活毒污水處理裝置消毒效果評價方法

活毒污水處理裝置消毒效果評價方法A.1范圍本附錄旨在為活毒污水裝置的消毒效果評價提供參考。引用文件《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）RB/T199-2015《實驗室設(shè)備生物安全性能評價技術(shù)規(guī)范》第4.4.3.2A項。A.2指示微生物通常選用枯草桿菌黑色變種（ATCC9372）芽孢或嗜熱脂肪桿菌（ATCC7953）芽孢作為指示微生物。如需殺滅特定微生物時，可選用抗力相似的微生物作為消毒指示微生物。A.3試驗器材菌懸液：按照《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版2.1.1.2制備細(xì)菌芽孢懸液及菌片。水抽濾系統(tǒng)，無菌器材，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、PAS、稀釋液、大豆?fàn)I養(yǎng)肉湯等。A.4驗證方法A.4.1連續(xù)式污水處理系統(tǒng)的抽濾式消毒驗證方法A.4.1.1試驗菌水樣配制:將嗜熱脂肪桿菌(ATCC7953)芽孢懸液混入生物指示物罐或污水收集罐的污水中，使其含菌量達(dá)到5′104cfu/100ml～5′105cfu/100ml，待罐內(nèi)污水經(jīng)過高溫滅菌開始排放后，根據(jù)滅菌管道體積及污水流速確定取樣時間，從滅菌段后面的取樣口取樣，每間隔一段時間取樣一次，采集次數(shù)不少于2次，每次采集水樣約200ml。A.4.1.2試驗菌模擬污染水樣中活菌的培養(yǎng)計數(shù)采用無菌操作，100ml模擬污水樣本進(jìn)行抽濾，濾膜接種于培養(yǎng)皿，56℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48～72h。另取1.00ml水樣接種平皿，然后將平皿倒置，放入56℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h。觀察結(jié)果和計數(shù)：計數(shù)濾膜上生長的嗜熱脂肪桿菌芽孢數(shù)，并按下式計算染菌水樣中含有的嗜熱脂肪桿菌芽孢數(shù)(cfu/100ml)：結(jié)果判定：嗜熱脂肪桿菌芽孢濃度以cfu/100ml計，不得檢出。試驗重復(fù)三次。A.4.2連續(xù)式污水處理系統(tǒng)的離心式消毒驗證方法當(dāng)污水灌內(nèi)液體的體積到達(dá)指定量時加入制備的嗜熱脂肪桿菌(ATCC7953)芽孢懸液，使罐體內(nèi)芽孢濃度達(dá)到5′104cfu/100ml～5′105cfu/100ml以上。根據(jù)滅菌管道體積及污水流速確定取樣時間，確保含有指示芽孢的污水流過滅菌管道后，從滅菌段后面的取樣口取樣，采集次數(shù)不少于2次，每次采集水樣約200ml。（總菌數(shù)≥1.0′106）將收取的樣本采用12000rpm離心15min，棄去上清液，用0.01MPAS洗脫后加入溴甲酚紫葡萄糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，洗脫液和培養(yǎng)基體積比≤1:10。陽性對照為培養(yǎng)基內(nèi)加入濃度為1.0′103cfu/ml的嗜熱脂肪桿菌芽孢樣本。將實驗組和陽性對照組于56℃培養(yǎng)48-72小時，觀察結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)至7天觀察結(jié)果。結(jié)果判定：陽性對照培養(yǎng)基變黃色；試驗組培養(yǎng)基顏色均未變色，為消毒結(jié)果合格。試驗重復(fù)三次。A.4.3序批式污水處理裝置消毒效果驗證方法菌片放置：滅菌前，將3個裝有嗜熱脂肪桿菌（ATCC7953）芽孢菌片的采樣器從檢測預(yù)留口放入罐體內(nèi)，分別置于上、中、下三個采樣點(diǎn)。待污水滅菌罐液位達(dá)到75%后，設(shè)備自動啟動滅菌程序，運(yùn)行一個滅菌周期后取出采樣器，在生物安全柜內(nèi)采用無菌操作方式將菌片取出放入溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液中。同時設(shè)陽性對照組和陰性對照組，一起放入56℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d，觀察培養(yǎng)基顏色變化。陽性對照進(jìn)行活菌計數(shù)，菌落數(shù)范圍為5.0×105～5.0×106cfu/片結(jié)果判定：陽性對照培養(yǎng)基變黃色；試驗組培養(yǎng)基顏色均未變色，為消毒結(jié)果合格。試驗重復(fù)三次。A.4.4化學(xué)污水處理裝置消毒效果驗證方法消毒池內(nèi)添加適當(dāng)?shù)南緞?，達(dá)到作用濃度?？莶輻U菌黑色變種芽孢（ATCC9372）菌片（5.0×105～5.0×106cfu/片）作為試驗用樣片放入專用容器內(nèi)，分別放置于消毒池內(nèi)上部、中部、下部三個位點(diǎn)，使菌片充分浸沒于消毒液中。消毒作用至規(guī)定時間后，按無菌操作方式取出枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）菌片放入含相應(yīng)中和劑的營養(yǎng)肉湯中。同時設(shè)陽性對照和陰性對照，放入37℃培養(yǎng)7d。同時設(shè)陽性對照組和陰性對照組，一起放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d。結(jié)果判定：樣本組肉湯未出現(xiàn)渾濁及菌膜可判定為陰性結(jié)果，陽性對照同時進(jìn)行活菌計數(shù)，菌落數(shù)范圍為5.0×105～5.0×106cf