒸餾水溶解后定容至100ml。100μg·mL-1脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)母液配制：精確稱(chēng)取20mg脯氨酸，倒入小燒杯內(nèi)，用少量蒸餾水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度（為100μg·mL－1脯氨酸母液）。冰醋酸；甲苯。第三頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日（二）實(shí)驗(yàn)步驟1.

脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作

用100μg·mL－1脯氨酸母液配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，然后向各管分別加入2ml3％的磺基水楊酸溶液，加入2ml冰醋酸及4mL2.5﹪酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱1h，溶液即呈紅色。冷卻后加入4ml甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置片刻，取上層液，以甲苯溶液為空白對(duì)照，在520nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A）值。

OD值為縱坐標(biāo)，脯氨酸濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)?；貧w方程式第四頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日2.樣品的測(cè)定2.1脯氨酸的提取

稱(chēng)取不同處理的植物葉片各0.5g，分別置大試管中，然后向各管分別加入5mL3％的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取過(guò)程中要經(jīng)常搖動(dòng)），冷卻后3000r/min離心10min。取上清液待測(cè)。2.2測(cè)定吸取2ml提取液于帶玻塞試管中，加入2mL去離子水，2mL冰醋酸及4mL2.5﹪酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱1h，溶液即呈紅色。冷卻后加入4mL甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置片刻。用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液為空白對(duì)照，在520mm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A）值。第五頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出樣品測(cè)定液中脯氨酸的含量，按下公式計(jì)算樣品中脯氨酸含量：

X×提取液總量（mL）脯氨酸含量（μg·g－1Fw）＝—————————————————

樣品鮮重（g）×測(cè)定時(shí)提取液用量（mL）公式中：X－從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中查得的脯氨酸含量（μg/mL）（三）計(jì)算結(jié)果依據(jù)回歸方程式計(jì)算得到脯氨酸含量（μg/mL）第六頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日相對(duì)電導(dǎo)率測(cè)定取根系或植物葉片，自來(lái)水洗凈，蒸餾水沖洗干凈，吸干表面水分。秤取1g，剪成長(zhǎng)約1cm小段。將材料裝到30ml指形管內(nèi)，加入去離子水15ml，抽真空至材料下沉，室溫放置1~2h。測(cè)電導(dǎo)率R1。（用根系時(shí)可以不用抽真空）將指形管沸水浴15~20min（注意加蓋防止水分蒸發(fā)），以充分殺死植物組織，取出放入自來(lái)水中冷卻至室溫，測(cè)電導(dǎo)率R2。相對(duì)電導(dǎo)率=R1÷R2×100%第七頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日植物含水量的測(cè)定

1、取成熟植物葉片，剪成適當(dāng)大小，迅速稱(chēng)量鮮重Wf（~1g）。2、將植物材料浸入蒸餾水并置于4℃冰箱中數(shù)小時(shí)至恒重（因植物材料而異）。3、將材料從水中取出，用吸水紙迅速吸去材料表面水分，稱(chēng)取其飽和鮮重Wfs。（12h以上）

4、將上述材料放入一信封內(nèi)，放入烘箱中，在105℃下殺青30min，然后將溫度調(diào)到80℃烘至恒重。5、稱(chēng)取材料干重Wd。第八頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日自然含水量=×100％相對(duì)含水量（RelativeWaterContent，RWC）植物組織含水量的指標(biāo)

RWC=自然鮮重-干重水飽和鮮重-干重=×100％×100％植物含水量的測(cè)定

組織飽和含水量有較好的重復(fù)性，而組織的鮮重、干重不太穩(wěn)定（鮮重常隨時(shí)間及處理?xiàng)l件而有變化）。第九頁(yè)，共十頁(yè)，2022年，8月28日蒽酮試劑：稱(chēng)取1.0g蒽酮，溶于80