錦瑞特定蛋白儀及試劑

特定蛋白的臨床意義與應(yīng)用

寶雞東林體外診斷試劑

李林主管檢驗師

特定蛋白分析儀概述特定蛋白分析儀是近年來國內(nèi)常購的臨床檢驗設(shè)備，是各級醫(yī)療機構(gòu)必備的檢測儀器。同時特定蛋白分析儀根據(jù)自動化程度分為全自動特定蛋白分析儀和半自動特定蛋白分析儀，根據(jù)其用途可以分為全功能特定蛋白分析儀和只檢測幾個參數(shù)的專用特定蛋白分析儀。儀器工作原理：根據(jù)抗原抗體反響引起光的散射，用散射比濁法來測量血清、全血或其他體液中的特定蛋白濃度。儀器預期用途：主要應(yīng)用于醫(yī)院臨床檢驗機構(gòu)對特定蛋白的檢測，特別適用于門診，急診，各級醫(yī)院的需要。特定蛋白分析儀檢測原理特定蛋白分析儀的檢測原理根本上是免疫比濁。由于比濁法檢測在醫(yī)學診斷上使用時主要用于檢測人體血液中某些特定蛋白質(zhì)的含量，因此而得名。比濁法原理：在一定條件下，透射光與微粒濃度成反比，散射光與微粒濃度成正比。我們公司儀器是散射比濁原理，根據(jù)雷利散射公式測量。散射比濁和透射比濁的比較示意圖發(fā)光器透射比濁測量器件散射比濁測量器件θ透射光散射光粒子

散射比濁比透視比濁優(yōu)越

透視比濁用于蛋白測定有一定的缺陷。1：溶液中存在的抗原-抗體復合分子應(yīng)足夠大，分子太小擋不住光線的通過。2：溶液中存在的抗原-抗體復合分子應(yīng)足夠多，如果數(shù)量少，對光線影響不大。散射光：由于光子與物質(zhì)分子相互碰撞，使光子的運動方向發(fā)生改變而向不同角度散射。綜上所述：散射比濁在蛋白測定時比透視比濁的測定靈敏度、精確度高?？乖贵w反響的特點遵循海德堡曲線沉淀量（結(jié)合物）檢測區(qū)間抗原量（檢測抗原濃度）

何為乳膠增強散射免疫比濁法？乳膠增強散射免疫比濁法：是近年來出現(xiàn)的一種微量非同位素檢查技術(shù)。利用微小的乳膠顆粒〔1u±〕聯(lián)接抗體后，在液相中與相應(yīng)抗原結(jié)合產(chǎn)生濁度變化來測定抗原含量?？梢源蟠笤鰪娧獫{蛋白的檢測性能，檢測敏感性可＜1mg/L。目前已成為血漿蛋白檢測的金標準技術(shù)。二、特定蛋白市場現(xiàn)狀目前國內(nèi)許多基層醫(yī)院將特定蛋白的工程的檢測放在了生化儀上進行，雖然也勉強得到檢測結(jié)果，但是由于生化儀是透射比濁法的工作原理，這從根本上決定了它具有局限性，比方：靈敏度和精密度沒有采用散射比濁法原理工作的特定蛋白分析儀高，所以在特定蛋白領(lǐng)域，許多時候生化儀不能完全滿足醫(yī)院的檢測需求。特定蛋白檢測的臨床意義血漿蛋白成分至少200余種,己別離出的具有臨床意義的純品已有100余種。而可用特定蛋白分析儀進行檢測的蛋白有40余種，最常用10余種，如CRP，IgG，IgM，IgA，C3，C4，RF，ASO，mALB，BMG，HbA1c，其中CRP〔C-反響蛋白〕應(yīng)用最為廣泛。這些蛋白質(zhì)在血液中濃度的增加或者降低和某些疾病有一定的關(guān)系，因而進行特定蛋白的檢測可以輔助診斷某些疾病，判斷預后，跟蹤治療效果。內(nèi)容簡介C－反響蛋白臨床意義與應(yīng)用糖化血紅蛋白臨床意義與應(yīng)用尿微量白蛋白、胱抑素C〔CystatinC〕臨床意義與應(yīng)用RF、ASO、CCP和CRP在RA的臨床意義與應(yīng)用D-二聚體〔D-Dimer〕臨床意義與應(yīng)用免疫球蛋白臨床意義與應(yīng)用補體C3和C4臨床意義與應(yīng)用特定蛋白推薦組合常見問題答疑C-反響蛋白〔CRP〕C-反響蛋白簡介C反響蛋白定義：1930年，Tillett和Francis首次在急性大葉性肺炎患者的血清中發(fā)現(xiàn)一種能在Ca2+存在時與肺炎球菌細胞壁中的C－多糖發(fā)生特異性沉淀反響的物質(zhì)。1941年Avery等測知它是一種蛋白質(zhì)，故稱為C反響蛋白(CRP)。它是一類正急性時相反響蛋白，隨著損傷、炎癥或各類疾病迅速增加。CRP為何被臨床醫(yī)生

所青睞？我國抗生素應(yīng)用概況門診處方抗菌藥占24%以上，是比例最大的一類藥物。門診感冒患者約有75％應(yīng)用抗生素住院病人，抗生素使用率高達80%，外科手術(shù)達95％抗菌藥物占全部藥物份額中國：25.38％

世界：2％

銷售額前10位藥物，抗生素占中國：4種，且排名在第一、二、四、五位世界：沒有一種抗菌藥濫用抗生素的嚴重后果20萬人/年死于藥品不良反響，40%與抗生素相關(guān)1/3的殘疾人屬于聽力殘疾，而60％到80％的致聾原因與使用抗生素有關(guān)細菌耐藥率不斷上升，并出現(xiàn)多藥耐藥和泛耐藥菌指導抗生素使用的檢測指標病原體檢測、培養(yǎng)、藥敏試驗需要專業(yè)的設(shè)備、條件和人員結(jié)果往往48小時以后出來檢出率不是很高白細胞檢測、監(jiān)測CRP檢測、監(jiān)測白細胞檢測敏感性差白細胞總數(shù)分類計數(shù)中性粒細胞的核象變化影響因素眾多疾病初期，機體應(yīng)激反響劇烈運動、跑步、緊張、恐懼妊娠、腎上腺皮質(zhì)激素使用反響速度慢、幅度小CRP的臨床優(yōu)點1.超出正常值的增量有巨大的潛力－－易于檢出2.病毒感染通常沒有標志性增長－－用于鑒別3.反響速度快和迅速常態(tài)化－－升高低降都很快4.檢測方便快速CRP的特性1、CRP的理化特點CRP由五個相同的非共價結(jié)合的單體組成，呈環(huán)狀五聚體，其亞基由206個氨基酸殘基組成。2、CRP的合成在肝細胞內(nèi)持續(xù)合成,分泌至各種體液中由細胞因子(IL-1,IL-6,TNF-)刺激肝細胞和上皮細胞合成，由活化的吞噬細胞〔巨噬細胞〕釋放3.生物學特點反響快速，增量大，隨著恢復下降也快；敏感！感染、創(chuàng)傷、手術(shù)等情況下快速上升，6-10hr明顯改變48hr〔24-72hr〕到頂峰，102-103倍的變化半衰期6-7hr，較快反映病情的變化病毒感染沒有標志性升高受影響因素少：不受生理活動的影響，不受化療、放療和激素治療的影響能關(guān)聯(lián)疾病活動性：CRP上升速度、幅度及持續(xù)時間與病情及組織損傷的嚴重程度密切相關(guān)健康人CRP濃度分布圖正常情況下人血清中CRP濃度很低中位數(shù)mg/L90%<3mg/LC-反響蛋白臨床意義與應(yīng)用CPR與ESR、WBCCRP在區(qū)分細菌和病毒感染方面能提供比WBC更精確的信息。革蘭氏陰性細菌性腦膜炎和病毒性腦膜炎患者血清CRP值和WBC值比較骨髓炎病人抗生素治療后30天內(nèi)CRP、ESR變化常用感染指標WBC、ESR、CRP的比較CRPWBCESR感染時反應(yīng)速度變化快速，幾小時可見升高，平均8小時增加一倍，隨著治愈一周左右恢復正常升高較慢治療有效后變化緩慢2-3天可見升高至少2-3周恢復正常

影響因素不受生理、免疫狀態(tài)藥物治療的影響易受年齡、日間變化、治療藥物等因素影響易受溫度、貧血、血沉管位置、異常免疫球蛋白或復合物、藥物等影響鑒別診斷能鑒別細菌或病毒感染不能鑒別細菌或病毒感染不能鑒別細菌或病毒感染相關(guān)疾病的活動性量的動態(tài)變化能反映病癥的活動性量的動態(tài)變化不能反映病癥的活動性無相關(guān)性CRP的臨床意義鑒別細菌性或病毒性感染

--指導是否使用抗生素監(jiān)測和控制感染

--監(jiān)測創(chuàng)傷、手術(shù)繼發(fā)感染評估抗生素療效

--調(diào)整抗生素或及時停用抗生素一〕、鑒別細菌性或病毒性感染CRP濃度在細菌感染時增高，而病毒感染時不增高.最高水平的CRP值常發(fā)生于細菌感染時，有時可高達500mg/L;細菌感染和寄生蟲感染通常引起中等程度的CRP升高，典型的是在100mg/L左右；病毒感染引起的反響最輕，通常不超過20mg/L,極少超過50mg/L.CRP的指導意義CRP升高的程度反響炎癥組織和感染的范圍、嚴重程度和活動性。CRP值為10-20mg/L，提示輕度炎癥。CRP值升至20-50mg/L時，提示有一般細菌感染。CRP值>50mg/L，提示有嚴重細菌感染。二〕、監(jiān)測和控制感染1、組織損傷廣泛燒傷時CRP顯著升高，如無感染，三天后即下降且在超過一個月的愈合期內(nèi)持續(xù)下降。如期間有感染發(fā)生，CRP又會升高，所以CRP可用來監(jiān)測整個病程。2、器官移植

移植后三天CRP開始下降，如不下降可疑心存在

早期排異反響腎臟功能恢復出色和無并發(fā)癥的患者血清CRP值變化和平均肌酐水平變化3.細菌性腦膜炎無并發(fā)癥細菌性腦膜炎〔BM〕或有并發(fā)癥細菌性腦膜炎〔BM〕和無菌性腦膜炎〔AM〕的比較三、評估抗生素療效急性感染性疾病時抗生素治療的最適化;高危患者在缺少微生物診斷報告時，確立抗生素治療方案;在CRP下降至正常時，中止抗生素治療。持續(xù)升高的CRP值一般預示治療無效，應(yīng)當更換治療方法;在一些難以進行臨床評估的風濕性疾病中，快速選擇適當?shù)目寡字委熕幬?；根?jù)CRP水平的變化來決定藥物的劑量；有效預計并發(fā)癥的發(fā)生。CRP的臨床應(yīng)用

作為一種炎癥篩選指標，CRP檢測特別對不能表達病癥的病人(嬰兒、昏迷、癡呆病人等)，有很好的提示作用。

超敏C-反響蛋白HS-CRP隨著檢測技術(shù)的不斷開展，常規(guī)CRP檢驗方法可在感染或組織損傷時檢測出CRP>8或10mg/L,但不能檢測出低濃度的CRP變化?，F(xiàn)醫(yī)學一般把濃度<3mg/L的CRP稱為超敏CRP〔HS-CRP〕。檢測超敏CRP〔HS-CRP〕方法的引入，CRP不僅可作為一種急性炎癥的標志物，而且可區(qū)別在正常范圍內(nèi)低程度炎癥反響中的CRP的水平.該濃度的CRP與心血管疾病的發(fā)生及新生兒、嬰幼兒的感染有著密切的關(guān)系1在冠心病、中風、周圍血管栓塞等疾病診斷和預測中發(fā)揮重要的作用。甚至被認為是心血管疾病危險評估的“金標準〞。局部學者認為超敏CRP可以作為心血管疾病〔例如：心肌堵塞〕危險評估的一項獨立指標?！窠陙硌芯刻崾荆匝装Y在動脈粥樣硬化的發(fā)生、開展中起重要作用●動脈粥樣硬化又是造成心血管疾病重要病因：如冠狀動脈粥樣硬化著，假設(shè)管徑狹窄達75％以上，那么可發(fā)生心絞痛、心肌堵塞、心律失常，甚至猝死?！衩绹膊】刂坪皖A防中心〔CDC〕和美國心臟協(xié)會〔AHA〕建議C-反響蛋白作為一種獨立的危險因素，能更有效地預示心血管疾病發(fā)生2新生兒的CRP水平通常很低〔<1-2mg/L〕，由于新生兒的細菌感染開展很快，沒有足夠時間產(chǎn)生大量CRP，所以大于此值時與細菌感染的嚴重程度有關(guān)。用常規(guī)CRP的檢測反響不出微小的變化。而超敏CRP可滿足兒科感染診斷的需求，監(jiān)測小兒病情變化。五：糖化血紅蛋白與血糖水平存在差異性的原因1、HbAlc代表的是檢測前120天的血糖平均水平，而血糖僅代表當時的血糖水平，具有片面性，波動大；2、HbAlc測定不受患者治療的影響，而血糖測定受治療的影響大；3、測定標本放置時間過長會影響血糖的測定值而HbAlc受其影響不大；4、某些糖尿病患者病情變化迅速，導致血糖值迅速改變，而糖化血紅蛋白的形成是個持續(xù)，緩慢的過程，因此其值相對穩(wěn)定；5、糖化血紅蛋白會受到某些疾病的干擾，尤其是一些血液病容易導致紅細胞壽命縮短，引起測定結(jié)果的不準確。尿微量白蛋白〔Microalbumin,MALB〕白蛋白(Alb)正常情況下可有少量被濾過，但95%的Alb又在近曲小管被重吸收,故尿中Alb含量很低。如果腎臟因疾病或損傷而異常時，蛋白可滲漏到尿液中，特別是白蛋白,尿微量白蛋白是指尿中含有少量但屬于不正當情況下分泌出的白蛋白，是腎臟功能變差的最早信號。尿微量白蛋白〔Microalbumin,MALB微量白蛋白尿成因可能是腎小球性的〔例如：糖尿病性微血管病、高血壓、小腎小球損害〕，腎小管性的〔重吸收障礙〕或者腎后性的〔腎臟病變累及腎小球和腎小管〕。MALB臨床應(yīng)用：可反映腎小球濾過性早期的一些改變，各種原因的腎病，常見升高，特別適用于糖尿病患者的腎病損害的監(jiān)測和療效判斷，以及高血壓、心血管疾病、腎病的病變程度及預后的臨床參考。因此微量白蛋白尿癥是預報腎病和心血管疾病危險的指標及預后的臨床參考。2.糖尿?。?/p>

〔a〕微量白蛋白尿癥最早出現(xiàn)，是糖尿病腎病和終末腎病的早期預測指標；

〔b〕微量白蛋白尿癥1型或2型糖尿病人心血管發(fā)病率和死亡率增高的預兆指標。3.高血壓和心血管?。?〔c〕在高血壓患者中進行微量白蛋白尿癥篩選，鑒別出有靶器官損害危險的高危人群；〔d〕在非糖尿病人中，微量白蛋白尿癥與心血管危險因子相關(guān)，與死亡率升高有關(guān)。

胱抑素C〔CystatinC〕胱抑素C.是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑,也被稱為γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中,是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，分子量為13.3KD,由122個氨基酸殘基組成,可由機體所有有核細胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定。循環(huán)中的胱抑素C僅經(jīng)腎小球濾過而被去除，是一種反映腎小球濾過率變化的內(nèi)源性標志物,并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代謝分解，不返回血液，因此，其血中濃度由腎小球濾過決定，而不依賴任何外來因素，如性別、年齡、飲食的影響，是一種反映腎小球濾過率變化的理想同源性標志物。臨床意義參考范圍：正常情況下，CysC在血清和血漿中的濃度為；當腎功能受損時，CysC在血液中的濃度隨腎小球濾過率變化而變化：〔a〕腎衰時,腎小球濾過率下降，CysC在血液中濃度可增加10多倍；〔b〕假設(shè)腎小球濾過率正常,而腎小管功能失常時，會阻礙CysC在腎小管吸收并迅速分解,使尿中的濃度增加100多倍。

腎臟損傷的病程變化危險因素〔糖尿病、高血壓等〕——內(nèi)皮功能障礙——微量白蛋白——大量白蛋白——腎病性蛋白尿——終末期腎病——死亡抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(Anti-CCP)抗環(huán)瓜氨酸肽抗體〔Anti-CCP〕是環(huán)狀聚絲蛋白的多肽片段，是以IgG型為主的抗體，1998年Schellekens和GirbalNeuhause等根據(jù)filaggrin的cDNA序列合成的多肽證實瓜氨酸殘基是類風濕關(guān)節(jié)炎特異的抗中間絲相關(guān)蛋白(filaggrin)抗體識別表位的必需組成。通過對基因文庫中各個序列號的filggrin氨基酸序列進行分析，合成了一條以瓜氨酸代替精氨酸的20個左右氨基酸殘基的肽鏈。并通過一定的試驗顯示了瓜氨酸是RA患者血清中抗filaggrin相關(guān)抗體識別的主要組成性抗原決定簇成分。在2000年，Schellekens將一條由19個氨基酸殘基組成的瓜氨酸肽鏈中的兩個絲氨酸替換為半胱氨酸，形成與β-轉(zhuǎn)角具有相似結(jié)構(gòu)的二硫鍵，合成環(huán)瓜氨酸肽(cycliccitrullinatedpeptide,CCP)。Filaggrin(絲聚合蛋白)抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(Anti-CCP)采用環(huán)瓜氨酸肽為抗原基質(zhì)檢測RA患者血清中的抗環(huán)瓜氨酸肽抗體，對類風濕性關(guān)節(jié)炎〔RA〕具有很好的敏感性和特異性，是RA新的血清標志物。對RA的特異性約為96%，在RA的早期階段即可出現(xiàn)陽性，并且具有很高的陽性預報道,且抗CCP抗體陽性的RA病人骨破壞較抗CCP抗體陰性者嚴重。Anti-CCPCRP在RA的意義在RA急性發(fā)作時，CRP常增高，而CRP水平正常者那么病情多較輕或穩(wěn)定，動態(tài)檢測CRP對RA有輔助性診斷作用及療效觀察作用。風濕四項〔RF、CCP、ASO、CRP〕〕類風濕性關(guān)節(jié)炎〔rheumatoidarthritis,RA〕是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，屬于自身免疫炎性疾病，是一種常見的慢性自身免疫性疾病。以慢性、對稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，隨著病情的進展，RA患者逐漸喪失勞動力，出現(xiàn)關(guān)節(jié)功能障礙。在全世界大約有1%的人罹患此病。RA能引起關(guān)節(jié)的疼痛、僵直及腫脹。在發(fā)病2年內(nèi)即可能出現(xiàn)不可逆的骨關(guān)節(jié)損傷，并可引起多種并發(fā)癥，如神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心包炎、淋巴腺炎等。因此，及早診斷RA及給予緩解病情的早期藥物治療，對控制病情非常重要?？梢钥刂坪蜏p少RA的致殘率。類風濕關(guān)節(jié)炎RARA活動性判斷晨僵持續(xù)的時間關(guān)節(jié)疼痛和腫脹的程度關(guān)節(jié)壓痛和腫脹的關(guān)節(jié)數(shù)關(guān)節(jié)功能限制程度急性炎癥指標血沉或Ｃ反響蛋白(急性時相反響物)疲勞的嚴重性ACR/EULAR2021年RA診斷標準〔6分或以上肯定RA診斷〕1中大關(guān)節(jié)02-10中大關(guān)節(jié)11-3小關(guān)節(jié)24-10小關(guān)節(jié)3>10至少一個為小關(guān)節(jié)5RF或抗CCP均陰性0RF或Anti-CCP至少一項低滴度陽性2RF或Anti-CCP至少一項高滴度陽性3滑膜炎持續(xù)時間<6周